類固醇硫酸酯酶抑制劑以及它們的制備和應用方法

專利名稱：類固醇硫酸酯酶抑制劑以及它們的制備和應用方法
技術領域：
本發明涉及硫酸酯酶抑制劑以及該抑制劑的制備和應用方法。這些方法包括在雌激素依賴型疾病的治療和預防中施用這些化合物。
發明的
背景技術：
絕經期婦女乳房腫瘤血漿中的雌激素水平至少比正常的雌激素水平高10倍。在這些腫瘤中雌激素處于高水平是因為在原處就可形成雌激素，這可能是通過雌酮硫酸酯酶的作用將雌酮硫酸酯轉化為雌酮。因此，雌酮硫酸酯酶的抑制劑有可能成為雌激素依賴型乳癌的治療劑。大多數雌酮硫酸酯酶抑制劑是天然的甾類化合物。雖然雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被認為是最好的雌酮硫酸酯酶抑制劑，近來已經證明雌化合物是有效的雌激素。因此，該化合物不能用于治療雌激素依賴型的疾病。
Reed和他的同事報道了雌酮-3-O-甲基硫代膦酸酯、雌酮-3-O-烷基和芳基磺酸酯、雌酮-3-O-膦酸酯和硫代膦酸酯和雌酮氨基磺酸酯硫酸酯酶抑制活性Duncan等人，″Inhibition of EstroneSulfatase Activity by Estrone-3-methylthiophosphonate″，Cancer Res.53298-303(1993)；Howarth等人，″Phosphonates andThiophosphonates as Sulfate SurrogatesSynthesis of Estrone-3-methyithiophosphonate，a Potent Inhibitor of EstroneSulfatase″，Bioorg.Med.Chem.Lett.3313-318(1993)；Howarth等人，″Estrone SulfamatesPotent Inhibitor of EstroneSulfatase with Therapeutic Potentiai″，J.Med.Chem.37219-221(1994)；和Purohit等人，″In vivo Inhibition of OEstrone Sulphatase and Dehydroepiandrosterone Sulphatase by OEstrone-3-O-sulphamate″，Int.J.Cancer，63106-111(1995)。
Li和他的同事報道了帶有雌酮核的磺酸酯或其類似物、亞甲基磺酸酯和磷酸酯的合成以及硫酸酯酶抑制活性，參見Li等人，″Synthesis and Biochemical Studies of Estrone SulfataseInhibitor″，Steroids，58106-111(1993)；Dibbelt等人，″Inhibition of Human Placental Steryl Sulfatase by SyntheticAnalogs of Estrone Sulfate″，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.，50(5/6)261-266(1994)；和Li等人，″Estrone Sulfate Analogsas Estrone Sulfatase Inhibitor″，Steroids 60299-306(1995).Estrone-3-amino derivatives are reported in Selcer等人，″Inhibition of Placental Estrone Sulfatase Activity and MCF-7Breast Cancer Cell Proliferation by Estrone -3-aminoDerivatives″，J.Steroid Biochem.Molec.Biol.，59(1)83-91(1996)。
U.S.P 5,567,831涉及非甾體雌酮硫酸酯酶化合物在治療雌激素依賴型疾病中的應用。
U.S.P 5,571,933涉及雌-1，3，5(10)三烯-17-酮，3-氨基化合物和這些化合物在治療雌激素依賴型疾病中的應用。
U.S.P 5,556,847和5,763,492分別涉及甾族和非甾族雌酮硫酸酯酶抑制劑，以及應用這些抑制劑有效地增強記憶，但是沒有公開應用這些抑制劑治療雌激素依賴型疾病。
U.S.P 5,616,574和5,604,215公開了類固醇硫酸酯酶抑制劑和它們的使用方法。與本發明公開的化合物相反，該專利所公開的化合物是有效的雌激素，并可代謝形成雌酮。
U.S.P 5,763,432公開了雌酮硫酸酯酶的類固醇抑制劑，該專利里沒有公開本發明的化合物，或在類固醇核的C17上的取代基與細胞膜的脂雙層相互作用的化合物。
因此就需要有有效的硫酸酯酶抑制劑，該抑制劑對代謝是穩定的，選擇性更好，并且沒有雌激素活性。
本發明還涉及所公開的類固醇硫酸酯酶抑制劑的合成方法。
此外，本發明還涉及將這些化合物用作硫酸酯酶抑制劑的方法。這些方法通常包括將一種或多種本發明化合物與適當的藥用載體結合，并給患者施用治療或預防有效量的本發明化合物。
本發明的另一方面是提供了用于抑制身體中產生的類固醇硫酸酯酶的化合物。
本發明的另一方面是提供了雌酮硫酸酯酶抑制劑化合物，該化合物具有抗腫瘤活性，或與抗雌激素和芳香酶抑制劑有協同增效作用。
本發明的另一方面是提供了具有治療雌激素依賴型疾病活性的雌酮硫酸酯酶抑制劑化合物。
本發明的另一方面是提供了用本發明的硫酸酯酶抑制劑化合物給患者進行治療或預防的方法。
本發明的另一方面是提供了硫酸酯酶抑制劑化合物的衍生物，該衍生物不會代謝成雌激素。
根據說明書下面的描述和所提交的權利要求書，本領域的熟練技術人員就會更完整地理解本發明的各個方面。


圖1一般性的說明了雌酮硫酸酯酶的反應途徑。
圖2說明了在圖中表示為“R3”的C17取代基與細胞膜的脂雙層相互作用的方式。
圖3說明了按照實施例1的方法制備第一類化合物的流程圖。
圖4說明了按照實施例2的方法制備第二類化合物的流程圖。
圖5說明了按照實施例2的方法制備第二類化合物的流程圖。
圖6說明了按照實施例2的方法制備第二類化合物的流程圖。
圖7說明了按照實施例3的方法制備第三類化合物的流程圖。
圖8說明了制備第四類化合物的流程圖。
圖9說明了按照實施例5的方法制備第十類化合物的反應流程圖。
圖10說明了制備第十二類化合物的反應流程圖。
圖11說明了按照實施例4的方法制備第二類化合物的流程圖。
圖12說明了按照實施例6的方法制備第六類化合物的流程圖。
發明的詳細描述本文所用的術語“患者”動物界的成員，包括但不限于人。
本發明涉及下式2化合物 其中R1和R2各自獨立地選自氫和具有1-6個碳原子的低級烷基；R3選自下述基團 R4和R5各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團；R6選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R7選自-N(R12)(R13)、-OR14、氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，R12和R13各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團，以及R14選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R8選自氫和具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R9選自具有1-15個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團、CO(CH2)mCH3和COR10；R10是具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，但是當烷基是C1或C2烷基時，所述的烷基不是支鏈的；m是0-2；R11是具有3-14個碳原子的支鏈烷基基團；和X和Y都是碳原子，以及X和Y之間的鍵是單鍵或是雙鍵，但是當R3是-N(R8)(R9)時，X和Y之間是單鍵的情況除外。
正如本領域熟練技術人員可以理解的，這些化合物是雌酮類，更具體地說是1，3，5(10)-三烯。適當的類固醇環系包括下述取代的雌酮2-OH-雌酮2-甲氧基-雌酮4-OH-雌酮6-α-OH-雌酮7-α-OH-雌酮7-α-烷基酰胺基-雌酮16-α-OH-雌酮16-β-OH-雌酮本發明進一步涉及具有下式(3)的化合物 其中R3選自下述基團 R4和R5各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團；R6選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R7選自-N(R12)(R13)、-OR14、氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，R12和R13各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團，以及R14選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R8選自氫和具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R9選自具有1-15個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團、CO(CH2)mCH3和COR10；R10是具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，但是當烷基是C1或C2烷基時，所述的烷基不是支鏈的；m是0-2；R11是具有3-14個碳原子的支鏈烷基基團；X和Y都是碳原子，以及X和Y之間的鍵是單鍵或是雙鍵，但是當R3是-N(R8)(R9)時，X和Y之間是單鍵的情況除外；和K是氮和L是碳，以及K和L之間的鍵是單鍵或是雙鍵。
對式2或3所表示的化合物而言，當“X”、“Y”和“L”都是碳時，“K”是氮；連接X和Y以及K和L的鍵通常是單鍵或是雙鍵。可以理解的是，當鍵是單鍵時，在X和K上連接有一個氫，Y和L上連接有兩個氫。
因此，一些雌酮是本發明的內容。為了便于參照，根據所連接的“R3”的不同，上述式2或式3的化合物在本文中被稱為第1類至第12類化合物，如下表1所述第1至第6類是關于式2化合物，第7至第12類是關于式3化合物。
表1 優選的，R1和R2都是氫。進一步優選的實施方案包括其中m等于2的第1和第7類化合物；R4和R5都是甲基的第2和8類化合物；R4是氫，和R5是具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基和具有1-3個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團的第2和8類化合物；R4是具有1-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，和R5是具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團的第2和8類化合物；R6是具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是CH2CH3的第3和9類化合物；R7是具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是具有3個碳原子的直鏈烷基(丙基)的第4和10類化合物；R7是-N(R12)(R13)，R12和R13均是氫、甲基、丙基或異丙基；或R12是乙基和R13是異丙基的第4和10類化合物；R11是具有3-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，特別是具有3個碳原子的支鏈烷基(異丙基)的第5和11類化合物；R8是具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基，和R9是具有2-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基或具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基的第6和12類化合物；以及R8是氫和R9是具有4個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基的第6和12類化合物。
本發明化合物可用作硫酸酯酶抑制劑。這些化合物通常含有取代的類固醇核。所述的取代基連接于類固醇核的C17位。在式2和3中用“R3”基團表示。因為在本發明類固醇核C17位的取代基是唯一的取代基，因此在酶失活后釋放出來的類固醇分子不是雌激素。本發明化合物的功能在其活性位點上是不可逆轉的雌酮硫酸酯酶抑制劑。氨基磺酸酯基團可以雌酮硫酸酯酶的途徑識別和結合于類固醇硫酸酯酶或雌酮硫酸酯酶，因此可防止雌酮硫酸酯向雌酮的轉化。雌酮硫酸酯酶途徑如圖1所示。
此外，與沒有這些取代基的化合物相比，類固醇核C17位上唯一的取代基使硫酸酯酶抑制作用提高。因為雌酮硫酸酶是膜鍵合酶，本文所述C17位的取代基造成了取代基和患者的多種膜的細胞膜的脂雙層之間疏水的相互作用。這種相互作用使抑制劑與酶的結合親和力增加。如圖所述，C17位的取代基(R3)和膜的脂雙層的兩層(14和16)作用。疏水的相互作用使取代基保持在雙層之中。這種附加的結合位點導致更強的硫酸酯酶抑制活性。
本發明進一步涉及上述化合物的合成，各種反應流程如圖3-12說明。
圖3給出了其中的R1和R2都是氫，R3是 和m等于2的式2化合物的合成。圖4、5和6說明了第二類化合物的合成。圖4中合成的具體化合物通常由式2表示，其中的R1和R2都是氫，R3是 和R4是氫、甲基、丙基或異丙基，以及R5是與圖4、5和6中的化合物11a-11s相應的任何“R5”基團。
圖7是第三類化合物的合成，該化合物通常由上述式2表示，其中的R3是-C(O)OR6。圖7所示的第三類化合物的具體實施方案由式2表示，其中的R1和R2都是氫，和R6是具有3個碳原子的直鏈烷基。圖8說明了第四類化合物的合成，所述的化合物通常表示為其中R3是-C(O)R7的上述式2化合物。圖8所示的第四類化合物的具體實施方案由式2表示，其中的R1和R2都是氫，和R7是具有3個碳原子的直鏈烷基。本領域熟練技術人員可以理解的是，所述各圖要說明的各種化合物的具體實施方案通常都表示為式2；按照各圖所示的這些反應流程和進行必要的取代反應，本領域熟練技術人員很容易制備具有不同“R”基團和不同“m”值的其它式2化合物。
圖9和圖10給出了制備第10和第12類化合物的合成路線。更具體地，圖9描述了第10類化合物的合成，該化合物通常以式3化合物表示，其中R3是-C(O)R7，R7是-N(R12)(R13)，R12是氫和R13是具有3個碳原子的直鏈烷基(丙基)。圖10表示第12類化合物的合成，由上述式3表示，其中R3為-N(R8)(R9)，R8為氫，R9為具有3個碳原子的直鏈烷酰基。再則，按照圖9和圖10所說明的反應流程，具有各種取代基的，通常用上述式3表示的化合物可用必要的化合物制備，得到所需的硫酸酯酶抑制劑。
圖11說明了第二類化合物的合成。圖11中合成的具體化合物通常表示為式2，其中R1和R2都是氫，R3是 和R4是氫或甲基，以及R5是與圖11中的化合物29d、29e、29g、29h和29m相應的“R5”基團之一。
圖12說明了第6類化合物的合成。圖12中合成的具體化合物通常表示為式2，其中R1和R2都是氫，R3是-N(R8)(R9)，R8是氫和R9是丁酰基。
本發明還涉及用上述化合物治療和/或預防患者的雌激素依賴型疾病的方法。這些疾病包括但不限于乳癌、陰道癌、子宮癌、卵巢癌和子宮內膜異位。
本發明的方法包括以下步驟a)將一種或多種本發明化合物與適當的藥用載體結合；和b)給患者施用治療有效劑量的或是預防有效劑量的，與載體結合的本發明化合物。
術語“適用的藥用載體”指在藥學工藝領域為給予病人服用化合物而使用的任一載體。任何適用的藥用載體只要不產生相容性問題都是可以使用的。優選的藥用載體是生理鹽水(0.9％氯化鈉)，95％葡萄糖水溶液。
給病人服用有效劑量或有效量的硫酸酯酶抑制劑可采用非腸胃注射的方法，如靜脈注射、鞘膜內注射、肌內注射或動脈注射。這些化合物還可口服或經皮膚使用，或由本領域專業技術人員熟悉的任何其他方法服用。口服是優選的。
這里所使用的術語“有效量”和“有效劑量”指為在病人中達到最低某種水平的酶抑制作用所需要的這里所公開的一種或多種化合物的量。具體地說，是足以影響病人達到所希望結果或所希望治療的量，如減少腫瘤大小或降低雌激素濃度。術語“治療有效量”指為治療病人所需要的本發明的一種或多種化合物的量。這種治療適于雌激素依賴的病人。同樣，“預防有效量”指為預防處理病人所需要的本發明的一種或多種化合物的量。這種處理適于為防止腫瘤增長而進行了外科手術的病人；本發明化合物能夠用來抑制新出現的腫瘤細胞的增長。人們會認識到，在“治療”和“預防”間存在有重疊。
正像本領域的專業技術人員所認識到的那樣，選定的化合物的劑量、服用的方法和治療期限將取決于被治療的個體情況，考慮的因素包括所治療的具體激素依賴病、病人的體重、對病人采用的其他治療和病人的狀況、臨床反應和耐性。劑量、服用的方法和治療期限由專業人員對這些因素進行評價后確定。典型的病人是絕經后的婦女和實施了卵巢切除的絕經前的婦女。雖然劑量和服用方法因病人而變化，但一般的劑量在0.005mg-2mg本發明化合物/每公斤體重，而且是每天都要服用。
實施例下面的實施例旨在說明本發明，但不應以任何的方式構成對本發明的限制。
對所有的實施例，化學品和硅膠購自Aldrich Chemical Company(Milwaukee，WI)。化學品由薄層色譜和NMR進行純度檢查。生物化學品、雌酮和雌酮硫酸酯購自Sigma Chemical Company(St.Louis，MO)。[6，7-3H]雌酮硫酸酯購自Dupon Company。熔點在Thomas Hoover毛細管熔點儀上測定，未校正。質子NMR譜用Bruker WH-300(300MHz)分光光度計獲得。元素分析由Atlantic Microlab Inc.(Norcross，GA)完成。放射性樣品用Packard Tri-Carb4530和Beckman LS-6500液體閃爍計數器分析。液體閃爍雞尾酒是Ecolume(ICN，CostaMesa，CA)，和Packard Utima Gold。
實施例1第一類化合物的制備參考數據對應于圖3。芐氧基雌酮(化合物2)的制備向在丙酮(150ml)中含5g(22mmol)化合物1的雌酮(化合物1)溶液加入K2CO3(4.56g，33mmol)和芐基溴(3.9ml，33mmol)。使該溶液回流2天，將溶液蒸干，用乙酸乙酯萃取。干燥(Na2SO4)乙酸乙酯層，將溶液蒸干，得到黃色固體。固體中的芐基溴用石油醚洗除，得到白色固體(化合物2)。該固體在下一步使用，無需進一步純化(產率~81％)。3-芐氧基-17-(三氟甲磺酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物3)的合成在0℃向在CH2Cl2(70ml)中含4.8g(13mmol)化合物2的溶液加入2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(3g，14mmol)和三氟甲磺酸酐(6g，27mmol)。使該混合物在室溫下攪拌5小時，過濾，濾液用10％碳酸氫鈉溶液洗滌，而后干燥(Na2SO4)溶液，過濾，蒸發，色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，2∶1)，得到黃色固體(5.2g，84.5％)(化合物3)。3-芐氧基-17-(N-丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物4)的合成將三氟甲磺酸酯化合物3(1.4g，3.02mmol)、乙酸鈀(II)(60mg，0.26mmol)、1，3-雙(二苯基膦基)丙烷(dppp)(110mg，0.26mmol)、三乙胺(2ml)和正丙胺(7ml)在二甲基甲酰胺(DMF，20ml)中的混合物在70℃加熱，并用一氧化碳鼓泡5.5小時。而后該反應混合物由乙酸乙酯稀釋，用10％鹽酸(HCl)溶液、10％碳酸氫鈉(NaHCO3)和鹽水洗滌。有機層用硫酸鈉(Na2SO4)干燥，濃縮，殘留物由硅膠色譜純化，石油醚∶乙酸乙酯(EtOAc)(4∶1)為洗脫液，得到純α，β-非飽和酰胺(化合物4)(1.04g，80％)。
m.p.136-138℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ0.92(t，3H，CH2CH3)，0.99(s，3H，CH3)，3.22-3.29(q，2H，NHCH2)，5.0(s，2H，CH2Ph)，5.63(brs，1H，NH)，6.30(brs，1H，16-CH)，6.70(d，1H，ArH)，6.74-6.78(dd，1H，ArH)，7.17(d，1H，ArH)，7.29-7.42(m，5H，CH2Ph).3-羥基-17-(N-丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物5)的合成將化合物4(0.9g，2.09mmol)溶解在氯仿(30ml)中，并在室溫下一次將三甲基硅碘化物(TMS-I，0.9ml，6.28mmol)加入到該反應混合物中，使該溶液在室溫下攪拌3小時。將甲醇(15ml)加入到該溶液中，以淬火反應，減壓蒸發甲醇。剩余的氯仿溶液用10％硫代硫酸鈉溶液洗滌，以中和碘化物，該溶液用硫酸鈉(Na2SO4)干燥。該溶液再蒸發，用色譜純化，使用梯度洗脫液，從純CH2Cl2到CH2Cl2中含10％乙酸乙酯，得到605mg化合物5，(85.1％)。 m.p.168.5-169℃；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.92(t，3H，CH2CH3)，0.99(s，3H，CH3)，3.23-3.29(q，2H，NHCH2)，4.66(s，1H，OH)，5.64(brs，1H，NH)，6.30(brs，1H，16-CH)，6.55(d，1H，ArH)，6.59-6.63(dd，1H，ArH)，7.12(d，1H，ArH).化合物6的合成在0℃攪拌下向在CH2Cl2(30ml)中含有400mg(0.93mmol)化合物5和2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(DBMP)(0.6g，2.79mmol)的溶液分步加入氨磺酰氯(1g，8.6mmol)。在室溫下使該溶液攪拌3.5小時。該溶液用水洗滌至到中性，用Na2SO4干燥，減壓蒸發。所得到的固體用色譜純化(CH2Cl2∶石油醚∶乙酸乙酯，2∶2∶1)，得到404mg化合物6(82.7％)。
m.p.185.3-186℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.83(t，3H，CH2CH3)，0.91(s，3H，CH3)，3.04(t，2H，NHCH2)，6.34(brs，1H，16-CH)，6.98(d，1H，ArH)，6.99-7.02(dd，1H，ArH)，7.32(d，1H，ArH)，7.74(brs，1H，NHCH2)，7.89(s，2H，NH2).Analysis calculated for C22H30N2O4SC，63.13；H，7.22；N.6.69.Found C，63.36；H，7.24；N，6.63.17β-(N-丙基氨基甲酰基)-雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(7)的合成在7ml乙醇中含有108mg化合物6的溶液在氫氣氛下同15mg鈀(10wt.％，在活性碳上，50％濕基)攪拌5小時。用硅藻土過濾除去催化劑，濾液濃縮。殘留物用硅膠色譜純化(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)，得到純化合物7(87mg，80％)。1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.59(s，3H，CH3)，0.84(t，3H，J＝7.3Hz，CH2CH3)，2.90(dt，2H，J＝5.8，7.3Hz，NHCH2)，3.07-3.20(m，1H，17-CH)，6.95(d，1H，J＝2.6Hz，ArH)，7.00(dd，1H，J＝2.6，8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.46(brt，1H，J＝5.8Hz，NHCH2)，7.83(brs，2H，NH2).
實施例2第二類化合物的制備參考數據對應于圖4，5和6給出的數字。17-(N-丁基氨基甲酰基)-3-(甲氧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(9a)的合成在0℃將草酰氯0.84ml加入到在25ml無水CH2Cl2中含750mg化合物8(描述在Tetrahedron Letters，26，1109-1112，1985)的溶液中。該溶液在室溫下攪拌5小時。在除去溶劑和草酰氯后，將20ml的無水四氫呋喃(THF)加入到該反應混合物中。在0℃將4ml該溶液加入到在2mlTHF含有0.19ml丁胺的溶液中，使該溶液攪拌2小時。蒸發溶劑后，加入5ml水。形成的沉淀過濾，用3ml異丙基醚研制，得到化合物9a(124mg，70％)。17-(N-丁基氨基甲酰基)-3-(羥基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(10a)的合成在-15℃，氮氣氛下向在2ml無水CH2Cl2中含119mg化合物9a的溶液加入0.64ml BBr3(1M，CH2Cl2溶液)。使該反應溶液在室溫下攪拌1.3小時，在0℃加入乙醇和水淬火。有機層分離，含水層用氯仿(CHCl3)萃取。合并有機層，用Na2SO4干燥，真空濃縮。殘留物用2.5ml EtOAc和2.5ml己烷研制，得到化合物10a(89mg，78％)。17-(N-丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11a)在0℃將氫化鈉(20mg)加入到在2ml無水DMF含73mg化合物10a的溶液中。使該溶液攪拌25分鐘，一次加入126mg氯代磺酰胺。而后使該溶液在室溫下攪拌2小時。向該反應混合物加入冰和飽和碳酸氫鈉溶液。形成的沉淀過濾，用水洗滌。殘留物用硅膠色譜純化(CHCl3∶甲醇，50∶1)，得到化合物11a(85mg，96％)。
FAB-MS m/z 433(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.88(t，3H，J＝7.5Hz，CH2CH3)，0.91(s，3H，CH3)，3.08(dt，2H，J＝5.6，6.6Hz，NHCH2)，6.34(s，1H，16-CH)，637(s，1H，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.6，8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.71(t，1H，J＝5.6Hz，NHCH2)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-戊基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11b)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11b。 FAB-MS m/z 447(M＋H)+；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.87(t，3H，J＝6.7Hz，CH2CH3)，0.91(s，3H，CH3)，3.07(dt，2H，J＝5.8，6.6Hz，NHCH2)，6.34(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.71(t，1H，J＝5.8Hz，NHCH2)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-己基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11c)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11c。
FAB-MS m/z 461(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.86(t，3H，CH2CH3)，0.91(s，3H，CH3)，3.07(dt，2H，NHCH2)，6.34(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.01(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.71(brt，1H，NHCH2)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-異丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11d)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11d。FAB-MS m/z 433(M＋H)+；1H NMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.85(d，6H，J＝6.9Hz，CH(CH3)2)，0.92(s，3H，CH3)，1.73(m，1H，CH(CH3)2)，2.78-3.00(m，2H，NHCH2)，6.36(s，1H，16-CH)，6.97(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.74(t，1H，J＝6.3Hz，NHCH2)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-叔丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11e)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11e。
FAB-MS m/z 433(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.92(s，3H，CH3)，1.29(s，9H，C(CH3)3)，6.30(s，1H，16-CH)，6.97(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(m，1H，ArH)，7.03(s，1H，NHC(CH3)3)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.89(s，2H，NH2).17-(N-甲基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11f)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11f。
FAB-MS m/z 391(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.91(s，3H，CH3)，2.62(d，3H，J＝4.6Hz，NHCH3)，6.35(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.69(d，1H，J＝4.6Hz，NHCH3)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-乙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11g)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11g。
FAB-MS m/z 405(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.91(s，3H，CH3)，1.03(t，3H，J＝7.1Hz，CH2CH3)，3.12(m，2H，CH2CH3)，6.36(s，1H，16-CH)，6.97(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.75(t，1H，J＝5.7Hz，NHCH2)，7.89(s，2H，NH2).17-(N-異丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11h)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11h。
FAB-MS m/z 419(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.91(s，3H，CH3)，1.072(d，3H，J＝5.6Hz，CH(CH3)2)，1.074(d，3H，J＝6.6Hz，CH(CH3)2)，3.93(m，1H，CH(CH3)2)，6.36(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.01(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.52(m，1H，NHCH)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-仲丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11i)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11i。 FAB-MS m/z 433(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.82(t，3H，J＝7.5Hz，CH2CH3)，0.92(s，3H，CH3)，1.04(d，3H.J＝6.6Hz，CHCH3)，3.75(m，1H，CHCH3)，6.34(s，1H，16-CH)，6.98(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.44(m，1H，NHCH)，7.88(s，2H，NH2).17-(N-叔戊基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11j)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11j。 FAB-MS m/z 447(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.76(t，3H，J＝7.4Hz，CH2CH3)，0.92(s，3H，CH3)，1.22(s，3H，C(CH3)2)，1.23(s，3H，C(CH3)2)，6.29(s，1H，16-CH)，6.85(m，1H，NH)，6.98(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.87(s，2H，NH2).17-(N-異戊基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11k)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11k。
FAB-MS m/z 447(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.88(d，6H，J＝6.6Hz，CH(CH3)2)，0.91(s，3H，CH3)，3.10(m，2H，NHCH2)，6.33(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.01(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.69(t，1H，J＝5.6Hz，NHCH2)，7.88(s，2H，NH2).17-(N，N-二乙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11l)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11l。
TOF-MS m/z 433(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.99(s，3H，CH3)，1.05(t，6H，J＝6.9Hz，CH2CH3)，3.20-3.48(m，4H，CH2CH3)，5.76-5.82(m，1H，16-CH)，6.96(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.31(d，1H，J＝8.6 Hz，ArH)，7.84(brs，2H，NH2).17-(N-甲基-N-丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11m)按照合成氨基磺酸酯11a所描述的類似方法，從化合物8制備化合物11m。 TOF-MS m/z 433(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.81(t，3H，J＝7.6Hz，CH2CH3)，0.99(s，3H，-CH3)，2.74-3.04(m，3H，NCH3)，3.20-3.40(m，2H，NCH2)，5.81(brs，1H，16-CH)，6.96(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.00(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.31(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.84(brs，2H，NH2).17-(N-乙氧基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11n)按照圖4給出的四步，化合物11n由化合物8a制備，8a由雌酮乙酸酯按照已知的方法制備(例如，TetrahedronLetters，26，1109-1112，1985)。 TOF-MSm/z421(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.92(s，3H，CH3)，1.15(t，3H，J＝6.9Hz，CH2CH3)，3.82(q，2H，J＝7.2Hz，CH2CH3)，6.29(s，1H，16-CH)，6.98(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.88(brs，2H，NH2)，10.93(s，1H，CONH).17-氨基甲酰基雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11o)化合物11o按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。化合物11o由化合物12制備。
EI-MS m/z 376M+；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.88(s，3H，CH3)，6.44(brs，1H，16-CH)，6.74(brs，2H，CONH2)，6.97(s，1H，ArH)，7.01(d，1H，J＝9Hz，ArH)，7.32(d，1H，J＝9Hz，ArH)，7.89(s，2H，SO2NH2).17-(N，N-二甲基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11p)化合物11p按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。化合物11p由化合物12制備。
EI-MS m/z404M+；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.98(s，3H，CH3)，2.93(brs，6H，N(CH3)2)，5.86(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝9Hz，ArH)，7.31(d，1H，J＝9Hz，ArH)，7.89(s，2H，SO2NH2).17-(N-甲基-N-甲氧基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11t)化合物11t按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。化合物11t由化合物12制備。1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.80(s，3H，CH3)，2.98(s，3H，NCH3)，3.40(s，3H，OCH3)，6.10(s，1H，16-CH)，6.95(s，1H，ArH)，7.15(dd，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.30(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.95(s，2H，NH2).17-(N，N-二正丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11q)化合物16q由化合物15通過羰基插入酰胺化制備；化合物11q按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。
EI-MS m/z 460 M+；1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.90(t，6H，CH2CH3)，1.09(s，3H，CH3)，3.30-3.45(m，4H，NCH2)，5.85(s，1H，16-CH)，6.97(s，1H，ArH)，7.02(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.36(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.95(s，2H，SO2NH2).17-(N，N-二異丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11r)化合物16r由化合物15通過羰基插入酰胺化制備；化合物16r按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。
EI-MS m/z 460 M+；1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.90(s，3H，CH3)，1.30(brs，12H，CH(CH3)2)，3.90(m，2H，CH(CH3)2)，5.45(s，1H，16-CH)，6.75(s，1H，ArH)，6.85(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.10(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.70(s，2H，SO2NH2).17-(N-乙基-N-異丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯的合成(11s)化合物16s由化合物15通過羰基插入酰胺化制備；化合物16s按照11a類似的方法合成，所不同的是用TMS-1代替BBr3。
EI-MS m/z 446 M+；1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ1.20(s，3H，CH3)，3.40(m，2H，CH2CH3)，4.45(brs，1H，CH(CH3)2)，5.90(s，1H，16-CH)，7.15(s，1H，ArH)，7.30(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.50(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，8.05(s，2H，SO2NH2).
實施例3第三類化合物的制備參考數據對應于圖7。3-芐氧基-17-(丙基羧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物18)的合成將三氟甲磺酸酯(化合物15)(1.1g，2.37mmol)、乙酸鈀(II)(45mg，0.20mmol)、1，3-雙(二苯基膦基)丙烷(dppp)(66mg，0.16mmol)和正丙醇(8ml)在二甲基甲酰胺(DMF，10ml)中的混合物在60℃加熱，并用一氧化碳鼓泡5.5小時。而后該反應混合物由乙酸乙酯稀釋，用水洗滌。有機層用硫酸鈉(Na2SO4)干燥，濃縮，殘留物由硅膠色譜純化，二氯甲烷(CH2Cl2)為洗脫液，得到純α，β-非飽和酯(化合物18)(875mg，89.1％)。
m.p.84-85℃；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ0.97(s，3H，CH3)，1.00(t，3H，J＝7.5Hz，CH3)，4.13(t，2H，J＝6.6Hz，OCH2)，5.05(s，2H，CH2PH)，6.7-7.4(m，9H，16-H and ArH).3-羥基-17-(丙基羧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物19)的合成將化合物18(780mg，1.81mmol)溶解在CH2Cl2(16ml)中，并在室溫下一次將三甲基硅碘化物(TMS-I，0.9ml，6.28mmol)加入到該反應混合物中，使該溶液在室溫下攪拌15分鐘。將水加入到該溶液中，使該混合物攪拌30分鐘。該混合物用CH2Cl2萃取，有機層分離，用10％硫代硫酸鈉溶液洗滌，以中和碘化物，該溶液用硫酸鈉(Na2SO4)干燥。該溶液再蒸發，用硅膠色譜純化，洗脫液為二氯甲烷(CH2Cl2)∶乙酸乙酯(EtOAc)(4∶1)，得到化合物19(590mg，95.7％)m.p.139.7-140.7℃。17-(正丙基羧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯(化合物20a)的合成在0℃攪拌下向在CH2Cl2(30ml)中含有250mg(0.73mmol)化合物19和2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(DBMP)(0.6g，3.23mmol)的溶液分步加入氨磺酰氯(1g，8.6mmol)。在室溫下使該溶液攪拌3.5小時。該溶液用水洗滌至到中性，用Na2SO4干燥，減壓蒸發。所得到的固體用色譜純化(CH2Cl2/EtOAc，4∶1)，得到293mg化合物20(95％)。
m.p.113.9-115.2℃；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ0.89(s，3H，CH3)，0.92(t，3H，J＝7.5Hz，CH3)，4.04(t，2H，J＝6.3Hz，OCH2)，6.78(brs，1H，16-CH)，6.98(d，1H，J＝1.8Hz，ArH)，7.02(dd，1H，J＝1.8，8.4Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.91(s，2H，NH2).Analysis calculated forC22H29NO5SC，62.98；H，6.97；N，3.34.Found C，62.86；H，6.90；N，3.32.17-(乙基羧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基-氨基磺酸酯(化合物20b)的合成化合物20b按化合物20a的類似方法合成。
1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.95(s，3H，18-CH3)，1.20(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)，4.10(q，2H，J＝7.2Hz，CH2)，3.70(s，3H，CH3)，6.70(s，1H，16-CH)，6.92(s，1H，ArH)，6.98(dd，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.30(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.82(s，2H，NH2).17-(甲基羧基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基-氨基磺酸酯(化合物20c)的合成化合物20c按化合物20a的類似方法合成。
1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.92(s，3H，CH3)，3.70(s，3H，CH3)，6.80(s，1H，16-CH)，6.98(s，1H，ArH)，7.0(dd，1H，J＝1.8，8.4Hz，ArH)，7.35(d，1H，J＝8.4Hz，ArH)，7.90(s，2H，NH2).
實施例4第二類化合物的制備參考數據對應于圖11。17β-(N-異丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29d)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11d制備化合物29d。 TOF-MS m/z 435(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.60(s，3H，CH3)，0.84(d，6H，J＝6.9Hz，CH(CH3)2)，2.60-3.16(m，2H，NHCH2)，6.95(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.00(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.34(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.49(brt，1H，J＝5.6 Hz，NHCH2)7.84(brs，2H，NH2).17β-(N-叔丁基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29e)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11e制備化合物29e。
FAB-MS m/z 435(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.59(s，3H，CH3)，1.26(s，9H，C(CH3)3)，6.89(s，1H，NH)，6.96(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.34(d，1H，J＝8.6Hz.ArH)，7.87(s，2H，NH2).17β-(N-甲基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29f)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11f制備化合物29f。FAB-MS m/z 393(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.60(s，3H，CH3)，2.59(d，3H，J＝3.6Hz，NHCH3)，6.96(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.01(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.34(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.29(m，1H，NHCH3)，7.87(s，2H，NH2).17β-(N-乙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29g)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11g制備化合物29g。
FAB-MS m/z 407(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.60(s，3H，CH3)，1.01(t，3H，J＝7.3Hz，CH2CH3)，3.02(m，1H，CH2CH3)，3.16(m，1H，CH2CH3)，6.96(d，1H，J＝2.0Hz，ArH)，7.01(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.34(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.47(t，1H，J＝5.6Hz，NHCH2)，7.87(s，2H，NH2).17β-(N-異丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29h)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11h制備化合物29h。
TOF-MS m/z 421(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.58(s，3H，CH3)，1.00-1.10(m，6H，CH(CH3)2)，3.38-3.50(m，1H，CH(CH3)2)，6.95(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.00(dd，1H，J＝2.3，8.6Hz，ArH)，7.27(d，1H，J＝7.9Hz，NHCH)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz，ArH).7.85(brs，2H，NH2).17β-(N-甲基-N-丙基-氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物29m)按照合成化合物7所描述的類似方法，從化合物11m制備化合物29m。
TOF-MS m/z 435(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.60-0.68(m，3H，CH3)，0.76-0.88(m，3H，CH2CH3)，2.70-3.70(m，5H，N(CH3)CH2)，6.95(d，1H，J＝2.6Hz，ArH)，7.00(dd，1H，J＝2.6，8.6Hz，ArH)，7.32(d，1H，J＝8.6Hz，ArH).7.83(brs，2H，NH2).
實施例5第十類化合物的制備參考數據對應于圖9。17-(N-正丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-[3，2，e]-1’2’3’-噁噻嗪-2，2，-二氧化物的合成(化合物22)在0℃將氫化鈉(0.115g，5mmol)加入到化合物21(0.37g，1.0mmol)在DMF(10ml)的溶液中。使該溶液攪拌20分鐘，加入氯代磺酰胺(0.73g，5mmol)。而后使該溶液攪拌6小時。將該反應混合物注入到冰冷卻的飽和NH4Cl溶液，用EtOAc萃取。有機層分離，用水、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)。減壓蒸發溶劑，殘留物用硅膠色譜純化(CHCl3∶EtOAc，15∶1)。
FAB-MSm/z 428(M＋H)+；NMR(250 MHz，DMSO-d6)δ0.65(t，3H，CH2CH3)，0.70(s，3H，CH3)，6.15(s，1H，16-CH)，7.01(s，1H，ArH)，7.55(m，1H，NH)，7.70(s，1H，ArH)，8.90(s，1H-CH＝N-).17-(N-正丙基氨基甲酰基)雌-1，3，5(10)，16-四烯-[3，2，e]-3’4’-二氫-1’2’3’-噁噻嗪-2，2’-二氧化物的合成(化合物23)在0℃向化合物22(0.428g，1mmol)的甲醇(4ml)溶液加入NaBH4(0.037g，0.96mmol)。使該反應物在0℃攪拌1小時，將該混合物注入到飽和NH4Cl溶液，用EtOAc萃取。有機層分離，用水、鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)。減壓蒸發溶劑，殘留物用硅膠色譜純化(EtOAc∶Pet醚，1∶1)。
FAB-MS m/z 430(M＋H)+；1HNMR(250MHz，DMSO-d6)δ0.65(t，3H，CH2CH3)，0.75(s，3H，CH3)，4.30(s，2H，CH2NHSO2)，6.20(s，1H，16-CH)，6.55(s，1H，ArH)，7.05(s，1H，ArH)，7.60(m，1H，amide NH)，8.25(m，1H，CH2NHSO2).
實施例6第六類化合物的制備參考數據對應于圖12。17β-(丁酰基氨基)雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的合成(化合物30)化合物30按照Li，等人提出的方法(Steroids，63425-32(1998))由化合物24分三步(酰胺化、脫保護和氨磺酰化)制備。
FAB-MS m/z 421(M＋H)+；1HNMR(270MHz，DMSO-d6)δ0.65(s，3H，CH3)，0.86(t，3H，J＝7.6Hz，CH2CH3)，2.07(m，2H，COCH2)，3.81(m，1H，17-CH)，6.96(d，1H，J＝2.3Hz，ArH)，7.00(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.32(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.48(d，1H，J＝8.9Hz，NHCO)，7.87(s，2H，NH2).
實施例7此實施例應用體外轉化試驗方法，對按照上述方法制備化合物進行了抑制硫酸酯酶的生物活性試驗，具體試驗化合物如下表2所示。正如本領域熟練技術人員可以理解的，本試驗是以對3H-雌酮硫酸酯通過雌酮硫酸酯酶的作用轉化為3H-雌酮為基礎的。酶試驗的最后體積是0.15ml[6.7-3H]雌酮硫酸酯(最后濃度3.3nmol/L；300,000dpm/管)；將各種濃度DMSO溶液的抑制劑和重組體的人雌酮硫酸酯酶(33ng/管)的磷酸鹽緩沖溶液加入1.5ml微型管，其中含有0.25M蔗糖和0.04M煙酰胺，pH為7。重組體的人雌酮硫酸酯酶可由ChineseHamster Ovary(CHO)細胞中部分純化，在該細胞中人的雌酮硫酸酯酶cDNA被轉染。該試驗由加入基質的雌酮硫酸酯開始。于37℃孵化60分鐘后，加入0.5ml甲苯使試驗停止。同時孵化的對照樣品沒有抑制劑。空白樣品在沒有雌酮硫酸酯酶的情況下孵化。停止反應的樣品渦旋攪拌30秒，離心(9,000rpm，5分鐘)。從每個停止反應的樣品中得到250微升的甲苯，測定生成產物的數量。將含有抑制劑的樣品所生成的產物與同時進行反應的對照樣品(沒有抑制劑)進行比較，可得出對照樣品的百分抑制率，該百分抑制率等于 對每種化合物在一定的濃度范圍內(0.025-2.5nM)進行試驗，以測定劑量-響應曲線，并計算IC50值。
在各個試驗中，每個濃度進行三次重復試驗。在體外轉化試驗中，兩種化合物對雌酮硫酸酯酶均顯示出劑量依賴抑制活性。IC50值如表2所示，IC50值表示在本試驗中產成50％抑制時的濃度。通過對對照百分數和濃度的關系進行線性回歸分析(log10)可得到IC50值，得到的方程式用于測定得到50％抑制時的濃度。
表2
實施例8以實施例6描述的方法對化合物7、29d、29h和29m進行試驗，結果列于下表3。
表3 為了說明本發明的目的，上文描述了本發明的具體實施方案，很顯然，對本領域熟練技術人員而言，在不脫離本發明權利要求書所定義的范圍內，本發明詳細描述的各種變種都是可以實現的。
權利要求
1.下式(2)化合物 其中R1和R2各自獨立地選自氫和具有1-6個碳原子的低級烷基；R3選自下述基團 R4和R5各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團，但是當R4和R5之一是氫時，另一個不是具有4-14個碳原子的直鏈烷基基團；R6選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R7選自-N(R12)(R13)、-OR14、氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，R12和R13各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團，以及R14選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；但是當R7為-N(R12)(R13)且R12或R13之一為氫時另一個不是具有4-14個碳原子的直鏈烷基，R8選E自氫和具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R9選自具有1-15個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團、CO(CH2)mCH3和COR10；R10是具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，但是當烷基是C1或C2烷基時，所述的烷基不是支鏈的；m是0-2；R11是具有3-14個碳原子的支鏈烷基基團；和X和Y都是碳原子，以及X和Y之間的鍵是單鍵或是雙鍵，但是當R3是-N(R8)(R9)時，X和Y之間是單鍵的情況除外。
2.權利要求1的化合物，其中R1和R2都是氫。
3.權利要求2的化合物，其中R3是和m是2。
4.權利要求2的化合物，其中X和Y之間是雙鍵，R3是 以及R4選自H、甲基和乙基，和R5選自氫、甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、叔丁基、仲丁基、異戊基、己基和乙氧基。
5.權利要求2的化合物，其中R3是 R4是氫和R5是4-8個碳原子的烷基鏈。
6.權利要求2的化合物，其中R3是 R4是具有1-5個碳原子的烷基，和R5是1-6個碳原子的烷基。
7.權利要求2的化合物，其中X和Y之間是雙鍵，R3是 和R4和R5兩者都是甲基，都是丙基，或都是異丙基。
8.權利要求2的化合物，其中X和Y之間是單鍵，R3是 和R4選自H和甲基，R5選自甲基、乙基、丙基、異丙基、異丁基和叔丁基。
9.權利要求2的化合物，其中R3是-C(O)OR6，和R6是具有1-8個碳原子的烷基。
10.權利要求9的化合物，其中R6是CH2CH3。
11.權利要求2的化合物，其中R3是-C(O)OR7，和R7是具有1-8個碳原子的烷基。
12.權利要求11的化合物，其中R7是丙基。
13.權利要求2的化合物，其中R3是 和R4是H，和R5是具有3-14個碳原子的支鏈烷基。
14.權利要求13的化合物，其中R5是具有3-8個碳原子的支鏈烷基。
15.權利要求14的化合物，其中R5是異丙基。
16.權利要求1的化合物，其中R3是-N(R8)(R9)，R8是氫和R9是具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷酰基。
17.權利要求16的化合物，其中R9是COCH2CH2CH3。
18.下式(3)的化合物 其中R3選自下述基團 R4和R5各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團；R6選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R7選自-N(R12)(R13)、-OR14、氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，R12和R13各自獨立地選自氫、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基基團，以及R14選自氫和具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R8選自氫和具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團；R9選自具有1-15個碳原子的直鏈或支鏈的鏈烷酰基、具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團、CO(CH2)mCH3和COR10；R10是具有1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，但是當烷基是C1或C2烷基時，所述的烷基不是支鏈的；m是0-2；R11是具有3-14個碳原子的支鏈烷基基團；X和Y都是碳原子，以及X和Y之間的鍵是單鍵或是雙鍵，但是當R3是-N(R8)(R9)時，X和Y之間是單鍵的情況除外；和K是氮和L是碳，以及K和L之間的鍵是單鍵或是雙鍵。
19.權利要求18的化合物，其中R1和R2都是氫。
20.權利要求19的化合物，其中R3是 和R4是H和R5是3-14個碳原子的支鏈烷基。
21.治療患者的雌激素依賴型疾病的方法，該方法包括給所述的患者施用有效量的權利要求1-20任意一項的化合物。
22.權利要求21的方法，其中所述的化合物包含于適當的藥用載體之中。
23.權利要求22的方法，其中所述的適當藥用載體選自生理鹽水和5％葡萄糖。
24.權利要求21的方法，其中所述的施用是指口服。
25.權利要求21的方法，其中所述的有效量是治療有效量。
26.權利要求21的方法，其中所述的有效量是預防有效量。
全文摘要
本發明公開了新的用于治療雌激素依賴型疾病的硫酸酯酶抑制劑化合物,這些化合物提出含有在其C17上被取代的類固醇核。本發明還公開了這些化合物的制備方法,以及它們在給患者進行治療和/或預防性處理上的應用。
文檔編號A61K31/565GK1340056SQ00803108
公開日2002年3月13日 申請日期2000年1月24日 優先權日1999年1月25日
發明者李沛佳, 秋永士朗, 村形力 申請人:霍利戈斯特杜肯大學, 協和發酵工業株式會社