專利名稱：高酶活家蠶基因工程飼用植酸酶制劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于轉基因物質，尤其是畜禽用轉基因酶制劑制造領域。
中國專利CN99103564公開了一種應用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達系統生產植酸酶的基因工程方法，用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因，并使其處于多角體蛋白基因啟動子的控制下，再將此重組質粒與野生型BmNPV-DNA共轉染于家蠶細胞，通過體內同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒，再利用多角體蛋白基因的啟動子啟動植酸酶基因，并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶，在蠶體內繁殖產生目標物植酸酶蛋白。但如何將家蠶基因工程植酸酶生產在較大的工業化程度上實現，或者更具體地說在畜禽用轉基因酶制劑工業中高產量、低成本的生產出具有商業競爭力的產品仍是需要解決的問題。在產品儲運過程中，制劑的酶活量不可避免會出現不同程度的降低。
本發明的目的是，生產一種家蠶基因工程植酸酶制劑，使之能改善現有技術的不足，使之具有良好的酶活穩定性，在成品儲運過程中具有較低的酶活日損失率。
本發明的目的使通過如下的方法實現的。
家蠶基因工程植酸酶工業化感染控制方法，應用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達系統生產植酸酶，用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因，并使其處于多角體蛋白基因啟動子的控制下，再將此重組質粒與野生型BmNPV-DNA共轉染于家蠶細胞，通過體內同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒，再利用多角體蛋白基因的啟動子啟動植酸酶基因，并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶，在蠶體內繁殖產生目標物植酸酶蛋白，將目標病蠶經勻漿后與一定細度的麩皮吸附，再經烘干—粉碎—過篩后標定酶活的工藝得到商業化產品，成品制劑中含有抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ。
制劑中加入適量抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ后，酶活日損失率與4℃下保存的產品相當，且可較大地降低前10天中酶的活性損失率，比未加EMQ產品酶活日損失率低0.18％(4℃下)-0.33％(室溫下)/天，使成品儲運過程中具有較低的酶活日損失率，為基因工程植酸酶制劑能在較大的時間和空間范圍內實現商業化應用提供了保障。
如下圖1為室溫下酶活隨時間的變化圖。
以其中0.9EMQ加入量為例，室溫下保存30天，酶活損失19.6％，日損失0.66％/天。前10天日損失0.55％，中間10天日損失1.45％，后10天日損失0.055％。
加入EMQ后，30天后酶活損失16.0％，日損失0.53％。前10天日損失0.22％，中間10天日損失1.37％，后10天日損失0.048％。
以蠶蛹為實驗樣本也得到基本一致的結果由此可見，采用本發明，在加工后的半成品中加入適量EMQ后得到的飼用基因工程植酸酶制劑，可在相當的時間內較大地降低酶的活性損失率，為基因工程植酸酶制劑能在較大的時間和空間范圍內實現商業化應用提供了有利的條件。
權利要求
1.高酶活家蠶基因工程植酸酶制劑，應用重組BmNPV載體-家蠶宿主表達系統生產植酸酶，用植酸酶基因替換家蠶核型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因，并使其處于多角體蛋白基因啟動子的控制下，再將此重組質粒與野生型BmNPV-DNA共轉染于家蠶細胞，通過體內同源重組得到帶有外源植酸酶基因的重組病毒，再利用多角體蛋白基因的啟動子啟動植酸酶基因，并將此重組家蠶核型多角體感染家蠶，在蠶體內繁殖產生目標物植酸酶蛋白；將目標病蠶經勻漿后與一定細度的麩皮吸附，再經烘干—粉碎—過篩后標定酶活的工藝得到商業產品，其特征在于，成品制劑中含有抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ。
2.根據權利要求1所述之高酶活家蠶基因工程植酸酶制劑，其特征在于，所述抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ的加入量為0.5-1.0％。
3.根據權利要求1或2所述之高酶活家蠶基因工程植酸酶制劑，其特征在于，所述抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ的加入量為0.8％。
全文摘要
本發明涉及應用重組BmNPV載體－家蠶宿主表達系統生產植酸酶,將特定重組家蠶核型多角體感染家蠶,在蠶體內繁殖產生目標物植酸酶蛋白;將目標病蠶經勻漿后與一定細度的麩皮吸附,再經烘干—粉碎—過篩后標定酶活的工藝得到商業化產品,其成品制劑中含有抗氧化劑乙氧基喹啉EMQ。本發明產品具有成品保存酶活損失小的優點,比常規產品日酶活損失率低0.18%(4℃下)－0.33%(室溫下)/天。
文檔編號A61K38/43GK1383893SQ0110739
公開日2002年12月11日 申請日期2001年4月30日 優先權日2001年4月30日
發明者陳英, 石鈺, 秦儉 申請人:四川華神集團股份有限公司