抑制粘連形成的方法和組合物的制作方法

專利名稱：抑制粘連形成的方法和組合物的制作方法
政府權利陳述本文描述的工作部分由NIH基金HD34824支持。美國政府在本發明中享有一定權利。
方面背景手術干預為了達到治愈的目的，涉及對患者的損傷。手術的一個不欲結果是手術后粘連形成。在醫學領域，術語“粘連”是指粘附，即兩個表面或部分的粘連或結合過程。例如，相對創面，或相對腹膜的結合。復數形式的“粘連”還指炎癥結合，這種結合將含漿液的相對表面連接。本文應用的術語“粘連”還包括纖維蛋白的粘連，這種粘連包括血漿或淋巴液滲出或血液滲出導致的纖維蛋白細絲的粘連。在損傷部位由于成纖維組織平緩過量生長導致的瘢痕，偶爾自發形成，也是粘連的一種形式。
業已報導，粘連發生是手術后病廢和死亡的主要原因。包括顯著粘連形成的最常見的手術過程是婦科手術，心血管手術和腹部大手術。無論傳統手術還是腹腔鏡手術，都涉及顯著粘連。
腹腔內粘連并發癥包括腸梗阻，慢性或復發性盆腔疼痛，女性不孕，以及手術時間延長，手術后并發癥(當需要進行其他手術時)。在個別病例中，輕微的粘附可以通過粘連切離術、手術切除或粘連溶解(粘連溶解)來治療。因此，在患者中抑制粘連形成的方法和組合物是最有用途的。
隨著獸醫手術技巧和技能的增長，動物的價值，無論情感的還是經濟的，也隨之增加，因此動物手術變得越來越常見。動物也面臨同樣的問題，即手術后粘連形成和粘連帶來的負性影響。對動物手術過程的人性化關愛，使很多源于人類的診斷和手術技術用于動物。因此，抑制動物粘連形成的方法和組合物也是非常有用的。
絕大多數粘連始于組織表面間纖維蛋白基質的形成，因此測試了物理屏障，通過在腹膜愈合過程中限制組織并置來預防粘連形成。通常的物理屏障是膜或凝膠，用于減少損傷腹膜的并置，直至再次腹膜化發生，因此抑制或預防粘連形成。在鼠模型系統中，再次腹膜化大約需要七(7)天。業已發現，在鼠模型系統中，屏障需要放置至少36天，來預防粘連形成(Harris et al.，1995，Surgery，117663-9)。
盡管已經測試了多種輔助制劑在動物模型中預防粘連的效果，目前只有三種屏障獲準用于人類，降低手術后粘連形成。InterceedTM(Johnson& Johnson Medical)是氧化的再生纖維素；SeprafilmTM(Genzyme Corp.)是修飾的透明質酸和修飾的羧甲基纖維素復合物；PrecludeTM(W.L.Gore)是延長的聚四氟乙烯。InterceedTM適用于沒有血的情況。PrecludeTM已獲準用作心包替代物，但不能生物再吸收。SeprafilmTM已獲準用于腹壁和子宮切口。
在鼠系統中測試的潛在抗粘連劑包括乳酸林格氏液，32％右旋葡萄糖苷70溶液，以及1％和2％的修飾羧甲基纖維素溶液。一半的溶液用于切口，剩余的液體在腹腔內聚集。乳酸林格氏液無效，因為在腹腔內很快吸收，因此在非常重要的整個36小時內不存在。而其他稍微粘稠的溶液則更加有效。
透明質酸(HA)業已在腹盆腔和整形外科手術中用作屏障。修飾的HA作為能夠再吸收的凝膠，以及基于透明質酸凝膠的自發交聯多糖(ACP)，也在測試。透明質酸衍生物ACP業已顯示，在兔模型系統中，可以預防腹腔鏡的粘連形成，見于DeIaco et al.，1998，Fertility and Surgery，69(2)318-323的報導。
Leach et a1.，1998，Fertility and Surgery，69(3)415-418將化學修飾的透明質酸和羧甲基纖維素(HA/CMC)凝膠制劑用于兔模型系統。
Rodgers et al.，Fertility and Surgery，69(3)403-408進行了在兔模型系統中評價聚乙烯二醇/聚乳酸(EG/LA)膜預防粘附形成的工作。
因此，在醫學領域始終存在這樣一種需求，即在動物以及人類中抑制或預防粘連形成的材料和方法。
發明簡述本發明提供了在哺乳動物中抑制或改善粘連形成的所需組合物和方法，所述哺乳動物包括人類。
通過應用與αVβ3(αvβ3)整聯蛋白相互作用的拮抗劑分子、或應用與細胞外基質蛋白整聯蛋白結合位點相互作用的拮抗劑分子治療創傷或手術部位，阻斷αvβ3整聯蛋白與哺乳動物體內細胞外基質蛋白的結合，可以抑制或至少改善由于創傷或外科手術導致的粘連。用于此目的的適宜拮抗劑分子是蛋白質、肽(線形以及環狀)和擬肽(peptidomimetic)，所述分子能夠模擬細胞外基質蛋白如纖連蛋白的αvβ3整聯蛋白結合位點，或者能夠與αvβ3整聯蛋白結合，干擾其與細胞外基質蛋白的結合。這些αvβ3拮抗劑分子的示例是單克隆抗體及其生物活性部分或片段，包括模擬或阻斷細胞外基質蛋白的αvβ3結合位點，或者與αvβ3分子的抗原決定簇特異性結合，這樣，可以達到抑制αvβ3整聯蛋白與細胞外基質蛋白結合的作用。一種這樣的單克隆抗體是完整的LM609，及其生物活性抗原結合部分或片段，如Fab，Fab2，Fv及其混合物。無論鼠單克隆抗體LM609，還是人源化單克隆抗體LM609，均適用于本目的。
此外，還可應用纖連蛋白片段作為αvβ3拮抗劑分子，用于本發明目的，干擾αvβ3整聯蛋白與纖連蛋白或其他任何細胞外基質蛋白的結合，所述纖連蛋白片段包括與纖連蛋白上αvβ3αVβ3結合位點相對應的氨基酸殘基序列，并可包括例如Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)的氨基酸殘基序列或其生物等價片段，所述細胞外基質蛋白具有由RGDS氨基酸殘基序列或其生物等價片段定義的結合位點。
還適用的是所謂的擬肽，即非肽有機化合物，模擬上述肽與αvβ3整聯蛋白相互作用，干擾αvβ3整聯蛋白與細胞外基質蛋白的結合，所述細胞外基質蛋白如纖連蛋白等。
通過在手術部位直接應用或在生理兼容載體中應用粘連抑制劑量的至少一種上述αvβ3拮抗劑分子，可以抑制或至少使粘連形成最小化。這些拮抗劑的應用可以通過腹腔內給藥(i.p.)、皮下注射(s.c.)、靜脈內給藥(i.v.)或其他適宜給藥途徑容易地進行。
適宜的載體可以是液體的，也可以是生理可接受可吸收的膏藥和固體。拮抗劑分子可以拮抗劑組合物的形式應用，所述組合物是將拮抗劑分子溶于水性載體或以懸液形式出現，通常濃度至少大約為50微克每毫升(ug/ml)。同樣，拮抗劑組合物還可以是由溶液或懸液中的抑制劑組成的可吸收膏藥或固體，可吸收明膠海綿或明膠粉、或可吸收的干的水凝膠、可吸收透明質酸衍生物等可以作為載體。αvβ3拮抗劑組合物可以適宜劑量形式包裝，并提供標簽，提示包裝中包括的抑制劑組合物可用于抑制粘連形成。
本發明預期的αvβ3拮抗劑能夠與細胞外基質蛋白或αvβ3整聯蛋白分子結合；但是，這種結合必須干擾αvβ3整聯蛋白與細胞外基質蛋白上的結合位點的正常相互作用才有效。這些細胞外基質蛋白的示例如纖連蛋白，纖維蛋白原，副纖連蛋白，血管性血友病因子，層粘連蛋白，膠原，細胞粘合素，骨橋素，血小板反應素等。
抑制手術后粘連形成的優選方法包括給手術患者(人或者獸醫)應用粘連抑制劑量的αvβ3整聯蛋白抑制劑分子。給藥方式包括將一等分抑制劑組合物應用于希望不產生粘連的組織表面，可以直接應用，也可以氣霧噴射，或者通過敷料、凝膠、溶液、懸液等作為適宜載體進行應用。
優選實施方案詳述粘連形成作為創傷愈合過程中的異常現象發生，涉及細胞粘附和成纖維細胞遷徙。粘連的發生通常是創傷或手術時出血的結果，所述手術破壞了腹膜表面的完整性，并導致間質層暴露。隨后，這種暴露導致激肽和組胺的釋放，反過來增加毛細血管的通透性，使含有炎癥細胞的血清血液滲出物釋放。該滲出物富含纖維蛋白，導致損傷表面血凝塊的形成。血凝塊不分解，炎癥細胞和成纖維細胞對富含纖維蛋白的細胞外基質的浸潤，導致粘連形成。
細胞外基質包括蛋白質的互動網絡，細胞在形成的網格上粘附于器官組織。構成細胞外基質的大分子主要由局部基質中的細胞分泌。在絕大多數結締組織中，這些大分子主要由成纖維細胞或成纖維家族細胞分泌，所述成纖維家族細胞如成軟骨細胞或成骨細胞。構成基質的兩類主要細胞外大分子是多糖粘多糖(GAGs)，通常與蛋白質共價連接，以蛋白多糖和纖維蛋白的形式存在。纖維蛋白通常被認為以兩種功能類型之一存在主要是結構蛋白(例如膠原和彈性蛋白)和主要是粘附蛋白(例如纖連蛋白和層粘連蛋白)。見例如The Molecular Biology of the Cell，2nded.(Alberts et al.，editors，Garland Publishing，Inc.，New York，1989)802-824。
細胞粘附控制胚胎組織和細胞外基質中的細胞遷徙、生長和分化，并對惡性細胞的形成、炎癥、免疫調控和止血有一定作用。細胞粘附的介質，跨膜細胞受體，包括整聯蛋白，免疫球蛋白超基因家族，鈣依賴粘附素，選擇素，CD44相關分子以及跨膜蛋白多糖(見Chothia & Jones，1997，Ann.Rev.Biochem.，66823-62)。整聯蛋白是一類重要的結合蛋白，可以與多種配體相互作用。αvβ3整聯蛋白是一種膜結合糖蛋白，并經鑒定是細胞與細胞之間粘附、遷徙的重要物質。整聯蛋白能夠與多種配體結合，所述配體包括細胞外基質組分，細胞表面免疫球蛋白(Ig)超家族受體，微生物表面組分，以及某些胞漿蛋白。綜述見Loftus，J.C.etal.，1994，J.Biol.Chem.，269(4)25235-25238。
雜交瘤細胞系LM 609產生的鼠單克隆(mAb)IgG抗體LM609特異性針對整聯蛋白αvβ3(Cheresh et al.，1987，J.Biol.Chem.，26217703-17711)。根據布達佩斯條例，鼠雜交瘤LM609業已于1987年9月15日作為國際儲存權威儲存于美國種類培養處(ATCC，Rockville，MD，USA)，分配的ATCC命名為HB 9537。
LM 609的cDNA業已克隆，其可溶性Fab部分也已從轉化組織細胞中制備。LM609抗體也經人源化處理，以減輕其免疫原性(WO99/29888)。
適用于作為αvβ3拮抗劑分子的蛋白和肽包括纖連蛋白上αvβ3的互補結合位點，氨基酸殘基序列RGDS，或其生物等價物。肽可以是線形的，也可以是環狀的。
還適用的是無毒的非肽有機化合物，該有機化合物定義了一個區域，與αvβ3整聯蛋白結合位點基本互補，或者與細胞外基質蛋白上αvβ3整聯蛋白結合位點基本互補。
在應用中，為了抑制粘連形成，αvβ3整聯蛋白拮抗劑分子可以以氣霧粉的形式、或者存在于生理兼容載體中，直接用于手術部位，所述生理兼容載體可以是液體如水，單獨或與可吸收粉劑以膏藥的形式應用。這些可吸收粉劑的示例如無菌明膠粉末，可以以GELFOAM_的名義購買(Upiohn Co.)。此外，αvβ3整聯蛋白拮抗劑分子還可以通過無菌明膠泡沫或海綿、美國專利號5,409,703和McAualley et al.，所述類型的可吸收的干的水凝膠、或透明質酸衍生物應用于手術部位。對于腹膜內(i.p.)、皮下(s.c.)或靜脈內(i.v.)給藥，優選的載體是水溶性載體，如水或水溶性鹽溶液。
以前業已描述了粘連形成的兔側壁模型(Rogers et al.，1996，J.Invest.Surg 9388-91；Rodgers et al.，1998，supra)。應用每kg兔體重55mg鹽酸氯胺酮和每kg 5mg甲苯噻嗪混合麻醉兔。無菌手術準備后，進行中線腹腔鏡手術。將盲腸和小腸從腹腔中取出，數字加壓，在所有可能接觸側壁損傷區域的腸表面產生漿膜下出血。然后應用4”4×4層無菌紗布輕輕磨擦損傷的小腸，直至觀察到點狀出血。然后將盲腸和小腸推回到它們正常的解剖位置。
該兔模型與Harris et al.(1995，supra)等描述的標準大鼠粘連形成模型非常類似。在該大鼠模型中，創建腹壁缺損和盲腸磨損，空氣中干燥10分鐘，關腹前使兩處損傷表面置于接觸狀態。腹腔內應用戊巴比妥鈉(43mg/kg)給大鼠麻醉。腹部備皮，涂抹碘，然后用70％酒精沖洗。在中線皮膚開6cm切口，然后將皮膚卷起。在腹壁中線開4cm切口，棄去右側腹壁。在中線切口側面1cm，從腹壁整齊切除1×2cm的壁腹膜，包括表淺的潛在肌肉層。然后將盲腸位置提高，這樣關腹后，可以使盲腸接觸腹壁缺損。此后，用解剖刀片，以標準方式刮磨盲腸，直至在1×2cm的區域內出現斑點狀表面出血。腹壁缺損也進行磨擦。腹壁和盲腸缺損在空氣中暴露10分鐘。然后使缺損接觸，應用4-0聚丙烯縫合線縫合中線切口，并用4-0絲線縫合皮膚(Harris et al.，1995，supra)。
另一個研究生殖器官粘連的兔系統為兔子宮角模型。在該模型中，開中線切口，將子宮角從切口中牽出。然后應用手術紗布磨擦子宮角整個邊長大約5cm長的區域，并用解剖刀片磨刮12次。這種損傷可以導致廣泛的紅斑形成，但沒有活動性出血區域。然后將子宮角重置于腹腔，縫合傷口。
隨著腹腔鏡手術器械和技術的出現，這種損傷較小的手術變得有賴于常見。但是，粘連形成仍然是這種腹腔鏡手術可能的并發癥。業已應用兔動物模型來研究腹腔鏡粘連預防(Delaco，et al.，1998，supra)。簡言之，將Verres針經中線進入腹壁，插入腹腔，然后應用自動腹腔注入器注入二氧化碳氣體。然后在腹壁的相同位置插入套管針。通過套管針將關節鏡插入腹腔，并應用Xenon 300W作為光源。所有手術過程依靠內鏡的顯微照相機進行。觀察腹腔后，通過兩個側切口，不通過套管針，插入腹腔鏡剪刀和防止損傷性鑷子。
對腹膜或內表面的標準化損傷可以通過下述程序誘導，即在上述損傷前，應用鑷子將右側子宮角暴露2×2cm區域30秒，在右側子宮角末梢制備1cm切口，將壁腹膜暴露5×5cm區域。
在患者手術部位應用完整的鼠LM 609mAb是可能的，但長期或多次應用卻應避免，以免激發宿主針對LM 609蛋白的免疫反應(即人類患者出現人抗鼠抗體HAMA反應；在其他治療動物中，出現貓或狗抗鼠抗體和其他反應)。這種反應可以通過應用截短的LM 609得到部分抑制，所述截短的LM 609如Fab，Fab2或Fv構建物，或這些構建物的混合物。抗體片段如Fab，Fab2或Fv的產生是本領域眾所周知的，例如French所述(1998，Methods in Molecular Biology，Immunochemical Protocols，2ndEd.，80121-134)。其他已知方法還包括，應用重組DNA方法制備這些抗原結合蛋白和人工構建物(即單鏈Fv，scFv，scAb；Molecular RecognitionUnits，MRUs)。例如見Verhoeyen et al.，“Advances in antibody engineering”in Molecular Immunology，(IRL Press at Oxford University Press，Oxford，1996)chapter 7。
為了用于人類治療，鼠LM 609抗體或其蛋白需要進行人源化處理，可以通過將蛋白結構的氨基酸殘基進行明智取代以改變抗體表面的免疫原性抗原決定簇，使之作為治療宿主的人類蛋白出現，但結合活性部位的抗原特異性，包括互補決定區(CDR)的氨基酸殘基卻保守，以維持抗原決定簇的結合特異性。人源化處理單克隆抗體的方法已知，并在本領域業已有描述。例如，Waldmann et al.(美國專利5,502,167)描述了一種人源化抗體，其中CDRs的氨基酸序列源于能夠與靜息和激活T細胞特異性結合的單克隆抗體的CDRs序列。Hoogenboom et al.(美國專利5,565,332)描述了制備人源化特征增加了的抗體的方法，包括重鏈或輕鏈的選擇性突變，重組突變鏈，然后用抗原篩選結合活性。Adair et al.，(美國專利5,859,205)描述了將抗體重鏈和輕鏈CDR移植到受體框架區的特異性方法。因此，可以將編碼活性部位形成殘基的LM 609抗體的氨基酸殘基移植到人類抗體框架中，因此可以創建一種嵌合抗體，具有LM 609的抗體結合特異性，同時其抗原特征類似人類抗體。進行CDR移植的最優化獨特方法還包括鏈的再分類以及抗原篩選，業已在WO99/29888(Barbas et al.)中有述。
該過程可能導致親和力的不欲下降以及結合效率的下降，可以通過抗原篩選選擇更優的結合構建物或通過生成多價結合構建物來使之最小化。例如，應用本領域眾所周知的化學接頭交聯兩個或多個LM 609抗原結合活性部位或人源化處理活性部位也是有益的，這樣可以形成雙功能或多功能活性部位群，作為阻斷劑可以更有效地發揮作用。同樣，還可以將多個活性部位粘附到固體支持物上，如微顆粒和較大的橡膠聚合物或膠質珠等。將完整的抗體或包括其活性部位的片段或構建物粘附到固體支持系統上是本領域已知的。例如，Wang(1998，Methods in MolecularBiology，Immunochemical Protocols，2ndEd.，80365-376)描述了應用免疫磁珠進行細胞分類，其中磁珠業已包被了生物反應性分子，例如抗體、鏈霉親和素、植物血凝素和肽。
可以通過生成干擾或者阻斷αvβ3整聯蛋白與纖連蛋白或其他細胞外基質蛋白結合的抗體使本發明方法得到實現或制備本發明等價組合物，進而干擾發生粘連所需的接觸形成。為達到該目的，可以免疫適宜的動物，刺激與αvβ3整聯蛋白或纖連蛋白或其他細胞外基質蛋白的αvβ3結合位點特異性結合的抗體的產生。應用本領域已知的常規方法，通過抗原篩選抗原選擇這些適宜的抗體。從選出的適宜克隆中產生單克隆抗體的方法也是眾所周知的，并可用來制備適宜的αvβ3抑制劑分子。
這些現存化合物的任意取代或隨后產生的組合物中抗體或本發明方法也屬于本發明范疇，在結果以及方法上是等價的。
除了本文描述的分子，其他適于抑制αvβ3結合的拮抗劑分子也可通過常規篩選方法容易地選擇。為達到該目的，可以創建一種體外篩選試驗，應用粘附于已經制備好細胞外基質上的細胞，所述細胞外基質包括纖連蛋白或其他適宜的基質組分。在初始篩選系統中，給予備選分子，然后為隨后的細胞行為評分。底物結合的減少，或者伴隨粘連形成發生基質組分增殖的抑制，提示該備選分子有希望進行進一步研究。初始篩選可以通過應用化合物的混合物進行來減少篩選時間和進行批量篩選的努力。一旦初始結果提示成功，就可對特定化合物混合物的特定結合抑制進行單獨的篩選試驗。如果需要，這些篩選試驗可以完全通過全自動系統完成。無論這些抑制分子是如何發現的，可以想象，它們都將適宜地制備成本發明組合物，用于本發明方法。這些化合物的理想最佳應用濃度是至少能與LM 609抗體濃度相比，并使任意潛在副反應或毒性作用最小化。
能夠與細胞外基質蛋白分子的αvβ3整聯蛋白結合位點特異性結合或干擾其結合的拮抗劑分子也適用于本發明實踐。
本發明和多個實施方案通過下述實施例闡述。
在兔子宮角模型中，應用含有完整鼠mAb LM 609的溶液進行了初始測試，所述單克隆抗體濃度為0.1-10mM。在測試中應用溶液的優勢在于，不象物理屏障，不需要進行物理屏障的準確放置，或者(在某些情況下)不需要隨后去除屏障。溶液可以放置在腹腔內，并進而彌漫整個腹腔，沒有限制或局限。因此，給予含有mAb LM 609的治療性組合物比放置已知的物理屏障要容易得多，而且其效果對物理因素的依賴也更少。
二十一(21)只麻醉新西蘭白兔進行開腹手術，隨機分為兩組，一組進行“開腹關腹”對照過程(對照，n＝3)，或者以標準方式盆腔有意創建刮傷(實驗組，n＝18)。實驗動物進行中線開腹手術，應用200粗砂的砂紙磨擦側壁、膀胱、子宮和輸卵管，直至出現點狀出血。損傷后，實驗組兔隨機腹腔內接受2ml鹽水(鹽水對照；組iii，n＝6)，2ml抗β1抗體(抗β1；1mg/ml，組ii，n＝6)，或者2ml LM 609(抗αvβ3；1mg/ml，組i，n＝6)。腹壁分兩層縫合，肌肉層用3.0 polyglactin 910(Vicryl)縫合，皮膚以皮下方式用4.0 polyglactin 910縫合。
動物以12小時日/夜周期圈養，每日喂養150g食物，水隨意。兔用5位數標簽進行計數，溶液分別用A，B和C標記。手術后3周，靜脈內應用50mg戊巴比妥處死動物，并由一位觀察者給腹腔內粘連評分，該觀察者不知道處理特性，評分系統應用Blauer et al.的改良評分系統(1988，Fertility & Sterility，49144-49)。
表I.粘連評分系統
薄膜狀粘連的定義是容易剝離的粘連。密集粘連則是不容易剝離的粘連。
應用STATA進行統計學分析。組間粘連評分的差異應用組間一致性Kruskall-Wallis檢驗進行測定，結果α＝0.05(p＝0.02)。然后應用兩樣本Wilcoxon秩和分析分析了每一組相對于其他組的差異，結果α＝0.05。
LM 609處理組的結果評分于對照偽處理組觀察到的類似(p＝0.11)，提示處理對于減輕粘連形成是有效的。結果顯示，對照處理與偽處理組相比，效果不好，鹽水(p＝0.05)或抗β1整聯蛋白(p＝0.03)。
表II.粘連評分
根據本文的描述，本發明(業已全面描述了很多方面并在文中要求保護)無需過多實驗即可進行和實施。盡管本發明的組合物和方法是通過上述實施例的方式描述的，應該指出，在不背離本發明概念、精神和范疇的條件下，可以對本文描述的組合物和方法進行多種改良和修飾。
權利要求
1.抑制粘連形成的方法，包括阻斷αVβ3整聯蛋白與哺乳動物機體內細胞外基質蛋白結合的步驟。
2.抑制手術后粘連形成的方法，包括給手術患者應用粘連抑制劑量的拮抗劑分子，所述拮抗劑分子能夠阻斷αVβ3整聯蛋白的結合部位與細胞外基質蛋白的結合。
3.權利要求2的方法，其中所述細胞外基質蛋白是纖連蛋白。
4.權利要求3的方法，其中所述拮抗劑分子具有單克隆抗體LM 609的抗原結合位點。
5.權利要求3的方法，其中所述拮抗劑分子是單克隆抗體LM 609。
6.權利要求3的方法，其中所述拮抗劑分子是單克隆抗體LM 609的抗原結合部分，選自Fab，Fab2，Fv及其混合物。
7.權利要求2的方法，其中拮抗劑分子在生理兼容的溶液中給予，并且濃度至少大約為50毫克/毫升。
8.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子是單克隆抗體。
9.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子是肽。
10.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子是擬肽。
11.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子是蛋白質。
12.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子與可吸收固體載體共同給予。
13.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子與可吸收明膠載體共同給予。
14.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子與作為載體的膏藥共同給予。
15.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子腹膜內給藥。
16.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子皮下給藥。
17.權利要求2的方法，其中所述拮抗劑分子靜脈內給藥。
18.適用于減輕粘連形成的組合物，包括拮抗劑分子和生理可接受、可吸收的固體載體，所述拮抗劑分子可以阻斷αVβ3整聯蛋白上的結合位點與細胞外基質蛋白的結合。
19.權利要求18的組合物，其中所述細胞外基質蛋白是纖連蛋白。
20.權利要求19的組合物，其中拮抗劑分子具有單克隆抗體LM 609的抗原結合位點。
21.權利要求19的組合物，其中拮抗劑分子是鼠單克隆抗體LM609。
22.權利要求19的組合物，其中拮抗劑分子是人源化單克隆抗體LM609。
23.權利要求19的組合物，其中所述分子是單克隆抗體LM 609的抗原結合部分，選自Fab，Fab2，Fv及其混合物。
24.權利要求18的組合物，其中拮抗劑分子是單克隆抗體。
25.權利要求24的組合物，其中拮抗劑分子是單克隆抗體的抗原結合片段。
26.權利要求18的組合物，其中所述可吸收固體載體是明膠。
27.權利要求18的組合物，其中拮抗劑分子是蛋白質。
28.權利要求18的組合物，其中拮抗劑分子是肽。
29.權利要求18的組合物，其中拮抗劑分子是擬肽。
30.適用于減輕手術后粘連的組合物的包裝劑型，包括拮抗劑分子和生理可接受載體，所述拮抗劑分子可以阻斷αVβ3整聯蛋白的結合位點與細胞外基質蛋白的結合；所述劑型還包括標簽，提示包裝的抑制劑組合物可用于抑制粘連形成。
31.權利要求30的包裝劑型，其中所述細胞外基質蛋白是纖連蛋白。
32.權利要求31的包裝劑型，其中所述拮抗劑分子具有單克隆抗體LM 609的抗原結合位點。
33.權利要求31的包裝劑型，其中所述拮抗劑分子是鼠單克隆抗體LM 609。
34.權利要求31的包裝劑型，其中所述拮抗劑分子是人源化單克隆抗體LM 609。
35.權利要求31的包裝劑型，其中所述拮抗劑分子是單克隆抗體LM609的抗原結合部分，選自Fab，Fab2，Fv及其混合物。
全文摘要
本發明公開了抑制或改善手術后/創傷后患者粘連形成的組合物和方法。這些組合物和方法應用能夠阻斷或抑制αVβ3整聯蛋白與細胞外基質蛋白結合的拮抗劑分子，所述細胞基質外蛋白如纖連蛋白。
文檔編號A61P17/02GK1399554SQ00816148
公開日2003年2月26日 申請日期2000年9月22日 優先權日1999年9月23日
發明者D·A·克雷斯, B·萊西 申請人:斯克里普斯研究學院, 北卡羅來納-查佩爾山大學