專利名稱：新穎的咔唑衍生物,其制備方法和含有它們的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新穎的12,13-(吡喃糖基)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑和12,13-(吡喃糖基)-呋喃并[3,4-c]吲哚并[2,3-a]咔唑化合物、它們的制備方法和含有它們的藥物組合物。
抗癌治療要求需要不斷開發(fā)新穎的細胞毒性試劑，目的在于得到活性更高和耐受性更好的藥物。本發(fā)明化合物例如具有抗腫瘤的性質，可用于癌癥的治療。
為了提高抗腫瘤的潛力，已經(jīng)對rebeccamycin或staurosporine結構進行了各種化學改性。例如可以提到專利說明書WO98/07433、WO99/02532和EP602597，它們要求保護rebeccamycin化合物，該化合物包含對分子糖苷部分和六環(huán)體系中存在的取代基所進行的結構改性。發(fā)表在《生物有機與醫(yī)藥化學》1998,6,1597-1604中的文章也描述了具有良好細胞毒活性的這類化合物。
除了本發(fā)明化合物是新穎的這一事實以外，它們還具有驚人的體外和體內(nèi)活性，并且優(yōu)于迄今所觀察到的活性。本申請人發(fā)現(xiàn)的化合物因此具有抗腫瘤性質，特別可用于癌癥的治療。
更確切地說，本發(fā)明涉及式(Ⅰ)化合物 其中●R1和R2可以是相同或不同的，彼此獨立地代表式U-Ⅴ基團，其中*U代表單鍵或直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，任選地被一個或多個相同或不同的選自鹵素和羥基的基團取代，和/或任選地含有一個或多個不飽和鍵，*V代表選自氫原子、鹵原子、氰基、硝基、疊氮基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、芳氧基、其中烷氧基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基、甲?；Ⅳ然?、氨基羰基、NRaRb、-C(O)-T1、-C(O)-NRa-T1、-NRa-C(O)-T1、-O-C(O)-T1、-C(O)-O-T1、-O-T2-NRaRb、-O-T2-ORa、-O-T2-CO2Ra、-NRa-T2-NRaRb、-NRa-T2-ORa、-NRa-T2-CO2Ra和-S(O)n-Ra基團的基團，其中→Ra和Rb可以是相同或不同的，各自代表選自氫原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基和其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基的基團，或者Ra+Rb與攜帶它們的氮原子共同構成具有5至7個環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)，任選地在環(huán)系內(nèi)含有一個選自氧和氮的第二雜原子，并且任選地被選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基氨基和其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二-(C1-C6)烷基氨基的基團取代。
→T1代表選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基和直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團，該鏈被選自-ORa、-NRaRb、-CO2Ra、-C(O)Ra和-C(O)NRaRb的基團取代，其中的Ra和Rb是如前文所定義的，→T2代表直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，→n代表0至2的整數(shù)，含0和2，●G代表氧原子或NR3基團，其中的R3代表選自氫原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、環(huán)烷基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的環(huán)烷基-(C1-C6)烷基、-ORa基團、-NRaRb基團、-O-T2-NRaRb基團、-NRa-T2-NRaRb基團、其中烷基部分是直鏈或支鏈的(C1-C6)羥基烷基氨基、其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二((C1-C6)羥基烷基)氨基、-C(O)-Ra基團、-NH-C(O)-Ra基團和直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團，該鏈被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵原子、氰基、硝基、-ORa、-NRaRb、-CO2Ra、-C(O)Ra、其中烷基部分是直鏈或支鏈的(C1-C6)羥基烷基氨基、其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二((C1-C6)羥基烷基)氨基和-C(O)-NHRa，基團Ra、Rb和T2是如前文所定義的，●X代表選自氫原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、巰基和直鏈或支鏈(C1-C6)烷硫基的基團，●Y代表氫原子，或者X和Y與攜帶它們的碳原子共同構成羰基，●X1代表選自氫原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、巰基和直鏈或支鏈(C1-C6)烷硫基的基團，●Y1代表氫原子，或者X1和Y1與攜帶它們的碳原子共同構成羰基，●R4和R5可以是相同或不同的，彼此獨立地代表選自氫原子、鹵原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、芳氧基、其中烷氧基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、芳基、氨基(本身任選地被一個或兩個相同或不同的基團取代，取代基選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基和其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基)、疊氮基、-N=NRa基團(其中Ra是如前文所定義的)、其中Rc代表直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(任選地被一個或多個基團取代，取代基選自鹵素、羥基、氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基氨基和其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二-(C1-C6)烷基氨基)的-O-C(O)-Rc基團、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基的基團，●R6代表式-U1-R4基團，其中U1代表單鍵或亞甲基，R4是如前文所定義的，●或者，在相鄰或不相鄰位置上的R4、R5和R6成對地與攜帶它們的碳原子構成具有3至6個環(huán)原子的環(huán)系，含有一個或兩個氧原子，不屬于該環(huán)系的剩余基團R4、R5或R6具有前文所給出的任意一種R4、R5或R6的定義，它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其前提條件是式(Ⅰ)化合物不是下列化合物-1,11-二氯-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5-酮，和-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-5,6,12,13-四氫-(7H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-7-酮，還應理解的是，-“環(huán)烷基”被理解為意指單環(huán)或二環(huán)基團，它是飽和的或不飽和的，但是沒有芳族特征，具有3至10個碳原子，任選地被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基和可選被一個或兩個直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代的氨基，-“雜環(huán)烷基”被理解為意指如上所定義的環(huán)烷基，在環(huán)系內(nèi)具有一個或兩個相同或不同的雜原子，選自氧、氮和硫，-“芳基”被理解為意指苯基、萘基、二氫化萘基、四氫化萘基、茚基或2,3-二氫化茚基，每個這些基團任選地被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基和可選被一個或兩個直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代的氨基。
在藥學上可接受的酸中，可以不加限制地提到鹽酸、氫溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、草酸、甲磺酸、樟腦酸等。
在藥學上可接受的堿中，可以不加限制地提到氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、叔丁胺等。
有利的是，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的基團G是NR3，其中R3是如式(Ⅰ)所定義的。
按照本發(fā)明的有利實施方式，優(yōu)選的化合物是其中X和Y與攜帶它們的碳原子共同構成羰基并且X1和Y1與攜帶它們的碳原子共同構成羰基的那些。
按照另一種有利的實施方式，優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式(Ⅰbis)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的。
優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的取代基R1和R2可以是相同或不同的，代表式U-Ⅴ基團，其中的U代表單鍵，Ⅴ代表選自鹵原子、氫原子、硝基、甲?；?、羥基和被羥基取代的直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團。
尤其有利的是，取代基R1和R2是相同的。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的取代基R3是氫原子、羥基和被選自NRaRb和ORa的基團取代的直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，其中的Ra和Rb是如式(Ⅰ)所定義的。
按照最后一種尤其有利的實施方式，優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式(Ⅰter)化合物 其中R1、R2、R3和R6是如式(Ⅰ)所定義的。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的化合物是-3,9-二甲?；?12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3-硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-9-硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-6-羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二-(羥甲基)-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二硝基-12,13-[1,2-(3,6-脫水-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二溴-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，和-6-二乙氨基乙基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮及其鹽酸鹽。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物的異構體和與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽構成本發(fā)明的整體。
本發(fā)明也涉及式(Ⅰ)化合物的制備方法，其特征在于使用式(Ⅱ)化合物作為原料 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的，將式(Ⅱ)化合物在堿性介質中用對甲苯磺酸處理，得到式(Ⅲ)化合物 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，將該式(Ⅲ)化合物與疊氮化鈉反應，主要得到式(Ⅰ/a)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，使該式(Ⅰ/a)化合物受到氫解條件，得到式(Ⅰ/b)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，將該式(Ⅰ/b)化合物用氫氧化鈉水溶液處理，然后用鹽酸處理，得到式(Ⅰ/c)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，使該式(Ⅰ/c)化合物受到式(Ⅳ)化合物的作用R3a-NH2(Ⅳ)其中R3a具有與R3相同的定義，但是氫原子除外，得到式(Ⅰ/d)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R3a、R4、R5和R6是如前文所定義的，所有式(Ⅰ/b)至(Ⅰ/d)化合物構成式(Ⅰ/e)化合物 其中G、X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的，按照本領域熟練技術人員熟知的常規(guī)有機合成條件，使該式(Ⅰ/e)化合物受到親電芳香加成反應或親核芳香加成反應，得到式(Ⅰ/f)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中G、X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，R1a和R2a分別具有與R1和R2相同的定義，但是R1a和R2a不能同時代表氫原子，式(Ⅰ/a)至(Ⅰ/f)化合物構成式(Ⅰ)化合物的整體，如果必要的話，按照常規(guī)的純化工藝進行純化，如果需要的話，可以按照常規(guī)的分離工藝分離為它們的不同異構體，其取代基R4、R5和R6按照糖化學領域中常用的有機合成方法進行調(diào)整，如果需要的話，用藥學上可接受的酸或堿將它們轉化為加成鹽。
式(Ⅱ)和(Ⅳ)化合物是商品化合物，或者可按照易為本領域熟練技術人員得到的常規(guī)有機合成方法得到。
式(Ⅰ)化合物尤其具有重要的抗腫瘤性質。它們對細胞系具有出色的體外細胞毒性，對細胞周期也有一定作用。該化合物的該特性使它們能夠在治療學上用作抗腫瘤劑。
本發(fā)明也涉及藥物組合物，包含至少一種式(Ⅰ)化合物、其旋光異構體或其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽作為活性成分，單獨或者與一種或多種惰性、非毒性、藥學上可接受的賦形劑或載體結合。
在根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物中，尤其可以提到適合于口服、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)、經(jīng)皮或透皮、鼻部、直腸、經(jīng)舌、眼部或呼吸給藥的那些，尤其是片劑或糖錠劑、舌下片、膠囊劑、明膠膠囊、栓劑、霜劑、軟膏劑、皮膚凝膠、可注射或可飲用的制劑、氣霧劑、滴眼劑或滴鼻劑等。
由于式(Ⅰ)化合物的藥理學特性，包含所述式(Ⅰ)化合物作為活性成分的藥物組合物因此尤其可用于癌癥的治療。
有用的劑量因患者的年齡與體重、給藥途徑、病癥的性質與嚴重性以及是否采取任何有關治療而異，劑量范圍從0.5mg至500mg，每天分一次或多次給藥。
下列實施例闡述本發(fā)明，而決非限制。所用原料是已知產(chǎn)物或者是按照已知操作制備的。
實施例中所述化合物的結構按照常用的分光光度工藝(紅外、核磁共振、質譜等)測定。
實施例1:1,11-二氯-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮步驟1:1,11-二氯-12-[4-O-甲基-2-O-甲苯磺酰基-β-D-吡喃葡萄糖基]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向1.7mmol rebeccamycin的200ml四氫呋喃溶液中加入1當量碳酸鉀和1當量甲苯磺酰氯。48小時回流和減壓濃縮后，殘余物經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯70/30)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點168-170℃步驟2;1,11-二氯-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.62mmol步驟1所得化合物的16ml二甲基甲酰胺溶液中加入10當量疊氮化鈉。在70℃下6小時后冷卻，反應混合物水解，用乙酸乙酯萃取。有機相然后洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/二氯甲烷10/90)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點296-298℃質譜(FAB+):m/z計算值=551.0650[M]+m/z實測值=551.0647[M]+實施例2:12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.855mmol實施例1化合物、0.57g5％Pd/C與0.57g甲酸銨在200ml甲醇中的混合物在室溫下攪拌48小時，然后經(jīng)硅藻土過濾。濾液減壓濃縮后，經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯40/60)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點284-286℃質譜(FAB+):m/z計算值=484.1508[M+H]+m/z實測值=484.1516[M+H]+實施例3:12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-二氫呋喃并[3,4-c]吲哚并[2,3-a]咔唑-5,7-二酮將0.414mmol實施例2化合物、420mg氫氧化鈉與70ml水的溶液回流3小時?；旌衔锶缓笙♂專?N鹽酸水溶液賦予其酸性，用乙酸乙酯萃取。有機相洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/環(huán)己烷70/30)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃質譜(FAB+):m/z計算值=485.1349[M+H]+m/z實測值=485.1333[M+H]+實施例4:6-甲基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.118mmol實施例3化合物和甲胺在14ml四氫呋喃中的2M溶液在70℃下攪拌16小時。冷卻后，反應混合物水解，導致沉淀的生成，將其用硅膠色譜法純化(乙酸乙酯/環(huán)己烷80/20)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃質譜(FAB+):m/z計算值=497.1587(M)+m/z實測值=497.1591(M)+實施例5:6-羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.207mmol實施例3化合物的5ml二甲基甲酰胺溶液中加入14.4mmol鹽酸羥胺和14.4mmol三乙胺。在70℃下23小時后，加入1N鹽酸水溶液、乙酸乙酯和四氫呋喃。有機相然后洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(四氫呋喃/甲醇95/5)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞260℃(分解)實施例6:3,9-二甲?；?12,13-[1,2-(3,6-二-O-乙酰基-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的0.207mmol實施例2化合物的2ml吡啶溶液中加入0.2ml乙酸酐。反應混合物然后在室溫下攪拌18小時。水解并用乙酸乙酯萃取后，有機相洗滌、干燥、過濾，然后蒸發(fā)。然后將所得殘余物稀釋在4ml二氯甲烷中，加入4.2mmol二氯甲基甲基醚。冷卻至0℃后，加入TiCl4在二氯甲烷中的4.2ml 1M溶液。反應混合物然后在室溫下攪拌24小時，然后水解，用乙酸乙酯萃取。有機相干燥、過濾，然后蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯1/1)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
紅外(KBr):VC=o=1690,1720和1755cm-1νNH,OH=3100-3600cm-1熔點＞200℃實施例7:3,9-二甲?；?12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.074mmol實施例6化合物的10ml四氫呋喃與5ml甲醇溶液中加入5ml28％氫氧化銨水溶液。在25℃下反應30小時后，混合物濃縮。將殘余物溶于二氯甲烷，用水洗滌。有機相蒸發(fā)，所得殘余物用丙酮洗滌，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1680,1710和1750cm-1νH,OH=3100-3650cm-1實施例8:3,9-二(羥甲基)-12,13-[1,2-(3,6-二-O-乙?；?4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.116mmol實施例6化合物、60ml甲醇與101mg阮內(nèi)鎳的溶液在25℃下氫化2天，然后加入0.591g阮內(nèi)鎳(水中50重量％)，保持氫化5天。反應混合物然后經(jīng)硅藻土過濾。濾液減壓濃縮后，經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/環(huán)己烷90/10)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞180℃(分解)紅外(KBr):VC=o=1720,1750cm-1νNH,OH=3150-3650cm-1實施例9:3,9-二(羥甲基)-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例7，使用實施例8化合物作為反應物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1710,1750cm-1νNH,OH=3100-3600cm-1實施例10:12,13-[1,2-(6-氯-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.447mmol實施例2化合物的2ml吡啶溶液中加入4當量PPh3和2當量CCl4。在25℃下攪拌3小時后，將反應混合物倒入1N鹽酸水溶液中，然后用乙酸乙酯萃取。有機相洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞280℃(分解)紅外(KBr):VC=o=1710,1750cm-1νNH,OH=3150-3600cm-1實施例11:12,13-[1,2-(3,6-脫水-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮該產(chǎn)物是在實施例10中進行的色譜法過程中分離到的。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1720,1750cm-1νNH,OH=3100-3600cm-1實施例12:12,13-[1,2-(6-疊氮基-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.1mmol實施例10化合物的1ml二甲基甲酰胺溶液和10當量疊氮化鈉在80℃下攪拌。48小時后，將反應混合物溶于乙酸乙酯，用水洗滌。有機相干燥、過濾并蒸發(fā)。經(jīng)硅膠色譜法(二氯甲烷/乙酸乙酯95/5)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞250℃(分解)紅外(KBr):VC=o=1700,1750cm-1νN=N=2100cm-1νNH,OH=3150-3600cm-1實施例13:3,9-二硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮在0℃下，向0.5mmol實施例2化合物的4.8ml吡啶溶液中加入10當量乙酸酐。在25℃下反應1天后，反應混合物水解，然后用乙酸乙酯萃取。有機相然后洗滌、干燥、過濾并蒸發(fā)。將所得殘余物稀釋在10ml四氫呋喃中，加入5.6ml發(fā)煙硝酸。在40℃下5天后，加入2.8ml發(fā)煙硝酸，混合物在40℃下保持30小時，然后水解。用乙酸乙酯萃取后，有機相洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。然后使殘余物進行實施例8所述過程，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1690,1740cm-1νNH,OH=3170-3640cm-1實施例14:3-和9-硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例13，使用濃硝酸作為試劑，并且在室溫下進行反應。色譜法能夠分離到3-硝基和9-硝基化合物的混合物(1.5/1)。
混合物的熔點293℃實施例15:3,9-二氨基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.094mmol實施例13化合物的13ml四氫呋喃與1.88mmolSnCl2溶液回流63小時。冷卻后，反應混合物水解，濾出所得沉淀。濾液調(diào)至pH10。用乙酸乙酯萃取后，有機相干燥、過濾并蒸發(fā)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞155℃(分解)紅外(KBr):VC=o=1700,1710,1750cm-1νNH,OH,NH2=3000-3600cm-1實施例16:3,9-二硝基-12,13-[1,2-(3,6-脫水-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例13，使用實施例11化合物作為反應物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1720,1760cm-1νNH=3100-3500cm-1實施例17:3-硝基-12,13-[1,2-(3,6-脫水-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮該產(chǎn)物是在實施例16化合物的合成過程中分離到的。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1710,1750cm-1νNH=3200cm-1實施例18:3,9-二羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.211mmol實施例6化合物的6ml甲醇溶液中加入37μl 50％H2O2水溶液，然后加入11μl 95％硫酸水溶液。在室溫下攪拌72小時后，反應混合物水解，然后用乙酸乙酯萃取。有機相洗滌、干燥、過濾，然后蒸發(fā)。經(jīng)硅膠色譜法(甲苯/四氫呋喃65/35)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞258℃(分解)實施例19:3,9-二溴-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的0.207mmol實施例2化合物的20ml四氫呋喃溶液中滴加2.07mmol N-溴代琥珀酰亞胺的30ml四氫呋喃溶液。在室溫下反應7天后，混合物水解，用乙酸乙酯萃取。有機相干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/環(huán)己烷70/30)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1710,1760cm-1νNH,OH=2700-3300cm-1實施例20:12,13-[1,2-(3-O-溴乙?；?4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.70mmol實施例2化合物的12ml四氫呋喃溶液中加入79mg叔丁醇鉀，在室溫下30分鐘后加入0.70mmol溴乙酰溴。反應24小時后，反應混合物水解，然后用乙酸乙酯萃取。有機相干燥、過濾并減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(二氯甲烷/乙酸乙酯70/30)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例21:12,13-[1,2-(6-O-溴乙酰基-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例20，使用碳酸鉀作為堿，并且在四氫呋喃的回流下進行反應。
實施例22:1,11-二氯-12,13-[1,2-(6-氯-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例10，使用實施例1化合物作為反應物。
實施例23鹽酸12,13-[1,2-(6-氨基-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.126mmol實施例12化合物的15ml甲醇與14ml乙酸乙酯懸浮液中加入7mg 10％Pd/C?；旌衔镌谝淮髿鈮合職浠?0小時，然后經(jīng)硅藻土過濾，連續(xù)用甲醇、四氫呋喃和乙酸乙酯洗滌。濾液減壓濃縮，在0.23ml 1N鹽酸溶液的存在下，將所得殘余物懸浮在0.3ml甲醇中。攪拌并加入二氯甲烷后，濾出所生成的沉淀，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1710,1760cm-1νNH,OH=3270-3600cm-1實施例24:12,13-[1,2-(6-碘-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向1.55mmol實施例10化合物的80ml丙酮溶液中加入31mmol碘化鈉。混合物在回流下攪拌7天，然后蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物溶于乙酸乙酯，然后洗滌。有機相干燥、過濾并減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯60/40)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例25鹽酸12,13-[1,2-(6-二甲氨基-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向3.14mmol二甲胺的5ml四氫呋喃溶液中加入0.154mmol實施例24化合物。在室溫下攪拌2天后，反應混合物水解，用乙酸乙酯萃取。有機相干燥、過濾并減壓濃縮。將殘余物稀釋在0.3ml甲醇中，加入1N鹽酸水溶液。攪拌并加入二氯甲烷后，濾出所生成的沉淀，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例26:6-氨基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.20mmol實施例2化合物中加入14mmol水合肼。在50℃下攪拌1.5小時后，將反應混合物倒在冰上，然后用乙酸乙酯萃取。有機相然后洗滌、干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/環(huán)己烷)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例27:6-甲酰氨基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向0.30mmol實施例3化合物的10ml二甲基甲酰胺溶液中加入10當量甲酰肼。在140℃下攪拌1小時后，反應混合物冷卻，然后水解，導致沉淀的生成，濾出沉淀，用水洗滌，然后用乙醚洗滌，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例28:(2-羥乙基)-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將0.30mmol實施例3化合物與1.3ml乙醇胺的溶液在室溫下攪拌1小時，然后倒在冰上，用乙酸乙酯萃取。有機相干燥、過濾，然后減壓濃縮。經(jīng)硅膠色譜法(乙酸乙酯/環(huán)己烷)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例29:6-二乙氨基乙基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮及其鹽酸鹽向58.5mg實施例3化合物的7ml無水四氫呋喃溶液中滴加26μlN,N-二乙基乙二胺?；旌衔镌?5℃下避光加熱4天，然后冷卻，溶于一種混合物(1N鹽酸水溶液/乙酸乙酯)。用乙酸乙酯萃取后，有機相干燥、過濾，然后減壓濃縮。所得殘余物冷卻至0℃，溶于200μl甲醇，向其中滴加1.14N鹽酸水溶液(108μl)?；旌衔飻嚢?，然后加入環(huán)己烷。沉淀通過玻璃料過濾，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點250℃紅外(KBr):VC=o=1700,1750cm-1νNH,OH=3200-3600cm-1實施例30:12,13-[1,2-(3,6-二-O-乙?；?4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向351mg實施例2化合物的7ml吡啶溶液中滴加0.68ml乙酸酐。反應混合物在室溫下攪拌19小時。水解后，有機產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，有機相然后洗滌并干燥。蒸發(fā)除去溶劑后，殘余物用硅膠色譜法純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯3/2)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點106℃紅外(KBr):VC=o=1720,1750cm-1
νNH,OH=3100-3600cm-1實施例31:12,13-[1,2-(3-O-乙?；?4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的337mg實施例30化合物的30ml乙腈與3ml水溶液中滴加0.92ml三氟化硼醚合物。在室溫下24小時后，加入3ml水和0.92ml三氟化硼醚合物。在室溫下又過了24小時，反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液水解。有機產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，有機相然后合并、洗滌并干燥。蒸發(fā)除去溶劑后，經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯1/1)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點294℃紅外(KBr):VC=o=1720,1750cm-1νNH,OH=3100-3600cm-1實施例32:12,13-[1,2-(3-O-乙?；?6-脫氧-6-氯-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向77mg實施例31化合物的1.7ml吡啶溶液中連續(xù)加入154mg三苯膦，然后滴加四氯化碳(43μl)。反應混合物在40℃下攪拌65小時，冷卻，然后倒入水(30ml)中。有機產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，洗滌，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸發(fā)除去溶劑后，殘余物用硅膠色譜法純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯55/45)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1700,1730,1770cm-1νNH=3100-3600cm-1實施例33:3,9-二硝基-12,13-[1,2-(3-O-乙?；?6-脫氧-6-氯-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的50.6mg實施例32化合物的5ml無水四氫呋喃溶液中滴加3.5ml發(fā)煙硝酸。2小時后，混合物恢復至室溫，攪拌21小時。水解后，有機產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。有機相合并、洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥，蒸發(fā)除去溶劑。經(jīng)硅膠色譜法(甲苯/四氫呋喃7/3)，得到預期二硝基產(chǎn)物。
實施例34:3,9-二硝基-12,13-[1,2-(6-脫氧-6-氯-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的22.3mg實施例33化合物的3ml乙腈、0.3ml水與2ml四氫呋喃溶液中滴加三氟化硼醚合物(48μl)。在40℃下48小時后，加入0.3ml水和1ml三氟化硼醚合物。在40℃下又過了24小時，加入相同比例的水和三氟化硼醚合物。在室溫下24小時后，反應混合物用飽和碳酸氫鈉水溶液水解。有機產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，有機相然后合并、洗滌并經(jīng)硫酸鎂干燥。蒸發(fā)除去溶劑后，經(jīng)硅膠色譜法(甲苯/四氫呋喃1/1，然后是環(huán)己烷/丙酮2/3)，能夠分離到預期產(chǎn)物。
實施例35:3,9-二硝基-12,13-[1,2-(6-疊氮基-6-脫氧-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮操作同實施例10，使用實施例34化合物作為原料。
熔點＞300℃紅外(KBr):VC=o=1720,1760cm-1νNH=3200-3600cm-1νN3=2100cm-1實施例36:3,9-二甲氧羰基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮將290mg實施例2化合物與6ml吡啶的混合物冷卻至0℃，然后加入0.6ml乙酸酐。反應混合物在室溫下攪拌18小時。加入水，混合物攪拌40分鐘，然后用乙酸乙酯萃取。有機相洗滌，然后經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物溶于9ml二氯甲烷。加入二氯甲基甲基醚(1.08ml)，混合物冷卻至0℃，然后加入1M TiCl4的11.96ml二氯甲烷溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時，然后用水水解。反應混合物攪拌一小時，然后用乙酸乙酯萃取。有機相經(jīng)MgSO4干燥，蒸發(fā)除去溶劑。然后將殘余物溶于6ml甲醇，然后加入50％過氧化氫水溶液(0.4ml)，然后加入95％硫酸(1.6ml)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?2小時。水解30分鐘后，反應混合物用乙酸乙酯萃取。有機相合并，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)除去溶劑。然后將所得殘余物溶于22ml甲醇，然后滴加28％氫氧化銨水溶液(10ml)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時。蒸發(fā)除去溶劑后，將殘余物溶于水/乙酸乙酯混合物。反應混合物用乙酸乙酯萃取。有機相合并，用氯化鈉水溶液洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)除去溶劑。殘余物用硅膠色譜法純化(環(huán)己烷/丙酮1/1)，得到預期產(chǎn)物。
實施例37:N3,N9-雙(3-氨基丙基)-5,7-二氧代-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-3,9-二甲酰胺在-20℃下，向1.26ml 2N Al(CH3)3的己烷溶液中加入0.2ml 1,3-二氨基丙烷?；旌衔镌?20℃下攪拌20分鐘，然后緩慢恢復至室溫。加入1.36g實施例7化合物的15ml二氯甲烷溶液，溶液加熱回流24小時。反應混合物用4ml 0.7M鹽酸溶液水解。攪拌30分鐘后，分離出水相，用乙酸乙酯萃取。有機相洗滌，然后干燥。蒸發(fā)除去溶劑后，所得殘余物用二氧化硅柱色譜法純化，得到預期產(chǎn)物。
實施例38:3,9-二氯-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮向冷卻至0℃的60mg實施例2化合物的3ml四氫呋喃溶液中滴加166mgN-氯代琥珀酰亞胺的6ml四氫呋喃溶液?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?天。用50ml水水解10分鐘后，二氯化合物用乙酸乙酯萃取。有機相干燥并過濾，蒸發(fā)除去溶劑。殘余物用硅膠色譜法純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯3/7)，得到預期產(chǎn)物。
實施例39:3,9-二氨基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-5-氧代-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑和3,9-二氨基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-7-氧代-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑在2.3ml 6N鹽酸的存在下，向106mg實施例15化合物的14ml乙醇溶液中加入1g鋅汞齊?；旌衔锘亓?小時，然后過濾。固體殘余物用乙酸乙酯洗滌。濾液蒸發(fā)，將殘余物溶于乙酸乙酯，用NaHCO3飽和水溶液洗滌，然后用水洗滌。有機相經(jīng)MgSO4干燥。蒸發(fā)除去溶劑，殘余物用二氧化硅柱色譜法純化(乙酸乙酯/甲醇9/1)，能夠分離到預期區(qū)域異構體(regioisomer)的混合物。
實施例40:12,13-[1,2-(3-O-賴氨酸-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮及其鹽酸鹽向冷卻至0℃的10ml二叔丁氧羰基賴氨酸的二甲基甲酰胺溶液中加入68mg羥基苯并三唑和114mg二環(huán)己基碳二亞胺?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?0分鐘，然后加入到242mg實施例2化合物的5ml四氫呋喃懸浮液中，該溶液預先在69mg碳酸鉀的存在下室溫攪拌。所得反應混合物在50℃下加熱24小時，然后用飽和NaCl溶液水解，然后用乙酸乙酯萃取。合并后的有機相干燥，然后過濾，減壓濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜法(環(huán)己烷/乙酸乙酯3/7)，能夠分離到一種化合物，然后將其溶于3M HCl在2.5ml乙酸乙酯中的混合物。在室溫下攪拌5小時后，反應混合物蒸發(fā)，得到晶體，用乙酸乙酯洗滌，得到預期產(chǎn)物的鹽酸鹽形式。
本發(fā)明化合物的藥理學研究實施例41體外活性●鼠白血病L1210體外使用鼠白血病L1210。將細胞在完整的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中包含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和10mM Hepes,pH 7.4。細胞分布在微量板上，接觸細胞毒性化合物達四個倍增周期，也就是48小時。然后用一種比色測定法、即微量培養(yǎng)四唑鎓測定法(J.Carmichael等《癌癥研究》47,936-942,(1987))統(tǒng)計存活細胞數(shù)。結果以IC50表示，即50％抑制受處理細胞增殖的細胞毒性濃度。所有本發(fā)明化合物都對該細胞系表現(xiàn)出良好的細胞毒性。例如，在該試驗中，實施例13化合物的IC50為0.13μM，實施例19化合物的IC50為0.14μM。
●人細胞系按照與鼠白血病L1210所述相同的實驗方案，還試驗了本發(fā)明化合物對人細胞系的作用，但是培養(yǎng)期為4天，而不是2天。例如，實施例14、16、19和29化合物對下列細胞系的IC50都小于1μM卵巢癌IGROV-1、成神經(jīng)細胞瘤SK-N-MC、結腸癌HT-29、非小細胞肺癌A549、表皮樣癌A431和小細胞肺癌H69。
這些不同的結果清楚地顯示，本發(fā)明化合物的抗腫瘤潛力是相當可觀的。
實施例42對細胞周期的作用在不同濃度供試化合物的存在下，將L1210細胞在37℃下培養(yǎng)21小時。細胞然后用70％(v/v)乙醇固定，在PBS中洗滌兩次，在20℃下在含有100μg/ml RNA酶與50μg/ml碘化丙錠的PBS中培養(yǎng)30分鐘。結果以21小時后蓄積在G2+M相中的細胞百分率表示，與對照比較而言(對照20％)。本發(fā)明化合物是尤其有價值的。它們在小于1μM的濃度下，21小時后誘發(fā)了至少70％的細胞蓄積在G2+M相中。
實施例43藥物組合物可注射的溶液實施例13化合物…………………………………………10mg可注射制劑用蒸餾水……………………………………25ml
權利要求
1．式(Ⅰ)化合物 其中●R1和R2可以是相同或不同的，彼此獨立地代表式U-V基團，其中*U代表單鍵或直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，任選地被一個或多個相同或不同的選自鹵素和羥基的基團取代，和/或任選地含有一個或多個不飽和鍵，*V代表選自氫原子、鹵原子、氰基、硝基、疊氮基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、芳氧基、其中烷氧基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基、甲?；?、羧基、氨基羰基、NRaRb、-C(O)-T1、-C(O)-NRa-T1、-NRa-C(O)-T1、-O-C(O)-T1、-C(O)-O-T1、-O-T2-NRaRb、-O-T2-ORa、-O-T2-CO2Ra、-NRa-T2-NRaRb、-NRa-T2-ORa、-NRa-T2-CO2Ra和-S(O)n-Ra基團的基團，其中→Ra和Rb可以是相同或不同的，各自代表選自氫原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基和其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基的基團，或者Ra+Rb與攜帶它們的氮原子共同構成具有5至7個環(huán)原子的單環(huán)雜環(huán)，任選地在環(huán)系內(nèi)含有一個選自氧和氮的第二雜原子，并且任選地被選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基氨基和其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二-(C1-C6)烷基氨基的基團取代，→T1代表選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基和直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團，該鏈被選自-ORa、-NRaRb、-CO2Ra、-C(O)Ra和-C(O)NRaRb的基團取代，其中的Ra和Rb是如前文所定義的，→T2代表直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，→n代表0至2的整數(shù)，含0和2，●G代表氧原子或NR3基團，其中的R3代表選自氫原子、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、環(huán)烷基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的環(huán)烷基-(C1-C6)烷基、-ORa基團、-NRaRb基團、-O-T2-NRaRb基團、-NRa-T2-NRaRb基團、其中烷基部分是直鏈或支鏈的(C1-C6)羥基烷基氨基、其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二((C1-C6)羥基烷基)氨基、-C(O)-Ra基團、-NH-C(O)-Ra基團和直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團，該鏈被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵原子、氰基、硝基、-ORa、-NRaRb、-CO2Ra、-C(O)Ra、其中烷基部分是直鏈或支鏈的(C1-C6)羥基烷基氨基、其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二((C1-C6)羥基烷基)氨基和-C(O)-NHRa，基團Ra、Rb和T2是如前文所定義的，●X代表選自氫原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、巰基和直鏈或支鏈(C1-C6)烷硫基的基團，●Y代表氫原子，或者X和Y與攜帶它們的碳原子共同構成羰基，●X1代表選自氫原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、巰基和直鏈或支鏈(C1-C6)烷硫基的基團，●Y1代表氫原子，或者X1和Y1與攜帶它們的碳原子共同構成羰基，●R4和R5可以是相同或不同的，彼此獨立地代表選自氫原子、鹵原子、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基、芳氧基、其中烷氧基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷氧基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、芳基、氨基(本身任選地被一個或兩個相同或不同的基團取代，取代基選自直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、芳基和其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基)、疊氮基、-N=NRa基團(其中Ra是如前文所定義的)、其中Rc代表直鏈或支鏈(C1-C6)烷基(任選地被一個或多個基團取代，取代基選自鹵素、羥基、氨基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基氨基和其中每個烷基部分是直鏈或支鏈的二-(C1-C6)烷基氨基)的-O-C(O)-Rc基團、芳基、其中烷基部分是直鏈或支鏈的芳基-(C1-C6)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基的基團，●R6代表式-U1-R4基團，其中U1代表單鍵或亞甲基，R4是如前文所定義的，●或者，在相鄰或不相鄰位置上的R4、R5和R6成對地與攜帶它們的碳原子構成具有3至6個環(huán)原子的環(huán)系，含有一個或兩個氧原子，不屬于該環(huán)系的剩余基團R4、R5或R6具有前文所給出的任意一種R4、R5或R6的定義，它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其前提條件是式(Ⅰ)化合物不是下列化合物-1,11-二氯-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5-酮，和-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-5,6,12,13-四氫-(7H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-7-酮，還應理解的是，-“環(huán)烷基”被理解為意指單環(huán)或二環(huán)基團，它是飽和的或不飽和的，但是沒有芳族特征，具有3至10個碳原子，任選地被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基和可選被一個或兩個直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代的氨基，-“雜環(huán)烷基”被理解為意指如上所定義的環(huán)烷基，在環(huán)系內(nèi)具有一個或兩個相同或不同的雜原子，選自氧、氮和硫，-“芳基”被理解為意指苯基、萘基、二氫化萘基、四氫化萘基、茚基或2,3-二氫化茚基，每個這些基團任選地被一個或多個相同或不同的基團取代，取代基選自鹵素、直鏈或支鏈(C1-C6)烷基、直鏈或支鏈(C1-C6)三鹵代烷基、羥基、直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基和可選被一個或兩個直鏈或支鏈(C1-C6)烷基取代的氨基。
2．根據(jù)權利要求1的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于G代表NR3，其中R3是如式(Ⅰ)所定義的。
3．根據(jù)權利要求1的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于X和Y與攜帶它們的碳原子共同構成羰基，并且X1和Y1與攜帶它們的碳原子共同構成羰基。
4．根據(jù)權利要求1的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于它們代表式(Ⅰbis)化合物 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的。
5．根據(jù)權利要求1或權利要求4的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于R1和R2可以是相同或不同的，代表式U-V基團，其中的U代表單鍵，V代表選自鹵原子、氫原子、硝基、甲酰基、羥基和被羥基取代的直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈的基團。
6．根據(jù)權利要求1或權利要求4的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于R1和R2是相同的。
7．根據(jù)權利要求1或權利要求4的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于R3代表氫原子、羥基和被選自NRaRb和ORa的基團取代的直鏈或支鏈(C1-C6)亞烷基鏈，其中的Ra和Rb是如式(Ⅰ)所定義的。
8．根據(jù)權利要求1或權利要求4的式(Ⅰ)化合物、它們的異構體及其與藥學上可接受的酸或堿的加成鹽，其特征在于它們代表式(Ⅰter)化合物 其中R1、R2、R3和R6是如式(Ⅰ)所定義的。
9．式(Ⅰ)化合物，它們是-3,9-二甲?；?12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3-硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-9-硝基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-6-羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二-(羥甲基)-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二硝基-12,13-[1,2-(3,6-脫水-4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二羥基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，-3,9-二溴-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮，和-6-二乙氨基乙基-12,13-[1,2-(4-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基)]-6,7,12,13-四氫-(5H)-吲哚并[2,3-a]吡咯并[3,4-c]咔唑-5,7-二酮及其鹽酸鹽。
10．制備式(Ⅰ)化合物的方法，其特征在于使用式(Ⅱ)化合物作為原料 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的，將式(Ⅱ)化合物在堿性介質中用對甲苯磺酸處理，得到式(Ⅲ)化合物 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，將該式(Ⅲ)化合物與疊氮化鈉反應，主要得到式(Ⅰ/a)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，使該式(Ⅰ/a)化合物受到氫解條件，得到式(Ⅰ/b)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，將該式(Ⅰ/b)化合物用氫氧化鈉水溶液處理，然后用鹽酸處理，得到式(Ⅰ/c)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，使該式(Ⅰ/c)化合物受到式(Ⅳ)化合物的作用R3a-NH2(Ⅳ)其中R3a具有與R3相同的定義，但是氫原子除外，得到式(Ⅰ/d)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中X、Y、X1、Y1、R3a、R4、R5和R6是如前文所定義的，所有式(Ⅰ/b)至(Ⅰ/d)化合物構成式(Ⅰ/e)化合物 其中G、X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如式(Ⅰ)所定義的，按照本領域熟練技術人員熟知的常規(guī)有機合成條件，使該式(Ⅰ/e)化合物受到親電芳香加成反應或親核芳香加成反應，得到式(Ⅰ/f)化合物，其為式(Ⅰ)化合物的一個特例 其中G、X、Y、X1、Y1、R4、R5和R6是如前文所定義的，R1a和R2a分別具有與R1和R2相同的定義，但是R1a和R2a不能同時代表氫原子，式(Ⅰ/a)至(Ⅰ/f)化合物構成式(Ⅰ)化合物的整體，如果必要的話，按照常規(guī)的純化工藝進行純化，如果需要的話，可以按照常規(guī)的分離工藝分離為它們的不同異構體，其取代基R4、R5和R6按照糖化學領域中常用的有機合成方法進行調(diào)整，如果需要的話，用藥學上可接受的酸或堿將它們轉化為加成鹽。
11．藥物組合物，包含至少一種根據(jù)權利要求1至9任意一項的式(Ⅰ)化合物作為活性成分，單獨或者與一種或多種惰性、非毒性、藥學上可接受的賦形劑或載體結合。
12．根據(jù)權利要求11的藥物組合物，在癌癥治療中用作抗腫瘤劑。
全文摘要
式(Ⅰ)化合物:其中●R
文檔編號A61P35/00GK1303859SQ0012854
公開日2001年7月18日 申請日期2000年11月17日 優(yōu)先權日1999年11月17日
發(fā)明者M·普汝德厚姆, P·莫瑞奧, F·安尼森, C·馬彌恩, G·阿塔斯, A·皮埃爾, B·普費福爾, P·若納德 申請人:阿迪爾公司