內皮素拮抗劑的制作方法

專利名稱：內皮素拮抗劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有內皮素拮抗活性的三肽衍生物，其特備方法，含它們的藥物組合物及它們在預防或治療與內皮素有關疾病的用途。
內皮素是重要的縮血管因子。人類或其它哺乳動物基因組存在三種分別編碼內皮素的基因，形成的大內皮素在內皮素轉換酶作用下，轉變為ET1，ET2，ET3。它們均為二十一肽，含有兩個二硫橋鍵。ET1不但表達于非血管細胞，而且是唯一存在于血管內皮細胞的內皮素。ET2和ET3主要在腦、腎和腎上腺及小腸中表達。ET與靶細胞中的特異受體結合，最終產生相應的生物學效應。迄今已發現三類ET受體，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主動脈，心房，胎盤，肺、腦血的及腎臟血管平滑肌中；BTB存在于中樞神經系統中的神經膠質細胞，脈落叢上皮細胞，肺、胎血、腎小球內皮，心室，腦中等，在血管平滑肌也有分布，ETC則分布于內皮細胞中。三種受體對各型ET的親和力不同。內皮素及受體在人體內具有廣泛的生理病理學反應。參與了高血壓，充血性心衰，心肌缺血，腦窒息，休克，急性腎衰，肺原性高血壓，血管痙攣性疾病等過程。因此，內皮素拮抗劑有助于預防/治療心血管疾病。
本發明的目的是尋找新的內皮素拮抗劑。
本發明人經研究現已發現式I的三肽衍生物RCO-A-B-C-OH I或其立體異構體具有良好的內皮素拮抗活性，因此式I三肽衍生物或其立體異構體可作為藥物用于預防或治療與內皮素有關的心血管疾病。本發明第一方面涉及式I三肽衍生物或其立體異構體，RCO-A-B-C-OHI其中R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ一氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp。
本發明還涉的含至少一種式I三肽衍生物或其立體異物體，RCO-A-B-C-OH I其中R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp，及藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發明還涉及制備式I三肽衍生物或其立體異物體的方法，其包括1)將RCO-A-OH化合物與B-OP在DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中反應，其中R，A，B，如上定義，P為C1-4烷基，生成RCO-A-B-OP，2)將1)中所得產物在1M氫氧化鈉/甲醇溶液中皂化，然后在1M鹽酸中酸化，生成RCO-A-B-OH，3)將2)中產物RCO-A-B-OH與C-OP在DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中反應，其中P為C1-4烷基，生成RCO-A-B-C-OP，所得產物如2)中所述進行反應，生成式I RCO-A-B-C-OH。
本發明還涉及式I三肽衍生物或其立體異構體在制備預防或治療與內皮素有關疾病或癥狀的藥物中用途。
根據本發明、術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
術語“C1-4烷基”指含1-4個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
在本發明中使用的縮寫具有下面含義Pro-脯氨酸，Leu-亮氨酸，Ala-丙氨酸，Phe-苯丙氨酸，Trp-色氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，DMF-二甲基甲酰胺，DCM-二氯甲烷，NMM-N-甲基-嗎啉，DIC-HOBt-二異丙基碳二亞胺-1-羥基苯并三唑，Fmoc-9-芴甲氧羰基，HIM-六亞甲基亞胺基。
本發明所用術語“式I三肽衍生物立體異構體”是指其相應的D-或L-立體構型。
具體講，本發明涉及式I三肽衍生物或其立體異構體，RCO-A-B-C-OH I其中，R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp。
本發明還涉及藥物組合物，其包括至少一種式I三肽衍生物或其立體異構體RCO-A-B-C-OH I其中R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp。
及藥用載體或賦形劑。
根據本發明，式I三肽衍生物或其立體異構體可選自下面的三肽1 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH19 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH20 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH27 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH28 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH29 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH30 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH31 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH32 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH33 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH34 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe((3-NO2)-OH35 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F-3-Cl)-OH36 苯氧基-CO-Pro-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH37 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH38 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH39 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH40 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OHo-CPh 41 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH42 o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH43 o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH44 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH45 o-CPh-D-Trp-D-Phe-Cl)-OH46 o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH47 o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH48 o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH49 o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH50 o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH51 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH52 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH53 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH。
根據本發明，式I三肽衍生物或其立體異構體進一步優選下面的三肽1HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)—D-Trp-OH。
根據本發明，本發明的式I三肽衍生物或其立體異構體可按本領域已知方法、文獻方法或下面所示的反應路線1制備反應路線1 i.DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt ii.1M氫氧化鈉，甲醇 iii.1M鹽酸在反應路線1中，式RCO-A-OH化合物(其中R，A如上定義)與B-OP(其中B如上定義，P為C1-4烷基，其可選自甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，仲丁基，異丁基，叔丁基，優選甲基，乙基)在DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中反應，生成式RCO-A-B-OP化合物(其中R，A，B，P如上定義)。將RCO-A-B-OP化合物在1M氫氧化鈉/甲醇溶液皂化，然后在1M鹽酸中酸化，生成式RCO-A-B-OH化合物(其中，R，A，B如上定義)。將式RCO-A-B-OH化合物于DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中與C-OP(其中，C，P如上定義)反應生成式RCO-A-B-C-OP(其中R，A，B，C，P如上定義)化合物，然后將所得RCO-A-B-C-OP(其中A，B，C，P如上定義)在1M氫氧化鈉/甲醇溶液中皂化，然后在1M鹽酸酸化，生成式I RCO-A-B-C-OH三肽衍生物或其立體異構體。
根據本發明，式I三肽衍生物的立體異構體包括D-和/或L-構型。
根據本發明，式(I)三肽衍生物及其立體異構體在動物抗Et1受體模型中顯示出優良效果，因此可作為心血管藥用于動物，優選用于哺乳動物，特別是人。
本發明因此還涉及含有作為活性成份的有效劑量的至少一種式(I)三肽衍生物和/或其立體異構體以及常規藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發明藥物組合物含有0.1-90重量％的式(I)化合物和/或其立體異構體。藥物組合物可根據本領域已知的方法制備。用于此目的時，如果需要，可將式(I)化合物和/或立體異構體與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結合，制成可作為人用的適當的施用形式或劑量形式。
本發明的式(I)三肽衍生物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等。可以是普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(I)三肽衍生物或其立體異構體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明明膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分式(I)三肽衍生物或其立體異構體制成微囊劑，混懸于水性介質中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應用。為了將給藥單元制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、pH調節劑等。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發明式(I)三肽衍生物或其立體異構體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥。
下面的實施例及生物活性實驗用來進一步說明本發明，但這并不意味著對本發明的任何限制。制備例1D，L-N-3-硝基-苯丙氨酸及其衍生物的合成1.1 D，L-3-硝基-苯丙氨酸(1aa)3-硝基-苯胺100克(0.725mol)懸浮于500毫升水和500毫升濃鹽酸中，維持內溫不高于零下5℃，攪拌條件下滴加亞硝酸鈉59.0克(0.908mol)/150毫升水溶液，亞硝酸鈉加畢，反應液澄清，繼續攪拌20分鐘。加入2.0克脲，再攪拌10分鐘，隨后加入48.0克醋酸鈉，反應液為黃色透明溶液。另外，預先將110毫升丙烯酸、300毫升丙酮與26.0克水合氯化銅/80毫升水溶液混合，室溫下將此溶液加入上述重氮鹽溶液中，逐漸升溫(25～100℃/0.5小時)，60～70℃產生大量氣泡，顏色逐漸加深為棕色，產氣完畢，停止加熱。冷卻后分層，分出有機相，水相用三氯甲烷提取(2×150毫升)，合并有機相，用水洗(3×150毫升)，濃縮有機相得到紅棕色油狀物。濃縮物用氨水溶成500毫升，放熱，用水稀釋為5000毫升澄清溶液，冷卻條件下充入足量的氨氣，溶液置于10升高壓釜中，60℃、70℃、80℃各反應一天，90℃反應兩天。冷卻后開啟高壓釜，取出反應液，減壓濃縮至400毫升，加入500毫升工業酒精，冰箱中冷卻，析出白色固體，抽濾，固體干燥，約100克。1.2 D，L-3-硝基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(1bb)將600毫升無水乙醇冰鹽浴冷卻至零下10℃，攪拌條件下緩慢滴入180毫升二氯亞砜，維持內溫零下5℃以下，20分鐘后加入(1aa)粗品100克，室溫下攪拌兩天，再回流兩小時，趁熱濾除不溶物(無機鹽)約25克，溶液減壓蒸干，有白色固體析出，加入無水乙醇反復濃縮二次，得(1bb)52.0克(收率26.1％，按3-硝基苯胺計)，m.p.184～186℃。FAB-MS m/z 239(M＋1-HCl)。1.3 D，L-N-乙酰-3-硝基苯丙氨酸乙酯(1cc)將(1bb)40.0克(0.146mol)加入150毫升干燥的三氯甲烷中，攪拌溶解，加入45.0毫升(0.323mol)三乙胺，析出白色固體(三乙胺鹽酸鹽)，室溫下滴加30毫升(0.322mol)醋酐，反應放熱，滴加完醋酐后繼續攪拌1小時。減壓濃縮，加入50毫升水，減壓濃縮除去醋酸，加入100毫升水，冷卻，油狀物固化，濾集固體，干燥，用乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)重結晶，得到絮狀晶體，濾集干燥得(1cc)40.2克(98.5％)，m.p.86～87℃TLC Rf＝0.68(A，乙酸乙酯石油醚/80∶20，254nm顯色)；1HNMR(CDCl3)δ1.27(t，J＝7.08Hz，-OCH2CH3)，2.01(s，3H，-COCH3)，3.21(m，2H，β-H)，4.20(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，4.88(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，5-NH)，7.46-8.13(m，4H，Ar-H)。IR 3260(NH)，2976(CH)，1738(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1560，1523(CH，苯環)，809，738，689(苯環間位硝基取代)。
元素分析C H N(％)C13H16N2O3理論值55.715.759.99280.28 測試值55.685.679.52制備例2 2-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成2.1 D，L-2-氟-苯丙氨酸(2aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高壓釜氨解時，55℃七天，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH4～5，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(2aa)粗品約17克。2.2 D，L-2-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(2bb)方法同(1bb)。投入(2aa)粗品17.0克。濃縮反應液后，加入10毫升無水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置一周，析出無色針狀結晶，濾集晶體，得(2bb)16.0克(24.7％，以2-氟苯胺計)，m.p.112～115℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。2.3 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2cc)方法同(1cc)。投入(2bb)16.0克(0.065mol)。濃縮后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濃縮，加入乙醚-石油醚冷卻析出無色晶體。濾集，得(2cc)13.0克(79.0％)，m.p.58～61℃。TLC Rf＝0.63(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.22(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，1.96(s，3H，-COCH3)，3.14(m，2H，β-H)，4.15(m，2H，-OCH2CH3)，4.82(m，1H，α-H)，5.98(s，1H，α-NH)，6.98-7.22(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2964(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1553，1498(CH，苯環)，753(苯環鄰氟取代)。
元素分析C H N(％)C13H16NFO3理論值61.656.375.53測試值61.656.445.75制備例3 3-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成3.1 D，L-3-氟-苯丙氨酸(3aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高壓釜氨解時，50℃八天，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH4～5，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(3aa)粗品約25克。FAB-MS m/z 184(M＋1)。3.2 D，L-3-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(3bb)方法同(1bb)。投入(3aa)粗品24.0克。濃縮反應液后，加入10毫升無水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置，析出無色針狀結晶，濾集晶體，得(3bb)20.0克(31.4％，以3-氟苯胺計)，m.p.119～121℃。3.3 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3cc)方法同(1cc)。投入(3bb)20.0克(0.080mol)。濃縮后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濃縮，加入乙醚-石油醚冷卻析出無色晶體。濾集，得(3cc)16.0克(78.9％)，m.p.75～77℃。TLC Rf＝0.60(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.32Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.12(m，2H，β-H)，4.18(q，J＝7.32Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(m，1H，α-H)，6.00s，1H，α-NH)，6.80-7.27(m，4H，Ar-H)。IR3334(NH)，2989，2939(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1529(CH，苯環)，776,701(苯環間氟取代)。
元素分析 C H N(％)C13H16NFO3理論值61.656.375.53253.27 測試值61.706.265.37制備例4 4-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成4.1 D，L-4-氟-苯丙氨酸(4aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟-苯胺100毫升(1.04mol)。室溫下氨解7個月，減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(4aa)粗品約150克。4.2 D，L-4-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(4bb)方法同(3bb)。投入(4aa)粗品150.0克。得(4bb)81.0克(31.5％，以4-氟苯胺計)，m.p.130～132℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。4.3 D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4cc)方法同(3cc)。投入(4bb)40.0克(0.162mol)。得(4cc)39.0克(95.0％)，m.p.71～73℃。TLCRf＝0.68(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.10(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH2CH3)，4.84(m，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.95-7.09(m，4H，Ar-H)。IR 3309(NH)，3087，2989(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環)，830,800,707(苯環對氟取代)。
元素分析CH N(％)C13H16NFO3理論值61.65 6.375.53測試值61.56 6.305.25制備例5 2-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成5.1 D，L-2-氯-苯丙氨酸(5aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯-苯胺51.5克(0.40mol)。室溫下氨解5個月。減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體。得19.8克。濃縮濾液，冰箱中放置過夜，得白色固體，干燥后重28.0克。合并共重47.8克。5.2D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5bb)(5aa)15.6克(0.078mol)溶于2mol/L NaOH 156ml，保持零下5℃，滴加醋酐15毫升，10分鐘后，加入23毫升濃鹽酸，pH約為3，冰箱中放置過夜，得白色固體，干燥后重14.0克。收率74％。熔點158～160℃5.3 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5cc)方法同(1bb)。(5bb)13.3克，無水乙醇170毫升，二氯亞砜8.5毫升。室溫下反應4小時，減壓濃縮，殘液倒入500毫升水中，冰箱中放置過夜，過濾干燥得12.0克(81％)。熔點63～65℃。TLC Rf＝0.61(A)1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.20～3.36(m，2H，β-H)，4.14～4.24(m，2H，-OCH2CH3)，4.94(m，1H，α-H)，6.04(s，1H，α-NH)，7.22～7.40(m，4H，Ar-H)。FAB-MS m/z 270.2(M)IR3334(NH)，3063，2976(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環)，750(苯環鄰氯取代)。
元素分析 C H N(％)C13H16NClO3理論值 57.895.985.19MW.269.71 測試值58.305.944.80制備例6 3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成6.1 D，L-3-氯-苯丙氨酸(6aa)方法及投量比同(1aa)的合成。間氯苯胺96.0克(0.784mol)。高壓釜中(60℃)氨解十天。濃縮過濾，得粗品87克，經乙醚洗得干燥品66克。6.2 D，L-3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(6bb)，方法同(1bb)。粗品(6a)66克(0.33mol)。無水乙醇400毫升，二氯亞砜110毫升。濃縮，用乙醚研出固體，過濾，乙醚洗滌固體，得白色固體63.0克，熔點138.5～140.5℃。按3-氯苯胺計，全程收率31.7％FAB-MS m/z 228.0(M＋1，-HCl)6.3 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6cc)方法同(1cc)。投入(6b)40.0克(0.162mol)。得(6cc)40.0克(98.0％)，m.p.88～90℃。TLC/Rf＝0.69(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.24(t，J＝7.25Hz，-OCH2CH3)，1.99(s，3H，-COCH3)，3.08(m，2H，β-H)，4.16(m，2H，-OCH2CH3)，4.84(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，α-NH)，6.98～7.26(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環)，880,787,692(苯環間氯取代)。
元素分析C H N(％)C13H16NClO3理論值57.895.985.19MW.269.71 測試值57.865.935.08制備例7 4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成7.1 D，L-4-溴-苯丙氨酸(7aa)方法及投量比同(1aa)的合成。對溴苯胺100.0克(0.58mol)。室溫氨解半年。濃縮過濾，得粗品81克。水不溶。FAB-MS m/z 245.2(M＋1，)7.2 D，L-4-溴-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(7bb)，方法同(1bb)。粗品(7aa)80克(0.33mol)。無水乙醇400毫升，二氯亞砜150毫升。濃縮，用乙醚研出固體，過濾，乙醚洗滌固體，得白色固體61.0克，熔點166～168℃。按對溴苯胺計，全程收率34.0％。7.3 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7cc)方法同(1cc)。投入(7bb)40.0克(0.143mol)。得(7cc)42.0克(94.0％)，熔點90～92℃。TLC/Rf＝0.57(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.23(t，J＝7.14Hz，-OCH2CH3)，1.97(s，3H，-COCH3)，3.04(m，2H，β-H)，4.14(m，2H，-OCH2CH3)，4.82(m，1H，α-H)，5.90(s，1H，α-NH)，5.94～7.39(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，3001(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1535(CH，苯環)，815(苯環對溴取代)。
元素分析C H N(％)C13H16NBrO3理論值49.705.134.46MW.314.11 測試值49.774.994.16制備例8 4-氟-3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成8.1 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸8aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟，3-氯-苯胺145克(1.00mol)。室溫下氨解10個月，減壓濃縮至約500毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(8aa)粗品約196.0克。FAB-MS m/z 218(M)，220(M＋2)。8.2 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(8bb)方法同(1bb)。投入(8a)粗品196.0克。得(8bb)126.0克(44.6％，以4-氟，3-氯-苯胺計)，熔點136～138℃。8.3 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8cc)方法同(1cc)。投入(8bb)41.0克(0.145mol)。得(8cc)39.6克(94.7％)，熔點106～107℃。TLC/Rf＝0.54(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.26(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.02(s，3H，-COCH3)，3.10(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.80(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.96-7.16(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3001(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環)，886,827,695(苯環對氟間氯取代)。
元素分析C H N(％)C13H15NFClO3理論值54.275.254.87測試值54.115.154.86制備例9 2，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成9.1 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸(9aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，4-二氯-苯胺80克(0.50mol)。室溫下氨解10個月，減壓濃縮至約500毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(9aa)粗品約103.0克。9.2 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(9bb)，方法同(1bb)。投入(9aa)粗品100克。得(9bb)59.0克(32.1％，2，4-二氯-苯胺計)，熔點180～182℃。FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。9.3 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9cc)方法同(1cc)。投入(9bb)54.4克(0.182mol)。得(9cc)53.0克(96.0％)，熔點109～111℃。TLC/Rf＝0.66(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.21(t，J＝7.18Hz，-OCH2CH3)，1.92(s，3H，-COCH3)，3.19(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.11～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，2989(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環)，867，849，818(苯環對氯鄰氯取代)。
元素分析 CH N(％)C13H15NCl2O3理論值51.334.974.60測試值51.384.924.34制備例10 2，5-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成10.1 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸(10aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，5-二氯-苯胺80克(0.50mol)。500毫升氨水(25％)，2000毫升乙醇，100毫升吡啶，0℃充氨，50℃氨解10天，減壓濃縮至干。1000毫升水充分溶解，濾除不溶物，濾液減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(10aa)粗品約25克。10.2 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(10bb)，方法同(1bb)。投入(10aa)粗品25克。得(10bb)16克(8.7％，2，5-二氯-苯胺計)，熔點184～188℃。(軟化，變黑)FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。10.3 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10cc)方法同(1c)。投入(10bb)20.7克(0.069mol)。得(10cc)19.20克(91.0％)，熔點116～118℃。TLC/Rf＝0.63(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.23(t，J＝7.15Hz，-OCH2CH3)，1.98(s，3H，-COCH3)，3.22(m，2H，β-H)，4.14(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，4.87(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，7.14～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3075，2989(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH3)，1541(CH，苯環)，815，713(苯環2，5-二氯取代)。元素分析 C H N(％)C13H15NCl2O3理論值51.334.974.60測試值51.434.984.39制備例11 3，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成11.1 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸(11aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3，4-二氯-苯胺250克(1.56mol)。50℃氨解7天，減壓濃縮至約1000毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(11aa)粗品約287.0克。11.2 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(11bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品287克。得(11bb)159.0克(36.2％，3，4-二氯-苯胺計)，熔點127～130℃。FAB-MS m/z 249.0(M)，251(M＋2)。11.3 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯(11cc)方法同(1c)。投入(11bb)11.0克(0.039mol)。得(11cc)8.0克(71.3％)，熔點101～103℃。TLC/Rf＝0.62(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.20(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，2.09(s，3H，-COCH3)，3.15(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.05～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，3075，2964(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環)，898，830(苯環對氯間氯取代)。制備例12 2-氯，4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成12.1 2-氯，4-溴-苯丙氨酸(12aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯，4-溴-苯胺10克(0.048mo1)。室溫氨解5個月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(12aa)粗品約5.6克。12.2 D，L-2-氯，4-溴-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(12bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品5.6克。得(12bb)5.1克(30.7％，2-氯，4-溴-苯胺計)，熔點172～174℃。FAB-MS m/z 308.0(M+1)。1HNMR(CDCl3)δ1.20(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，3.28～3.34，3.42～3.48(m，2H，β-H)，4.21～4.26，(m，2H，-OCH2CH3)，4.45(m，2H，α-NH2)，7.25～7.74(m，3H，Ar-H)。IR 3445(NH2.HCl)，2939(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1590(CH，苯環)，855,821(苯環對溴鄰氯取代)。元素分析 C H N(％)C11H14NBrCl2O2理論值38.51 4.114.08MW.343.05 測試值38.56 4.184.02制備例13 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成13.1 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸(13aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氯，2-甲基-苯胺142克(1.0mol)。室溫氨解5個月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(13aa)粗品約105.6克。13.2 D，L-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(13bb)，方法同(1b)。投入(13aa)粗品105.6克。得(13bb)74.0克(26.7％，3-氯，2-甲基-苯胺計)，熔點142～4℃。FAB-MS m/z 242.2(M-HCl)。13.3 D，L-N-乙酰-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(13cc)方法同(1cc)。投入(13bb)19.0克(69mmol)。得(13cc)19.0克(98.1％)，熔點106～107℃。TLC/Rf＝0.73(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.16(t，J＝7.32Hz，-OCH2CH3)，1.96(s，3H，-COCH3)，3.01(m，2H，β-H)，4.12(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH2CH3)，4.82(q，1H，α-H)，6.08(s，1H，α-NH)，7.01～7.27(m，3H，Ar-H)。IR 3284(NH)，3075，2976，2939(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1560，1498(CH，苯環)，796，707(苯環2-甲基，3-氯取代)。元素分析C H N(％)C14H18NClO3理論值59.266.39 4.94測試值59.476.42 4.72制備例14 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成14.1 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸(14aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-硝基，2-甲基-苯胺50克(0.33mol)。室溫氨解5個月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(14aa)粗品約32.6克。14.2 D，L-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(14bb)，方法同(1bb)。投入(14aa)粗品32.6克。得(14b)26.0克(27.4％，4-硝基，2-甲基-苯胺)，熔點172～5℃。FAB-MS m/z 253.0(M＋1-HCl)。14.3 D，L-N-乙酰-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(14cc)方法同(1cc)。投入(14bb)19.0克(66 mmol)。得(14cc)12.5克(64.6％)，熔點114～6℃。TLC/Rf＝0.64(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.22(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.22(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.88(q，1H，α-H)，6.14(s，1H，α-NH)，7.27～8.03(m，3H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH3)，1517(CH，苯環)，913，843，800，744(苯環鄰甲基對硝基取代)。元素分析 C HN(％)C14H18N2O5理論值57.146.169.52測試值56.996.199.48制備例15 4-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成15.1 D，L-4-羧基-苯丙氨酸(15aa)將68.0克(0.5mol)4-羧基-苯胺與40.0克(0.29mol)碳酸鉀/200毫升水混合溶解，攪拌加入35克(0.507mol)亞硝酸鈉，形成紅色溶液。500毫升濃鹽酸/200毫升水攪拌冷卻至-5℃，滴加入上述紅色溶液，控制反應溫度-5℃以下。20分鐘后加入0.5克脲，攪拌20分鐘，再加入30.0克醋酸鈉，溶解，得到亮黃色的重氮鹽。將預先配好的75毫升丙烯酸、100毫升丙酮與18克水合氯化銅/50毫升水溶液的混合液，加入至上述重氮鹽中，逐漸升溫，50～80℃產氣，產氣結束后冷卻，形成大量略帶粉紅色的沉淀，濾集固體，用2000氨水，密封，室溫放置9個月，濾去不溶物，濾液減壓濃縮，酸化至pH4，析出沉淀，濾集固體，干燥得(15aa)粗品84.8克。15.2 D，L-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(15bb)方法同(3bb)。投入(15aa)粗品84.8克。得(15bb)白色晶體60.0克(40.1％，以4-羧基-苯胺計)，m.p.137～139℃。FAB-MS m/z 266(M＋1-HCl)。15.3 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15cc)方法同(3cc)。投入(15bb)40.0克(0.133mol)。得(15cc)34.0克(83.5％)，m.p.89.5～90.5℃。TLC Rf＝0.56(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，1.38(t，J＝7.02Hz，3H，Ar-CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.18(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH2CH3)，4.36(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO2CH2CH3)，4.88(m，1H，α-H)，5.99(d，1H,α-NH)，7.1-7.98(m，4H，Ar-H)。IR 3247(NH)，3075，2989(CH)，1738，1707(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，855，766(苯環對羧基乙酯取代)。元素分析 C H N(％)C16H21NO5理論值62.536.89 4.563O7.34 測試值62.566.85 4.46制備例16 3-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成16.1 D，L-3-羧基-苯丙氨酸(16aa)3-氨基-苯甲酸100克(0.73mol)70～80℃氨解4天。減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(16aa)粗品約92.6克。16.2 D，L-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(16bb)方法同(3bb)。投入(16aa)粗品92.6克。得(16bb)白色晶體65.0克(29.5％，以3-羧基-苯胺計)，m.p.165～7℃。FAB-MS m/z 266.1(M＋1-HCl)。1HNMR(CDCl3)δ1.29(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，1.42(t，J＝7.08Hz，3H，Ar-CO2CH2CH3)，3.25(m，2H，β-H)，4.19(m，2H，-OCH2CH3)，4.39(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO2CH2CH3)，5.02(m，1H，α-H)，6.09(d，1H，α-NH)，7.21-8.08(m，4H，Ar-H)。元素分析C H N(％)C14H20NClO4理論值55.726.684.64301.77 測試值55.786.624.6216.3 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16cc)方法同(3cc)。投入(16bb)54.0克(0.18mol)。得(16cc)54.5克(99.1％)，紅色油狀物，待拆分用。制備例17 2-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成17.1 D，L-2-羧基-苯丙氨酸(17aa)2-氨基-苯甲酸100克(0.73mol)50℃氨解4天。減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(17aa)粗品約88.6克。17.2 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17bb)。方法同(3bb)。投入(17aa)粗品88.6克。得(17bb)白色晶體74.0克(46.3％，以2-羧基-苯胺計)，m.p.87～9℃。FAB-MS m/z 221.0(M＋2)。1HNMR(CDCl3)δ1.15(t，J＝7.01Hz，-OCH2CH3)，3.24～3.45(m，2H，β-H)，4.15(m，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，5.13(m，J＝5.49Hz，1H，α-H)，7.22-8.08(m，4H，Ar-H)。IR 3445(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1726(C＝O，-NHCO-)，1553，1498(CH，苯環)，757(苯環鄰羰基取代)。元素分析 C HN(％)C12H13NO3理論值65.745.986.39219.24 測試值65.786.026.35制備例18 D，L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯的拆分18.1 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯(1AA)。D，L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯16.3克(58mmol)研成粉末，懸浮于200毫升0.1M KH2PO4和K2HPO4溶液中，水浴恒溫至37℃，用1M NaOH溶液調pH7.4，加入20.0毫克α-糜蛋白酶，緩慢攪拌，pH緩慢下降，用2M KOH溶液維持pH7.4，攪拌至pH穩定，繼續攪拌2小時。反應液用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有機相，飽和氯化鈉溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥后濃縮至30毫升，加入石油醚，析出淡黃色針狀結晶，濾集，得(1AA)7.8克(95.7％)，m.p.109～110℃，[α]27D＝-9.90°(c＝1.02，無水甲醇)。18.2 L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1BB)上述拆分萃取后的水相中用濃鹽酸調至pH2～3，用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有機相，以飽和氯化鈉溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥后，40℃以下減壓濃縮，得到(1B)淡黃色固體6.8克(92.7％)，m.p.167～169℃，[α]27D＝+31.09°(c＝1.01，無水甲醇)。18.3 D-3-硝基-苯丙氨酸鹽酸鹽(1CC)(1AA)5.00克(18mmol)，在100毫升6M鹽酸中回流6小時，減壓蒸干，加無水乙醇濃縮一次，加入50毫升乙酸乙酯濾集固體，得(1CC)淡黃色針晶4.38克(99.8％)，m.p.241～243℃(分解)，[α]25D＝-9.4°(c＝1.05，無水甲醇)。18.4 L-3-硝基-苯丙氨酸鹽酸鹽(1DD)(1BB)5.00克(20mmol)，同上法處理。得(1DD)白色細針狀晶體4.65克(95.1％)，m.p.229～232℃(分解)，[α]25D＝+8.0°(c＝1.01，無水甲醇)。18.5 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1EE)(1AA)1.00克(3.64mmol)，加入10毫升甲醇溶解，冷卻攪拌條件下加入3毫升2M氫氧化鉀溶液，20分鐘后，加入1M鹽酸調至pH8.0，40℃以下減壓蒸干，加入15毫升水溶解，用1M鹽酸酸化至pH2～3，乙酸乙酯提取(3×20毫升)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮得淡黃色固體(1EE)0.88克(98.0％)，m.p.162～164℃。[α]20D＝-33.9°(c＝1.27，無水甲醇)。18.6 D-3-硝基-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1FF)。1.00克(1CC)，SOCl2/CH3OH法。得(1F)1.05克(99.3％)m.p.174～6℃。20D＝-13.5(c＝0.88，無水甲醇)。18.7 L-3-硝基-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1GG)。1.00克(1DD)，SOCl2/CH3OH法。得(1GG)1.05克(99.4％)m.p.170～2℃。[α]20D＝+14.1(c＝1.02，無水甲醇)。制備例19 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分19.1 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯12.16克(47.7mmol)，得(2AA)5.50克(90.5％)，為無色油狀物。19.2 L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2BB)拆分方法同(1BB)項。得白色固體4.76克(88.O％)，m.p.163～165℃，[α]20D＝+33.90°(c＝1.28，無水甲醇)。19.3 D-2-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(2CC)方法同(1CC)項。(2AA)4.73克(18.7mmol)，得(2CC)白色固體4.01克(97.7％)，m.p.215～218℃，[α]25D＝-12.2°(c＝1.02，無水甲醇)。19.4 L-2-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(2DD)方法同(1DD)項。(2BB)4.20克(18.7mmol)，得(2D)白色細針狀晶體4.09克(99.8％)，m.p.221～223℃，[α]25D＝+14.50°(c＝1.02，無水甲醇)。19.5 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2EE)方法同(1EE)項。(2AA)1.00克(3.96mmol)，得(2EE)白色固體0.65克(73.1％)，m.p.156～159℃。[α]20D＝-37.9°(c＝1.02，無水甲醇)。19.6 D-2-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2FF)。1.00克(2CC H2O)，SOCl2/CH3OH法。得(2FF)0.88克(89.5％)m.p.176～8℃。[α]20D＝-25.54(c＝1.21，無水甲醇)。19.7 L-2-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2GG)。1.00克(2DD·H2O)，SOCl2/CH3OH法。得(2GG)0.97克(98.6％)m.p.176～7℃。20D＝+29.33(c＝0.75，無水甲醇)。制備例20 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分20.1 D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3AA)拆分方法同(1AA)項。
D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯15.28克(62.5mmol)，得(3AA)無色針晶7.24克(91.5％)，m.p.107～108℃，[α]25D＝-8.14°(c＝1.02，無水甲醇)。20.2 L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3BB)方法同(1BB)項。得(3BB)白色固體6.71克(95.4％)，m.p.151～154℃，[α]25D＝+31.59°(c＝0.997，無水甲醇)。20.3 D-3-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(3CC)方法同(1CC)項。(3AA)5.00克(19.8mmol)，得(3CC)白色固體4.32克(99.6％)，m.p.237～239℃(分解)，[α]25D＝-2.5°(c＝1.00，無水甲醇)。20.4 L-3-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(3DD)方法同(1DD)項。5.00克(3BB)。得(3DD)白色固體4.91克(99.3％)，m.p.＞241℃(分解)，[α]25D＝+3.7°(c＝1.02，無水甲醇)。20.5 D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3EE)方法同(1EE)項。(3AA)1.00克(3.96mmol)，得白色固體0.87克(97.8％)，m.p.152～154℃。20D＝-33.6°(c＝1.19，無水甲醇)。20.6 D-3-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(3FF)。1.00克(3CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(3FF)1.05克(98.7％)m.p.151～3℃。[α]20D＝-12.52(c＝1.07，無水甲醇)。20.7 L-3-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(3GG)。1.00克(3CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(3GG)1.05克(98.7％)m.p.175.5～177.5℃。[α]20D＝+13.73(c＝0.75，無水甲醇)。制備例21 D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分21.1 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯37.43克(148mmol)，得(4AA)無色針晶16.60克(88.7％)，m.p.64～66℃，[α]25D＝-8.24°(c＝1.02，無水甲醇)。21.2 L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4BB)方法同(1BB)項。得(4BB)白色固體16.71克(99.9％)，m.p.133～136℃，[α]25D＝+28.8°(c＝1.00，無水甲醇)。21.3 D-4-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(4CC)方法同(1CC)項。(4AA)5.00克(19.8mmol)，得(4CC)白色固體4.23克(97.5％)，m.p.238～240℃(分解)，[α]25D＝-5.9°(c＝1.00，無水甲醇)。21.4 L-4-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(4DD)方法同(1DD)項。(4BB)5.00克(22.2mmo1)，得(4DD)白色固體4.88克(100％)，m.p.242～244℃(分解)，[α]25D＝+2.9°(c＝0.988，無水甲醇)。21.5 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4EE)方法同(1EE)項。(4AA)1.00克(3.96mmol)，得(4E)白色固體0.84克(94.4％)，m.p.139～142℃。20D＝-34.0°(c＝1.20，無水甲醇)。21.6 D-4-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(4FF)。1.00克(4CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(4FF)1.06克(100.0％)m.p.190～2℃。[α]20D＝-15.67(c＝1.04，無水甲醇)。21.7 L-4-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(4GG)。1.00克(4DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(4GG)1.06克(99.6％)m.p.185～7℃。[α]20D＝+14.76(c＝1.14，無水甲醇)。制備例22 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分22.1 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯10.0克(37mmol)，得(5AA)白色針晶4.7克(94.0％)，m.p.87～8℃，[α]25D＝+10.6°(c＝0.99，無水甲醇)。22.2 L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5BB)方法同(1BB)項。得(5BB)白色固體4.17克(93.0％)，m.p.166～7℃，[α]25D＝-12.2°(c＝1.02，無水甲醇)。22.3 D-2-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(5CC)方法同(1CC)項(5AA)3.47克(12.87mmol)，得(5CC)白色晶體2.97克(97.7％)，m.p.233～6℃(分解)，[α]25D＝+15.9°(c＝1.02，無水甲醇)。22.4 L-2-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(5DD)方法同(1DD)項。(5BB)3.97克(16.44mmol)，得(5DD)白色晶體3.80克(99.4％)，m.p.243～7℃(分解)，[α]25D＝-17.3°(c＝1.01，無水甲醇)。22.5 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5EE)方法同(1EE)項。(5AA)1.00克(3.7mmol)，得(5EE)白色固體0.87克(97.1％)，m.p.165～7℃。20D＝+11.8°(c＝1.26，無水甲醇)。22.6 D-2-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(5FF)。1.00克(5CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(5FF)1.05克(99.1％)m.p.147～9℃。[α]20D＝+28.3(c＝1.15，無水甲醇)。22.7 L-2-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(5GG)。1.00克(5DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(5GG)1.06克(100.0％)m.p.144～6℃。[α]20D＝-29.64(c＝0.685，無水甲醇)。制備例23 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分23.1 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯16.5克(61.05mmol)，得(6AA)白色針晶6.67克(80.72％)，m.p.70～2℃，[α]25D＝-5.8°(c＝1.03，無水甲醇)。23.2 L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6BB)方法同(1BB)項。得(6BB)白色固體6.30克(85.2％)，m.p.155～7℃，[α]25D＝+35.2°(c＝1.01，無水甲醇)。23.3 D-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(6CC)方法同(1C)項。(6AA)5.17克(19.18mmol)，得(6CC)白色固體4.29克(94.8％)，m.p.239～242℃(分解)，[α]25D＝-6.4°(c＝1.02，無水甲醇)。23.4 L-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(6DD)方法同(1DD)項。(6BB)5.38克(22.0mmol)，得(6DD)白色晶體5.06克(96.2％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+6.7°(c＝1.01，無水甲醇)。23.5 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6EE)方法同(1EE)項。(6AA)1.00克(3.7mmol)，得(6EE)白色固體0.85克(94.9％)，m.p.151～3℃。20D＝-29.4°(c＝1.02，無水甲醇)。23.6 D-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(6FF)。1.00克(6CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(6FF)0.80克(75.5％)m.p.122～3℃。[α]20D＝-12.27(c＝0.92，無水甲醇)。23.7 L-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(6GG)。1.00克(6DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(6GG)1.06克(100.0％)m.p.120～2℃。[α]20D＝+13.14(c＝0.845，無水甲醇)。制備例24 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯的拆分24.1 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7AA)拆分時采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯20.0克(63.5mmol)，得(7AA)無色針晶9.41克(94.1％)，m.p.96～98℃，[α]25D＝-20.0°(c＝1.03，無水甲醇)。24.2 L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7BB)方法同(1BB)項。針狀晶體9.17克(100.7％)，m.p.158～160℃，[α]25D＝+39.9°(c＝1.02，無水甲醇)。24.3 D-4-溴-苯丙氨酸鹽酸鹽(7CC)方法同(1CC)項。(7AA)5.00克(16.0mmol)，得(7CC)白色固體4.33克(96.9％)，m.p.244～6℃(分解)，[α]25D＝-4.90°(c＝1.01，無水甲醇)。24.4 L-4-溴-苯丙氨酸鹽酸鹽(7DD)方法同(1DD)項。(7BB)9.15克(32.0mmol)，得(7DD)白色晶體8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+4.75°(c＝0.998，無水甲醇)。24.5 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7EE)方法同(1EE)項。(7AA)1.00克(3.2mmol)，得(7EE)白色固體0.87克(95.6％)，m.p.152～4℃。20D＝-37.9°(c＝1.00，無水甲醇)。24.6 D-4-溴-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(7FF)。1.00克(7CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(7FF)1.01克(96.2％)m.p.198～200℃。[α]20D＝-16.02(c＝1.33，無水甲醇)。24.7 L-4-溴-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(7GG)。1.00克(7DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(7GG)1.05克(99.9％)m.p.190～2℃。[α]20D＝+22.88(c＝0.75，無水甲醇)。制備例25 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分25.1 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8AA)拆分方法同(1AA)項。
D，L-N-乙酰-4-氟—苯丙氨酸乙酯17.6克(6lmmol)，得(8AA)無色細針晶8.04克(91.4％)，m.p.92～94℃，[α]20D-7.16°(c＝1.145，無水甲醇)。25.2 L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8BB)方法同(1BB)項。得白色固體7.26克(91.4％)，m.p.163～165℃，[α]20D＝+33.33°(c＝0.96，無水甲醇)。25.3 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(8CC)方法同(1CC)項。
(8AA)5.00克(17.4mmol)，得(8CC)白色固體4.18克(94.6％)，m.p.230～232℃(分解)，[α]25D＝-6.5°(c＝1.02，無水甲醇)。25.4 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(8DD)方法同(1DD)項。
(8BB)5.00克(19.3mmol)，得(8DD)白色針晶4.76克(97.3％)，m.p.233～237℃(分解)，[α]25D＝+6.4°(c＝1.01，無水甲醇)。25.5 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8EE)方法同(1EE)項。
(8AA)1.00克(3.48mmol)，得白色固體0.87克(96.4％)，m.p.160～163℃。[α]20D＝-32.4°(c＝1.27，無水甲醇)。25.6 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(8FF)。3.00克(8CC)，SOCl2/CH3OH法。得(8FF)2.89克(91.3％)m.p.178～182℃。20D＝-12.40(c＝1.12，無水甲醇)。25.7 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(8GG)。1.00克(8DD)，SOCl2/CH3OH法。得(8GG)1.08克(99.9％)m.p.182～3℃。20D＝+13.81(c＝1.00，無水甲醇)。制備例26 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分26.1 D-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9AA)拆分時采用枯草桿菌蛋白酶[4]，其余方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯5.0克(16.34mmol)，得(9AA)無色針晶2.34克(93.6％)，m.p.89～91℃，[α]25D＝+7.0°(c＝1.00，無水甲醇)。26.2 L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9BB)方法同(1BB)項。得(9BB)針狀晶體2.28克(100.4％)，m.p.177～9℃，[α]25D＝-2.5°(c＝1.00，無水甲醇)。26.3 D-2，4-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(9CC)方法同(1CC)項。
(9AA)1.75克(5.76mmol)，得(9CC)白色固體1.51克(97.0％)，
m.p.240～1℃(分解)，[α]25D＝-9.29°(c＝1.01，無水甲醇)。26.4 L-2，4-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(9DD)方法同(1DD)項。
(9BB)2.47克(10.0mmol)，得(9DD)白色晶體8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+9.00°(c＝0.995，無水甲醇)。26.5 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9EE)方法同(1EE)項。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯1.00克(3.29mmol)，得(9EE)白色固體0.908克(95.3％)，m.p.132～5℃。26.6 D-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(9FF)。1.00克(9CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(9FF)1.07克(97.0％)m.p.133～4℃。20D＝-29.6(c＝1.50，無水甲醇)。26.7 L-2，4-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(9GG)。1.00克(9DD)，SOCl2/CH3OH法。得(9GG)1.03克(98.0％)m.p.175～8℃。[α]20D＝+16.86(c＝0.80，無水甲醇)。制備例27 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分27.1 D-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10AA)拆分時采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯18.0克(59.2mmol)，得(10AA)無色針晶8.80克(97.8％)，m.p.125～126℃，[α]25D＝-14.45°(c＝1.04，無水甲醇)。27.2 L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸(10BB)方法同(1BB)項。得(10BB)針狀晶體7.97克(97.4％)，m.p.179～181℃，[α]25D＝+14.27°(c＝1.08，無水甲醇)。27.3 D-2，5-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(10CC)方法同(1CC)項。
(10AA)4.00克(13.16mmol)，得(10CC)白色固體3.54克(99.5％)，m.p.227～230℃(分解)，[α]25D＝-25.7°(c＝1.05，無水甲醇)。27.4 L-2，5-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(10DD)方法同(1DD)項。
m.p.176～8℃。[α]25D＝-15.93°(c＝0.999，無水甲醇)。27.6 D-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(10FF)。1.00克(10CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(10FF)1.10克(99.7％)m.p.157～9℃。20D＝--24.72(c＝1.06，無水甲醇)。27.7 L-2，5-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(10GG)。1.00克(10DD)，SOCl2/CH3OH法。得(10GG)1.05克(99.9％)m.p.182～3℃。20D＝+32.70(c＝0.85，無水甲醇)。制備例28 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯的拆分28.1 D-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲乙酯(11AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸乙酯7.7克(26.6mmol)，得(11AA)白色固體3.46克(89.9％)，m.p.122～4℃，[α]25D＝-23.8°(c＝1.16，無水甲醇)。28.2 L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸(11BB)方法同(1BB)項。得(11BB)白色固體3.44克(93.9％)，m.p.149～151℃，[α]25D＝+43.2°(c＝1.01，無水甲醇)。制備例29 D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分29.1 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯(13AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯19.0克(67.02mmol)，得(13AA)無色針晶9.22克(92.0％)，m.p.130～2℃，[α]25D＝+9.40°(c＝1.165，無水甲醇)。29.2 L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13BB)方法同(1BB)項。得(13BB)針狀晶體7.74克(90.0％)，m.p.174～6℃，[α]25D＝-11.86°(c＝1.265，無水甲醇)。29.3 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(13CC)方法同(1CC)項。
(13AA)2.0克(7.05mmol)，得(13CC)白色固體1.68克(95.2％)，m.p.224～7℃(分解)，[α]25D＝-5.18°(c＝1.10，無水甲醇)。29.4 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(13DD)方法同(1DD)項。
(13BB)2.00克(7.05mmol)，得(13DD)白色晶體1.67克(95.0％)，
m.p.222～5℃(分解)，[α]25D＝+6.03°(c＝1.09，無水甲醇)。29.5 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13EE)方法同(1EE)項。
(13AA)1.00克(3.53mmol)，得(13EE)白色固體0.88克(97.6％)，m.p.173～5℃。[α]25D＝+10.35°(c＝0.85，無水甲醇)。29.6 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(13FF)。1.00克(13CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(13FF)1.08克(97.1％)m.p.188～190℃。20D＝-33.89(c＝0.95，無水甲醇)。29.7 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(13GG)。260毫克(13DD)，SOCl2/CH3OH法。得(13GG)260毫克(95.0％)m.p.174～6℃。20D＝+31.75(c＝0.63，無水甲醇)。制備例30 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分30.1 D-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15AA)采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)，D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯21.1克(68.7mmol)，得(15AA)無色細小針晶10.3克(97.6％)，m.p.97～98℃，[α]25D＝+7.9°(c＝1.00，無水甲醇)30.2 L-N-乙酰-4-羧基乙酯-苯丙氨酸(15BB)方法同(1BB)項。針狀晶體8.9克(92.8％)，m.p.174～175℃，[α]25D＝-6.37°(c＝1.02，無水甲醇)。30.3 D-4-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(15CC)方法同(1CC)項。(15AA)4.07克(13mmol)，得(15CC)白色固體3.28克(100％)，m.p.＞280(分解)，[α]20D＝-33.96°(c＝1.96，二甲亞砜)。30.4 L-4-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(15DD)。方法同(1DD)項。(15BB)4.43克(16mmol)，得白色固體3.87克(99.3％)，m.p.＞280(分解)，[α]20D＝29.72°(c＝1.24，二甲亞砜)。30.5 D-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(15EE)。1.00克(15CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(15EE)1.17克(95.3％)m.p.138～140℃。20D＝--15.02(c＝1.21，無水甲醇)。30.6 L-4-羧基-苯丙氨酸二甲酯鹽酸鹽(15FF)。1.00克
(15DD)，SOCl2/CH3OH法。得(15FF)1.03克(92.4％)m.p.178～180℃。[α]20D＝+17.09(c＝1.11，無水甲醇)。制備例31 D，L-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分31.1 D-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16AA)拆分方法同(1AA)項。
按(1.16.3)項的合成產物55克(0.18mmol)，得(16AA)為油狀物。31.2 L-N-乙酰-3-羧基乙酯-苯丙氨酸(16BB)方法同(1BB)項。針狀晶體23.0克(92.0％)，m.p.148～9℃，[α]25D＝+39.37°(c＝1.625，無水甲醇)。IR 3321(NH)，2989(CH)，1707(C＝O，COOEt)，1615(C＝0，NHCOCH3)，1566(CH，苯環)，760，704(苯環3-羧基乙酯取代)。31.3 D-3-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(16CC)方法同(1C)項。(16AA)的最終產物，得(16CC)白色固體21.5克(97.8％)，m.p.265～270(分解)，[α]20D＝-26.65°(c＝1.314，二甲亞砜)。31.4 L-3-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(16DD)。方法同(1DD)項。(16BB)1.00克(3.58mmol)，得白色固體0.84克(95.5％)，m.p.270～2(分解)，[α]20D＝+28.03°(c＝1.106，二甲亞砜)。31.5 D-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(16EE)。1.00克(16CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(16EE)1.18克(95.8％)m.p.192～194℃。20D＝-13.02(c＝1.26，無水甲醇)。31.6 L-3-羧基-苯丙氨酸二甲酯鹽酸鹽(16FF)。1.00克(16DD)，SOCl2/CH3OH法。得(16FF)1.08克(92.4％)m.p.163～5℃。20D＝+18.85(c＝0.96，無水甲醇)。制備例32 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯的拆分32.1 D-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17AA)拆分方法同(1AA)項。D，L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯10.0克。
得(17AA)4.55克(91％)。m.p.86～88℃，[α]20D＝+7.8(c＝1.16，無水甲醇)。32.2 L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧酸(17BB)方法同(1BB)項。
得(17BB)4.15克(95.2％)。m.p.151～3℃，[α]20D＝-5.5(c＝1.22，無水甲醇)。
實施例1HIM-CO-Leu-DTrp-DPhe(2-F)-OH的制備將D-色氨酸乙酯鹽酸鹽135毫克(0.5mmol)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉0.06毫升(0.5mmol)，加入5毫升THF，溶解，加入六亞甲基胺甲酰亮氨酸128毫克(0.5mmol)，加入HOBt81毫克(0.6mmol)和DIC 76毫克(0.6mmol)，攪拌反應4小時。濃縮，加入乙酸乙酯，分別用水、0.5M鹽酸(10毫升)、飽和碳酸氫鈉(10毫升)和飽和氯化鈉(10毫升)洗一遍，濃縮乙酸乙酯層，得無色油狀物。加入2毫升甲醇，冷卻條件下加2毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌1小時。用1M鹽酸調pH8.0，濃縮，加入20毫升水，1M鹽酸酸化pH3，析出固體，濾集干燥得170毫克。
D-2氟苯丙氨酸乙酯鹽酸124.0毫克(0.5mmo1)，溶于2毫升DMF中，加入N-甲基嗎啡啉0.06毫升(0.5mmol)，加入5毫升THF，溶解，加入上述全部固體，加入HOBt81毫克(0.6mmol)和DIC76毫克(0.6mmol)，攪拌反應4小時。濃縮，加入乙酸乙酯，分別用水、0.5M鹽酸(10毫升)、飽和碳酸氫鈉(10毫升)和飽和氯化鈉(10毫升)洗一遍，濃縮乙酸乙酯層，得無色油狀物，甲醇-水重結晶，濾集固體。固體中加入2毫升甲醇，冷卻條件下加2毫升1M氫氧化鈉，室溫下攪拌1小時。用1M鹽酸調pH8.0，濃縮，加入20毫升水，1M鹽酸酸化pH3，析出固體，濾集干燥得約250毫克(79.6％)標題化合物。TLC Rf＝0.54(氯仿∶甲醇∶醋酸9∶1∶0.5)。FAB-MS m/z 629.3(M＋1)，651.3(M＋Na)。HPLC Rt＝14.44分(流動相A液50％～0％，B液50％～100％/10分鐘，A液0％～50％，B液100％～50％/10～20分鐘，流速1.00毫升/分鐘)高效液相條件泵Waters 600E型色譜柱Kromasil-C18填料5μm，4.6×250mm流動相 A0.1％三氟醋酸/水B70％乙腈/0.1三氟醋酸-水紫外檢測器 Spectra-Physics UV1000，波長280nm。
實施例2-53按類似于實施例1的方法和步驟，制備出三肽化合物2-53。實施例1-53化合物均經過FAB-MS鑒定，同時用HPLC進行了純度分析，具體見表1。
表1實施例1-53化合物的質譜和高效液相分析序一級結構 質譜(Ms)HPLC號 保留時間/含量1 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 587(M＋1) 5.65/96.7％d2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH601.1(M＋1)5.82/97.6％d3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH 601.3(M＋1)6.45/99.2％d4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH608.3(M＋1)8.20/93.3％d5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH608.2(M＋1)8.53/94.5％d6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH608.2(M＋1)8.10/95.O％d7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH 624.3(M＋1)8.23/100％d8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH 623.2(M＋1)9.21/98.8％d9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH 623.2(M＋1)9.93/100％d10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH 669.1(M＋1)8.77/94.5％d11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH 635.1(M＋1) 8.07/99.1％d12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH 690.2(M＋1)**8.47/89.5％d13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH 690.4(M＋1)*** 7.37/95.1％d14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH 656.3(M＋1)* 9.83/98.2％d15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH 659.1(M＋1) 12.71/93.1％d16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH 659.3(M＋1) 12.01/100％d17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH 638.4(M＋1) 18.11/100％d18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH 622.O(M＋1)* 9.12/95.8％d19 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH 622.1(M＋1)* 8.69/97.7％d20 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH 622.1(M＋1)* 8.86/98.0％d21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH 683.1(M＋1)* 1.77/97.8％d22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH 649.2(M＋1)* 9.59/99.0％d23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)--D-Trp-OH656.4(M＋1)* 13.01/98.O％d24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp- 848.2(M＋1)*** 7.82/85.4％dOH25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp- 848.0(M＋1)*** 8.26/96.4％dOH26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-652.4(M＋1)* 14.52/99.8％dOH27 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 601.3(M＋1)* 4.83/95.0％d28 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 601.3(M＋1)* 5.07/97.4％d29 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 601.3(M＋1)* 4.58/99.0％d30 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH 617.4(M＋1)* 7.75/92.0％d31 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH 617.2(M＋1)* 5.42/98.3％d32 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH 617.2(M＋1)* 5.04/96.3％d33 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH 662.0(M＋1)* 5.21/93.5％d34 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe((3-NO2)-OH 650.2(M＋Na)* 4.74/96.8％d35 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F-3-Cl)-OH 635.2(M＋1)* 5.18/95.3％d36 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH 652.0(M＋1)* 6.12/97.0％d37 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH 652.1(M＋1)* 7.57/96.4％d38 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH655.2(M＋1)*** 4.98/92.6％d39 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH655.0(M＋1)** 5.05/96.8％d40苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)- 631.4(M＋1)*6.91/97.4％dOHo-CPh 41o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH 557.3(M＋1)*9.73/100％c42o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH 557.1(M＋1)*9.63/94.0％c43o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH 557.1(M＋1)*12.9/100％c44o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH 573.0(M＋1)*9.22/92.7％c45o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH 596.2(M＋Na)* 9.89/97.0％c46o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH 573.2(M＋1)*7.17/98％c47o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH 618.1(M＋1)*7.7/98％c48o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH584.0(M＋1)*5.22/100％c49o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH625.2(M＋1)** 5.01/97.4％c50o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-COON)-OH625.0(M＋1)*** 5.06/98.4％c51o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH 608.2(M＋1)*5.89/98.0％c52o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH 608.2(M＋1)*5.01/99.O％c53o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH 587.2(M＋1)*5.97/98.0％ca 時間(min) 流速 A％ B％c 時間(min) 流速 A％ B％0 1 40 60 0 0.650 5010 1 0 100101 0 10020 1 40 60 201 50 50b時間(min)流速A％B％d 時間(min)流速A％B％0 0.6 50 50 0 1 10 9010 1 0 100101 0 10020 1 20 80*(皂化前的甲酯)，**(皂化前的二乙酯)，***(皂化前的二甲酯)。生物活性實驗材料Wistar大鼠 軍事醫學科學院實驗動物中心臺式自動平衡記錄儀 上海大華儀器廠ET-1American peptide company10％碳酸鉀溶液 自配改良Kreb’s-Ringer緩沖液自配實驗方法樣品溶液配制定量稱取樣品(實施例1-53的化合物)2×10-5摩爾，加入0.5毫升10％堿金屬碳酸鹽溶解，用改良Kreb’s-Ringer緩沖液定量稀釋為5.0毫升，作為貯備液冰箱中保存。用緩沖液稀釋為10-6、10-7、10-8和10-9nM四個濃度。體外血管實驗將大鼠斷頭處死，迅速開胸，摘取主動脈，置于盛有血管營養液的培養皿中，清除血污，仔細分離血管周圍組織，剪成長約3毫米的動脈環，分別將兩根直徑為0.1毫米的不銹鋼鋼絲小心穿入，作成三角環狀。隨后置于盛有10毫升血管營養液的37℃恒溫浴槽中，下端固定，上端通過張力換能器連于自動臺式平衡記錄儀，持續同入95％氧氣和5％二氧化碳混合氣。動脈環負荷0.5克，穩定之后開始給藥。拮抗實驗先用10nM量的ET-1誘發血管環收縮，約10分鐘左右，達到平臺后，給予10-9M樣品，觀察對抗收縮效應。當低濃度沒效時，逐漸升高濃度至10-6M。結果按照上述方法，活性結果見下表藥理活性結果序號 一級結構 拮抗活性(mmol/L)10-610-710-810-91 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH ++2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH +3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH+4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH +5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH +6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH +7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH +8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH +9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH++10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH +11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH+12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH +13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH +14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH++15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH +16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH ++17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH +18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH +19 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH +20 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH -21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH +22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH +23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)—D-Trp-OH+24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH+25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO D-Trp-OH)-D-Trp-OH++26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)D-Trp-OH +27 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH +28 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH +29 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH ++30 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH +31 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH +32 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH +33 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH +34 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe((3-NO2)-OH ++35 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F-3-Cl)-OH +36 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH +37 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH +38 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH+39 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH+40 苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH +o-CPh 41 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH42o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH+43o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH+44o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH +45o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH +46o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH +47o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH +48o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH +49o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH -50o-CPh-D—Trp-D-Phe(4-COOH)-OH-51o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH+52o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH-53o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH+++拮抗活性很強； +拮抗活性中等 -不表現拮抗活性
權利要求
1.式I三肽衍生物或其立體異構體RCO-A-B-C-OH I其中，R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp。
2.權利要求1的三肽衍生物或其立體異構體。其選自下面三肽化合物1 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH19HIM-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH20HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH21HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH24HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH27苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Pre(2-F)-OH28苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Pre(3-F)-OH29苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Pre(4-F)-OH30苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH31苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH32苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH33苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH34苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe((3-NO2)-OH35苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F-3-Cl)-OH36苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH37苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH38苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH39苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH40苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OHo-CPh 41o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH42o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH43o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH44o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH45o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH46o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH47o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH48o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH49o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH50o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH51o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH52 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH53 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH。
3.權利要求1或2的三肽衍生物或其立體異構體，其選自下面三肽化合物1 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)--D-Trp-OH24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH。
4.藥物組合物，其包括至少一種式I三肽衍生物其立體異構體RCO-A-B-C-OH I其中，R為六亞甲基亞胺基或苯氧基，或RCOA為下式基團， A為Leu，Pro或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，B為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，C為D-Trp，D-Pya，D-Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，羧基或C1-4烷基單取代或二取代，條件是B和C中至少一個為D-Trp，及藥用載體或賦形劑。
5.權利要求4的藥物組合物，其中式I三肽衍生物或其立體異構體選自1 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2 HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3 HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH19HIM-CO-Leu-D-Phe(3-F)-D-Trp-OH20HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F)-D-Trp-OH21HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH24HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-OH27苯氧基-CO-Pho-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH28苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH29苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH30苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH31苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH32苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH33苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH34苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe((3-NO2)-OH35苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-F-3-Cl)-OH36苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH37苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH38苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH39苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH40苯氧基-CO-Pro-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OHo-CPh 41o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH42o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH43o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH44o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH45o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH46o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH47o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH48 o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH49 o-CPh-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH50 o-CPh-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH51 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH52 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH53 o-CPh-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH。
6.權利要求4或5的藥物組合物，其中式I三肽衍生物或其立體異構體選自1HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-OH2HIM-CO-GABA-D-Trp-D-Trp-OH3HIM-CO-NH-(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-OH4HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-F)-OH5HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-F)-OH6HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-F)-OH7HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-Cl)-OH8HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl)-OH9HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Cl)-OH10 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-Br)-OH11 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-NO2)-OH12 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-COOH)-OH13 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(4-COOH)-OH14 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(3-Cl-4-F)-OH15 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，4-Cl)-OH16 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2，5-Cl)-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-OH18 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-F)-D-Trp-OH21 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-Br)-D-Trp-OH22 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-NO2)-D-Trp-OH23 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-OH24 HIM-CO-Leu-D-Phe(3-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH25 HIM-CO-Leu-D-Phe(4-CO-D-Trp-OH)-D-Trp-OH26 HIM-CO-Leu-D-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-OH。
7.式I三肽衍生物或其立體異構體衍生物的制備方法，其包括1)將RCO-A-OH化合物與B-OP在DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中反應，其中R，A，B，如上定義，P為C1-4烷基，生成RCO-A-B-OP，2)將1)中所得產物在1M氫氧化鈉/甲醇溶液中皂化，然后在1M鹽酸中酸化，生成RCO-A-B-OH，3)將2)中產物RCO-A-B-OH與C-OP在DMF，DCM，NMM，DIC-HOBt中反應，其中P為C1-4烷基，生成RCO-A-B-C-OP，所得產物如2)中所述進行反應，生成式IRCO-A-B-C-OH。
全文摘要
本發明涉及具有內皮素拮抗活性的三肽衍生物,其特備方法,含它們的藥物組合物及它們在預防或治療與內皮素有關疾病的用途。
文檔編號A61P9/00GK1330075SQ0011866
公開日2002年1月9日 申請日期2000年6月21日 優先權日2000年6月21日
發明者劉克良, 于文勝, 梁遠軍, 汪海, 趙玉芬, 丁振闿 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所