專利名稱：一種生物技術(shù)制備中成藥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于酶的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，是用復(fù)合酶反應(yīng)液制備中成藥的方法。
本發(fā)明的主要技術(shù)方案采用復(fù)合酶反應(yīng)液，對中草藥的單方或復(fù)方原料通過酶解和發(fā)酵，將其中的有效成分、化學(xué)成分有效的提取出來。
本發(fā)明的制備方法包括以下步驟1.單方或復(fù)方中草藥原料經(jīng)洗凈后破碎、過60目篩；2.將步驟(1)破碎的原料浸沒在乳酸中，并同時用40支光紫外燈照射18小時；3.在步驟(2)處理過的中草藥原料中加入復(fù)合酶反應(yīng)液，按20公斤中草藥原料(干基)加1升復(fù)合酶反應(yīng)液計，攪拌均勻后在35-45℃下發(fā)酵72小時，發(fā)酵過程中用濃度為36-72％的NaOH或濃度為72-90％的醋酸控制PH值為3.5-6.2，當(dāng)過酸時加NaOH，中性偏堿時加醋酸，經(jīng)沉淀后提取上清液、包裝即為口服液。
上述方法成還可按常規(guī)方法將(3)步的上清液噴霧干燥后制成包括粉劑、片劑、膠囊在內(nèi)的劑型。
所述的復(fù)合酶反應(yīng)液已申請專利，專利申請?zhí)枮?1130990.3。所述的復(fù)合酶反應(yīng)液的組成成份及其含量(以組分重量之和為100計)復(fù)合酶2-5％、原生質(zhì)液4.5-60％、酶促進(jìn)劑5-10％、蒸餾水10-70％、含微量元素的無機(jī)鹽0.5-18％、輔料3-24％。所述的復(fù)合酶為纖維素酶、果膠酶、葡萄糖異構(gòu)酶、淀粉酶和脂肪酶以重量比為2∶2∶3∶3∶3混合；所述的原生質(zhì)液包括玉米漿、玉米粉、胡蘿卜汁、蛋清、蘋果汁、梨汁、蘿卜汁、青菜汁、苦瓜汁在內(nèi)的一種、兩種或兩種以上的混合物；所述的酶促進(jìn)劑包括酵母膏、吐溫80、紅曲粉在內(nèi)一種、兩種或兩種以上的混合物；所述的無機(jī)鹽包括KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、ZnSO4、KNO3、CaCl2、NaNO3、Na2SO4；所述的輔料包括蛋白胨、蛋白粉、甘油、酵母膏、葡萄糖、蜂王漿、瓊脂、乳酸、白糖、紅糖在內(nèi)的一種、兩種或兩種以上的混合物。
復(fù)合酶反應(yīng)液的制備方法將復(fù)合酶及原生質(zhì)液、無機(jī)鹽、輔料、蒸餾水按比例加到容器中混合，搖床振動8小時，40℃下培養(yǎng)8小時，裝瓶，紫外線照射8小時，在18-26℃下避光可保存18個月。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果本發(fā)明的方法與傳統(tǒng)的煎煮中藥方法相比有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的方法簡單，適用于中草藥中的單方、復(fù)方秘方或任何傳統(tǒng)的方藥，對不同用途的中草藥可選擇不同的復(fù)合酶反應(yīng)液；本發(fā)明的方法是應(yīng)用酶解及發(fā)酵的生物工程理論，在一般的溫度、壓力下對原料加工后再進(jìn)行酶解成藥，這樣可大大提高藥物的有效成分，同時使藥效也大大提高，另一方面對傳統(tǒng)方法作為廢渣的物質(zhì)，可大量地轉(zhuǎn)化為輔助性治病的葡萄糖等而被人體吸收；本發(fā)明由于采用酶解發(fā)酵，不會產(chǎn)生超過人體允許的重金屬或有毒物質(zhì)，因此產(chǎn)物安全無毒；本發(fā)明的方法，使產(chǎn)物分子結(jié)構(gòu)發(fā)生根本變化并能充分地分解纖維素、木質(zhì)素、脂肪等，并能使小分子蛋白、游離氨基酸及多肽產(chǎn)物等生物活性物質(zhì)的量大大提高，這些生物活性物質(zhì)易被人體吸收，可直接進(jìn)入病灶；此外，本發(fā)明的方法無廢水、廢氣、廢渣，對環(huán)境保護(hù)有著重要意義。
本發(fā)明的方法將復(fù)合酶反應(yīng)液應(yīng)用于中藥制藥工業(yè)至今還是世界首創(chuàng)，如果將此方法在我國6000家左右的大、中、小中藥廠應(yīng)用將會獲得較大的經(jīng)濟(jì)效益，因此此本發(fā)明的方法具有重大的經(jīng)濟(jì)和社會意義。
實例1本實例為單方甘草。
將40公斤甘草洗凈后破碎至60目，浸沒在乳酸中，并同時用40支光紫外燈照射18小時，然后加入2升復(fù)合酶反應(yīng)液，攪拌均勻，在40±5℃下發(fā)酵72小時，發(fā)酵過程中控制PH值為3.5-6.2，最后經(jīng)沉降后取其上清液即可。
同時按傳統(tǒng)方法煎煮甘草，得到過濾后的煎煮液。
經(jīng)分析結(jié)果表明，本發(fā)明方法的甘草甜素的提取率是傳統(tǒng)方法的提取率的2.2倍(是由福建中醫(yī)學(xué)院中心實驗室測試，采用高效液相色譜法檢測，所用的儀器為美國tsp高效液相色譜儀)。
本實例所用的復(fù)合酶反應(yīng)液配方，按下列重量百分?jǐn)?shù)蘋果汁10％、豆芽汁5％、吐溫80 5％、K2HPO41％、KH2PO41％、(NH4)2SO40.5％、MnSO40.5％、蛋白粉5％、酵母膏5％、葡萄糖5％、白糖2％、乳酸5％、復(fù)合酶(纖維素酶∶果膠酶∶葡萄糖異構(gòu)酶∶淀粉酶∶脂肪酶重量比為2∶2∶3∶3∶3進(jìn)行混合)5％、蒸餾水50％，混勻后即可。
實例2本實例為單方黃芪20公斤，實例1的復(fù)合酶反應(yīng)液1升，按實例1的方法得到上清液。并同時用按傳統(tǒng)的方法對黃芪水煎，得到水煎液。
結(jié)果表明，本發(fā)明的方法黃芪多糖的提取率為，是傳統(tǒng)方法的提取率的5倍(是由福建中醫(yī)學(xué)院中心實驗室測試，采用比色法檢測，所用的儀器為紫外/可見分光光度計)。
實例3本實例為單味中藥組方即滿山白止咳劑(福建省建陽制藥廠提供的組方)。將單味組方采用實例1的本發(fā)明的酶解方法，所用生藥材量為2kg，按常規(guī)方法制成粉劑；按傳統(tǒng)的水煎方法，得到水煎液，所用的生藥材量為7.7kg。兩者止咳效果在統(tǒng)計學(xué)上無差異，而用的藥材量，傳統(tǒng)方法是本發(fā)明的酶解方法的3.85倍。
本實例的復(fù)合酶反應(yīng)液組成原生質(zhì)液梨汁20％、蘿汁10％、青菜汁10％、苦瓜汁10％；酶促進(jìn)劑為吐溫80 5％；無機(jī)鹽ZnSO48％、MgSO42％、KH2PO46％；復(fù)合酶4％；輔料為乳酸15％；蒸餾水10％。
實例4本實例為單味中藥組方即元胡鎮(zhèn)痛劑(福建省陽制藥廠提供的組方)。
將2kg生藥材按本發(fā)明的方法制得元胡酶解粉劑(復(fù)合酶反應(yīng)液組成同實例3)；將28.2kg的生藥材，按傳統(tǒng)的方法，得到元胡水煎液。兩者止痛效果統(tǒng)計學(xué)上無差異，但傳統(tǒng)方法的生藥材量是本發(fā)明方法的14.1倍。
實例5本實例是比較實例3方法得到的滿山白酶解粉劑和傳統(tǒng)方法的滿山白水煎劑對小鼠的鎮(zhèn)咳作用，從而考察兩種方法對生物活性的影響。
試驗材料藥品與試劑滿山白水煎劑相當(dāng)于生藥含量為4.13g/g，按本發(fā)明方法得到的滿山白酶解粉劑相當(dāng)于生藥含量為0.69g/g，實驗中的給藥劑量均按相當(dāng)于生物量計算；氫氧化氨為北京化工廠生產(chǎn)，批號960910；動物SPF級昆明小鼠，雌雄兼用，由中國藥品生物制品檢定所動物繁育中心提供，合格證號京動許字(2000)第017號，動物試驗設(shè)備合格證號二級醫(yī)動學(xué)第010-2059號。
方法的結(jié)果；取體重19.0±1.0克的小鼠，隨機(jī)分為5組，分別為空白對照組，兩種樣品的高劑量組(10g/kg)和低劑量組(2.6g/kg)，給藥體積為0.5ml/20g，對照組灌胃給予等容積蒸餾水，給藥后1小時將動物置于加入定量氨水的容器中，記錄小鼠出現(xiàn)咳嗽反應(yīng)的時間(潛伏期)及2分鐘內(nèi)的咳嗽次數(shù)，結(jié)果見表1。
表1結(jié)果表明兩種工藝制備的滿山白粉劑和滿山白水煎劑，在氨水所致小鼠咳嗽模型上，10g/kg劑量組均能明顯延長小鼠咳嗽潛伏期(P＜0.01)，同時也可以減少小鼠出現(xiàn)咳嗽次數(shù)(P＜0.05)；比較兩個樣品同等劑量(10g/kg)組對小鼠咳嗽潛伏期影響結(jié)果，滿山白水煎劑較滿山白酶解粉劑延長咳嗽潛伏期的作用略有增強(qiáng)(P＜0.05)，而低劑量組結(jié)果基本相同。
實例6本實例是考察按實例4的方法制得的元胡酶解粉劑和按傳統(tǒng)的方法制得的元胡水煎劑的止痛作用，從而比較兩種不同方法對其生物活性的影響。
試驗材料藥品與試劑元胡水煎劑(用生藥材28.2kg得到干膏粉2kg)相當(dāng)于生藥含量14.1g/g，元胡酶解粉劑(用生藥材2kg得到酶解產(chǎn)物1.5kg)相當(dāng)于生藥含量1.33g/g，實驗中的給藥劑量均按相當(dāng)于生藥量計算。
動物SPF級昆明小鼠，雄性，由中國藥品生物制品檢定所動物繁育中心提供，合格證號京動許字(2000)第017號。
方法和結(jié)果兩種樣品對熱板法小鼠疼痛模型鎮(zhèn)痛作用影響選取體重19.0±1.0克，痛閾潛伏期在10-30秒以內(nèi)的雄性小鼠，隨機(jī)分為5組；空白對照組，兩種樣品高劑量組(25g/g)、低劑量組(6.0g/kg)，經(jīng)口給藥0.5ml/20g體重，對照組灌服等容量蒸餾水，1小時后在熱板測定儀上測量動物的疼痛反應(yīng)(55±1℃)，以小鼠舔后足為指標(biāo)，記錄出現(xiàn)舔足反應(yīng)的時間(潛伏期)，結(jié)果見表2。
表2結(jié)果表明，元胡酶解粉劑和元胡水煎劑，高劑量組(25g/kg)均對熱板引起的小鼠疼痛模型有明顯鎮(zhèn)痛作用，并且兩種不同方法的樣品，在同等劑量下對小鼠疼痛模型鎮(zhèn)痛作用未見明顯差異。
上述實例5和實例6的試驗方法和結(jié)果是由“中國藥品生物制品檢定所”提供。
表1 滿山白水煎劑和滿山白酶解粉劑的鎮(zhèn)咳作用
與對照組比較**P＜0.01、*P＜0.05，與滿山白水煎劑相同劑量組比較#＜0.05。
表2 元胡水煎劑和元胡酶解粉劑的鎮(zhèn)痛作用
與對照組比較**P＜0.0權(quán)利要求
1一種生物技術(shù)制備中成藥的方法，其特征在于制備過程包括以下步驟(1)單方或復(fù)方中草藥原料洗凈后破碎，過60目篩，(2)將步驟(1)破碎的原料浸沒在乳酸中，并同時用40支紫光燈照射18小時，(3)在步驟(2)處理過的中草藥原料中加入復(fù)合酶反應(yīng)液中，按20公斤中草藥原料(干基)加1升復(fù)合酶反應(yīng)液計，攪拌均勻后在35-45℃下發(fā)酵72小時，發(fā)酵過程中用濃度為36-72％的NaOH或濃度為72-90％的醋酸控制PH值為3.5-6.2，發(fā)酵結(jié)束沉降后提取上清液即可。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)得到的上清液經(jīng)噴霧干燥，再按常規(guī)方法制得包括粉劑、片劑、膠囊在內(nèi)的劑型。
全文摘要
本發(fā)明是一種生物技術(shù)制備中成藥的方法，系將中草藥原料經(jīng)清洗、粉碎，乳酸浸泡并同時用紫外燈照射，然后加入復(fù)合酶反應(yīng)液，在一定溫度下進(jìn)行發(fā)酵，沉降后取上清液即可，還可以將上清液進(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法制成包括粉劑、片劑、膠囊在內(nèi)的劑型。本發(fā)明是將單方或復(fù)方中草藥原料，通過酶解發(fā)酵，可將藥物中的有效成分、化學(xué)成分進(jìn)行有效的提取，而且可將傳統(tǒng)煎煮中藥方法中的廢渣大量地轉(zhuǎn)化為葡萄糖等易被人體吸收的物質(zhì)，而且該方法無廢水、廢氣、廢渣，對環(huán)境保護(hù)有著重要的意義。
文檔編號A61K38/43GK1406614SQ01130989
公開日2003年4月2日 申請日期2001年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月29日
發(fā)明者林陸山, 汪奮生 申請人:鄭振標(biāo), 鄭東