非肽鈴蟾肽受體拮抗物對(duì)治療焦慮和恐慌紊亂癥的新應(yīng)用的制作方法

專(zhuān)利名稱(chēng)：非肽鈴蟾肽受體拮抗物對(duì)治療焦慮和恐慌紊亂癥的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于鈴蟾肽受體拮抗物對(duì)新適應(yīng)癥用的藥物制造中的應(yīng)用。也關(guān)于利用鈴蟾肽受體拮抗物進(jìn)行診斷、治療或預(yù)防的方法。
背景技術(shù)：
兩棲的四十肽鈴蟾肽(BB)屬于新一類(lèi)的肽，在它們的C-端順序中共享結(jié)構(gòu)均勻性(Dutta A.S.(1993)inSmall PeptidesChemistry，Biology，&ClinicalStudies，第2章，pp66-82，Elsevier)。
十肽神經(jīng)介素B(NMB)、神經(jīng)介素C(NMC)和27殘基氨基酸，釋放胃泌激素的肽(GRP)是已被證明的三種哺乳類(lèi)動(dòng)物的類(lèi)鈴蟾肽的肽(Battey J.等人(1991)，Trends Neurosa.14524)。認(rèn)為NMB和GRP通過(guò)作用于相應(yīng)的優(yōu)選的NMB(BB1)受體和優(yōu)選GRP(BP2)受體，可傳遞各種周邊和中心傳遞的生物作用(Lebacq Verheyden A.等人(1990)Handbook of ExperimentalPharmacology95(part II)71)。國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 98/07718中描述了非肽鈴蟾肽受體拮抗物。
發(fā)明簡(jiǎn)要現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)描述于WO 98/07718中的化合物和相關(guān)的化合物可用于以下疾病的診斷、預(yù)防和治療，例如焦慮和恐慌紊亂癥、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育失調(diào)、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌紊亂、嘔吐或厭食。在國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 98/07718中所描述的在本發(fā)明中所使用的鈴蟾肽受體拮抗物，公開(kāi)在本文中作為參考。
因此，本發(fā)明提供了一種利用鈴蟾肽受體拮抗物可改善治療的各種疾病的預(yù)防或治療方法，包括焦慮恐慌失調(diào)癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育失調(diào)癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、嘔吐或厭食，炎癥疼痛、神經(jīng)病的疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性和后皰疹性疼痛，所述方法包括對(duì)需要這種治療的病人施用有效量的式I的鈴蟾肽受體拮抗物或其藥學(xué)上可接受的鹽。 其中i為0或1，k為0或1，l為0，1，2，或3，m為0或1，n為0，1或2，Ar是苯基、吡啶基或嘧啶基，各為未取代的，或可由選自烷基、鹵素、烷氧基、乙?；?、硝基、氨基、-CH2NR10R11，氰基、-CF3，-NHCONH2，和-CO2R12中的1～3個(gè)取代基取代的R1是氫或1～7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，R8是氫或和有3～7個(gè)碳原子的R1形成的環(huán)，R2是氫或1～8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈，或環(huán)狀烷基，它也可以含有1～2個(gè)氧或氮原子，R9是氫或由3～7個(gè)碳原子與R2形成的環(huán)，它可含有氧或氮原子；或者R2和R9可一起是羰基，Ar1可以是單獨(dú)選自Ar并也可包括吡啶基-N-氧化物、吲哚基、咪唑基，和吡啶基，R4、R5、R6和R7每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫和低級(jí)烷基，R4也可與R5形成2～3個(gè)原子的共價(jià)鍵，其可以包括氧或氮原子，R3可單獨(dú)地選自Ar，或者是氫、羥基、-NMe2，N-甲基-吡咯基、咪唑基、N-甲基-咪唑基、四唑基、N-甲基-四唑基、噻唑基、-CONR13R14、烷氧基， ，或
其中p為0，1或2，Ar2是苯基或吡啶基，R10，R11，R12，R13和R14各單獨(dú)地選自氫或者1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
本發(fā)明還關(guān)于利用式I化合物制備一種通過(guò)上述鈴蟾肽受體拮抗物而用于可改善治療的診斷、預(yù)防或治療的疾病。
本發(fā)明還關(guān)于提供治療哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，包括向哺乳動(dòng)物施用一種組合物，該組合物含有抑制腫瘤量的式I化合物，或者式I化合物和細(xì)胞毒素劑的共軛物。
本發(fā)明進(jìn)而提供一種對(duì)哺乳動(dòng)物具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的組織的體內(nèi)診斷成象的方法，該方法包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的本發(fā)明放射性標(biāo)記化合物，由于所說(shuō)的化合物與有許多有這種受體細(xì)胞的組織的鈴蟾肽受體相結(jié)合，所以能進(jìn)一步檢測(cè)放射圖像。尤其是本發(fā)明關(guān)于對(duì)哺乳動(dòng)物診斷哺乳動(dòng)物腫瘤的存在方法，該方法包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的式I化合物，并可選擇地檢測(cè)具有許多有鈴蟾肽受體的細(xì)胞的組織的圖像。
本發(fā)明的再一個(gè)方面，是提供一種體外檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織中的癌細(xì)胞的方法，該方法包括將哺乳動(dòng)物的組織樣品，與體外診斷成象量的式I化合物接觸一定時(shí)間，并在足以使化合物與癌細(xì)胞結(jié)合的條件下，檢測(cè)這種結(jié)合。
附圖描述

圖1示出化合物1(以10mg/kg，試驗(yàn)前1h腹膜注射)對(duì)放置在提高的正迷宮上的大鼠行為的作用([A]是開(kāi)臂的％時(shí)間；[B]進(jìn)入開(kāi)臂的％數(shù)；[C]開(kāi)臂結(jié)束時(shí)間；Veh載體)。
圖2示出了通過(guò)大鼠在強(qiáng)光、生疏的條件下，化合物1對(duì)社會(huì)相互作用所用時(shí)間的作用。
圖3示出了通過(guò)大鼠在敞開(kāi)田野試驗(yàn)的沙地中央時(shí)化合物1對(duì)所用時(shí)間的作用(Veh載體)。
圖4示出了豚鼠幼畜中化合物1在隔離-誘導(dǎo)發(fā)聲恐懼模式中的作用。
圖5示出了豚鼠幼畜中在隔離-誘導(dǎo)發(fā)聲恐懼模式中苯甲二氮(a)或氟苯氧丙胺(b)的作用。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明中使用的化合物是上述式I的化合物。優(yōu)選化合物是式II的化合物。 其中Ar是未取代苯基，或由選自異丙基、鹵素、硝基、和氰基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基，R4、R5和R6是氫，R7是甲基或氫，R3是2-吡啶基或羥基，和Ar1是吲哚基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物或咪唑基。
另一種優(yōu)選化合物是式I的化合物。
其中Ar是未取代的苯基，R1是環(huán)戊基或叔丁基，R4和R5是氫，R7是甲基，R6是氫，R3是具有2個(gè)異丙基取代基的苯基，未取代苯基，或式 Ar1是吲哚基。
另一種優(yōu)選化合物是式I的化合物，其中Ar是2，6-二異丙基-苯基，4-硝基-苯基，和4-氰基-苯基，R4、R5和R6是氫，R7是甲基，
R2是氫或環(huán)己基，和R3是羥基，吡啶基。 ，或 本發(fā)明中使用的化合物的烷基基團(tuán)，除了專(zhuān)門(mén)指定的形式外，包括1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈，或環(huán)狀碳鏈。代表性的基團(tuán)是甲基、乙基、丙基、異丙基、正-丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、2-甲基己基、正-戊基、1-甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2-甲基戊基、2，2-二甲基丙基、正-己基和其他。
本發(fā)明中所用化合物的低級(jí)烷基基團(tuán)包括具有1-6個(gè)碳原子的基團(tuán)。
本發(fā)明中所用化合物的環(huán)烷基基團(tuán)是具有3-7個(gè)碳原子的基團(tuán)。它們可以用選自鹵素、硝基、烷基、和烷氧基中的1-3個(gè)基團(tuán)取代。
本發(fā)明中所用化合物的烷氧基團(tuán)，除了另有說(shuō)明外，包括1-6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈的兩種碳鏈。代表性的基團(tuán)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異-丙氧基、仲-丁氧基、和己氧基。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴、碘和砹，包括他們的放射性核素。
術(shù)語(yǔ)“Ar”是指包括取代的或未取代的苯基。取代基包括以下的一種或多種取代基，諸如鹵素、硝基、烷基、烷氧基、和其他基，如所說(shuō)明的或本技術(shù)人員所熟知的。
術(shù)語(yǔ)“胺”是游離氨基、烷基化胺、和?；?。
更優(yōu)選的化合物是選自以下(S)N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-N-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-1-甲基-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-(1-氧-吡啶-2-基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，
2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-吡啶-2-基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2-叔-丁基-苯基)-脲基]-N-環(huán)己基甲基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二氯-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二甲氧-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二甲基氨基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，(S)N-環(huán)己基甲基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，[S-(R*，R*)]3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-{3-[1-(4-硝基-苯基)-乙基]-脲基}-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，N-(2，2-二甲基-4-苯基-[1，3]二噁烷-5-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(1-苯基-環(huán)戊基甲基)-脲基]-丙酰胺，(S)-N-(2，6-二異丙基-苯基)-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，(R)-N-(2，6-二異丙基-苯基)-2-[3-(2，2-二甲基-1-苯基-丙基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-(2，2-二甲基-4-苯基-[1，3]二噁烷-5-基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-環(huán)己基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，N-(2-環(huán)己基-乙基)-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(3-甲基-丁基)-丙酰胺，
2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(3-苯基-丙基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(2-苯基-環(huán)己基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-二氫化茚-1-基-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-N-(1-羥基-環(huán)己基甲基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(6，7，8，9-四氫-5H-苯并環(huán)庚-5-基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-苯基-丙酰胺，N-(1-羥基-環(huán)己基甲基)-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，2-[3-(4-氰基-苯基)-脲基]-3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-2-[3-(4-三氟甲基-苯基)-脲基]-丙酰胺，(S)4-(3-{2-(1H-吲哚-3-基)-1-甲基-1-[(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-氨基甲?；鵠-乙基}-脲基)-苯甲酸乙基酯，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-3-(1H-咪唑-4-基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-3-(2-三氟甲基-苯基)-丙酰胺，2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-(2-硝基-苯基)-N-(1-吡啶-2-基-環(huán)己基甲基)-丙酰胺，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺，和N-環(huán)己基甲基-2-[3-(2，6-二異丙基-苯基)-脲基]-2-甲基-3-吡啶-2-基-丙酰胺。
以后，(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺也稱(chēng)作化合物1。
本發(fā)明中所用的化合物，在上述式I中，根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)，可具有多個(gè)手性中心。尤其是本發(fā)明中使用的化合物可以以非對(duì)映體，非對(duì)映體的混合物，或者以混合的或單獨(dú)的光學(xué)對(duì)映體而存在。本發(fā)明認(rèn)為可使用所有這些形式的化合物。
本發(fā)明中使用的化合物包括式I化合物的溶劑化物、水合物、藥物可接受的鹽，和多晶型物(不同晶格描述物)。
最適宜是形成鹽，藥物可接受的鹽包括乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、乙酸鈣、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰對(duì)氨苯基胂酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明鹽(hydrabamine)、氫溴化物、氫氯化物、羥基萘酸鹽、碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽(4，4′-亞甲基雙(3-羥基-2-萘酸鹽))，泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、q-氯茶堿、三乙基碘鹽、芐星、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、亞乙基二胺、葡甲胺、普魯卡因、鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、和鋅(也可參看“pharmaceutical salts”，Bergs S.M.等人(1997)J.P ham.Sci.661-19，本文中引入作參考)。
術(shù)語(yǔ)“病人”或“對(duì)象”是指哺乳動(dòng)物，特別是指人類(lèi)。
進(jìn)行本發(fā)明的方法是通過(guò)向哺乳動(dòng)物施用有效量的式I化合物，在化學(xué)治療適應(yīng)癥中，施用式I化合物與細(xì)胞毒素劑的共軛物，或其藥物可接受的鹽以診斷、預(yù)防和治療上述的任何疾病。這種有效量一般是每公斤對(duì)象體重為約1-300mg。對(duì)于一個(gè)70kg的成年人，一般劑量為每天約1mg到5g。此外，所用放射性標(biāo)記化合物的劑量取決于放射性核素的比放射性。
本發(fā)明的再一個(gè)方面，是提供一種對(duì)上述所列適應(yīng)癥的治療或預(yù)防用的藥物組合物，所述組合物含有式I的鈴蟾肽受體拮抗物，至少與一種藥物上可接受的載體或賦形劑一起。為由本發(fā)明所用化合物制備藥物組合物，惰性的，藥物上可接受的載體可以是固體也可以是液體。固體形式的制劑包括粉末、片劑、分散性顆粒、膠囊、藥包、子宮托和包括陰道栓的栓劑。固體載體可以是能用作稀釋劑、香劑、增溶劑、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、粘合劑、或片劑崩解劑中的一種或多種物質(zhì)，它也可以是一種密封材料。在粉末中，載體是一種磨得很細(xì)的固體，并與很好磨碎的活性組分形成混合物。在片劑中，活性組分以適當(dāng)?shù)谋嚷逝c具有需要粘合性質(zhì)的載體進(jìn)行混合，并壓制成所要形狀和大小。
為了制備陰道栓或栓劑，首先將低熔蠟，諸如脂肪酸甘油酯和可可脂的混合物熔融，并例如通過(guò)攪拌使活性組成分散在其中。然后將熔融均勻的混合物倒入適宜大小的模具中，并使其冷卻和固化。軟膏也是優(yōu)選的藥物組合物，同樣可以由本發(fā)明所用的化合物進(jìn)行制備。
粉末和片劑優(yōu)選含有5％～約70％的活性組分，適宜的載體是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石、乳糖、蔗糖、果膠、糊精、淀粉、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點(diǎn)蠟、可可脂，等等。
術(shù)語(yǔ)“制劑”是包括將活性組分與作為載體的密封材料進(jìn)行配制，提供一種膠囊，其中活性組成(具有或不具有其他載體)由載體包圍，因此載體與它結(jié)合在一起，同樣也能制備藥包。
片劑、粉劑、藥包和膠囊可以作為適于口服的固體劑形。
液體形式制劑包括溶液、懸濁液、和乳濁液。作為適于腸胃服用的液體制劑的實(shí)例，可以提出活性化合物的無(wú)菌水或水-丙二醇溶液。液體制劑也可以是在聚乙二醇水溶液中的溶液?？诜乃芤嚎赏ㄟ^(guò)將活性組分溶解在水中而制備。如果需要，可添加適宜的色劑、香劑、穩(wěn)定劑和增稠劑。通過(guò)將磨細(xì)的活性組分與粘性材料如天然合成膠、樹(shù)脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和藥物配制技術(shù)中公知的其他懸浮劑一起分散在水中，可制成水懸浮液。
優(yōu)選的藥物制劑是以單位劑量形式。這種形式中，將制劑分成含有適宜量的活性組分的單位劑量。單位劑量形式可以是一種包裝制劑，包裝含有離散量的制劑，例如，包裝片劑、膠囊、和裝在小瓶或安瓿瓶中的粉末。單位劑量形式也可以是膠囊、藥包、或片劑本身，或者可以是任意適宜數(shù)量的這種包裝形式。
正如已提到的，式I化合物可以用于診斷、預(yù)防和治療各種狀況的疾病，關(guān)于這種應(yīng)用的更詳細(xì)情況提供如下。
1)焦慮、恐慌發(fā)作和社交恐怖癥焦慮癥是一種常見(jiàn)的癥狀，苯并二氮雜是對(duì)此癥的主要治療劑。在美國(guó)為此目的最常用的是氯二氮雜氧化物、苯甲二氮，去甲羥基安定、氯羥去甲安定、環(huán)丙安定和三唑安定。然而，治焦慮癥的苯并二氮雜也可引起鎮(zhèn)靜狀態(tài)，它們具有肌肉-松馳、鎮(zhèn)靜-催眠性和遺忘的副作用，它們也可增強(qiáng)醇的作用，對(duì)它們的作用的偏差都可能發(fā)展，在長(zhǎng)期頻繁地使用后，一旦停止使用就會(huì)導(dǎo)致焦慮反彈，長(zhǎng)期使用苯并二氮雜，尤其是隨著劑量的增加，都會(huì)導(dǎo)致依賴(lài)性。因此，需要降低對(duì)焦慮治療的這種依賴(lài)趨勢(shì)。
最近發(fā)現(xiàn)，建議類(lèi)鈴蟾肽的肽在緊張和焦慮中會(huì)發(fā)揮作用(Plamondon H.等人(1996)Soc.Neurosci.22Abstract 181.13)將用于GRP受體和NMB受體的對(duì)mRNA抗過(guò)敏的寡核苷酸輸注老鼠腦室(i.c.v)，超過(guò)2天通過(guò)受體自體放射照相術(shù)測(cè)量，結(jié)果降低腦中鈴蟾肽結(jié)合位點(diǎn)的密度。當(dāng)與對(duì)照動(dòng)物比較時(shí)，用抗過(guò)敏的寡核苷酸處理的老鼠，在高位加迷宮的焦慮場(chǎng)(anxiogenicfields of an elevated plus maze)或在槽形隧道的卵形迷宮(trough-tunnel ovalmaze)的焦慮場(chǎng)上，明顯消耗更多的時(shí)間。這就反映出處理的焦慮作用。通過(guò)藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物有用于治療焦慮恐慌癥，以下列舉一些實(shí)例。
動(dòng)物和藥劑服用以6組圈養(yǎng)的雄性Hooded Lister大鼠(200-250g)或雄性TO小鼠(20-25g)。以成對(duì)圈養(yǎng)稱(chēng)重280-380g的普通狨猴(callithrix jacchus)。所有的動(dòng)物都在12小時(shí)明/暗循環(huán)下，用食物和水隨意圈養(yǎng)。
除了另有說(shuō)明，一般都是在試驗(yàn)前40分鐘，通過(guò)腹腔注射(i.p)或皮下注射(s.c)給藥藥劑，對(duì)于大鼠和狨為1ml/kg的容積量，對(duì)于小鼠為10ml/kg的容積量。
a)小鼠的明/暗箱試驗(yàn)裝置是一個(gè)頂部敞開(kāi)的箱子，長(zhǎng)45cm，寬27cm，和高27cm，由隔板分成大(3/5)，小(2/5)區(qū)，隔板比四壁延高20cm(costall B.等人(1989)Pharmacol.Biochem.Behav.32777-785)。沿地板水平，在隔板的中心處開(kāi)有7.5×7.5cm的開(kāi)口。小的箱室涂成黑色，大的箱室涂成白色。白箱室用60W的鎢燈照明，用紅光照明實(shí)驗(yàn)室，將每個(gè)小鼠通過(guò)放在白區(qū)的中心而進(jìn)行試驗(yàn)，并使它習(xí)慣新環(huán)境5分鐘，測(cè)定在照明位點(diǎn)中度過(guò)的時(shí)間(Kilfoil T.等人(1989)Neuropharmacol.28901-905)。
b)鼠的高位X迷宮試驗(yàn)方法A標(biāo)準(zhǔn)的高位X迷宮(Handley S.L.等人(1984)Naunyn-Schiedeberg的Arch.Pharmacol.3271-5)，如Field等人(1991)Br.J.Pharmacol.102 Suppl304P中所述是自動(dòng)化的。將動(dòng)物放在面向開(kāi)臂之一的X迷宮中心處。為了確定焦慮效應(yīng)，在5分鐘的試驗(yàn)期內(nèi)，測(cè)定在開(kāi)臂的進(jìn)入和在結(jié)束的一半所度過(guò)的時(shí)間(Costall等人(1989)Br.J.Phamacol.96Suppl.312P)。
結(jié)果(圖1)在試驗(yàn)前60分鐘以10mg/kg劑量腹膜給藥化合物1的鼠群中，與只接收載體的鼠群比較，在迷宮開(kāi)臂處度過(guò)時(shí)間的％顯著增加，探查開(kāi)臂結(jié)束度過(guò)的時(shí)間量也明顯增加。
c)狨猴的人恐嚇試驗(yàn)在2分鐘的試驗(yàn)時(shí)間內(nèi)，記錄通過(guò)動(dòng)物因恐嚇刺激而出現(xiàn)的體態(tài)變化的總數(shù)(人站在離狨猴箱約0.5m處，并凝視進(jìn)狨猴的眼睛)。記錄體態(tài)的變化是凝視狹縫、尾部姿態(tài)，在箱內(nèi)/高位處作氣味標(biāo)識(shí)，立毛，后退，和背部成拱形狀。每個(gè)動(dòng)物在藥物處理前和處理后的試驗(yàn)日期經(jīng)受兩次恐嚇刺激。在首次(控制)恐嚇后，至少2小時(shí)，進(jìn)行皮下藥物處理。對(duì)每種化合物的預(yù)處理時(shí)間是40分鐘。用Dunnett′試驗(yàn)后的單向方差分析來(lái)分析兩次記錄間的不同。
d)大鼠的沖突試驗(yàn)在工作室內(nèi)培訓(xùn)大鼠群壓桿以獲得食物。計(jì)劃程序包括交替進(jìn)行如下操作，通過(guò)打開(kāi)室光而發(fā)信號(hào)，間隔30s變化，進(jìn)行4次4分鐘未懲罰周期，和通過(guò)關(guān)閉室光而發(fā)信號(hào)以恒比5的三次3分鐘處罰(通過(guò)伴隨輸送食物對(duì)腳的沖擊)。對(duì)每只鼠調(diào)整腳的沖擊的程度，與未懲罰的應(yīng)答相比，獲得大約80～90％的應(yīng)答抑制，在培訓(xùn)的日期內(nèi)鼠群接收含鹽載體。
f)大鼠的社會(huì)相互作用試驗(yàn)方法社會(huì)相互作用活動(dòng)場(chǎng)是環(huán)形的(直徑70cm)，由白色有機(jī)玻璃制成，壁高30cm?；顒?dòng)場(chǎng)通過(guò)位于活動(dòng)場(chǎng)上方的強(qiáng)光源(350lux)直接照射。在活動(dòng)場(chǎng)的正上方還安裝一臺(tái)照相機(jī)，與相鄰室內(nèi)的視頻記錄儀連接，為以后分析進(jìn)行試驗(yàn)期間記錄。
將大鼠按體重進(jìn)行配對(duì)，以保證一對(duì)的成員重量差小于10g。在將鼠放入活動(dòng)場(chǎng)的前60分鐘，對(duì)每對(duì)中的兩個(gè)鼠進(jìn)行載體(n＝10)或各種劑量試驗(yàn)化合物(n＝10/組)的腹膜注射5分鐘。由對(duì)藥物處理不明的觀察者記錄在活躍的社會(huì)調(diào)查(鼠對(duì)用鼻子聞，追蹤和整理)中度過(guò)的時(shí)間。對(duì)于藥物處理的，以隨意的順序在1000～1400之間進(jìn)行試驗(yàn)，在每次試驗(yàn)后要擦試整個(gè)活動(dòng)場(chǎng)。利用單向ANOVA分析數(shù)據(jù)，隨后對(duì)各種差異進(jìn)行Post-hoc Duncan′s試驗(yàn)。
結(jié)果(圖2)以3.75和7.5mg/kg[F(2，27)＝7.2，p＜0.01]注射的化合物1明顯增加了大鼠的社會(huì)相互作用能力。就百分比增加而言，兩種劑量是相近的。對(duì)于運(yùn)動(dòng)活性沒(méi)有作用，這就證明對(duì)于社會(huì)相互作用的能力的作用是有選擇的。
g)大鼠敞開(kāi)場(chǎng)地的試驗(yàn)方法敞開(kāi)活動(dòng)場(chǎng)是環(huán)形的(直徑70cm)，由白色有機(jī)玻璃制成，壁高30cm。通過(guò)位于活動(dòng)場(chǎng)的正上方的強(qiáng)光源(350lux)照射活動(dòng)場(chǎng)。與相鄰室的視頻記錄儀連接的照相機(jī)也安裝在活動(dòng)場(chǎng)的正上方，為后來(lái)分析進(jìn)行試驗(yàn)期間記錄。底板用線分成內(nèi)環(huán)和外環(huán)。劑量給藥后60分鐘，將每個(gè)鼠放置在活動(dòng)場(chǎng)中心5分鐘，并留下以進(jìn)行探查。由對(duì)藥物處理不明觀察者記錄在活動(dòng)場(chǎng)周邊附近度過(guò)的時(shí)間，和在活動(dòng)場(chǎng)內(nèi)區(qū)度過(guò)的時(shí)間，當(dāng)動(dòng)物的4個(gè)爪都在區(qū)域時(shí)，才認(rèn)為在內(nèi)活動(dòng)場(chǎng)內(nèi)，同樣，當(dāng)4個(gè)爪都在外環(huán)中時(shí)，才認(rèn)為在周邊處。在內(nèi)區(qū)域度過(guò)的時(shí)間，是以在內(nèi)外區(qū)域內(nèi)總時(shí)間的百分比表示，并通過(guò)單向ANOVA分析，隨后對(duì)各種差異進(jìn)行Post-hoc Duncan′s試驗(yàn)。
結(jié)果(圖3)與對(duì)照動(dòng)物比較，以3.75mg/kg進(jìn)行腹膜注射化合物1的鼠，在活動(dòng)場(chǎng)的內(nèi)區(qū)域中度過(guò)時(shí)間的百分比明顯增加，這反應(yīng)處理焦慮的作用。
h)隔離豚鼠幼畜導(dǎo)致焦慮的發(fā)音模式動(dòng)物的精神病模式通常用大鼠或小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物。然而，就這一點(diǎn)講，豚鼠是最適合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，因?yàn)樗鼈兙哂信c人類(lèi)相類(lèi)似的中心5HT1D受體，通過(guò)暫時(shí)隔離母體引起豚鼠發(fā)聲是對(duì)影響行為的試驗(yàn)?zāi)Ｊ?。還知道，在這種豚鼠的焦慮模式中能夠抑制隔離叫聲的化合物是臨床效應(yīng)的征兆。
方法以5分鐘隔離時(shí)間定量測(cè)定豚鼠幼畜(2-14天齡)的悲痛叫聲，在這之后使他們與他們的母親和小伙伴重新相聚。試驗(yàn)箱由白色內(nèi)壁、白色照明的聲音減弱盒構(gòu)成。借助于微型擴(kuò)音器和DAT記錄器，在DAT磁帶上記錄發(fā)出的聲音。在連續(xù)3天進(jìn)行3次預(yù)試驗(yàn)后，首先利用最少發(fā)射500次聲響的標(biāo)準(zhǔn)選擇幼畜。作為正控制，包括苯甲二氮雜和攝取5-羥色胺的抑制劑氟苯氧丙胺。每只幼畜接受試驗(yàn)化合物(化合物1，1-30mg/kg，腹膜內(nèi)(i.p.)注射，在50％環(huán)糊精中、苯甲二氮0.1-1mg/kg，皮下注射(s.c.)在羥甲基纖維素(CMC)中，或者氟苯氧丙胺1-10mg/kg，皮下注射，在水載體中)，并在與母體隔離前，返回家籠30分鐘。作為正控制，每天平行試驗(yàn)苯甲二氮(1mg/kg)。對(duì)每組，通過(guò)一對(duì)t試驗(yàn)而進(jìn)行，計(jì)算分析處理前和處理后所發(fā)出叫聲數(shù)的差異。使用Kruskall-Wallis試驗(yàn)分析叫聲數(shù)減少的百分比，隨后在載體和不同劑量之間進(jìn)行Mann-Whitney試驗(yàn)。
結(jié)果在所有的研究劑量下，化合物1顯著地減少了隔離引發(fā)的叫聲。在試驗(yàn)前30分鐘，只注射化合物1，隨著劑量(1-30mg/kg，i.p.)增加叫聲減少的百分比，以10mg/kg的MED(圖4以平均減少±SEM的百分比表示結(jié)果。對(duì)載體組*P＜0.05，Kruskull-Wallis試驗(yàn)，隨后Mann-Whitney試驗(yàn))。這種效果優(yōu)于苯甲二氮所觀察到的效果(MED＝1mg/kg；圖5)。因?yàn)殒?zhèn)靜作用，所以研究中不包括這種化合物的較高劑量。氟苯氧丙胺以10mg/kg的最低有效劑量(MED)也能明顯降低叫聲數(shù)(圖5)。很明顯抗焦慮和抗抑郁藥物都能減少由豚鼠發(fā)出的隔離叫聲。鈴蟾肽拮抗物化合物1如這些化合物一樣有效，表明這類(lèi)化合物作為新型的抗焦慮/抗抑郁藥劑存在一定潛力。
2)肺動(dòng)脈高血壓Hurel S.J.等人(Lancet(1996)3481243)指出GRP受體拮抗物注入到遭受肺動(dòng)脈高血壓痛苦的病人中，隨后就能減小肺收縮壓力。本發(fā)明的化合物通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥物方法證實(shí)可用于治療肺動(dòng)脈高血壓癥。
3)肺修補(bǔ)和肺發(fā)育的紊亂癥幾種研究都強(qiáng)調(diào)GRP和GRP受體在肺損傷后的肺修補(bǔ)和在肺發(fā)育中的作用(Spurzem J.R.等人(1997)Am J.Respir.Cell.Mol.Biol.16209-211，WangD.等人(1996)Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.14409-416；Spindel E.R.，同上14407-408)。肺損傷包括因吸煙誘發(fā)而導(dǎo)致增加肺的類(lèi)鈴蟾肽的肽量。由Cutz E.等人的發(fā)現(xiàn)(Pediatrics(1996)98668-72)，提出母體吸煙可能使嬰兒肺神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的增殖而使嬰兒突然死亡的綜合癥(SIDS)(正如根據(jù)氣管上皮對(duì)鈴蟾肽免疫反應(yīng)的百分比所測(cè)定的)，并提出這些細(xì)胞的機(jī)能障礙可對(duì)SIDS的病理生理學(xué)作出貢獻(xiàn)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物可用于治療肺修補(bǔ)和肺發(fā)育的紊亂癥。
4)治療癌癥本發(fā)明還關(guān)于治療癌癥的方法，它包括向病人或?qū)ο?，特別是哺乳動(dòng)物，尤其是人類(lèi)，施用有效量的式I化合物，最好是與細(xì)胞毒素劑共軛的式I化合物。該方法特別適用于其腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌癥，包括某些前列腺癌或胰腺癌。
當(dāng)使用直接標(biāo)記的式I化合物于治療目的時(shí)，最好使用鹵素取代的Ar作為放射性核素。用于治療的鹵素放射性核素最好是β-輻射或α-輻射的放射性核素。對(duì)于治療癌癥的最佳的Ar鹵素取代基包括131I、211At、76Br和77Br，131I尤其好。
Ar由放射性核素鹵素取代的式I化合物，通過(guò)相應(yīng)非放射性化合物的親電子芳香取代而易于制備，其中Ar由鹵素或活性基團(tuán)取代。這種鹵素優(yōu)選是Br或I，最好的活性基團(tuán)包括三丁基錫、三甲基甲硅烷、叔-丁基二甲基甲硅烷，等。
式I化合物與細(xì)胞毒素劑的共軛物，特別優(yōu)選是當(dāng)式I化合物中R3是羥基或氨基。在這種情況下，本發(fā)明的化合物可方便地通過(guò)二官能部分，如谷氨酸等，與細(xì)胞毒素劑連接，形成共軛物。適宜的細(xì)胞毒素劑，包括如阿霉素(doxorubicin)、抗癌化學(xué)治療的化合物，如Merck Index，第12版，1996，P，MISC-10中描述的。
本發(fā)明還提出使用式I化合物與放射性核素的共軛物，用于放射性治療法的優(yōu)選放射性核素發(fā)射α或β粒子，包括188Re，131I，221At，212pb，212Bi，76Br，77Br等等(例如，The Merck Index，第12版，1996，page MISC-93)。使用通常方法可制備所說(shuō)的共軛物。例如，可利用二官能的螯合劑，如三琥珀(trisucein)(Safavy A.等人(1993)Bioconj.Chem.4194-8)，根據(jù)SafavyA.等人在Cancer(1997)80(Suppl)2354-9中采用的方法，使放射性核素，如188Re，與式I化合物連接。共軛物可采用其在進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)時(shí)破裂而釋放出細(xì)胞毒素劑的化合物形式，化合物在體內(nèi)迅速轉(zhuǎn)化，以產(chǎn)生上式的母體化合物，例如，通過(guò)在進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)時(shí)進(jìn)行水解，這種化合物最為理想。
本發(fā)明治療哺乳動(dòng)物腫瘤的方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施加抑制腫瘤量的本發(fā)明的至少一種化合物的組合物。這種抑制腫瘤的量是對(duì)象化合物中至少一種的量，該量足以使化合物定位于腫瘤處，以減小腫瘤的生長(zhǎng)或大小。該劑量為0.1～500mmol/kg體重。優(yōu)選劑量為5～50mmol/kg體重。
根據(jù)放射性核素的型式可變化放射性計(jì)量。然而，考慮到放射性量時(shí)，可使用從1毫居(mCi)到約800mCi。優(yōu)選可使用10～600mCi。然而，當(dāng)考慮劑量時(shí)，放射性化合物的比放射性應(yīng)考慮到。這種比放射性最好是很高的，例如對(duì)123I-標(biāo)記的化合物，比放射性至少為約1000～約50000Ci/mM。對(duì)123I-標(biāo)記的化合物的比放射性，優(yōu)選為約10000～約22000Ci/mM。
a)前列腺癌鈴蟾肽在人類(lèi)的前列腺癌細(xì)胞中，通過(guò)GRP受體專(zhuān)門(mén)誘發(fā)起細(xì)胞內(nèi)的鈣流動(dòng)(Aprikian A.G.et al.(1996)J.Mol.Endocrinol16297～306)。這就提出了神經(jīng)肽的鈴蟾肽族在前列腺癌的生物學(xué)中起到調(diào)節(jié)作用。使用抗體提高抗鈴蟾肽抑制前列腺癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)(Hoosein N.M.(1993)Cancer Bull.45436-411)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于前列腺癌的診斷和治療。
b)胰腺癌正常的和腫瘤的胰腺細(xì)胞含有特殊的GRP受體，它在惡性胰腺組織表達(dá)更多(Hajri A.et al.(1996)Dancreas1225～35)。類(lèi)鈴蟾肽的肽可刺激人類(lèi)胰腺癌細(xì)胞的增殖(Wang Q.J.等人Int.J.Caneer(1996)68528-34)。因此，可以使用鈴蟾肽受體拮抗物治療胰腺癌。而且，可以使用放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物治療胰腺癌。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于治療胰腺癌。
5)肝的卟啉癥肝卟啉癥的主要臨床表現(xiàn)是神經(jīng)性癥狀，包括腹部疼痛、神經(jīng)病和精神干擾。認(rèn)為在疾病急性期間，系統(tǒng)循環(huán)中，通過(guò)一些腸胃的和神經(jīng)傳遞質(zhì)的聚肽，包括GRP的增加，引起神經(jīng)性癥狀(Medenica R.等人(1997)Cell mol.Biol.439-27)。因此，用鈴蟾肽受體拮抗物治療可降低這些結(jié)合到鈴蟾肽受體的聚肽的作用，并減輕急性卟啉癥的癥狀。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明的化合物可用于肝卟啉癥的治療。
6)內(nèi)臟疼痛通過(guò)以如下藥物學(xué)方法證明，本發(fā)明中使用的化合物適用于內(nèi)臟疼痛。
刺激大鼠的結(jié)腸在麻醉下，對(duì)大鼠進(jìn)行氣管造口術(shù)，對(duì)頸動(dòng)脈作套管插入術(shù)，以監(jiān)測(cè)血壓。內(nèi)結(jié)腸注射0.6％乙酸后45分鐘，進(jìn)行結(jié)腸膨脹(75mmHg，30s)。通過(guò)測(cè)量這些結(jié)腸膨脹后的血壓降低證明結(jié)腸疼痛。然后皮下注射試驗(yàn)化合物，30分鐘后，再進(jìn)行6次結(jié)腸膨脹。通過(guò)在預(yù)處理周期間和事后處理期間血壓降低的比較，計(jì)算抗傷害性的百分比。使用這種方法，化合物1，以10mg/kg產(chǎn)生57％的抗傷害性。
7)腸胃的分泌干擾已經(jīng)證明GRP在檢測(cè)腸胃分泌功能的干擾是一個(gè)很有價(jià)值的工具，包括那些與十二指腸潰瘍有關(guān)的疾病和幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori)感染(McColl K.E.等人(1995)Aliment.Pharmacol.Ther.9341-7)。結(jié)果是放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物可用于診斷這些病癥。其他的腸胃功能，像膽囊收縮、胰腺分泌，和胃-食道的活動(dòng)性可由GRP調(diào)節(jié)控制，并且，放射性標(biāo)記的鈴蟾肽受體拮抗物可用于診斷這些病癥。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的藥物學(xué)方法證明本發(fā)明的化合物可用于腸胃分泌干擾的治療。
8)嘔吐鈴蟾肽在青蛙皮膚內(nèi)以高濃度存在。作為保護(hù)反應(yīng)的一部分，當(dāng)捕食者吞下時(shí)，兩棲動(dòng)物會(huì)分泌催促物質(zhì)，在哺乳動(dòng)物中，鈴蟾肽是廣泛地分布在GI道內(nèi)，在那里它可引起胃活動(dòng)性和分泌的變化。本發(fā)明的鈴蟾肽受體拮抗物可降低惡心嘔吐，并因此，在治療嘔吐是有效的，尤其是對(duì)服用抗癌劑的病人更有效?？梢允褂靡韵碌乃幬飳W(xué)方法證明本發(fā)明化合物在治療嘔吐的功效。
順鉑(cisplatin)誘發(fā)白鼬嘔吐的拮抗作用作為與對(duì)照動(dòng)物比較，利用以下方法，通過(guò)體內(nèi)順鉑(cisplatin)誘發(fā)白鼬嘔吐，證明本發(fā)明中所用化合物的止吐特性。使用靜脈注射順鉑(30mg/kg)。在注射順鉑前30分鐘，再在注射催吐劑后45分鐘，一般通過(guò)非腸胃道注射研究的化合物。隨著給藥催吐物質(zhì)，在5小時(shí)期間，連續(xù)觀察各個(gè)籠中的白鼬。在觀察期間記錄每只動(dòng)物惡心嘔吐的發(fā)作次數(shù)，對(duì)每個(gè)處理組的結(jié)果以平均±S.E.M表示。利用單向差異分析(ANOVA)評(píng)估，用本發(fā)明化合物處理和用載體(PEG200，0.5ml/kg)處理之間存在的差異顯著，隨后進(jìn)行Student的t-試驗(yàn)。
9)厭食癥鈴蟾肽引起小鼠攝取葡萄糖的降低。在缺乏GRP受體的小鼠中，鈴蟾肽不再顯示這種作用(Hampton L.等人Proc.Natl.Acad.Soi.USA.953188-92，1998)。本發(fā)明使用的鈴蟾肽受體拮抗物可增加進(jìn)食行為，因此，在治療厭食癥中有效，諸如癌癥病人的厭食癥。當(dāng)與對(duì)比動(dòng)物比較，通過(guò)測(cè)量小鼠的食物攝取和體重增加，證明體內(nèi)施用本發(fā)明所用化合物的開(kāi)胃作用。
10)疼痛通過(guò)以下藥物學(xué)方法證明本發(fā)明化合物在治療疼痛中的應(yīng)用。
a)鹿角菜膠誘發(fā)大鼠的痛覺(jué)過(guò)敏和異常性疼痛將鹿角菜膠(20mg/ml的100μl)給藥到后爪的足底面中，測(cè)量對(duì)外部熱和機(jī)械刺激的痛覺(jué)過(guò)敏和異常性疼痛。
b)外科疼痛的卵巢子宮切除術(shù)后的模式在手術(shù)期間通過(guò)鼻錐保持用異熒烷(為誘導(dǎo)作用用5％，為保持麻醉用2％)和1∶4O2/NO2的混合物以麻醉雌大鼠。在手術(shù)期間將動(dòng)物放在恒溫毯上。在finea alba中，通過(guò)中線腹部切口(2cm長(zhǎng))進(jìn)行卵巢子宮切除術(shù)。用5.0絲線使用單夾具技術(shù)將卵巢韌帶和子宮頸進(jìn)行縫合。在腹壁上作4個(gè)簡(jiǎn)單的中斷縫合(5.0絲)。用4個(gè)傷口夾封閉皮膚，用局部抗菌素處理傷口。
為內(nèi)臟傷害的癥狀，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù)后的試驗(yàn)，手術(shù)后，立刻將動(dòng)物放在單獨(dú)的有機(jī)玻璃籠內(nèi)，并以30分鐘一批記錄腹部姿勢(shì)。記錄的姿勢(shì)是弓背的位置，與后肢向內(nèi)移動(dòng)有關(guān)的腹部肌肉的收縮，身體的拉伸，和較低腹部對(duì)地板的擠壓。對(duì)于有關(guān)在后爪的病覺(jué)過(guò)敏和異常性疼痛的癥狀，動(dòng)物也可試驗(yàn)。
c)糖尿病引發(fā)的神經(jīng)性疼痛模式如早期所述的，使用單一的腹膜注射鏈脲霉素(50mg/kg)誘發(fā)大鼠(250-300g)產(chǎn)生糖尿病(Courteix等人，1993，Pain5381-88)。對(duì)照動(dòng)物接受類(lèi)似的等滲鹽水注射。
d)神經(jīng)性疼痛的緩慢壓縮傷害模式由Bennett和Xie，在Pain3387-107(1988)中早期描述，誘發(fā)緩慢壓縮傷害(CCI)。簡(jiǎn)單說(shuō)，用戊巴比妥鈉60mg/kg腹膜注射麻醉大鼠。通過(guò)bicepsfemoris，使用鈍器解剖法使左側(cè)坐骨神經(jīng)暴露在大腿股中間水平，并接近坐骨的三叉一側(cè)，寬松地扎結(jié)4個(gè)結(jié)扎(4.0編織的絲線)，以相距1mm間隙松松地環(huán)繞它而結(jié)扎，然后將肌肉以層狀封閉?？砂磶追N方法測(cè)量疼痛閾值。
1)熱痛覺(jué)過(guò)敏在給藥前和后的不同的時(shí)間點(diǎn)，對(duì)大鼠使用Vgo Basile足底試驗(yàn)，接著以Hargreaves等人(1998)Pain3277-78的改進(jìn)方法評(píng)估熱痛覺(jué)過(guò)敏。使動(dòng)物習(xí)慣于在高位玻璃臺(tái)上由3個(gè)單獨(dú)的有機(jī)玻璃盒構(gòu)成的裝置。在臺(tái)子下面設(shè)置可移動(dòng)的熱輻射源，并集中在所要求的爪上。記錄爪子收回的等待時(shí)間。有一個(gè)從22.5s到防止組織損傷的自動(dòng)切斷點(diǎn)。
2)靜態(tài)異常性疼痛使用Semmes-Weinstein Von Frey毛發(fā)測(cè)量機(jī)械過(guò)敏性。將動(dòng)物放進(jìn)底部為線網(wǎng)的籠中，使接近它們的爪子的底部，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前使它們熟習(xí)該環(huán)境。通過(guò)使動(dòng)物的右后爪的趾面，按照力的增長(zhǎng)順序(0.7，1.2，1.5，2，3.6，5.5，8.5，11.8，15.1和29g)，與Von Frey毛發(fā)接觸達(dá)6s。一旦確立縮回應(yīng)答，下一個(gè)降下的Von Frey毛發(fā)開(kāi)始，對(duì)爪子再次試驗(yàn)，直到?jīng)]有應(yīng)答發(fā)生為止。以最高29g的力提起爪子，以及誘發(fā)應(yīng)答，由此，表示切斷點(diǎn)。記錄誘發(fā)應(yīng)答所需要的最低力(以g計(jì))作為爪子縮回的閾值(PWT)。
11)診斷癥狀本發(fā)明提供一種用于具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的哺乳動(dòng)物組織的體內(nèi)診斷成象的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥一種診斷成象量的本發(fā)明化合物，并檢測(cè)具有許多有鈴蟾肽受體細(xì)胞的組織的成象。尤其是本發(fā)明提供用于檢測(cè)某些類(lèi)型的癌癥，例如前列腺癌和胰腺癌的方法。
本發(fā)明所用的化合物結(jié)合到細(xì)胞表面鈴蟾肽受體上并對(duì)上述癌細(xì)胞和對(duì)具有鈴蟾肽受體的細(xì)胞，呈現(xiàn)強(qiáng)烈的細(xì)胞特異性和親合性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明是指用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物腫瘤的方法，包括向哺乳動(dòng)物施用診斷成象量的上述式I化合物，并觀測(cè)在哺乳動(dòng)物組織中的化合物的滯留量。本發(fā)明還提供一種用于診斷癌癥的方法，使用標(biāo)記的，優(yōu)選使用適于成象的放射性核素標(biāo)記的式I鈴蟾肽受體拮抗物。由Michelot J.M.等人(1991)在J.Nucl.Med.321573-80中描述了適于成象的放射性核素實(shí)例。用于診斷成象的優(yōu)選放射性核素不發(fā)射像α、β一類(lèi)的粒子。當(dāng)用于診斷成象時(shí)，可使用Ar的鹵素取代基作為放射性核素。而且，所述鹵素放射性核素基團(tuán)，優(yōu)選用于診斷成象的基團(tuán)，主要是放射γ的放射性核素，它可使用放射性成象方法，例如通過(guò)閃爍掃描成象術(shù)，而進(jìn)行檢測(cè)。這種放射γ的放射性核素發(fā)出的射線，足以通過(guò)組織穿透要檢測(cè)的。用于診斷成象的Ar基團(tuán)的優(yōu)選的鹵素取代基，包括123I，124I，125I，131I，18F，76Br和77Br。用于診斷成象的更好的基團(tuán)包括123I，125I和18F，123I特別優(yōu)選用于診斷成象。
本發(fā)明的化合物一般在一些癌細(xì)胞類(lèi)型上，結(jié)合到特異的細(xì)胞受體上，這種癌細(xì)胞包括胰腺癌、前列腺癌和有關(guān)的細(xì)胞。本化合物結(jié)合的細(xì)胞受體實(shí)例是細(xì)胞表面的鈴蟾肽受體。在受體結(jié)合的檢測(cè)中，已證明本發(fā)明中所用化合物的結(jié)合特性，正如WO 98/07718中所描述的。
根據(jù)本發(fā)明，體內(nèi)檢測(cè)哺乳動(dòng)物腫瘤或含有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的方法，包括向哺乳動(dòng)物施加一種含有診斷成象量的至少一種本發(fā)明化合物的組合物。這種診斷成象量是至少一種目的化合物的劑量，它可使化合物足以定位于腫瘤或組織，以能檢測(cè)腫瘤或組織。這種劑量為每升化合物1μg～1g，它給藥劑量為1ng～10μg/kg體重。對(duì)于診斷成象，本發(fā)明化合物的優(yōu)選劑量為約10ng～約2μg/kg。而且，對(duì)于診斷成象，應(yīng)當(dāng)考慮施用的放射性劑量，優(yōu)選施用約0.1mCi～約20mCi的放射性化合物。
正如本文中所描述的，使用放射性探測(cè)器，例如γ-放射性探測(cè)器可檢測(cè)以一種或多種本發(fā)明化合物標(biāo)記的腫瘤或組織。一種這樣的方法是使用閃爍照相法。也可以利用X線體層照相術(shù)，例如單光子發(fā)射計(jì)算的X線體層照相術(shù)(SPECT)或正電子發(fā)射X線體層照相術(shù)(PET)，以改進(jìn)顯像。
在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于哺乳動(dòng)物組織樣品的癌細(xì)胞的體外檢測(cè)方法，包括將哺乳動(dòng)物的組織樣品與體外診斷成像量的式I或式II中任一種化合物接觸一段時(shí)間，在足以使化合物結(jié)合到癌細(xì)胞上的細(xì)胞表面鈴蟾肽受體，并檢測(cè)這種結(jié)合。通過(guò)技術(shù)人員已知的方法收集樣品，例如收集組織的活體解剖或體液。例如樣品可用切片刀進(jìn)行切片，以易于用顯微鏡檢查并觀測(cè)結(jié)合的化合物。樣品也可用適宜的固定劑固定住，在培育之前或之后，用一種本發(fā)明的化合物以改進(jìn)樣品組織的組織質(zhì)量。足以使化合物結(jié)合到癌細(xì)胞上細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的條件包括標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)條件，即，樣品可體外培養(yǎng)并在生理介質(zhì)中用一種本發(fā)明的化合物培育。這種條件對(duì)技術(shù)人員是公知的。另一種方法是樣品可固定，然后在等滲或生理緩沖液中，用本發(fā)明的化合物進(jìn)行培育。至少一種用于體外檢測(cè)癌細(xì)胞量的，本發(fā)明化合物的量為1ng/l～1000μg/l。優(yōu)選量為1μg/l～100μg/l。
當(dāng)本發(fā)明的化合物用于體外診斷癌癥時(shí)，可使用Ar的取代基作為放射性核素。對(duì)于體外診斷癌癥的優(yōu)選的取代基放射性核素，包括125I，18F，-14COOH，-14CH3，3H等。對(duì)于結(jié)合一種本發(fā)明化合物的細(xì)胞的檢測(cè)，可在所選擇化合物的存在下培育樣品，然后洗滌，并用標(biāo)準(zhǔn)的閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。另一種方法是將樣品浸漬在照相乳劑中，幾天后，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)，如曝光的銀粒子。
權(quán)利要求
1.式I化合物或其藥物可接受的鹽在處理、預(yù)防或診斷焦慮和恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌癥疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中任何一種所用藥物的制造應(yīng)用， 其中j為0或1，k為0或1，l為0，1，2，或3，m為0或1，n為0，1或2，Ar是苯基、吡啶基或嘧啶基，每種可以是未取代的，或者被選自烷基、鹵素、烷氧基、乙酰基、硝基、氨基、-CH2NR10R11、氰基、-CF3，-NHCONH2，和-CO2R12中的1～3個(gè)取代基取代。R1是氫或1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，R8是氫或和由3-7個(gè)碳原子的R1形成的環(huán)，R2是氫或以1-8個(gè)碳原子的直鏈、支鏈、或環(huán)狀烷基、它也可含有1-2個(gè)氧或氮原子，R9是氫或3-7個(gè)碳原子與R2形成的環(huán)，它可含有氧或氮原子；或者R2和R9可一起成為羰基，Ar1可以是單獨(dú)選自Ar中，并也可包括吡啶基-N-氧化物、吲哚基、咪唑基，和吡啶基，R4、R5、R6和R7每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫和低級(jí)烷基，R4也可與R5形成2-3個(gè)原子的共價(jià)鍵，它可包括氧或氮原子。R3可單獨(dú)地選自Ar，或者是氫、羥基、-N-Me2，N-甲基-吡咯基、咪唑基、N-甲基-咪唑基、四唑基、N-甲基-四唑基、噻唑基、-CONR13R14、烷氧基， ，或 其中p為0，1或2，Ar2是苯基或吡啶基，R10、R11、R12、R13和R14每一個(gè)都是單獨(dú)地選自氫或者有1-7個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，特征是，化合物是式II的化合物， 其中Ar是未取代苯基、或由選自異丙基、鹵素、硝基和氰基中的1或2個(gè)取代基取代的苯基，R4，R5和R6是氫，R7是甲基或氫，R3是2-吡啶基或羥基，和Ar1是吲哚基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物和咪唑基。
3.(S)3-(1H-吲哚-3-基)-N-[1-(5-甲氧-吡啶-2-基)-環(huán)己基甲基]-2-甲基-2-[3-(4-硝基-苯基)-脲基]-丙酰胺或其藥物上可接受的鹽，在治療預(yù)防或診斷焦慮和恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌癥疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中任何一種所用的藥物的制造應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的應(yīng)用，特征是，藥物是用于治療或預(yù)防因十二指腸潰瘍或幽門(mén)螺桿菌感染引起的胃腸分泌失調(diào)癥的藥物。
5.權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，在哺乳動(dòng)物腫瘤的哺乳動(dòng)物中診斷成象用藥物的制造中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的基團(tuán)Ar是由γ輻射的放射性核素的鹵素所取代的苯基。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的基團(tuán)Ar是由123I，124I，125I，131I，18F，76Br或77Br取代的苯基。
8.權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，在用于治療前列腺癌或胰腺癌用的藥物的制造中的應(yīng)用。
9.細(xì)胞毒素和權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物的共軛物在治療哺乳動(dòng)物腫癌用藥物的制造中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求9的應(yīng)用，特征是，共軛物進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)破裂，并釋放細(xì)胞毒素劑。
11.權(quán)利要求8，9或10的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由β輻射或α輻射的放射性核素鹵素所取代的苯基。
12.權(quán)利要求8，9或10的應(yīng)用，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由131I，211At，76Br或77Br取代的苯基。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的應(yīng)用，特征是，共軛物包括通過(guò)螯合劑使放射性核素與式I化合物連接。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，特征是，放射性核素是188Re。
15.根據(jù)權(quán)利要求5-14中任一項(xiàng)的應(yīng)用，特征是，藥物是針對(duì)含有具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌細(xì)胞的哺乳動(dòng)物腫瘤。
16.一種用于體外檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織樣品中癌細(xì)胞的方法，它包括使所述哺乳動(dòng)物組織樣品與體外診斷量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3化合物進(jìn)行接觸。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由β輻射或α輻射的放射性核素鹵素所取代的苯基。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，特征是，所述化合物中的Ar基團(tuán)是由131I，211At，76Br或77Br取代的苯基。
19.根據(jù)權(quán)利要求16，17或18的方法，特征是，試驗(yàn)是用于含有具有細(xì)胞表面鈴蟾肽受體的癌細(xì)胞的組織樣品。
20.一種用于治療焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓癥、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中中任何一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或它們?cè)谒幬锷峡山邮艿柠}。
22.一種用于預(yù)防焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中的任一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物上可接受的鹽。
23.一種用于診斷焦慮或恐慌紊亂癥、社會(huì)恐怖癥、肺動(dòng)脈高壓癥、肺修補(bǔ)和肺發(fā)育紊亂癥、前列腺癌、胰腺癌、肝卟啉癥、內(nèi)臟疼痛、胃腸分泌失調(diào)、炎癥疼痛、神經(jīng)病疼痛、癌疼痛、手術(shù)后疼痛、三叉神經(jīng)疼痛、急性皰疹性疼痛和后皰疹性疼痛中的任何一種疾病的方法，包括向經(jīng)受上述疾病并需要治療的病人，給藥以有效量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物上可接受的鹽。
24.一種治療哺乳動(dòng)物腫瘤用的方法，包括向哺乳動(dòng)物給藥以一種組合物，該組合物含有抑制腫瘤量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物學(xué)上可接受的鹽。
25.一種用于診斷存在哺乳動(dòng)物腫瘤的哺乳動(dòng)物方法，它包括向哺乳動(dòng)物給藥以診斷成像量的權(quán)利要求1定義的式I化合物或權(quán)利要求2定義的式II化合物或權(quán)利要求3的化合物，或其在藥物學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
已發(fā)現(xiàn)式I化合物的新型應(yīng)用，式I中Ar、Ar
文檔編號(hào)A61P25/24GK1461217SQ0082008
公開(kāi)日2003年12月10日 申請(qǐng)日期2000年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月20日
發(fā)明者羅伯特·D·平諾克, 馬丁·C·普里查德 申請(qǐng)人:沃納-蘭伯特公司