專利名稱：長－47麻疹病毒非編碼區和p、m基因序列及載體構建的制作方法
技術領域：
本發明屬于病毒學和分子生物學領域，涉及對一株麻疹病毒疫苗株的所有非編碼區及P、M編碼區序列的發現，確切地說是闡明一株我國成功研制的用于控制麻疹的減毒活疫苗毒株的所有非編碼區序列，P、M編碼區序列及其編碼的蛋白質的氨基酸序列以及它們的應用范圍。
長-47疫苗株為我國自主研制的疫苗株，起源于1957年分離的Leningrad-4株麻疹病毒，經人腎細胞傳26代、人羊膜細胞傳47代以及雞胚成纖維細胞傳若干代后逐漸適應減毒而成(Rota，J.S.，Wang，Z.D.，Rota，P.A.，and Bellini，W.J.1994.Comparision of sequences of theH，F，and N coding genes of measles virus vaccine strains.VirusResearch 31317-330)。我國自1965年開始使用麻疹疫苗以來，尤其是1987年開展計劃免疫后，麻疹控制工作取得了重大進展，麻疹疫苗的安全性及有效性得到了很好的證明。
對病毒基因組的研究是在70年代分子生物學技術發展并得到廣泛應用之后才興起的。到19世紀80年代為止，單股負鏈RNA病毒家族不少成員的基因序列得以測定，從而促使了利用負鏈RNA病毒cDNA進行病毒拯救的反向遺傳學研究的興起，也導致了利用其研究病毒致病機制、持續性感染、疫苗減毒機制以及研制新型疫苗和構建病毒表達載體等。尤其是病毒的非編碼區序列(基因組末端及結構基因間非編碼區)具有順式調節元件功能，能指導下游基因的轉錄和復制，對于構建病毒表達載體具有非同尋常的意義，而利用麻疹病毒構建成表達載體又具有明顯優點1、和DNA病毒載體相比，麻疹病毒RNA復制不經過DNA階段，故而不會與細胞染色體發生重組整合，比較安全；2、和正鏈RNA病毒載體相比，不易發生病毒基因重組，從而有利于保持外源基因的穩定，因為RNA病毒基因重組依賴于模板選擇的機制，而負鏈RNA病毒基因組主要以核糖核蛋白復合物(RNP)形式存在，故重組效率要低得多；3、麻疹病毒基因組的有效復制必須遵循“基因組核苷酸數是6的倍數”的增殖規則，因而基因組發生插入和缺失后仍存活的幾率要小得多。4、用已得到廣泛認可的安全的麻疹病毒減毒疫苗株構建表達載體，體內應用的安全性較高。因此，有關麻疹病毒表達載體的研究具有非常重要的意義。
基于麻疹病毒作為載體所具有的許多優點，而我國的長-47減毒活疫苗株為傳統方法研制，其安全可靠性已得到長期檢驗和認可，但是其基因組非編碼區序列及P、M編碼區序列尚未被闡明。這一方面不能從基因水平保護我國的MV疫苗的知識產權，另一方面也限制了利用該疫苗病毒構建基因轉移和表達載體。
經傳統生物學方法研制的麻疹病毒長-47疫苗株為雞胚成纖維原代細胞培養生產，本發明從該疫苗病毒感染的細胞提取全細胞RNA，以隨機引物逆轉錄成cDNA，并以此為模板，用DNA多聚酶鏈式反應(DNA Polymerase ChainReaction，PCR)擴增長-47病毒基因組cDNA。共擴增6段相互重疊的片段，覆蓋整個長-47病毒基因組。分段擴增的基因分別克隆到質粒載體上，進而對待測區域進行序列測定，獲得病毒基因組所有七段非編碼區序列和其結構基因P、M編碼區序列，并推導出P、M基因編碼氨基酸序列(見后，序列表)。
本發明在國內外首次闡明了我國研制的麻疹減毒活疫苗株長-47的所有非編碼區序列及P、M編碼區序列，直接提供麻疹病毒全基因組載體外源基因的插入位點以及插入方式使之能夠隨病毒基因組一起復制、轉錄、包裝和表達，因而本發明可直接導致麻疹病毒載體(攜帶單個或多個外源基因)的產生，該載體既有望用于構建基因重組多價疫苗，也有望于用于基因治療的目的。鑒于負鏈RNA病毒載體的優點，及其可以為進一步的研究如致病機理、減毒機理提供研究平臺的前景，廣泛使用的麻疹病毒減毒疫苗株所具有其無可比擬的優勢。本發明還可以直接指導構建僅有麻疹病毒末端調控序列作為順式調節元件控制外源基因轉錄、表達以及復制和包裝系統。
以下實施例對于麻疹病毒長-47減毒活疫苗株所有非編碼區序列及P、M編碼區序列的應用進行詳細的說明，但不意味著限制本發明的內容。
實施例1 長-47疫苗株基因間非編碼區序列在cDNA水平上可提供在病毒全基因組中插入外源基因的位點用于構建疫苗病毒表達載體，用于構建基因重組多價疫苗和/或基因治療。
麻疹病毒是副粘病毒科麻疹病毒屬(morbillivirus)成員，是一種不分節段的單股負鏈RNA病毒，基因組由六個互不重疊的順反子串聯排列而成3’-N-P-M-F-H-L-5’，共編碼8個蛋白N、P/C/V、M、F、H、L，基因組兩末端以及各結構基因間區域為非編碼區序列。長-47麻疹疫苗株幾乎每一結構基因間非編碼區均存在以保守的GAA三核苷酸為界的基因終止信號和基因起始信號序列(例外H/L間為CCC三核苷酸序列)，它們控制著3’端上游蛋白編碼基因轉錄的終止與mRNA的聚腺苷酸化和5’端下游蛋白編碼基因的轉錄再啟動。由于基因間隔區具有的這種特點，可以將外源基因兩端帶上與長-47病毒蛋白相似的基因間隔非編碼區后插入到病毒基因組中，這樣該插入蛋白基因便可以病毒蛋白基因類似的方式存在于病毒基因組中，并得以表達和復制、包裝入子代病毒中。如在P/M基因間插入外源基因，可使用常規克隆方法在病毒全基因的cDNA水平將P/M間非編碼區序列重復相鄰連接，中間保留一適用的酶切位點，然后將外源基因DNA插入該酶切位點，形成如
圖12的重組cDNA結構，重組cDNA導入細胞后使用本領域已知的方法(如痘苗病毒/T7RNA聚合酶瞬時表達系統)將其轉錄成RNA。在提供輔助病毒蛋白N、P和L的條件下，轉錄出的重組RNA可以形成具有復制和轉錄能力的RNP，形成具有感染能力的新的子代重組病毒，從而完成外源基因的轉移和表達。外源基因插入基因組其它位置以此類推，即必須使插入的外源基因兩側具有與長-47結構基因mRNA兩側相似的具有順式調節功能的非編碼區序列(分別見說明書附圖1、2、3)，這也表示該病毒基因組中可插入1個以上的外源基因，并獲得表達。
實施例2 麻疹病毒長-47疫苗株基因組3’末端非編碼區和5’端非編碼區序列可用于構建表達外源基因的缺陷型病毒顆粒載體。前者基因組3’末端非編碼區包含病毒反基因組(Antigenome)復制的起始信號，N蛋白mRNA轉錄的起始信號以及結合病毒N蛋白的包裝信號等；后者5’端非編碼區序列則包含病毒基因組(Genome)復制的起始信號，L蛋白mRNA轉錄的終止信號以及結合病毒N蛋白的包裝信號等。將該段3’末端非編碼區序列cDNA的3’端按常規克隆方法連接下游外源基因起始密碼子，而將該段5’末端非編碼區序列cDNA的5’端按常規克隆方法連接上游外源基因終止密碼子，然后使用本領域已知的方法(如體外轉錄或攜帶RNA聚合酶基因的體內轉錄系統)將其轉錄為RNA并導入哺乳動物細胞(如Vero細胞)，在病毒L蛋白(病毒RNA聚合酶)存在的條件下該序列可指導插入的“可表達基因”的轉錄，并在病毒其它蛋白存在的條件下，與N、P、L蛋白結合形成RNP復合物，進而復制和被包裝成攜帶外源基因的缺陷型病毒顆粒，外源基因按照病毒蛋白表達相似的方式得以表達(見說明書附圖4)。
實施例3 麻疹病毒長-47疫苗株P和M基因的編碼區序列及其編碼的氨基酸序列可用于構建基因重組抗原，用于麻疹病毒感染的血清學診斷或疫苗接種后的流行病學調查。
根據已測定的長-47疫苗株P和M蛋白基因的的序列及其編碼的氨基酸序列分析結果，可以分別選取二者的全基因序列或包含主要抗原表位的基因構建原核或真核表達載體，在原核細胞和真核細胞中表達相應的M和P蛋白，純化后用于麻疹病毒感染的血清學診斷或疫苗接種后的流行病學調查。
實施例4 長-47減毒活疫苗株病毒的所有非編碼區序列，P、M編碼區序列及其編碼的蛋白質的氨基酸序列分析可用于闡明該疫苗毒株的減毒機制和細胞適應培養的機理。
將長-47減毒活疫苗株病毒的所有非編碼區序列，P、M編碼區序列及其編碼的蛋白質的氨基酸序列與國外野毒株、疫苗株病毒基因組相應位置進行比較，從基因和蛋白水平來闡明長-47減毒活疫苗株與國外野毒株及疫苗株之間的異同和相應的功能改變，可以研究疫苗的減毒機制，細胞培養適應機理以及尋找強弱毒株間的分子標記，從而為麻疹病毒的分子流行病學調查提供參考。
圖2為外源基因與P/M基因間非編碼區連接方式，外源基因插入長-47病毒基因組P/M蛋白基因間以獲得重組病毒基因，所有陰影部分均為非編碼區序列。
圖3為麻疹病毒長-47疫苗株病毒載體基因組提供的外源基因插入結構圖，陰影部分為非編碼區序列。
圖4為僅由長-47基因組兩末端非編碼區序列與外源基因連接的連接方式，以構建缺陷型病毒載體，陰影部分為基因組末端非編碼區序列。
權利要求
1.麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組所有非編碼區序列，共包括7個不連續的區域，為6個結構基因編碼區隔開，分別是基因組3’末端非編碼區、N/P、P/M、M/F、F/H、H/L基因間非編碼區和基因組5’末端非編碼區，其特征在于(1)麻疹病毒-47疫苗株(Measles virus ChangChun-47 attenuatedstrain)基組3’末端非編碼區序列由107個核苷酸組成，位于全長基因組的第1-107位核苷酸。3’-5’方向RNA序列為UGGUUUGUUUCAACCCAUUCCUAUCAAGUUAGUUACUAGUAGAAGAUCACGUGAAUCCUAAGUUCUAGGAUAAUAGUCCCUGUUCUCGUCCUAAUCCCUAUAGGCUC(2)麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組N/P基因間非編碼區(共121個核苷酸)，位于全長基因組的第1686-1806位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為CACGCUCUCCGGCUCCUGGUCUUGUUGUAGGCGGAUGGGAGGUAGUAACAAUAUUUUUUGAAUCCUUGGUCCAGGUGUGUCGGCGGUCGGGUAGUUGGUAGGUGAGGGUGCUAACCUCGGC(3)為麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組P/M基因間非編碼區(共107個核苷酸)，位于全長基因組的第3331-3437位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為GAUGUCGAGUUGAAUGGACGGUUGGGGUACGGUCAGCUGGGUUGAUCAUGUUGGAUUUAGGUAAUAUUUUUUGAAUCCUCGUUUCACUAACGGAGGGUUCAAGGUGU(4)為麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組M/F基因間非編碼區(共1012個核苷酸)，位于全長基因組的第4446-5457位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為UGGCAUCACGGGUCGUUACGGGCUUUUGCUGGGGGGAGUGUUACUGUCGGUCUUCCGGGCCUGUUUUUUUGGGGGAGGCUUUCUGAGGUGCCUGGUUCGCUCUCCGGUCGGUCGUCGGCUGCCGUUCGCGCUUGUGGUCCGCCGGGGUCGUGUCUUGUCGGGGCUGUGUUCCGGUGGUGGUCGGUGGGGUUAGACGUAGGAGGAGCACCCUGGGGGCUCCUGGUUGGGGGUUCCGACGGGGGCUAGGUUUGGUGGUUGGCGUAGGGGUGGUGGGGGCCCUUUCUUUGGGGGUCGUUGACCUUCCGGGGAGGGGGAGAGGGAGUUGUGUUCUUGAGGUGUUGGCUUGGCGUGUUCGCUGGCUCCACUGGGUUGGCGUCCGUAGGCUGAGGGAUCUGUCUAGGAGAGAGGGGCCGUUUGAUUUGUUUUGAAUCCCGGUUCCUUGUAUGUGUGGGUUGUCUUGGGUCUGGGGCCGGGUGCCGAGGCGCGGGGGUUGGGGGCUGUUGGUCUCCCUCGGGGGUUGGUUAGGGCGUCCGAGGGGGCCACGGGUGUCCGUCCCUGUGGUUGGGGGCUUGUCUGGGUCGUGGGUUGGUAGCUGUUAGGUUCUGCCCCCCCGGGGGGGUUUUUUUCCGGGGGUCCCCGGCUGUCGGUCGUGGCGCUCCUUCGGGUGGGUGGGGUGUGUGCUGGUGCCGUUGGUUUGGUCUUGGGUCUGGUGGGACCCGGUGGUCGAGGGUCUGAGCCGGUAGUGGGGCGUCUUUCCUUUCCGGUGUUGGGCGCGUGGGGUCGGGGCUAGGCCGCCCCUCGGUGGGUUGGGCUUGGUCGUGGGUUCUCGCUAGGGGCUUCCUGGGGGCUUGGCGUUUCCUGUAGUCAUGGGGUGUCGGAGAGGUUCAGGGGGCCAGAGGAGGAGAAGAGCUUCCCUGGUUCUCUAGUUAGGUGGUGUGGGCUGCUGUGAGUUGAGGGGUGGGGAUUUCCUCUGUGGCCCUUAGGGUCUUAGUUCUGAGUAGGUUACAGGUAG(5)為麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組F/H基因間非編碼區(共160個核苷酸)，位于全長基因組的第7111-7270位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為AGGAGAUGUUGAGAACUUUGUGUUUACAGGGUGUUCAGAGGAGAAGCAGUAGUUCGUUGGUGGCGUGGGUCGUAGUUCGGGUGGACUUUAAUAGAGGCCGAAGGGAGACCGGCUUGUUAUAGCCAUCAAUUAAUUUUGAAUCCCACGUUCUAGUAGGUGU(6)為麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組H/L基因間非編碼區(共109個核苷酸)，位于全長基因組的第9125-9233位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為CCGACGAUCACUUGGUUAGAGUACUACAGUGGGUCUGUAGUCCGUAUGGGUGAUCACACUUUAUCUGUAGUCUUAAUUCUUUUUGCGUCCCAGGUUCACCAAGGGGCAA(7)麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組5’末端非編碼區序列(共109個核苷酸)，位于全長基因組的第15786-15894位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為AACCAACUUGAGGCCUUGGGAUUAGGACGGGAUCCACCAAUCCGUAAUAAACGUUAUAUAAUUUCUUUUGAAACUUUUAUGCUUCAAAGAUAAGGGUCGAAACAGACCA(8)上述基因的結構和功能。
2.麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組P基因編碼區及M基因編碼區序列，其特征在于(1)麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組P基因編碼區序列共1524個核苷酸，位于全長基因組的第1807-3330位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為UACCGUCUUCUCGUCCGUGCGGUACAGUUUUUGCCUGACCUUACGUAGGCCCGAGAGUUCCGGCUCGGGUAGCCGAGUGACCGGUAGCUCCUUCGAUACCGUCGUACCAGUCUUUAUAGUCUGUUGGGUCCUGUCCUCGCUCGGUGGACGUCCCUUCUCUUCCGUCCGUCAAGCCCAGAGUCGUUUGGUACGGAGAGUCGUUAACCUAGUUGACUUCCGCCACGUGGAACGUAGGCGCCAGUCCCUGGACCUCUCUCGCUACUGCUGCGACUUUGAAACCCUUAGGGGGGUUCUUUAGAGGUCCGUAGUUCGUGACCCAAUGUCACAGUAAUACAAAUACUAGUGUCGCCACUACGCCAAUUCCCUUAGGUUCUACGACUGAGAUAGUACCAAGUUAGUCCGGAACUACCACUAUCGUGGGAGAGUCCUCCUCUGUUACUUAGACUUUUGUCGCUACACCUAUAACCGCUUGGACUAUGGCUCCCUAUACGAUAGUGACUGGCCCCUAGACGAGGGUAGAGAUACCCCAAGUCCCGAAGACUACAACUUUGACGUCUUCCUCCCCUCUAGGUGCUCGAGGACUCUGAGGUUAGGUCUCCGUUGUUGAAAGGCUUCGAACCCUUUUGAGAGUUACAAGGAGGCGGGGGCCUGGGGCCAUCCCGGUCGUGAAGGCCCUGUGGGUAAUUUUUCCCGUGUCUGCGCUCUAAUCGGAGUAAACCUUGCCUCUAGCGCAGAAAUAACUGUCCACCACGUUGGGUUACACGAGCUUUCAGUGGGAGCCUUGGUAGUCCCGGUCCACGUGGACGCCCCUUACAGGGGCUCACACACUCGUUACGGCGUGACUAUGUCCUCACCUGUGGGCUUAGACCAUGGUGUUAGAGGGGCUCUAGGGUCUUAUUACCUUUUCCCCCUCUGAUAAUACUACUACUCGACAAGAGACUACAGGUUCUAUAAUUUUGUCGGAACCGGUUUUAUGUGCUCCUAUUAGUCUUCUAUUAGAGGUUCGAUCUCAGUGACGACAAUAACUUCCCUCUUCAACUCAGUUAAUUCUUCGUCUAGUUGUCCGUUUUAUAGUCGUAUAGGUGGGACCUUCCUGUGGAGAGUUCGUAGUACUAGCGGUAAGGACCUGAACCCUUCCUAGGGUUGCUGGGGUGACGUCUACAGCUUUAGUUAGGGCUGAACUUUGGGUAGUAUCCGUCUCUAAGUCCGGCUCGUGACCGGCUUCAAGAGUUCUUUGGGCAACGGUCGGCUGUUGAGGUUCCUUACUGUUUACCUGCCUGGUCAAGGUCUCCUGUCGACGACUUCCUUAAAGUCGAUUUCGGCUAGCCCUUUUUCUACUCGAGUCGGCAGCCCAAACAAGGACUGUGGCCGGGACGUAGUGCGUCACAUUAGGCGAGGUAAUAUUUUAGGUCGGCCGAUCUCCUCCUAGCCUUCGCAAUGGACUACUGAGAGGAACUACUAUAGUUUCCUCGGUUACUAGAACGGUUCAAGGUGGUCUACGACUACUUCUAUUAUUACUUCAUC(2)麻疹病毒長-47疫苗株(Measles virus Changchun-47 attenuatedstrain)基因組M基因編碼區序列共1008個核苷酸，其特征在于位于全長基因組的第3438-4445位核苷酸，3’-5’方向RNA序列為UACUGUCUCUAGAUGCUGAAGCUGUUCAGCCGUACCCUGUAGUUUCCCAGCUAGCGAGGCUAUGUUGGGUGGUGGAUGUCACUACCGUCCGACCACGGGGUCCAGUCUCAGUAUCUAGGACCAGAUCCGCUGUCCUUCCUACUUACGAAAUACAUGUACAAAGACGACCCCCAACAACUCCUGUCGCUAGGGGAUCCCGGAGGUUAGCCCGCUCGUAAACCCAGGGACGGGAAUCCACAACCGUCUAGGUGUCGUUUCGGGCUUUUUGAGGAGUUUCUCCGGUGACUCGAACUGCAUCAACAAUCUGCAUGUCGUCCCGAGUUACUUUUUGACCACAAGACGUUGUUGUGGGGUGAUUGAGAGGAGUGUGGAACCUCUUUCCAGGAUUGUUGUCCCUCACAGAAGUUGCGUUUGGUUCACACGUUACGCCGAUUAGACUAUGGCGAGCUAUUGGGCGUCUCCAAGGCACAACAAAUAUACUCGUAGUGGGCAGAAAGCCUAUUGCCCAUAAUGUGGCAAGGAUCUUCUUACGACCUUAAGUCUAGCCAGUUACGUCACCGGAAGUUGGACGACCACUGGGAAUCCUAACUGUUCCGCUAUCCGGGACCCUUCUAGUAGCUGUUAUGUCUCGUUGAAGGACUCCGUUGUAAAUACCAGGUGUAGCCCUUGAAGUCCUCUUUCUUCUCACUUCAGAUGAGACGGCUAAUAACGUUUUACUUUUAGCUUUUCUACCCGGACCAAAAACGUGAACCACCCUAUCCCCCGUGGUCAGAAGUGUAAUCUUCGUGUCCGUUUUACUCGUUCUGAGAGGUACGUGUUGAGCCCAAGUUCUUCUGGAAUACAAUGGGCGACUACCUAUAGUUACUUCUGGAAUUAGCUAAUGAGACCUCCUCGUCUACGUUCUAUCAUUCUUAGGUCCGUCAAAACGUCGGUAGUCAAGGAGUUCUUAAGGCGUAAAUGCUGCUGCACUAGUAUUUACUACUGGUUCCUGAUAAGUUUCAAGACAUC(3)上述基因的結構和功能。
3.根據權利要求2，長-47疫苗株P和M基因分別編碼相應的結構蛋白，其特征在于(1)P基因編碼的蛋白由507個氨基酸組成，分子量為53.788千道爾頓，等電點為5.06，氨基酸從N端到C端為MAEEQARHVKNGLECIRALKAEPIGSLAIEEAMAAWSEISDNPGQERATCREEKAGSSGLSKPCLSAIGSTEGGAPCIRGQGPGESDDDAETLGIPPRNLQASSTGLQCHYVYDHSGDAVKGIQDADSIMVQSGLDGDSTLSGGDNESENSDVDIGEPDTEGYAITDRGSAPISMGFRASDVETAEGGEIHELLRLQSRGNNFPKLGKTLNVPPPPDPGRASTSGTPIKKGTDARLASFGTEIASLLTGGATQCARKSPSEPSGPGAPAGNVPECVSNAALIQEWTPESGTTISPRSQNNGKGGDYYDDELFSDVQDIKTALAKIHEDNQKIISKLESLLLLKGEVESIKKQINRQNISISTLEGHLSSIMIAIPGLGKDPNDPTADVEINPDLKPIIGRDSGRALAEVLKKPVASRQLQGMTNGRTSSRGQLLKEFQLKPIGKKMSSAVGFVPDTGPASRSVIRSIIKSSRLEEDRKRYLMTLLDDIKGANDLAKFHQMLMKIIMK*(2)M基因編碼的蛋白由335個氨基酸組成，分子量為37.650千道爾頓，等電點為9.36，氨基酸從N端到C端為MTEIYDFDKSAWDIKGSIAPIQPTTYSDGRLVPQVRVIDPGLGDRKDECFMYMFLLGVVEDSDPLGPPIGRAFGSLPLGVGRSTAKPEKLLKEATELDVVVRRTAGLNEKLVFCNNTPLTLLTPWRKVLTTGSVFNANQVCNAANLIPLDNPQRFRVVYMSITRLSDNGYYTVPRRMLEFRSVNAVAFNLLVTLRIDKAIGPGKIIDNTEQLPEATFMVHIGNFRRKKSEVYSADYCKMKIEKMGLVFALGGIGGTSLHIRSTGKMSKTLHAQLGFKKTLCYPLMDINEDLNRLLWRSRCKIVRIQAVLQPSVPQEFRIYDDVIINDDQGLFKVL*(3)上述所有基因編碼的蛋白質的結構和功能。
4.根據權利要求1所述特征，麻疹病毒長-47疫苗株的非編碼區序列可用于構建長-47疫苗病毒表達載體，用于制造重組基因工程疫苗或基因治療目的。
5.根據權利要求1、2和4所述，其特征在于長-47所有非編碼區序列、P和M基因序列及其酶切圖譜用于構建重組病毒載體。
6.權利要求4的用途，其特征在于用于重組疫苗抗原目的或基因治療目的的外源基因在重組病毒載體基因組中與長-47的非編碼區相鄰連接。
7.根據權利要求1所述特征，麻疹病毒長-47疫苗株的基因組3’末端和5’術端非編碼區序列可以置于外源基因的兩側，用于控制外源基因的復制、轉錄和偽型包裝以構建缺陷型病毒顆粒載體。
8.根據權利要求4-7所述特征，含有1種或一種以上外源基因的長-47疫苗病毒表達載體。
9.根據權利要求2和3所述特征，麻疹病毒長-47疫苗株的結構基因P和M，可通過原核或真核表達系統予以表達，P基因的表達產物或克隆質粒還可提供該毒株RNP復合物形成所必須的P蛋白，用于重組病毒拯救時的輔助物。
10.根據權利要求8的用途，P和M基因的表達產物用于建立麻疹感染的血清學診斷方法。
全文摘要
本發明提供了麻疹病毒長春－47疫苗株的所有非編碼區和P、M編碼區序列及其結構，P、M編碼區編碼的蛋白質氨基酸序列及其結構以及其非編碼區序列在構建該疫苗病毒載體中的用途和載體構建方法。這些序列數據和方法可應用于使用該疫苗株病毒構建表達載體用于重組多價疫苗或基因治療，還可用于麻疹病毒感染的的分子生物學診斷及其試劑的研制。
文檔編號A61K48/00GK1408851SQ0114144
公開日2003年4月9日 申請日期2001年9月25日 優先權日2001年9月25日
發明者李德新, 胡孔新, 王曉芳, 李川, 孟祥芝, 梁米芳 申請人:中國預防醫學科學院病毒學研究所