專利名稱：兩頭尖提取物的制備工藝和用途的制作方法
技術領域：
本發明公開一種兩頭尖提取物的制備工藝和用途，涉及中藥有效成分的提取制備工藝技術和用途領域。
兩頭尖為毛茛科銀蓮花屬植物多被銀蓮花(Anemone raddeanaRegel)的干燥根莖，作為中藥在中醫臨床上具有“祛風濕、消癰腫”的作用，用于“風寒濕痹、四肢拘攣、骨節疼痛、癰腫潰爛”，現代藥學研究表明兩頭尖及其莖、葉、花、果中的總皂甙具有消炎、鎮痛、鎮靜、抑菌等生物活性，特別是皂甙D的上述活性較強，目前，上述物質的提取分離只局限于實驗室研究階段，無法達到工業化生產和開發新藥用途。
本發明提供一種兩頭尖提取物的制備工藝，目的旨在從兩頭尖中提取具有藥用價值的總皂甙及單體皂甙D，適用于工業化生產。
本發明的另一目的是提供兩頭尖總皂甙及皂甙D制成的藥物，用于治療惡性腫瘤。
本發明的進一步目的是提供上述提取物在制備治療惡性腫瘤的藥物方面的用途。
本發明的技術解決方案包括以下步驟1、取兩頭尖及其莖、葉、花、果粉碎成20目左右粗粉；2、加5～9倍量的50～70％乙醇進行提取，或用水煎醇沉法提取，過濾并回收乙醇；3、經大孔吸附樹脂吸附，除去色素、糖類等，再用水洗脫樹脂至無色，也可用堿溶液洗脫，柱中即為皂甙部分；4、用50％～70％的乙醇進行洗脫，回收乙醇至無醇味，加入適量的明膠，過濾，上脫色大孔樹脂，用50％～70％乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮干燥，獲得兩頭尖總皂甙；5、將兩頭尖總皂甙用甲醇溶解，上硅膠干柱層析分離，洗脫至柱底，洗脫液為氯仿∶甲醇∶水=75～55∶45～25∶20～1；6、收集柱中含皂甙D硅膠，用甲醇洗脫至無皂甙反應，回收甲醇至干，通過醇重結晶，得到無色粉末狀結晶兩頭尖皂甙D。
取兩頭尖總皂甙干粉加適量淀粉，以70％乙醇制粒，干燥分裝制成口服膠囊。
稱取兩頭尖皂甙D10份、氯化鈉75份，加蒸餾水適量，用1～5％的氫氧化鈉溶液調PH7.5～8.5，加蒸餾水10000ml，經過濾，在無菌條件下灌裝和冷凍干燥，制成注射用皂甙D粉針。
本發明的藥物含有治療有效量的提取物為活性成分，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體。
本發明的提取物可用于制備治療癌癥，特別是肝癌、胃腺癌、肺癌、乳腺癌等癌癥的藥物。
上文的載體是指藥學領域常規的藥物載體，包括稀釋劑、賦形劑，填充劑，粘合劑，濕潤劑，崩解劑，吸收促進劑，表面活性劑，吸附載體等。
本發明可以組合物的形式通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或外用給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學領域的常規生產方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑等。也可使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，制成所需劑型。
本發明的藥物組合物優選重量比為0.1％～99.5％活性成分。
本發明的施藥量可根據用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴重程度等變化，日劑量為0.01～20mg/kg。
兩頭尖活性成分的提取分離和鑒定，闡明了兩頭尖功能主治的物質基礎，本發明人發現兩頭尖總皂甙具有極明顯的抗癌活性，對小鼠體內Hep-A-22肝癌的抑瘤率為79％，對C57小鼠Lewis肺癌的抑瘤率為71％。體外能顯著抑制小鼠S180和腹水型肝細胞的DNA、RNA和蛋白質合成，其抑制率隨劑量的增多和時間的延長而增加。其抗癌機理主要是由于抑制癌細胞的DNA合成。
下面的實施例可使本領域的技術人員更全面理解本發明，但不以任何形式限制本發明。
實施例1兩頭尖總皂甙的制備取兩頭尖包括莖、葉、花、果10公斤，粉碎成20目粗粉，加50公斤的70％乙醇，回流提取3次，每次2小時，過濾提取液合并，減壓回收乙醇至無醇味，經噴霧干燥成干粉，加入70％的乙醇溶解，上D101大孔吸附樹脂柱，用水洗至無色后，用70％的乙醇洗脫至無皂甙反應為止，將洗脫液用1％活性炭脫色30分鐘，趁熱過濾，回收乙醇至無醇味，噴霧干燥成細粉，得黃褐色粉末0.5公斤。
實施例2兩頭尖總皂甙的制備取兩頭尖10公斤，粉碎成20目粗粉，加100公斤的水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.18～1.20(80℃～85℃熱測)，加乙醇，使乙醇含量達70％，靜止24小時，過濾，回收乙醇，至小體積，加乙醇使醇含量達90％，靜止24小時，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，得黃褐色粉末。
實施例3兩頭尖皂甙D的制備取兩頭尖粗粉100克，加70％乙醇500ml滲漉至無皂甙反應，回收乙醇至無醇味，經減壓干燥并粉碎成干膏粉，加入甲醇溶解，拌如入5倍量的硅膠，上硅膠柱，樣品∶硅膠=1∶150進行干柱層析，用氯仿∶甲醇∶水=65∶25∶5配成的洗脫液洗脫至柱底，取硅膠切割成段，用甲醇洗脫，薄層析鑒定，收集皂甙D部分，繼續用甲醇洗脫至無皂甙反應，減壓回收甲醇至干，用乙醇重結晶，得無色粉末狀晶體。
實施例4膠囊兩頭尖總皂甙 2500克玉米淀粉 500克制備方法將兩頭尖總皂甙與玉米淀粉混合攪拌均勻，加入適量70％乙醇濕潤制粒，干燥裝入膠囊中，制成膠囊1000粒，每個膠囊0.3克。
實施例5注射用粉針劑兩頭尖皂甙D 15克氯化納75克注射用水 10000ml制備過程將兩頭尖皂甙D、氯化鈉溶解于適量的注射用蒸餾水中，用1～5％的氫氧化鈉溶液調PH8.0，加注射用水至10000ml，通過0.2μm的微孔濾膜過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓶，冷凍干燥。
實施例6實施例1提取物的抑瘤作用總皂甙制成的膠囊經藥效學研究，能明顯抑制肉瘤S180，肝癌、宮頸癌，其抑癌率分別為49％,54％,84％，對離體細胞株增殖的影響試驗表明，在藥物的直接作用下，對肝癌細胞株，肺腺癌細胞株，胃腺癌細胞株，乳腺癌細胞株的增殖均有抑制作用，其抑制率分別在75％,76％,73％,84％以上。
實施例7兩頭尖皂甙D制成的注射用粉針以5-氟尿嘧啶為對照藥，對小鼠體內Hep-A-22肝癌的抑瘤率為74％。對C57小鼠Lewis肺癌的抑瘤率為71％。對Bre-04人體乳腺癌，C01-06人體腸癌的抑瘤率在54～41范圍。體外100μg/ml對人體肝、肺、乳腺及腸癌細胞毒試驗IC50結果均表明具有20μg/ml的細胞毒作用，對乳腺癌細胞更敏感，體外對人體肝癌、人胃腺癌、人肺癌、乳腺癌的抑制率分別為75％、76％、53％、58％。本注射液能抑制前身物(DNA)摻入體外培養的AH細胞，特別是對S180細胞3H-TdR摻入DNA合成有顯著的抑制作用。
權利要求
1.一種兩頭尖提取物的制備工藝，包括以下工藝步驟1)、取兩頭尖及其莖、葉、花、果粉碎成20目左右粗粉；2)、加5～9倍量的50～70％乙醇進行提取，或用水煎醇沉法提取，過濾并回收乙醇；3)、經大孔吸附樹脂吸附，除去色素、糖類等，再用水洗脫樹脂至無色，也可用堿溶液洗脫，柱中即為皂甙部分；4)、用50％～70％的乙醇進行洗脫，回收乙醇至無醇味，加入適量的明膠，過濾，上脫色大孔樹脂柱，用50％～70％乙醇洗脫，回收乙醇，濃縮干燥，獲得兩頭尖總皂甙；5)、將兩頭尖總皂甙用甲醇溶解，上硅膠干柱層析分離，洗脫至柱底，洗脫液為氯仿∶甲醇∶水=75～55∶45～25∶20～1；6)、收集柱中硅膠，用甲醇洗脫至無皂甙反應，回收甲醇至干，通過醇重結晶，得到無色粉末狀結晶兩頭尖皂甙D。
2.用于治療癌癥的藥物，其中含有治療有效量的權利要求1提取物和藥學上可接受的載體。
3.根據權利要求1所得提取物制備治療肝癌、胃腺癌、肺癌、乳腺癌的藥物。
4.根據權利要求1～3所得提取物制備醫藥學上任何劑型藥物。
全文摘要
本發明公開一種兩頭尖提取物的制備工藝和用途,從兩頭尖及其莖、葉、花、果中提取具有藥用價值的總皂甙及單體皂甙D,適用于工業化生產,并制成藥物,用于治療惡性腫瘤疾病。兩頭尖活性成分的提取分離和鑒定,闡明了兩頭尖功能主治的物質基礎,兩頭尖總皂甙具有極明顯的抗癌活性,對小鼠體內Hep－A－22肝癌的抑瘤率為79%,對C
文檔編號A61K31/4745GK1312253SQ0110608
公開日2001年9月12日 申請日期2001年1月16日 優先權日2001年1月16日
發明者劉大有, 劉大同, 邱金文, 張大方, 李紅科, 劉藝峰 申請人:長春中醫學院