用母牛分枝桿菌治療慢性病毒感染的制作方法

專利名稱：用母牛分枝桿菌治療慢性病毒感染的制作方法
技術領域：
本發明涉及在病毒感染，特別是慢性病毒感染的治療中母牛分枝桿菌的用途。
背景技術：
英國專利說明書，NO.2156673(國際專利說明書WO85/03639)敘述了包含殺死的母牛分枝桿菌細胞的免疫治療試劑。這些試劑可用于分枝桿菌疾病的免疫治療，特別是結核病和麻風病的免疫治療。據報道，利用這一免疫治療試劑能夠加速眾所周知的單獨化學治療難于除去的導致結核病或麻風病的存留桿菌。
國際專利說明書PCT/GB85/00183(WO85/05034)敘述了用于減輕關節疾病癥狀和治療或診斷的組合物，該組合物中含有作為活性成分的完整的母牛分枝桿菌生物體。據報道，母牛分枝桿菌的制劑可用于治療各種自身免疫疾病，和尤其是關節疾病包括類風濕關節炎，關節強硬性脊椎炎或Reiter綜合癥。
母牛分枝桿菌的其它用途在下面幾個專利中有專門說明WO91/02542，其中提到了含有起源于母牛分枝桿菌，通常用于治療缺半乳糖的IgG(即，重鏈上缺乏N連接的寡糖而來的末端半乳糖的IgG)的比例增加的病癥的抗原性的和免疫調節性的物質的組合物，WO92/08484，其中提到利用母牛分枝桿菌治療葡萄膜炎，WO94/06466，其中提供了起源于母牛分枝桿菌的抗原性和/或免疫調節性物質，用于生產治療AIDS和治療HIV陽性的無病癥病人的藥劑，和南非專利申請95/2644，其中涉及有望對中胚層，外胚層，內胚層起源的腫瘤，包括胸和支氣管腫瘤的治療有效的母牛分枝桿菌的免疫治療。
盡管WO92/08488進一步公開，殺死的母牛分枝桿菌的細胞可以用較為有利的方式刺激和/或修飾抗非母牛分枝桿菌內源的抗原的免疫應答，但為了方便，因此也是優選的，上面提到的治療試劑含有母牛分枝桿菌的死細胞，最優選地是經過高壓滅菌殺死的細胞。
國際申請PCT/GB98/03346中論述已經獲得含有冷休克治療誘導的蛋白質的冷休克母牛分枝桿菌制劑，并且這樣的制劑具有各種用途，包括但不限于如Raynaud綜合癥或體溫過低等疾病的治療。
發明公開我們已經驚奇地發現用母牛分枝桿菌進行慢性病毒感染的治療對治療感染是有益的，因為能夠穩定感染，或部分地或整個地改進臨床治療過程。
母牛分枝桿菌在人或其它動物中抵抗病毒疾病的作用是驚人的，因為這一細菌抗原的作用對在較遠位點感染病毒的細胞誘導應答。
所以，本發明提供了治療HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，該方法包括對需要治療的人或動物給藥有效量的母牛分枝桿菌制劑。但對這些非HIV慢性病毒的作用可能與抗HIV的作用不同，因為HIV直接攻擊宿主的免疫系統，而據認為宿主的免疫系統是受母牛分枝桿菌調節的。
本發明進一步提供了母牛分枝桿菌制備物用于生產治療HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑的用途。
發明的詳細描述有些病毒可以進入特異的細胞，改變細胞的功能，以生產病毒蛋白質，和表達應急蛋白質，但不殺死細胞。這樣，這些病毒慢慢地在感染的宿主細胞內復制，這樣的感染會引起慢性病或疾病再發，并且也會產生臨床損傷。所以，“慢性病毒感染”是指人或其它動物感染病毒并且在較長的時期，通常幾星期，幾月甚至幾年內在宿主的細胞內繁殖而不危及宿主的生命。
引起慢性感染并且根據本發明可以治療的病毒有人乳頭瘤病毒(HPV)，單純性皰疹和其它皰疹病毒，乙型和丙型肝炎病毒以及其它肝炎病毒和麻疹病毒，所有這些病毒能夠產生嚴重的臨床癥狀。長期的感染最終會導致例如能致死患者的丙型肝炎病毒引起的肝癌這樣的疾病。
在人體內，乳頭瘤病毒會引起四種不同的疣散發性疣，通常是在手上；腳上的足底疣；復合性疣，其中有在分散的大面積的皮膚上融合的贅疣，通常也包括與宮頸異常增生相關的陰部(性病疣)在內；和與子宮異常增生相關但通常沒有其它損傷的乳頭瘤病毒。其中前面兩個通常較易治療，自愈或局部措施就能治療。后面兩個較難治療，通常不同程度地伴隨人生命期。宮頸異常增生已知是惡性病的前兆，并且是進行子宮頸涂片的主要原因。HPV至少有75種可以區別的類型。一種損傷通常與一種類型相關，復合的損傷通常與同時感染幾種不同類型的病毒有關，陰部疣和宮頸異常增生通常與16，18或31型病毒相關。根據本發明，這些類型，以及其它HPV亞型，例如HPV2a和HPV21的病毒是可以治療的。
單純性皰疹病毒HSV-1引起的已知的癥狀是“凍瘡”，這種病癥一年發生幾次，在頰或鼻粘膜和周圍的皮膚之間的粘膜接合處有小的或潰瘍性損傷。當免疫性受急性病毒感染破壞時，通常發生損傷。在小的神經末梢這些病毒會長期存在。HSV-2病毒也可能引起生殖器皰疹，其中在陰莖和包皮之間或圍繞女性外陰的粘膜接合處的周圍，損傷會擴展。在兩種性別中，生殖器皰疹損傷有趨勢比凍瘡更廣泛更嚴重。雖然一次與一次不一樣，但生殖器皰疹比凍瘡頑固得多。另外，在小的神經中，病毒潰瘍會連續地再感染陰部區域，因此病毒就變得頑固。本發明提供了對HSV-1和HSV-2感染，以及其它皰疹病毒的治療。
雖然可能不是唯一的原因，但乙型和丙型肝炎病毒通常從人到人的傳播媒介是血液產物。兩種類型的病毒都會引起急性肝炎，但在一些人中治愈了沒有后遺問題，而在另一些人中會變成慢性。慢性肝炎導致肝的慢性硬化，由于會發展成肝衰竭或惡性肝癌，肝硬化可能導致死亡。這些疾病都是不易治療的。
偶爾，麻疹病毒會在腦中慢慢地固定下來和引起循序性并且致死的稱為亞急性硬化全腦炎(SSPE)的病癥，這種病癥還沒有已知的治療措施。
按照本發明可以治療的其它慢性病毒感染包括埃伯斯坦一巴病毒(EBV)，以及其它病毒，如可能與腫瘤相關的那些，或在動物的情況中的各種牲畜的病毒疾病，例如家養的寵物或農業上的重要的牲畜的那些病。
可以理解的是，對感染的治療是緩解，減輕或除去感染的癥狀，通過除去或減少負載的病毒等等減輕感染的嚴重性來延遲或阻止啟動次級變化如惡性或其它形態的變化。
母牛分枝桿菌制劑可以全部是或包括母牛分枝桿菌的死細胞的材料。盡管高壓滅菌是優選的殺死細菌細胞的方法，例如在69kPa，115℃-125℃下處理10分鐘，但例如利用輻射，例如在2.5megarads劑量的60Cobalt下，化學地，或其它方法也是可以的。高壓滅菌可以比輻射產生更有效的制劑。
在殺死之前，母牛分枝桿菌可能在適當的固體培養基上生長。改良的Sauton液體培養基是優選的(Boyden等人)，用瓊脂固化，優選地是1.3％的瓊脂。在有氧溫育后，通常在32℃下10天，可以收獲生物體，然后，稱重并懸浮于稀釋液中，可備用于給藥。如果需要，在使用前，可以在4℃下儲存。
除了在固體培養基上生長細胞，也可以利用如在發酵罐中的液體培養基如改良的Sauton培養基(Boyden等人)。
在生長的過程中，為了誘導生產冷或熱休克蛋白質，可以用冷休克或熱休克處理母牛分枝桿菌。適當的熱休克條件包括在升高的溫度下，例如37，42或45℃下生長一個時期，從10分鐘到幾個小時例如3個或更多個小時。冷休克處理可以是在減低的溫度下例如10到25℃下處理相同的時期。
稀釋液可以是無熱原的未緩沖的鹽。優選地，稀釋液可以是硼酸緩沖的，優選地含有表面活性劑如吐溫80。適當的硼酸緩沖液是Na2B4O7.10H2O-3.63克，H3BO3-5.25克，NaCl-6.19克，吐溫800.0005％，用蒸餾水加到1升。這些稀釋液在藥物學上是可接受的。
通過以母牛分枝桿菌如可從英國的聯邦藥物管理局IND和醫藥控制部的CTX的幾個研究人員用于人的GMP制劑SRL172的給藥已經得到上面提到的對人產生的結果。Huntingdon Research已經進行了GLP的急性毒理研究。在美國已經得到了1期和2期的安全數據，并交給了FDA。SRL172在3期試驗中用于結核病的免疫治療。SRL172可以優選地用于本發明。
SRL172是起源于R877R菌株的母牛分枝桿菌的制劑，根據布達佩斯條約，該菌株以登記號NCTC11659，在1984年2月13日，保藏于英國，倫敦NW95HT，Colindale街，國立典型培養物保藏中心(NCTC)，中央公共健康實驗室。R877R最初是從中央Uganda的Lango區(Stanford和Paul)的泥沙樣品中分離得到的。
也可以利用其它母牛分枝桿菌替代SRL172。通過生化和抗原性的標準可以鑒定屬于母牛分枝桿菌的生物體(Bonicke等人)。
以無或基本上無母牛分枝桿菌抗原或免疫調節物質的母牛分枝桿菌物質給藥在本發明中是優選的。換句話說，即給藥的藥劑或組合物可以含有，或基本上包括母牛分枝桿菌的抗原性和/或免疫調節性物質，如死的細胞，提取物或衍生物，和藥物學上可接受的稀釋劑。
以“治療有效的量”給藥是優選的，因為這樣對病人是有利的。這樣的給藥的益處是至少能夠減輕一種癥狀。實際的給藥量，給藥速度和時間將根據治療的病情的特性和嚴重性而變化。治療的處方，例如，藥量等等，屬于普通治療醫生和其它治療人員的責任范圍。
一個劑量(其中以死細胞給藥)通常含有107到1010個殺死的母牛分枝桿菌微生物。盡管需要的話，可以多次給藥，例如間隔2星期到6個月，但給藥病人的一個劑量的藥中可以有108到109個殺死的母牛分枝桿菌。
根據治療的癥狀，可以同時或按順序單獨使用組合物或結合其它治療劑使用。
根據本發明和用于本發明的藥物組合物，除了活性成分還包括藥物學可接受賦形劑，載體，緩沖液，穩定劑或本領域技術人員已知的物質。這樣的物質應該是非毒性的并且應該不會干擾活性成分的效力。載體或其它物質的具體特性將根據給藥的途徑而不同，而這些途徑盡管優選的是注射，例如皮，皮下或透皮，但這樣的途徑應該是本領域技術人員使用的方便途徑。
對于注射途徑，活性成分的形式將是腸胃可接受的水溶液，其中無熱原，pH適當，等滲和穩定。已經在上面討論過，適當的稀釋劑是藥物學可接受的，并且是優選的。
也可以口服給藥，這時，藥物組合物可以是片劑，膠囊，粉末或液體形式。片劑可以含有固體載體如明膠或佐劑。液體藥物組合物通常含有液體載體，如水，原油，動物或植物油，礦質油或合成油。還可以包括生理鹽溶液，葡聚糖或其它多糖溶液或醇如乙二醇，丙二醇，或聚乙二醇。
利用合適配方，例如包括穿行到氣管的合適部分的大小的顆粒將母牛分枝桿菌以氣霧劑給藥到氣管。這種制劑是干粉而不是含水懸浮液。
除了殺死的細胞，也可以利用起源于母牛分枝桿菌的其它物質，特別是具有需要的活性的提取物或合成分子。
在下面的非限制性實施例中本發明得到進一步說明，這些實施例報告了接受一個或多個標準劑量(108-109個細胞)的母牛分枝桿菌的病人的癥狀的研究。
實施例1接受用殺死的母牛分枝桿菌免疫治療別的適應癥的兩個個體在手上有推測是病毒起因的長期的單一類型的疣。在治療期間，觀察到疣完全治愈。
實施例2
由各種HPV亞型引起的擴展性復合疣的三個病人接受了殺死的母牛分枝桿菌的系列注射。
第一位是免疫防御系統因為嚴重的并發性免疫缺陷而從親本再構建骨髓才5個月的15歲的男孩。他感染了HPV2a和21，并且在8年前已經發展成難治療的疣。在過去幾年中，他接受了7次母牛分枝桿菌注射，有時，注射后IL-2產量增加，并且產生CD8毒性細胞。但是，這些副反應都不長久。他的臨床損傷繼續發展，檢測其發展。
第二位是29歲的婦女，她在9歲時第一次在手指上出現了疣，在15歲時，手和腳上的疣大量增加，并且在19歲時延伸到陰部。當她20歲時進行了宮頸細胞學檢查，仍然顯示邊緣性的中等核異常，為此她接受了幾次局部的透熱治療和冷凝固治療。她接受了2次3個劑量的母牛分枝桿菌，第一次在1988年的3月和5月之間，第二次將近在2個星期的間隔之后。目前她的臨床狀況正在好轉。
第三位是54歲的婦女，她接受了3個單月劑量的母牛分枝桿菌，現在正在檢查對治療的反應情況。
實施例3一個38歲的婦女在過去的6個月里進行的子宮涂片顯示在過去的20年中她有子宮異型增生，在這20年中，她生產了3個小孩，她接受過局部激光治療。在1995年她接受了一次殺死的母牛分枝桿菌的注射后的兩次定期的宮頸檢查顯示癥狀正常，而她的第一次檢查是在22歲時。隨后，她進一步接受了4次每年一次的注射殺死的母牛分枝桿菌和宮頸檢查，最后一次在1999年5月19日。自從開始治療后，所有的涂片都是病毒清除了。
實施例4一個34歲的婦女被檢測到有3個月的陰部皰疹的歷史，接受了2次月間隔地注射殺死的母牛分枝桿菌，第3次注射是在間隔3個月后。在第一次注射后15個月時，病人作了檢查，報告說，在接受治療后，她已經是并且保持了無癥狀狀態。在這個時期，本來估計即使用抗病毒的化學治療連續治療，她也會有2次或3次的重新發作。
實施例5一個有先天性的弓形體歷史的9歲的女孩在1年前接種麻疹疫苗后出現了正在惡化的SSPE。在沒有任何其它替代治療的情況下，在1997年11月開始用殺死的母牛分枝桿菌免疫治療。在開始的15個月的治療中，她接受了母牛分枝桿菌的重復注射，她的病情進展較小，從整體來說，即癥狀沒有明顯的惡化。在接著的12個月中，她接受了間隔1星期的2次注射，觀察到了相當明顯的好轉。病人又能夠自己坐下了。還報告說眼睛，頭，頸，臂和腿都可以大幅度運動，并且她可以進行有意的體育運動。對腦脊髓液的抗體分析發現了抗體從抗麻疹病毒的多克隆抗體(與正在惡化的SSPE病有關)變化成寡聚克隆的抗麻疹抗體(與從病毒感染恢復有關)。
即使單個出版物或專利說明書都是特定或單獨適用于引入作為參考的，本說明書中的引證的所有公開物和專利申請書都可以引入作為參考。
雖然，為了說明和理解，通過敘述和實施例，前面敘述的發明已經在一定程度上得到了詳細的陳述，但對于本領域的技術人員，很顯然能夠理解的是，在不脫離附加的權利要求書的精神或范圍的情況下，是可以進行一些改變和修改的。
參考文獻Bonicke等人，(1964)Zentr albl.Bakteriol.Parasitenkd.Infection skr.Hyg.Abt.1，Orig.，192133Boyden等人，(1955)免疫學雜志7515.
Stanford和Paul，(1973)Ann.Soc.Belge Med.Trop.53141-389.
權利要求
1.母牛分枝桿菌制劑用于制造用于治療HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
3.根據權利要求2所述的用途，其中所述的HPV感染與宮頸異常增生有關。
4.根據權利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是皰疹病毒感染。
5.根據權利要求4所述的用途，其中所述的皰疹病毒感染是單純性皰疹病毒感染。
6.根據權利要求1所述的用途，其中慢性病毒感染是亞急性硬化全腦炎。
7.根據權利要求1所述的用途，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
8.治療HIV感染以外的慢性病毒感染的方法，該方法包括對需要治療的人或動物給藥治療有效量的母牛分枝桿菌制劑。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是HPV感染。
10.根據利要求9所述的方法，其中所述的HPV感染與宮頸異常增生有關。
11.根據權利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是皰疹病毒感染。
12.根據權利要求11所述的方法，其中所述的皰疹病毒感染是單純性皰疹病毒感染。
13.據權利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是亞急性硬化全腦炎。
14.據權利要求8所述的方法，其中所述的慢性病毒感染是肝炎病毒感染。
全文摘要
本發明提供了母牛分枝桿菌制劑用于生產治療除HIV感染以外的慢性病毒感染的藥劑中的用途。慢性病毒感染包括HPV感染,如與宮頸異常增生相關的HPV感染,皰疹病毒感染,亞急性硬化全腦炎和肝炎病毒感染。
文檔編號A61P31/20GK1377274SQ0080347
公開日2002年10月30日 申請日期2000年2月16日 優先權日1999年2月16日
發明者J·L·斯坦福, G·A·W·羅克, C·A·斯坦福 申請人:斯坦福盧克有限公司