2－苯氧基嘧啶衍生物及其治療用途的制作方法

專利名稱：2－苯氧基嘧啶衍生物及其治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類2-苯氧基嘧啶衍生物、其鹽及藥用前體，這類化合物具有抑制蛋白激酶及其變型的活性的作用，可用于治療和預(yù)防增生性疾病如癌癥及炎癥類疾病，同時(shí)也可用于治療和預(yù)防神經(jīng)衰退性疾病如老年性癡呆癥、心血管疾病、病毒感染和霉菌感染等。
背景技術(shù)：
蛋白激酶是一類在蛋白質(zhì)中的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的羥基上磷酸化的酶。這種簡單的生物化學(xué)反應(yīng)涉及到細(xì)胞的各種活動(dòng)，包括生長、分裂和增生。從某種意義上來講，蛋白激酶的活性影響到細(xì)胞周期活動(dòng)中的每一個(gè)環(huán)節(jié)。同時(shí)，不正常的蛋白激酶活性與各種類型的疾病(從常見的牛皮癬到致命的腦膜癌)都具有密切的聯(lián)系。
蛋白激酶通常被分成酪氨酸蛋白激酶和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶兩大類。
在蛋白激酶中，人們普遍認(rèn)為酪氨酸蛋白激酶在許多細(xì)胞功能中起著非常重要的作用，特別是參與細(xì)胞信號的傳遞。雖然詳細(xì)和精確的作用機(jī)制還不明朗，但是大量的研究結(jié)果證明酪氨酸蛋白激酶在細(xì)胞的增生、癌變和分裂過程中扮演著不可缺少的重要角色。
酪氨酸蛋白激酶又分為受體類和非受體類兩大類別。受體類酪氨酸蛋白激酶通常由細(xì)胞外、貫穿細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)三部分組成，而非受體類酪氨酸蛋白激酶則完全在細(xì)胞內(nèi)。
受體類酪氨酸蛋白激酶含具有不同生物活性的大量且各異的貫穿細(xì)胞膜的受體。至今，根據(jù)受體部分的特征，已有約20個(gè)家族的受體類酪氨酸蛋白激酶被發(fā)現(xiàn)和鑒別。其中，HER亞族包括EGFR、HER2、HER3和HER4，與這一亞族的受體結(jié)合的配基包括表皮生長因子、TGF-β、細(xì)膜核模質(zhì)、HB-EGF等。另一亞族是與胰島素受體相關(guān)的酪氨酸蛋白激酶，包括INS-R、IGF-IR和IR-R。PDGF亞族則由PDGFRα、PDGFRβ、CSFIR、C-kit和FLK-II組成。還有一類FLK亞族，它包括KDR、FLK-1、FLK-4和Flt-1。由于結(jié)構(gòu)和功能上的相似性，人們通常將PDGF和FLK兩亞族歸劃在一起。有關(guān)受體類酪氨酸蛋白激酶的詳細(xì)闡述，可參閱Madhani，2001，Cell；106(1)9-11。
非受體類酪氨酸蛋白激酶也具有多種亞族，像Abl、Src、Frk、Btk、Csk、ZAP70、FES/FPS、Fak、Jak、Ark和LIMK。每個(gè)亞族還可進(jìn)一步分成不同的亞亞族。例如，Src是最大的亞族之一，它包括Src、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk。該亞族被廣泛認(rèn)為與腫瘤形成密切相關(guān)。有關(guān)非受體類酪氨酸蛋白激酶的詳細(xì)闡述，可參閱Adjei，2001，Curr Pharm Des；7(16)1581-1594。
不論是受體類還是非受體類，這些酪氨酸蛋白激酶經(jīng)參與細(xì)胞的信息傳遞過程從而與癌癥、神經(jīng)功能衰退、牛皮癬和免疫功能異常等多種疾病相關(guān)。
酪氨酸蛋白激酶如Abl的活性增強(qiáng)與血液中骨髓干細(xì)胞類疾病如慢性骨髓細(xì)胞型白血病直接相關(guān)。
酪氨酸蛋白激酶如c-erB-2、c-Src、EGF-R、PDGF-R和ZAP70等的活性異常與人體內(nèi)惡性腫瘤的形成有著密切的聯(lián)系。例如，EGF-R活性增強(qiáng)導(dǎo)致頭頸部癌癥，而c-erB-2的高活性與乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌和結(jié)腸癌有關(guān)，等等。因此，酪氨酸蛋白激酶的抑制劑可用于治療上述的腫瘤疾病。
此外，體內(nèi)酪氨酸蛋白激酶活性的異常也與其它一系列疾病有關(guān)，如牛皮癬(Dvir et al，1991，J Cell Biol；113857-865)、纖維變性、動(dòng)脈粥樣硬化和心瓣變窄(Buchdanger et al，1992，Proc Natl Acad Sci USA；922258-2262)、自主免疫疾病、過敏、哮喘和器官移植時(shí)的排斥反應(yīng)(Klausneret al，1991，Cell；64875-878)、炎癥(Berkois，1992，Blood；79(9)2246-2254)、血栓形成(Salari et al，1990，F(xiàn)EBS Lett；263(1)104-108)及神經(jīng)系統(tǒng)疾病(Ohmichi et al，1992，Biochemistry；314034-4039)。
參與調(diào)節(jié)和減緩上述疾病狀態(tài)的蛋白激酶抑制劑代表著治療這些疾病的最新方法和趨勢。目前已有許多治療用途的蛋白激酶抑制劑的例子，以下只是其中的一些例子。(1)抑制Src、Raf和CDK用于治療癌癥(Martin，2001，Nature Rev Mol Cell Biol；2(6)467-475；Rowinsky et al，1999，J ClinOncol；17(11)3631-3652；Malumbres et al，2000，Biol Chem 381(9-10)827-838)；(2)抑制CDK-2或RDGF-R用于治療心瓣變窄(Buchdanger et al，1995，Clin Cancer Res；1(8)813-821)；(3)抑制CDK-5和GSK-3用于治療老年性癡呆癥(Aplin et al，1996，J Neurochem；67(2)699-707)；(4)抑制c-Src用于治療骨質(zhì)疏松癥(Schmidt et al，1996，Proc Natl Acad Sci USA；93(7)3068-3073)；(5)抑制GSK-3用于治療II型糖尿病(Frame et al，2001，Mol Cell；7(6)1321-1327)；(6)抑制P38用于治療炎癥(Wang et al，2000，J Immunol；166(11)6877-6884)；(7)抑制VEGFR-1-3和TIE-1，2用于治療血管再生性疾病(Hattori et al，2001，J Exp Med；193(9)1005-1014)；(8)抑制uL97用于治療病毒感染(Mendez et al，1999，Transplantation；67(5)755-757)；(9)抑制CSF-1R用于治療骨質(zhì)性疾病(Hajiwaro et al，2001，Int J Hematol；73(1)100-107)；(10)抑制Lck用于治療自主免疫性疾病(Kanner et al，1995，J Immunol；154(6)2996-3005)和(11)抑制Abl用于治療慢性骨髓細(xì)胞型白血病(Zimmermann et al，1997，Bioorg Med Chem Lett；7(2)187-192)，然而同時(shí)帶來意外的耐藥性(Gorre et al，2001，Science；293(5531)876-880)。
美國專利5,302,739、美國專利4,770,691、美國專利4,427,437和Jojima等人(Jojima et al，1966，Agr Biol Chem；30(9)896-905)公開了一系列具有除雜草作用的2-苯氧基嘧啶類化合物。最近，Boehm等人(Boehm et al，2001，Bioorg Med Chem Lett；11(21)1123-1126)也發(fā)表了一類具有抑制P38α活性的苯氧基嘧啶衍生物。但是，這些公開化合物的主要化學(xué)結(jié)構(gòu)特征以及它們的作用和用途與本發(fā)明無關(guān)。
本發(fā)明所涉及的2-苯氧基嘧啶衍生物是具有選擇性的酪氨酸蛋白激酶的有效抑制劑，它們的主要作用是通過抑制酪氨酸蛋白激酶的活性而發(fā)揮，從而選擇性地消除或減少特定的疾病組織。這類化合物所抑制的主要酪氨酸蛋白激酶有Abl、P38β、PDGF-R、C-kit等。當(dāng)然，也不能排除這類化合物抑制其它與疾病相關(guān)的蛋白激酶的可能性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供一類特異、高效并經(jīng)口服或注射給藥有效的化合物，它們能通過抑制參與細(xì)胞信息傳遞的酪氨酸蛋白激酶的活性而治療人體血液類疾病、固體類惡性腫瘤疾病及其它細(xì)胞增生性疾病。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一類新型化合物用于治療對現(xiàn)有藥物產(chǎn)生耐藥性的疾病如慢性骨髓細(xì)胞型白血病、胃腸道粘連性腫瘤和腦膜癌，它們能通過抑制或阻止酪氨酸蛋白激酶的變型而對抗耐藥性。
上述發(fā)明目的中所述的人體血液類疾病是淋巴細(xì)胞型和骨髓細(xì)胞型的血液腫瘤，它們包括急性淋巴細(xì)胞型白血病、急性原始淋巴型白血病、B型細(xì)胞淋巴瘤、T型細(xì)胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、毛狀細(xì)胞淋巴瘤、Burkett氏淋巴瘤、急性骨髓細(xì)胞型白血病、慢性骨髓細(xì)胞型白血病、骨髓發(fā)育不全癥和早幼粒細(xì)胞型白血??；所述的固體類惡性腫瘤疾病的發(fā)生部位是一種或多種同時(shí)存在，它們是乳腺、卵巢、結(jié)腸、肺、腦、骨、呼吸道、胃、胰腺、前列腺、肝、膽、咽喉、膀胱、子宮、皮膚等部位；所述的其它細(xì)胞增生性疾病包括血管增生性疾病如關(guān)節(jié)炎和心瓣變窄、纖維增生性疾病如肝硬化和動(dòng)脈粥樣硬化以及腎小球細(xì)胞增生性疾病如腎小球腎炎、糖尿性腎炎、慢性腎硬化和器官移植時(shí)的排斥反應(yīng)。這些化合物還可用于治療代謝性疾病如牛皮癬、慢性傷口潰爛、炎癥和神經(jīng)衰退性疾病如老年性癡呆癥。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種2-苯氧基嘧啶衍生物，它是含有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物或它的鹽，可以通過抑制蛋白激酶的活性用于治療和預(yù)防各種人體增生性疾病和其它疾病， 其中，X為氧、硫、二級氨基(-NH-)或羰基 Y為羰基 、氧、硫或二級氨基(-NH-)；R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8是氫、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)狀雜烷基或環(huán)狀雜烷化烷基；R4是氫、鹵素、羥基、烷氧基或含1-6個(gè)碳原子的烷基；R9選自氫、氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)、烷基或-Z-R10；其中Z表示氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)或烷基；R10是芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、氫或鹵素、烷基、環(huán)狀雜烷基、環(huán)狀雜烷化烷基。
上述技術(shù)方案中，帶有游離鍵價(jià)的雜原子都是由氫原子結(jié)合，其中的“雜原子”指氧(O)、氮(N)和硫(S)原子；所述“鹵素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)原子；所述烷基是指含有1-12個(gè)碳原子的單價(jià)烷，可以是直鏈、分叉或環(huán)狀，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、辛基等；所述“環(huán)烷基”是指一類環(huán)狀并含有3-15個(gè)碳原子但無共軛雙鍵的烷基，它們可含有1-4個(gè)環(huán)，無取代基的例子有環(huán)丙烷基、環(huán)丁烷基、環(huán)戊烷基、環(huán)已烷基等，取代基則指含有一個(gè)或更多的以下基團(tuán)鹵素、烷基、烷氧基、羥基、氨基、硝基、氰基、硫基等；所述“芳基”是指單環(huán)或雙環(huán)的芳香環(huán)，如苯基、有取代基的苯基以及稠形的基團(tuán)如萘基、菲基等，芳基含有至少一個(gè)六元環(huán)、并可能是1-5個(gè)六元環(huán)相連接，相連的環(huán)之間具有碳與碳原子間或碳與雜原子間形成的的共軛雙鍵，此外，芳基上可能存在鹵素、烷基、烷氧基、羥基、氨基、硝基、羧基、?；?、氰基、硫基等取代基團(tuán)；所述“芳香雜環(huán)基”是指五元或六元的單個(gè)芳香環(huán)或8元或10元的雙環(huán)中含至少一個(gè)雜原子，其中，氮原子可多個(gè)共存，也可能與氧或硫原子并存，芳香雜環(huán)基的例子有噻嗯基、呋喃基、吡啶基、吡咯基、咪唑基、哌啶基、噻唑基、吡唑基、三唑基、異噁唑基、異噻唑基、吡嗪基、噠嗪基、嘧啶基、三嗪氮雜基、吲哚基、異吲哚基、喹啉基、異喹啉基等，這些環(huán)上還可能存在不同的取代基，如鹵素、烷基、烷氧基、羥基、環(huán)烷基、硝基、氨基、硫基等；所述“環(huán)狀雜烷基”是指環(huán)中的1-3個(gè)碳原子被雜原子置換后的環(huán)狀烷基，例如哌嗪基等，環(huán)上還可能存在如鹵素、烷基、烷氧基、羥基、環(huán)烷基、硝基、氨基、硫基等取代基團(tuán)，此外，雜原子為硫時(shí)，可能是砜或亞砜，若雜原子為氮時(shí)，有可能是四價(jià)氮。
上述技術(shù)方案中，較常用的化合物為所述的R2、R3、R5、R6、R7為氫；所述的R9為-Z-R10，其中Z表示氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)或烷基；R10是芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、氫或鹵素、烷基、環(huán)狀雜烷基、環(huán)狀雜烷化烷基。
除本發(fā)明直接描述的化合物外，這些化合物的藥用型鹽類也在本發(fā)明的保護(hù)范圍中，本發(fā)明涉及化合物的藥用型鹽類包括與無機(jī)酸、有機(jī)酸或無機(jī)堿、有機(jī)堿所形成的各種鹽。
酸性鹽的例子有醋酸鹽、已二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦碘酸鹽、環(huán)戊基丙酸鹽、雙葡糖酸鹽、十二烷磺酸鹽、甲基磺酸鹽、乙基磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、乙醇酸鹽、亞磺酸鹽、庚酸鹽、已酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、萘磺酸鹽、尼古丁酸鹽、硝酸鹽、乙二酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、異丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽；堿性鹽的例子則有堿金屬(如鈉、鉀)鹽、堿性二價(jià)金屬(如鎂)鹽、氨鹽和含1-4個(gè)碳原子的烷基胺鹽。
本發(fā)明的上述2-苯氧基嘧啶衍生物、其鹽或藥用前體可以和與能作為藥用的載體組合成藥用制劑。
所述2-苯氧基嘧啶衍生物、其鹽或藥用前體可以作用于蛋白激酶及其變型，調(diào)控和改變蛋白激酶及其變型的催化功能。
其中所作用的蛋白激酶及其變型可以是酪氨酸蛋白激酶及其變型，包括受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型和非受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型。受體類的酪氨酸蛋白激酶及其變型包括PDGFRα、PDGFRβ、EGF、HER2、HER3、HER4、IR、IGF-IR、IRR、CSFIR、C-kit、C-fms、Flk-IR、Flk-4、KDR/Flk-1、Flt-1、FGFR-1R、FGFR-2R、FGFR-3R和FGFR-4R；非受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型包括Abl、Src、Frk、Btk、Csk、MAP、P38、ZAP70、Fes/Fps、Fak、Jak、ArkYes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk。
所述蛋白激酶及其變型也可以是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶及其變型，包括CDK2、MAP、P38、Raf和PKC。
給予人體有效劑量的上述的化合物，可用于治療和預(yù)防與蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病。
本發(fā)明涉及的化合物可經(jīng)由藥用型的載體對人體給藥，這些藥用載體包括離子交換樹脂、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(如人體血清白蛋白)、緩沖物(如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀等)、部分飽和植物油的甘油脂、水和鹽的混合物或電解質(zhì)(如硫酸精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉等)、鋅鹽、膠態(tài)硅膠、三聚硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素類、聚乙烯甘油醇、羧酸甲基纖維素鈉、聚?；?、蠟類及羊毛脂等。
本發(fā)明涉及的化合物可通過不同途徑對人體給藥，具體的給藥途徑包括口服、非胃腸道給藥、口腔吸入、透過皮膚給藥、直腸給藥、鼻腔給藥、舌下給藥、面頰給藥、陰道給藥及通過植入性容器給藥；非胃腸道給藥又包括在皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、鞘內(nèi)、肝內(nèi)、損傷部位內(nèi)和顱內(nèi)注射或浸滲。
本發(fā)明涉及的化合物可制成不同的劑型用于人體給藥，具體的劑型有水溶液注射劑、油狀混懸液注射劑、口服膠囊劑、口服片劑、口服水溶液、口服混懸液、直腸栓劑、滴眼液、眼膏、皮膚用軟膏、皮膚用霜?jiǎng)?、皮膚用噴霧劑、口腔噴霧劑、口腔氣霧劑、鼻腔噴霧劑和鼻腔氣霧劑等，同時(shí)還包括這些不同劑型的緩釋劑和控制釋放速度和劑量的制劑。
本發(fā)明涉及的化合物在用于人體進(jìn)行治療和預(yù)防疾病時(shí)，所用的劑量受多種因素的影響，這些因素包括年齡、體重、健康狀況、性別、種族、飲食習(xí)慣、給藥時(shí)間、排尿頻率及是否使用其它藥物，等等。
本發(fā)明涉及的化合物具有特異的藥理活性，它們的活性是通過抑制蛋白激酶特別是酪氨酸蛋白激酸及其變型而起作用的。在背景技術(shù)一節(jié)中已闡述了與蛋白激酶的活性相關(guān)的各類疾病，本發(fā)明通過抑制蛋白激酶及其變型的活性，對于增生性疾病特別有效，同時(shí)還可以解決目前臨床使用藥物所存在的耐藥性問題。
由此本發(fā)明的化合物特別適用于治療和預(yù)防下述各種疾病
發(fā)生在以下部位和組織的固體惡性腫瘤乳腺、卵巢、結(jié)腸、肝、膽、肺、胃、前列腺、胰腺、咽喉、膀胱、腦、皮膚等；淋巴細(xì)胞型血液類腫瘤急性淋巴細(xì)胞型血病、急性原始淋巴細(xì)胞型白血病、B細(xì)胞型白血病、T細(xì)胞型白血病、何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、毛狀細(xì)胞淋巴瘤和Burkett氏淋巴瘤；骨髓細(xì)胞型血液類腫瘤急性骨髓細(xì)胞型白血病、慢性骨髓細(xì)胞型白血病、骨髓發(fā)育不全癥和早幼粒細(xì)胞型白血??；其它還包括發(fā)生在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的腫瘤；由于酪氨酸蛋白激酶對細(xì)胞功能的調(diào)控及細(xì)胞的增生和繁殖起著非常重要的作用，本發(fā)明的化合物對任何影響細(xì)胞功能調(diào)控和細(xì)胞增生的疾病可能具有治療和預(yù)防作用，這些疾病包括炎癥、神經(jīng)衰退性疾病、病毒感染及霉菌感染等。
本發(fā)明的化合物可以通過(但不局限于)以下的合成路線來制備 上述合成路線以本發(fā)明中的一小類化合物為例提出，其它化合物可以以類似方式制備；也可以通過其它合成路線制備。
本發(fā)明化合物的生物活性可以通過測定它們酶氨酸蛋白激酶的抑制作用來加以評估，其抑制作用通常用半數(shù)抑制濃度(IC50)來表示，在實(shí)施例二十中給出了部分化合物的半數(shù)抑制濃度實(shí)驗(yàn)值。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，這些實(shí)施例只是用來幫助理解本發(fā)明，并不限制本發(fā)明所涉及的任何技術(shù)和用途實(shí)施例一制備中間體4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯胺將3-乙酰基吡啶(121克，1摩爾)和N，N-二甲基醛酰胺二甲基半糖醛(119克，1摩爾)溶解于500毫升無水二甲基甲酰胺中，在110℃回流反應(yīng)3小時(shí)。溶劑蒸干后，加入乙醚使產(chǎn)物沉淀并結(jié)晶，分離和干燥后得到182克白色結(jié)晶。
先將金屬鈉(18.4g，0.8mol)溶解于500ml純乙醇中，加入硫胍(76.1g，2mol)和176g以上白色結(jié)晶，然后加熱回流反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)完畢后，加入1000ml蒸餾水，再用冰乙酸調(diào)至酸性，強(qiáng)力攪拌并加熱至沸騰，用pH試紙確定溶液呈現(xiàn)酸性后，迅速冷卻至30℃并過濾沉淀物，沉淀物干燥后得到138.6g白色固體。
將94克以上白色固體溶解于500毫升1N氫氧化鈉溶液中，加入碘甲烷(70.5g，1mol)，在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)液過濾后用冰乙酸調(diào)至中性析出白色沉淀。該沉淀物在乙醇中重結(jié)晶后得到85.3克白色結(jié)晶。
將61克以上白色結(jié)晶溶解于300毫升甲醇-水(7∶3)混合液中，加入50克偏二亞硫酸鉀(KHSO5)。在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后將溶劑蒸干，再用水洗產(chǎn)物后用無水硫酸鎂除水，干燥后得到57.8克白色固體。
分別將47克以上白色固體溶解于75ml二甲基甲酰胺和3-羥基-4-甲基-苯氨基甲酸叔丁酯(44.7g，0.2mol)溶解于150ml二甲基甲酰胺中。將兩種溶液混合后，慢慢滴加35ml混懸14.4g氫化鈉于二甲基甲酰胺中的溶液，在15分鐘左右加完。在室溫下攪拌反應(yīng)18小時(shí)后，用檸檬酸調(diào)至酸性，倒入2000ml冰水中析出沉淀。沉淀物過濾后用水沖洗。然后，在潮濕時(shí)溶解于二氯甲烷中。用無水硫酸鎂除水后蒸去溶劑，得到油狀物。用乙醚溶解該油狀物后，加入200毫升1N氫氧化鈉溶液提取產(chǎn)物，分離后得到水相溶液，再用200毫升1N鹽酸中和后產(chǎn)生晶狀沉淀。沉淀過濾并干燥后得到73.4克微黃色結(jié)晶。
將70克以上微黃色結(jié)晶溶解于250毫升含25％三氟乙酸的二氯甲烷中，在室溫下攪拌反應(yīng)8小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，加入200毫升蒸餾水并分離得到有機(jī)相溶液。用無水硫酸鎂除水后，蒸去二氯甲烷溶劑得到56.4克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為微黃色固體，熔點(diǎn)145-147℃。MS(ESI)m/z 278。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.57(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.66(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.20(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.09(d，J＝8.2Hz，1H)，6.52(s，1H)，6.35(d，J＝8.2Hz，1H)，4.82(s，2H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例二4-(4-甲基-哌嗪基-1-甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2氧)-苯基]-苯酰胺將實(shí)施例一中所得的標(biāo)題化合物(2.78g，0.2ml)和4-(4-甲基-哌嗪基-1-甲基)苯甲酸(2.33g，0.2mol)溶解于50毫升二氯甲烷中，加入N，N-二環(huán)已基碳化二亞胺(1.94ml，0.2mol)后在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)。反應(yīng)完成后，用水洗反應(yīng)液再分離得到有機(jī)相溶液，用硫酸鎂除水后蒸去溶劑，干燥后得到3.88克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)209-214℃。MS(ESI)m/z 510。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.57(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.66(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74-7.76(m，3H)，7.23-7.24(m，2H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H)，3.57(s，2H)，2.37-2.58(m，11H)，2.30(s，3H)。
實(shí)施例三N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用苯甲酸制備得到3.14克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)181-183℃。MS(ESI)m/z 382。1HNMR(400MHz，CDCl3) δ9.57(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.66(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.86(d，J＝7.7Hz，2H)，7.74(s，1H)，7.56(s，3H)，7.25(d，J＝8.4Hz，1H)，7.20(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例四4-甲基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-甲基苯甲酸制備得到3.38克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)106-110℃。MS(ESI)m/z 396。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.15-7.26(m，6H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，2.41(s，3H)，2.33(s，3H)。
實(shí)施例五3-甲基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-甲基苯甲酸制備得到3.05克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)116-117℃。MS(ESI)m/z 396。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.75(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.69(d，J＝7.7Hz，1H)，7.48(dd，J＝7.7Hz，1H)，7.38(s，1H)，7.24(s，1H)，7.18-7.20(m，2H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.41(s，3H)，2.24(s，3H)。
實(shí)施例六4-甲氧基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-甲氧基苯甲酸制備得到3.27克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)96-98℃。MS(ESI)m/z 412。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.90(d，J＝8.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，3.74(s，3H)，2.41(s，3H)。
實(shí)施例七3-甲氧基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-甲氧基苯甲酸制備得到2.93克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)102-104℃。MS(ESI)m/z 412。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.59(dd，J＝7.9Hz，1H)，7.52(d，J＝7.9Hz，1H)，7.32(d，J＝7.8Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.14(s，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，3.79(s，3H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例八4-氟-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-氟苯甲酸制備得到2.60克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)193-196℃。MS(ESI)m/z 400。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.54(d，J＝8.8Hz，2H)，7.30(m，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例九3-氟-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-氟苯甲酸制備得到2.32克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)187-189℃。MS(ESI)m/z 400。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.62(d，J＝7.7Hz，1H)，7.58(s，1H)，7.48(dd，J＝7.7，8.3Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.16(d，J＝8.3Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十4-氨基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-氨基苯甲酸制備得到3.01克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為微黃色固體，熔點(diǎn)165-167℃。MS(ESI)m/z 397。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.79(d，J＝8.6Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，6.91(s，2H)，6.89(m，2H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十一3-氨基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-氨基苯甲酸制備得到2.64克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為微黃色固體，熔點(diǎn)171-174℃。MS(ESI)m/z 397。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.50(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.29(s，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，6.28(s，2H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十二4-羥基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-羥基苯甲酸制備得到3.14克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)203-206℃。MS(ESI)m/z 398。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(m，2H)，7.24(d，J＝8.2Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.09(m，2H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十三3-羥基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-羥基苯甲酸制備得到2.87克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)208-210℃。MS(ESI)m/z 398。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.56(dd，J＝7.9，8.0Hz，1H)，7.49(d，J＝7.9Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.13(s，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十四N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-異尼古丁酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用異尼古丁酸制備得到2.95克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)168-169℃。MS(ESI)m/z 383。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.81(m，2H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.73(m，2H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十五N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-尼古丁酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用尼古丁酸制備得到3.13克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)176-178℃。MS(ESI)m/z 383。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，9.03(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，8.21(d，J＝7.2Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.50(dd，J＝4.7，7.2Hz，1H)，7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十六6-(4-甲基-哌嗪基-1-甲基)-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-尼古丁酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用6-(4-甲基-哌嗪基-1-甲基)尼古丁酸制備得到3.86克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為白色固體，熔點(diǎn)216-219℃。MS(ESI)m/z 495。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，9.14(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，8.18(d，J＝8.1Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.43(d，J＝8.1Hz，1H)，7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，3.73(s，2H)，2.59(m，4H)，2.51(m，4H)，2.40(s，3H)，2.26(s，3H)。
實(shí)施例十七4-硝基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用4-硝基苯甲酸制備得到3.11克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為淡黃色固體，熔點(diǎn)213-216℃。MS(ESI)m/z 427。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)，8.65(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.2Hz，1H)，8.27(m，2H)，8.05(d，J＝9.0Hz，1H)，7.97(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十八3-硝基-N-[4-甲基-3-(4-吡啶基-3-嘧啶基-2-氧)-苯基]-苯酰胺按實(shí)施例二所述的方法，用3-硝基苯甲酸制備得到2.85克標(biāo)題化合物。
該產(chǎn)物為淡黃色固體，熔點(diǎn)215-218℃。MS(ESI)m/z 427。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.56(s，1H)，8.74(d，J＝4.9Hz，1H)， 8.61-8.65(m，3H)，8.34(d，J＝8.5Hz，1H)，8.17(d，J＝8.0Hz，1H)，7.98(d，J＝5.4Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.68(dd，J＝8.0，8.5Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)，7.19(dd，J＝4.9，8.2Hz，1H)，7.04(d，J＝8.4Hz，1H)，2.40(s，3H)。
實(shí)施例十九Abl酪氨酸蛋白激酶活性的測定酶反應(yīng)溶液包括50mM Tris-HCL緩沖液(pH7.5)、10mM氯化鎂、1mM EDTA、10μM γ-32P標(biāo)記的ATP(3000-5000cpm/pmol)、0.2mM ATP和10μg Abl肽類底物EAIYAAPFAKKK(1mg/ml，從New England Biolabs，MA，USA購得，產(chǎn)品目錄號為P6051)。該反應(yīng)液體積為40μl。將此反應(yīng)液與溶解于二甲基亞砜中的測試化合物混合均勻后，加入10μl Abl酪氨酸蛋白激酶(10000單位/ml，從Cell Signaling Technology，MA，USA購得，產(chǎn)品目錄號為6150)，從而開始酶反應(yīng)。
在30℃反應(yīng)10分鐘后，加入40μl 10％三氯乙酸溶液終止反應(yīng)，離心2分鐘(10000rpm)。吸取35μl上清液并滴在P81離子交換濾紙(Whatman)上，用6％冰乙酸沖洗濾紙三遍后，在室溫下自然干燥。然后將干燥后的濾紙置放于放射線計(jì)數(shù)瓶內(nèi)，在β-射線計(jì)數(shù)儀上測定放射量。Abl酪氨酸蛋白激酶的活性按濾紙上的放射量進(jìn)行計(jì)算。
本發(fā)明所涉及化合物對Abl酪氨酸蛋白激酶的抑制作用以造成50％酶活性抑制的化合物濃度(IC50)來表示。
實(shí)施例二十本發(fā)明化合物對Abl酪氨酸蛋白激酶的抑制作用本發(fā)明的化合物對Abl酪氨酸蛋白激酶具有明顯且很強(qiáng)的抑制作用，它們的半數(shù)抑制濃度(IC50)在0.025-2.0μM的范圍內(nèi)。
下表給出了對實(shí)施例二至十八中的化合物進(jìn)行測試的結(jié)果值(化合物用對應(yīng)的實(shí)施例名稱來表示)。
表1 本發(fā)明化合物對Abl的抑制作用(化合物以實(shí)施例的名稱代表)化合物 側(cè)鏈基團(tuán)IC50(μM)
權(quán)利要求
1.一種2-苯氧基嘧啶衍生物，其特征在于它是含有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物或它的鹽， 其中，X為氧、硫、二級氨基(-NH-)或羰基 Y為羰基 氧、硫或二級氨基(-NH-)；R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8是氫、鹵素、烷基、芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)狀雜烷基或環(huán)狀雜烷化烷基；R4是氫、鹵素、羥基、烷氧基或含1-6個(gè)碳原子的烷基；R9選自氫、氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)、烷基或-Z-R10；其中Z表示氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)或烷基；R10是芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、氫或鹵素、烷基、環(huán)狀雜烷基、環(huán)狀雜烷化烷基。
2.如權(quán)利要求1所述的2-苯氧基嘧啶衍生物，其特征在于所述的R2、R3、R5、R6、R7為氫。
3.如權(quán)利要求1或2所述的2-苯氧基嘧啶衍生物，其特征在于所述的R9為-Z-R10，其中Z表示氧、硫、次甲基(-CH2-)、二級氨基(-NH-)或烷基；R10是芳基、芳烷基、芳烷雜環(huán)基、環(huán)烷基、氫或鹵素、烷基、環(huán)狀雜烷基、環(huán)狀雜烷化烷基。
4.一種2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于采用如 1至3中所述的2-苯氧基嘧啶衍生物、其鹽或藥用前體和與能作為藥用的載體組合成藥用制劑。
5.如權(quán)利要求4所述的2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于所述2-苯氧基嘧啶衍生物、其鹽或藥用前體可以作用于蛋白激酶及其變型，調(diào)控和改變蛋白激酶及其變型的催化功能。
6.如權(quán)利要求5所述的2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于所述蛋白激酶及其變型是酪氨酸蛋白激酶及其變型。
7.如權(quán)利要求6所述的2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于所述酪氨酸蛋白激酶及其變型包括受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型和非受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型。
8.如權(quán)利要求5所述的2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于所述蛋白激酶及其變型是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶及其變型。
9.一種2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于給予人體有效劑量的如權(quán)利要求1所述的化合物，可用于治療和預(yù)防與蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病。
10.如權(quán)利要求9所述的2-苯氧基嘧啶衍生物的治療用途，其特征在于所述與蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病包括與受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病、與非受體類酪氨酸蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病以及與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶及其變型相關(guān)的疾病。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類2－苯氧基嘧啶衍生物,它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)由權(quán)利要求1中的結(jié)構(gòu)式及其不同的取代基團(tuán)所表示。這類化合物是蛋白激酶及其變型的抑制劑,它們可用于治療和預(yù)防增生性疾病及對現(xiàn)有藥物產(chǎn)生耐藥性的疾病,如癌癥和炎癥類疾病,此外也可用于治療神經(jīng)變性類疾病如老年性癡呆癥、心血管疾病、病毒性感染和霉菌感染。
文檔編號A61P31/12GK1362409SQ01138070
公開日2002年8月7日 申請日期2001年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月28日
發(fā)明者陳依軍 申請人:陳依軍