含有蘆薈的藥用組合物,其制備方法及其應用的制作方法

專利名稱：含有蘆薈的藥用組合物,其制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及含有蘆薈的藥用組合物，其制備方法及其應用。
蘆薈是我國中醫的傳統藥材，最早記載于《神農本草》，歷代本草，如《本草疏經》、《本草綱目》、《開寶本草》、《本草圖經》等對其藥性均有精辟的論述，參見“中醫大詞典”(上海科技出版社)1996年出版1076，“中華藥材學”(中國醫藥科技出版社)1996版ISBN 7-507-1145-1，“中華本草”(上海科技出版社)上冊第一版1998:2013-2019。目前，各先進國家相繼對蘆薈進行了廣泛的研究和開放應用。經分析鑒定，蘆薈含有75種以上的化學物質，分為7大類(a)蒽醌類化合物，主要是蘆薈大黃素甙(Aloctin A)和異蘆薈大黃素甙(Aloctin B)等。(b)脂肪酸。(c)四種植物刺激素。(d)16種氨基酸。(e)9種維生素，以維生素E的含量最高。(f)15種微量元素。(g)可溶性糖和粘性雜多糖。(參見T.Shida等，1985:Effectof Aloe extract on Penipheral Phagocytos is in adult bronchial asthma,Planta Medica.3:273-275)、Miguef Rb等在”Comparative evaluation ofaloe vera in the management of burn Wornds in guinea,Pigs.PlastPeconstr Surg.1998:81(3):386一文里揭示這些細胞代謝所必需的物質外用于創面可直接營養上皮細胞，加速愈合速度。蘆薈也有增強機體免疫功能；抗菌抗炎作用；和促進創面愈合作用。
P.Pelavean等發現蘆薈對網狀內皮系統地吞噬細胞有刺激作用(PlantaMed.40(1):49,1980)。J.Y.Krossar等證實蘆薈能增強小鼠對單核細胞增多性的李司忒氏菌感染的抵抗能力(J.Y.Krossar等，Arch.Inst.Pastcur Madagascar,48(1)11,1981)。日本學者也證實蘆薈對吞噬細胞和人體中性白細胞有刺激作用(Maruho Co.Ltd.Jpn.Kokas,Tokkyo KohoJP59,78121,1982)。實驗證明蘆薈有抗大腸桿菌、綠膿桿菌、須發蘚菌等細菌的活性，參見M.Soeda等，Nippon Suikingaku Zassh,21:609,1996,K.Fujita等，antimicrob.Agents Chemother,14:132 1978。Bouchey等在“Chemical studies of aloe vera juice,第Ⅱ部分QJDrugRes.,1969:9:1445”一文里揭示蘆薈能促進燒傷創面愈合。W.D.Winters在“Economic Botany”35(1):9,1981一文里報道蘆薈大黃素甙(Aloctin A)中的致有絲分裂活性可使白細胞增值，從而促進壞死細胞脫落，對創傷有促進愈合作用。N.A.Aryayer等在國外醫學，中醫中藥分冊，(5):40,1981提出應用蘆薈治療營養性潰瘍，3-5天內就減少潰瘍滲出液中的微生物菌叢，增加吞噬作用，出現粉紅色肉芽，上皮細胞復蓋了創面。1993年美國德克薩斯大學醫學分校外科系選用蘆薈與其它各種抗血栓素藥物對照，對燒傷、凍傷、電擊傷等皮膚損傷作活體分析。結果表明，蘆薈不僅是血栓素A2(TxA2)的抑制劑，并能減少各種損傷中發生的組織丟失(p=0.001)，蘆薈有逆轉組織壞死的功效，參見Excepta Maclsec 30 1993,83(7):326。
但上述的研究僅為實驗室規模，且都只涉及蘆薈單獨使用的情況，其穩定性和療效均不盡如人意。本技術領域急需含有蘆薈的新穎的藥用組合物，以有效地治療燒傷創面和消化性潰瘍等疾病。
本發明的一個目的是提供新穎的、含有蘆薈的藥用組合物。
本發明的再一個目的是提供所述藥用組合物的制備方法。
本發明另一個目的是提供所述藥用組合物在制備治療創傷、消化性潰瘍等疾病的藥物中的應用。
本發明的目的是通過下列構思來實施的一種藥用組合物，它包含0.1-2重量％蘆薈干粉，0.0002-0.2重量％生物酶及余量的賦形劑。
這樣制備所述的蘆薈干粉取上述制得的滅活的蘆薈膠汁液，在惰性氣體氣流下分別過5-100KD分子膜；
用無菌純水分別溶出截留物，得到5000-50000分子量的蘆薈膠汁液；
分別在滅活的蘆薈膠汁液和蘆薈分子量膠汁液中加膨松劑，再分別進行凍干，得到蘆薈膠質干粉和蘆薈不同分子量汁液的干粉。
所述的生物酶選自胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、膠原蛋白酶。
所述的賦形劑由本技術領域的人員根據第二種藥用組合物所選取的劑型，按常規來選擇。在一個優選的實施方案里，所述的藥用組合物呈脫水油膏劑形式，所述的賦形劑可為油狀烴類或動植物油類、固體石蠟。羊毛脂，凡士林等烴類物。
本發明中使用的蘆薈優選的是美國引進的庫拉索蘆薈育種(CurasaoAloe)。
本發明的藥用組合物可用于制備治療皮膚創傷、燒傷、輻射傷和皮膚潰瘍等病癥的藥物，特別適合用于制備治療深Ⅱ度燒傷創面的藥物，所述的藥物對創面無刺激，疼痛較少，能清潔創面，起到保護與促進創面愈合的作用。
本發明的一個實施方案是所述的藥用組合物為脫水油膏形式，可通過下列步驟制備
ⅰ)稱取0-50重量份數油狀烴類或動植物油類放入勻質器中；
ⅱ)取0.1-2重量份數蘆薈干粉和0.0002-0.2重量份數生物酶干粉倒入ⅰ)的勻質器中勻質；
ⅲ)取50-100重量份數烴類物(如固體石蠟、羊毛脂、凡士林)，熔勻后冷卻，在攪拌下將ⅱ)和ⅰ)的已勻質的液狀物倒入ⅱ)得到的勻質物，繼續攪拌成半固體。
下面將結合具體實施例對本發明作進一步詳盡的闡述。
原料制備實施例1
稱取5公斤庫拉索蘆薈葉子，清潔表面，洗去污膩臟物。用1.5毫升/升水濃度的“獅王媽媽”(上海家化有限公司生產)消毒蘆薈葉。不銹鋼剝除蘆薈葉外皮和損壞部分，皮重占45重量％，得到占總量55重量％的蘆薈膠質體。將所的的膠質體用無菌純水浸洗，以漂洗去大量蒽醌類黃色液體。將所得的脫黃色膠質體粉碎，過濾。用74毫米尼龍布在640mmHg壓力下過濾，稱取大部分纖維和結締組織，得到占70重量％的粘稠無色的膠汁液，殘渣占25％，粘液流失4.5％。
原料制備實施例2
取原料實施例1制備的膠汁液100毫升，在0.5kg氮氣壓力下過50kD分子膜，流速1毫升/分鐘，壓出液中用純水補足100毫升提及。然后再用氮氣壓力0.8kg，過5kD分子膜，流速10毫升/小時，截留物定容劑100毫升，得到100毫升分子量為5000-50000kD的蘆薈膠汁液。
原料制備實施例3
取原料制備實施例1制得的膠汁液10千克，減壓、60℃下經薄膜濃縮10∶1。加入所取蘆薈膠汁液固定量50％的麥芽糊精。干燥條件進口溫度140℃，出口溫度80-90℃，空壓機壓力4.3kg/cm2，干燥粉為淺棕色。
實施例1
蘆薈-生物酶脫水油膏的制備
固體石蠟500克，加熱熔勻，稱原料制備實施例3制備的蘆薈粉5克，木瓜蛋白酶粉(Sigma生產)1克(2u/mg蛋白)，放入研缽中，加入少許麻油研勻，再用麻油定容到500毫升，勻質，在攪拌下將該麻油組分加入到熔化了的固體石蠟液中即可。
實施例2
取凡士林500克，加熱熔勻，稱原料制備實施例3制備的蘆薈粉7克，膠原蛋白酶(上海喬源生物制藥有限公司生產)50毫克(300u/mg蛋白)，放入研缽中，加入少許橄欖油研勻，再用橄欖油定容到70毫升，勻質，在攪拌下將該橄欖油組分加入到熔化了的凡士林液中即可。
實施例3
取原料實施例3制備的鮮蘆薈凍干粉6克，膠原酶(上海喬源生物制藥有限公司)50毫克(300u/mg蛋白)，加入熔勻后的凡士林至500克，攪拌后得到淡綠色油膏。
試驗1蘆薈脫水油膏的豚鼠皮膚過敏試驗
將豚鼠按體重性別隨機分為3組，每組10個(雌雄各半)。于給藥前24小時將豚鼠背部兩側毛剪去，去毛范圍每側約3×3平分厘米。第一組給予實施例3制備的樣品，第二組給予不含蘆薈干粉和生物酶的賦形劑，第三組給予陽性對照，所述的陽性對照是將2,4-二硝基氯苯用羊毛脂配制成1％的致敏濃度和1％的激發濃度。
致敏接觸取實施例3的樣品0.2克涂敷在動物背部左側脫毛區，用繃帶固定，持續6小時，用溫水去除受試物，于給藥后第7天和第14天，以同樣方式重復一次。賦形劑對照和陽性對照的方法同上。
激發接觸于末次給脫水油膏致敏后地4天，將脫水油膏0.2克涂敷在動物背部右側脫毛區，6小時后去除受試物，即刻觀察，然后于24、48和72小時再次觀察皮膚過敏反應情況。按下表皮膚過敏反應評分標準進行評分。賦形劑對照和陽性對照方法與受試組的方法相同。
皮膚過敏反應評分標準
皮膚反應 分值
紅斑形成
無紅斑0
輕度紅斑 1
中度紅斑 2
重度紅斑 3
水腫性紅斑4
水腫形成
無水腫0
輕度水腫 1
中度水腫 2
重度水腫 3
總分 7
致敏率分類
結果脫水油膏每只豚鼠皮膚過敏反應評分結果組別 動物編號 性別 不同時間(小時)皮膚反應分值
即刻 24 48 72
賦形劑1 雌0000
對照組2 雌0000
3 雌0000
4 雌0000
5 雄0000
6 雄0000
7 雄0000
8 雄0000
9 雄0000
10雄0000
實施例3 11雌0000
12雌0000
13雌0000
14雌0000
15雄0000
16雄0000
17雄0000
18雄0000
19雄0000
20雄0000
陽性對照 21雌2222
22雌1111
23雌1222
24雌1111
25雄2222
26雄2222
27雄2222
28雄2222
29雄2222
30雄2222
脫水油膏在豚鼠皮膚過敏反應評分結果脫水油膏對豚鼠皮膚的致敏率可見，脫水油膏對豚鼠皮膚過敏反應為陰性。
試驗2皮膚刺激試驗
取2.3-2.5kg的新西蘭雌性兔6只，分為2組，分別為完整皮膚組及破損皮膚組，每組3只，于給藥前24小時將動物背部脫毛。每個動物背部分為2區(每區面積為50平方厘米)，分別為受試物區及賦形劑對照區。將實施例2制備的藥物、賦形劑各1克分別涂于上述區域，每日1次，連續7天。于末次給藥后24小時涂抹部位的紅斑和水腫情況以及上述變化的恢復情況和時間。對每只動物試樣結果按表1進行刺激反應評分，并計算出平均分值按表2進行刺激強度評價。
皮膚刺激反應評分
刺激反應分值紅斑 無紅斑0
面前可見 1
中度紅斑 2
重度紅斑 3
紫紅色紅斑并有焦痂形成4
刺激反應 分值水腫 無水腫0
勉強可見 1
皮膚隆起輪廓清楚 2
水腫隆起約1mm并范圍擴大 4總分 8
皮膚刺激強度評價
強度 分值
無刺激性 ＜0.5
輕度刺激性 ＜3.0
中度刺激性 ＜6.0
重度刺激性 ＞6.0a．完整皮膚組b．破損皮膚組
注ER紅斑
ED水腫
c．皮膚刺激強度評價
刺激反應平均分值=0，為無刺激性
結論實施例2制各的藥物經家兔皮膚刺激試驗，結果無刺激性。
試驗3藥理試驗
a．燒傷創面模型的制備及分組
選250-300清潔級SD大鼠70只(上海必凱-西普爾動物有限公司)，實驗前一日8％硫化鈉溶液背部脫毛，在戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉下，恒溫恒亞75℃、9秒，在每只大鼠背部中線兩側各制作兩個直徑25毫米的深二度燒傷創面(經病理切片證實)，隨機分為兩組，燒傷對照組及試驗組，每組創面70個。
創面制備好后，先清洗創面，然后按實驗分組分別在創面上用藥，燒傷對照組創面給予賦形劑，試驗組創面給予實施例3的產品，用無菌紗布覆蓋后包扎固定，隔天換藥。于藥后1天、3天、5天、7天10天、14天、21天進行創面觀察并活檢取材作指標分析。每個時間點每組各取10個創面。另取10只大鼠正常皮膚活檢作為正常對照組。
b．檢測指標及方法
1、燒傷創面的一般情況觀察；
2、燒傷創面愈合情況對7天、10天、14天、21天的創面進行拍照攝影后用圖像積分方法對創面愈合情況作定量分析。
3、燒傷創面羥脯氨酸含量測定；采用氯氨T氧化法(參見許志勤、高蘭興，組織羥脯氨酸測定方法的改進。解放軍預防醫學雜志。1990:8:40-42)。
OHP含量(微克/毫克組織)=樣品管OD/標準管OD×10×稀釋倍數/3
4、創面細胞周期測定單細胞懸液用流式細包儀進行檢測。
5、創面病理學檢查活檢標準石蠟切片HE染色，光學顯微鏡形態學觀察分析。
c．結果
1、燒傷創面的一般情況觀察
試驗組創面傷后第5天開始出現壞死組織溶脫現象，創面較濕潤，壞死組織較易清除，創面毛細血管增生活躍，邊緣炎性反應不明顯。傷后第10天、第14天壞死組織絕大部分已溶脫，創面潔凈，有新生上皮形成。
對照組創面傷后第7天始有壞死組織溶脫發生，但創面較試驗組干燥。第10天、14天后壞死組織仍不能完全溶脫，形成一層痂蓋于創面，與基底粘連較緊。
2、燒傷創面愈合情況
試驗組愈合時間平均為21.3±1.2天；對照組為24.6±2.1天(P＜0.05)。試驗組傷后第7、10、14、21天的創面愈合率也較對照組大。(表1)
表1 燒傷創面愈合率的比較(％)組別 傷后時間(天)
7 10 1421試驗組 45.53±2.12** 56.37±2.11** 83.29±1.91** 98.87±1.89*對照組 30.24±1.5641.76±2.0160.58±2.57 80.35±1.64
試驗組與對照組相比**p＜0.05,**p＜0.01
3、燒傷創面羥脯氨酸含量變化
正常對照組羥脯氨酸含量為19.51±1.44(微克/毫克)。
從傷后第5天開始，試驗組與對照組羥脯氨酸含量較正常對照均有升高，至第10天達到峰值，隨后逐漸回復到正常水平。
在傷后第7、10、14天，試驗組創面OHP含量明顯高于對照組(表2)。表2 燒傷創面羥脯氨酸含量(微克/毫克)試驗組與對照組相比，*p＜0.05 **p＜0.014、創面G0/G1期細胞百分比在傷后第5、7、10、14天，試驗組G0/G1期細胞百分比低于對照組。(表3)試驗組與對照組相比，*p＜0.05 **p＜0.015、創面S期細胞百分比在傷后第5、7、10、14天，試驗組創面S期細胞百分比高于對照組。(表4)
試驗組與對照組相比，*p＜0.05 料p＜0.01
6、燒傷創面病理形態學分析
病理切片可見，試驗組與對照組傷后表皮層及大部分真皮層均壞死，傷后7天內組織生長不明顯，表皮細胞缺如，大量細胞變性壞死，胞漿濃縮，核固縮，真皮層有大量炎性細胞浸潤。膠原纖維變性壞死，排列紊亂。
試驗組于傷后第5天，痂皮開始脫落，表皮細胞自毛囊處開始生長，增殖分裂活躍，并形成多層及形態分化的表皮細胞層。傷后第7天創面已出現較多的不連續的上皮細胞覆蓋。真皮內成纖維細胞密度增高，周圍膠原成分增多。至傷后14天，成纖維細胞數量變化與試驗組相近，但新升膠原纖維排列紊亂，膠原之間的連接松散。
結論
實施例3產品可促進創面壞死組織的溶脫，減輕炎性反應；促進膠原合成和細胞的分裂增殖能力。因此，實施例3的產品加速了上皮化過程，促進深Ⅱ度創面愈合。
上面已結合具體實施例對本發明作了詳盡的闡述，這些實施例可供理解和闡述用。本發明的藥用化合物可用于治療燒傷、創傷等創面，具有對創面無刺激，減少疼痛，能清潔創面，對創面起到保護與促進愈合作用等優點。
權利要求
1．一種藥用組合物，它由0.1-2重量％蘆薈膠質液干粉，0.0002-0.2重量％生物酶及余量的賦形劑組成。
2．根據權利要求1所述的藥用組合物，其中所述的蘆薈膠質液干粉是這樣制備得到的
給蘆薈葉清潔并消毒；
剝除蘆薈葉外皮和損壞部分，得到蘆薈膠質體；
洗去蘆薈膠質體中的蒽醌類黃色液體；
使脫黃色膠質體粉碎，在減壓下用279-74毫米尼龍布過濾粉碎的蘆薈膠質體，除去大部分纖維和結締組織，得到蘆薈膠汁液；
在滅活的蘆薈膠質液中加入膨松劑，凍干得到蘆薈膠質液干粉。
3．根據權利要求2所述的藥用組合物，其中所述的蘆薈葉選自庫拉索蘆薈葉。
4．根據權利要求1所述的藥用組合物，其中蘆薈膠質液干粉為5000-50000分子量的蘆薈膠質液干粉。
5．根據權利要求4所述的藥用組合物，其中500-50000分子量的蘆薈膠質液干粉是這樣制備得到的
給蘆薈葉清潔并消毒；
剝除蘆薈葉外皮和損壞部分，得到蘆薈膠質體；
洗去蘆薈膠質體中的蒽醌類黃色液體；
使脫黃色膠質體粉碎，在減壓下用279-74毫米尼龍布過濾粉碎的蘆薈膠質體，除去大部分纖維和結締組織，得到蘆薈膠汁液；
在惰性氣體氣流下，把上述制得的滅活的蘆薈膠質液過5-100KD分子膜，用無菌水分別溶出截留物，得到5000-50000分子量的蘆薈膠質液；
在所得到的5000-50000分子量的蘆薈膠質液中加入膨松劑，凍干得到5000-50000分子量的蘆薈膠質液干粉。
6．根據權利要求1所述的藥用組合物，其中所述的生物酶為生物蛋白酶。
7．根據權利要求6所述的藥用組合物，其中所述的生物蛋白酶選自胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、膠原蛋白酶。
8．根據權利要求1所述的藥用組合物，它為脫水油膏形式。
9．一種制備如權利要求8所述的藥用組合物的方法，包括下列步驟
ⅰ)稱取0-50重量份數油狀烴類或動植物油類放入勻質器中；
ⅱ)取0.1-2重量份數蘆薈干粉和0.0002-0.2重量份數生物酶干粉倒入ⅰ)的勻質器中勻質；
ⅲ)取50-100重量份數烴類物，熔勻后冷卻，在攪拌下將ⅱ)和ⅰ)的已勻質的液狀物倒入ⅱ)得到的勻質物，繼續攪拌成半固體。
10．如權利要求1-8任一權利要求所述的藥用組合物在制備治療皮膚創傷、燒傷、輻射傷和皮膚潰瘍病癥的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及含有蘆薈的藥用組合物,所述的藥用組合物包含0.1—2重量%的蘆薈膠質液干粉,0.0002—0.2重量%生物酶,以及余量的賦形劑。本發明也涉及所述藥用組合物的制備方法。本發明進一步涉及所述的藥用組合物在制備治療皮膚創傷、燒傷、輻射傷和皮膚潰瘍等病癥的藥物的應用。
文檔編號A61K38/55GK1302661SQ00135379
公開日2001年7月11日 申請日期2000年12月11日 優先權日1999年12月9日
發明者曹亮 申請人:上海第二醫科大學附屬瑞金醫院