專利名稱：紅曲及其提取物在制備藥品或保健品食品中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及紅曲及其提取物的用途，尤其涉及在制備藥品或保健食品中的用途。
紅曲為曲霉科紅曲霉菌寄生在粳米或其它基質原料上感染而成的一味傳統中藥，具有活血化瘀、健脾消食之功效，中醫傳統用于治療食積飽脹、瘀滯腹痛等癥。現代醫學證明紅曲有降血壓、降脂、降膽固醇和降血糖的作用(參見中國發明專利申請93100737.2、97103970.4和97112548.1)，臨床上主要應用紅曲直接粉碎后加入賦形劑制成的片劑或膠囊劑，治療高血脂癥及其相關的心腦血管疾病。
據統計報道，隨著人口的老齡化，全球骨質疏松患者已有二億多人，尤其成為絕經期及絕經后婦女的常見病和多發病。骨質疏松癥是以骨量減少為特征的骨的系統性疾病，臨床表現為骨吸收大于骨生成，骨密度降低、骨骼變脆，易造成骨折。臨床治療骨質疏松的藥物主要有雌激素、降鈣素、鈣劑、活性維生素D、氟化物及雙磷酸鹽類等，但這些化學藥物或存在著應用上的限制或長期服用后會產生依賴性，并有誘發其它病變的毒副作用(《中華內分泌代謝雜志》，1998；14(1)29～33)。目前應用的治療骨質疏松藥降鈣素等，主要是阻止鈣質進一步流失，但對促進骨質細胞生長作用不明顯(《中華實驗外科雜志》1998；15(5)465～466)。另外，兒童在生長發育過程中，為促進骨胳生長及防止缺鈣，臨床上常使用龍牡壯骨沖劑。
本發明的目的在于提供中藥紅曲及其提取物在制藥或保健品中的新用途。
實際上，本發明涉及利用紅曲及其提取物具有的促進和恢復骨質細胞生長，增加骨密度的作用，制備可治療或預防骨質疏松癥的藥品或保健食品。
本發明還涉及利用紅曲及其提取物的促進骨質細胞生長、增加骨密度的作用，制備促進兒童骨胳生長的藥品或保健食品。
為了更好地理解本發明的實質，下面用紅曲乙酸乙酯提取物的藥理試驗及結果來說明其在制藥領域中的新用途。同樣地，將紅曲、紅曲的其它溶劑提取物或紅曲與其提取物合用也可達到同樣的藥理效果，區別僅在使用的量上的不同。
首先，用粳米或其它基質為原料，按傳統方法或文獻方法，將紅曲霉菌接種，使其發酵培養，至全部米粒或基質變為紫紅色時，得到紅曲藥材(《中藥大辭典》上冊，991頁，上海科技出版社，77年版；中國發明專利申請90110240.7；93100737.2；97112548.1)。
能夠實現本發明目的的紅曲可由以下紅曲霉菌接種發酵產生紫紅曲菌(Monascus purpucus)、發白紅曲菌(M.albidus)、煙色紅曲菌(M.fuliginosusSato)、叢毛紅曲菌(M.pilosus Sato)、軟毛紅曲菌(M.pubigerus Sato)、巴斯紅曲菌(M.Paxii)和紅色霉曲菌(M.ruber van Tieghem)等。
然后，稱取1.0公斤紅曲，滅菌、烘干和粉碎后，用乙酸乙酯提取，提取液回收到溶劑后，得62.2克干浸膏。稱取40.0干浸膏，加入800毫升蒸餾水，加適量的常規助溶劑，加熱攪拌，過濾、滅菌、密封備用。
紅曲原料也可用堿水或有機溶媒提取，例如用95％乙醇、丙酮、氯仿、石油醚等。用有機溶媒提取時，以95％乙醇為溶劑，所得的紅曲提取物收率最高；以石油醚為溶劑，所得的紅曲提取物收率最低。用95％乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿提取時雜質較多，如經過加堿溶解、酸化沉淀的步驟進行精制處理后，得到的提取物抗骨質疏松的活性更高。
1、動物急性毒性試驗(1)口服給藥健康雄性小鼠，體重18～25克，用5％紅曲乙酸乙酯提取物水溶液灌胃0.5ml/10g(相當于生藥38.3g/Kg)，連續一周后，未見小鼠死亡。
(2)注射給藥健康雄性小鼠，體重18～25克，用5％紅曲乙酸乙酯提取物水溶液進行腹腔注射，連續一周，觀察動物死亡情況。紅曲乙酸乙酯提取物的LD50值為18.32±4.82g/kg。
2、用常規藥理試驗觀察了以上方法制備的紅曲乙酸乙酯提取物對新生大鼠顱骨成骨細胞增殖的影響。
按文獻方法(參見《上海醫科大學學報》1991；18475)對新生大鼠顱骨成骨細胞進行分離和培養，傳二代成骨細胞經消化后以含10％胎牛血清的RPMI1640稀釋，以2×104/孔加入，96孔培養板培養24小時，以每6孔為一平行樣本，加入不同濃度的待測樣品溶液或對照品溶液，培養三天后，以3H-胸腺嘧啶核苷摻入法(參見《BONE》1996；1859～65)檢測，結果列于表1。
表1紅曲乙酸乙酯提取物對新生大鼠顱骨成骨細胞增殖影響測定結果(x±s，n＝6)藥物濃度(mg/L) CMP值空白對照組 380.3±31.310 404.2±46.2*50 444.8±55.3**100 810.5±90.1***1000 1113.2±89.8***5000 1130.4±105.2***注與對照組對比*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01本研究結果顯示紅曲的乙酸乙酯提取物以劑量依賴的方式，促進成骨細胞的增殖，當低濃度時(10mg/L)，其對成骨細胞增殖作用影響不大(P＞0.05)；而當濃度為50gm/L時，已表現出明顯的促進成骨細胞增殖作用(P＜0.05)。在50-1000mg/L范圍內，其促進作用隨著濃度的升高而迅速增加，于1000 mg/L時達最大效應(P＜0.01)，并在濃度大于1000mg/L后其作用呈飽和趨勢。
3、紅曲及其乙酸乙酯提取物對去卵巢雌性大鼠骨質密度的增強作用選取3月齡SD雌性大鼠，體重200±10g，隨機分為7組生理鹽水對照組、去勢組、去勢+龍牡壯骨沖劑組(龍牡壯骨沖劑為市售的預防及治療兒童骨胳發育不良及缺鈣的藥品，武漢健民制藥廠生產，鄂衛藥準字(90)1324號)、去勢+紅曲原料組、去勢+紅曲乙酸乙酯提取物組(分為10、50和100mg/kg/天三個劑量組)，所有大鼠均以3％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，除對照組行單純開腹之外(假手術)，其余6組均行雙側卵巢切除術，術后大鼠于室溫下分籠飼養，自由攝水，每天每只予以標準飼料18g。術后三周開始給治療組大鼠灌胃給藥，按常法處理(參見《中華婦科雜志》1999，34(2)91-93)，分別于術后一個月、二個月和三個月用雙能X線吸收測量儀測定股骨中端骨密度，其結果列于表2。
表2各組大鼠術后股骨骨密度的變化(g/cm2，x±s，n＝8)組別 劑量mg/kg/天1個月 2個月3個月對照組 -- 0.241±0.034 0.234±0.023 0.236±0.021去勢組(模型-- 0.198±0.024**0.187±0.032***0.183±0.022***組)去勢+龍牡壯50000.208±0.033△0.222±0.033△△0.224±0.031△△△骨沖劑組去勢+紅曲原20000.202±0.026△0.215±0.021△△0.221±0.024△△△料組去勢+紅曲乙10 0.204±0.025△0.208±0.021△0.216±0.028△△酸乙酯提取物去勢+紅曲乙50 0.206±0.021△0.215±0.022△△0.226±0.026△△△酸乙酯提取物去勢+紅曲乙100 0.222±0.020△△0.227±0.026△△△0.231±0.024△△△酸乙酯提取物與對照組比較*p＞0.05 **p＜0.05 ***p＜0.01與模型組比較△P＞0.05△△P＜0.05△△△P＜0.01以上動物體內試驗結果表明紅曲的乙酸乙酯提取物和紅曲原料均可使去卵巢雌性大鼠的骨質密度增強，這種作用并隨著服藥時間的增長而逐漸明顯。其中，紅曲原料以2000mg/kg/天給藥的作用與龍牡壯骨沖劑以5000mg/kg/天給藥的作用相當。紅曲的乙酸乙酯提取物還以劑量依賴方式促進去卵巢雌性大鼠骨密度的提高，當以100mg/kg/天劑量服用紅曲乙酸乙酯提取物時，在術后一個月時已表現出明顯的提高骨質密度作用(p＜0.05)，而在術后二個月時便達最大效應(P＜0.01)。
從以上結果，可得出本發明的優點在于本發明提供了紅曲及其提取物具有促進和恢復骨質細胞增殖及增加骨密度作用，可用于制備預防或治療病理性或生理性的骨質細胞減少或不足及骨密度降低的藥品或保健食品。
本發明還提供了紅曲及其提取物可用于制備預防或治療骨質疏松癥的藥品或保健食品。
本發明尚提供了紅曲及其提取物具有促進兒童骨胳生長的作用，可用于制備促進兒童骨胳生長的藥品或保健食品。
下面將描述本發明的實施例，但本發明的內容完全不局限于此。
實施例1采用發酵完全的紅曲原料2.0kg，粉碎后用95％乙醇提取，合并提取液，減壓回收溶劑后得到210.3g干浸膏。然后取該干浸膏200g、微粉硅膠200g、無水乳糖200g、硬脂酸鎂50g，混合均勻后用少量95％乙醇為潤濕劑，按公知技術制粒，再制成每粒含150mg提取物的膠囊劑。
實施例2采用發酵完全的紅曲原料2.5kg，粉碎后用乙酸乙酯提取，合并提取液，減壓回收溶劑后得到120.5g干提取物。然后取提取物100g、微粉硅膠150g、無水乳糖150g、硬脂酸鎂50g，按實施例1所述方法，制成每粒含100mg提取物的膠囊劑。
實施例3采用發酵完全的紅曲原料2.5kg，粉碎后用氯仿提取，合并提取液，減壓回收溶劑后得到132.6g干提取物。然后取提取物100g，加入與實施例2相同種類和比例的賦形劑，按實施例1所述方法，制成每粒含100mg提取物的膠囊劑。
實施例4采用發酵完全的紅曲原料2.0kg，粉碎后用丙酮提取，合并提取液，減壓回收溶劑后得到184.7g干提取物。然后取提取物150g，加入與實施例1相同種類和比例的賦形劑，按實施例1所述方法，制成每粒含150mg提取物的膠囊劑。
實施例5采用發酵完全的紅曲原料4.0kg，粉碎后用2.0％NaOH水溶液浸泡，三天后開始滲漉提取，不斷添加NaOH水溶液至流出液色淺時止。合并滲漉液，用10％HCL中和至中性，再用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，得到62.5g干浸膏。然后取60g干浸膏，加入與實施例2相同種類和比例的賦形劑，按實施例1所述方法，制成每粒含50mg提取物的膠囊劑。
實施例6實施例1方法得到紅曲干浸膏。然后取200g，加入2000ML2％NaOH水溶液，分次捏溶。用10％HCL中和堿水液至中性，再用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，得到34.2g干浸膏。然后取30g干浸膏，加入與實施例2相同種類和比例的賦形劑，按實施例1所述方法，制成每粒含50mg提取物的膠囊劑。
實施例7，按本技術領域技術人員公知的方法制備紅曲提取物的片劑，其中所述片劑按實際需要制成含10-30％的紅曲提取物。用上述實施例2制取紅曲提取物。取150g紅曲提取物、微粉硅膠420g、無水乳糖350g、氧化硅30g，混合30分鐘后，再篩入200g硬脂酸鎂，繼續混勻，最后用12/32英寸的標準凹沖壓成片。
實施例8采用發酵完全的紅曲原料1.0kg，干燥、粉碎后，過200-300目篩，裝成每粒含400mg紅曲原料粉末的膠囊劑。
實施例9同實施例8方法得到紅曲原料粉末，取紅曲原料粉末250g、微粉硅膠80g、無水乳糖70g、硬脂酸鎂50g，按公知制片技術和裝備制成每片含250mg紅曲原料粉末的片劑。
權利要求
1.紅曲及其提取物在制備預防或治療病理性或生理性的骨質細胞減少或不足及骨密度降低以及促進和恢復骨質細胞生長的藥品或保健食品中的應用。
2.根據權利要求1紅曲及其提取物可用于制備治療或預防骨質疏松癥的藥品或保健品。
3.根據權利要求1紅曲及其提取物可制備具有促進兒童骨胳生長作用的藥品或保健食品。
全文摘要
本發明公開了紅曲及其提取物預防或治療病理性或生理性的骨質細胞減少或不足及骨密度降低,并促進和恢復骨質細胞生長的作用,可用于制備治療或預防骨質疏松癥及促進兒童骨骼生長的藥品或保健食品。
文檔編號A61P19/00GK1266697SQ0011203
公開日2000年9月20日 申請日期2000年1月18日 優先權日2000年1月18日
發明者葉文才 申請人:葉文才