一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物及其制備方法

一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物及其制備方法。一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物，原料藥組分如下：硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、碳酸鈣、透明質酸鈉、二甲基砜、葛根提取物。本發明還涉及利用該組合物制備的薄膜包衣片劑及其制備方法。本所述的組合物在增加骨密度方面均能起到較好的療效；各組分具有協同作用，更容易促進鈣的吸收，能夠更好地增加骨密度；經動物功能試驗證明，本組合物能顯著提高大鼠的股骨重量、骨鈣含量、股骨中點密度和股骨遠心端骨密度。
【專利說明】
一種具有増加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物及其制備方法，屬于保 健食品技術領域。
【背景技術】
[0002] 骨質疏松和骨關節炎是中老年人常見疾病，患病人群在我國占有很大比例，已經 成為影響我國人民健康的一個重要問題。全世界約有2億骨質疏松癥患者，其發病率躍居常 見病、多發病的第7位，且年平均增長率呈快速增長的勢頭。臨床上對該病的治療，多以口服 鈣劑及補充維生素 D為主，鈣的攝入可以減緩骨的丟失，改善骨礦化，但臨床研究表明，除了 補鈣，患者還應同時進行提高骨密度、增強骨強度和預防骨折的綜合治療。近年來，隨著人 們對骨質疏松發病機制研究的深入，具有增加骨密度、防止軟骨細胞損傷、促進軟骨基質的 修復和重建、改善關節活動、抗炎鎮痛作用的物質，因其獨特、安全可靠的作用機制，越來越 受到人們青睞，人們更傾向于選擇純天然、綠色、副作用小，效果好的產品。
[0003] 硫酸軟骨素是動物體內分布最廣泛的一種細胞外基質糖胺多糖，主要作為膳食補 充劑用于保護關節。硫酸軟骨素作為結締組織的重要組成部分，能夠結合水分子用于潤滑 和支撐關節，使關節活動自如；由于明顯的親軟骨性，它可優先進入軟骨組織，保護軟骨。因 此，主要用于骨關節炎的治療。它還可以通過緩解各種癥狀達到修復軟骨、促進軟骨再生。
[0004] 鹽酸氨基葡萄糖是甲殼素經鹽酸水解得到的一種氨基單糖。它天然存在于人體特 別是關節軟骨中，是合成氨基聚糖的基本物質及關節軟骨中蛋白多糖的組成成分，作為關 節軟骨的營養補充劑被廣泛使用。科學研究表明，30歲以后，隨著年齡的增長，人體內氨糖 含量逐漸降低，關節軟骨的磨損不斷累積，所以中老年人易患骨關節炎等疾病。在歐美醫學 界，鹽酸氨基葡萄糖是唯一被認可的對骨關節疾病具有治療作用的營養保健品。
[0005] 透明質酸鈉是廣泛存在于人及動物各種組織的高分子物質，是一種高黏性物質， 具有非常好的生物相容性。透明質酸鈉作為關節滑液的主要成分，賦予滑液良好的黏彈性， 對維持關節正常生理功能至關重要。具有參與細胞外液中電解質及水分調節、潤滑關節、抗 御感染、參與創傷愈合等多種生理功能，對關節的保護、營養及功能的發揮均起重要的作 用。
[0006] 鈣是構成動物骨骼組織的重要礦物質成分，而且在機體各種生理學和生物化學過 程中起著重要作用。骨主要有鈣、磷以羥磷灰石的形式沉積于膠原基質中，大量臨床實踐及 流行病學調查的研究表明，鈣攝入不足可能是骨質疏松的危險因素。碳酸鈣是《維生素、礦 物質化合物名單》中的物品，是法規允許使用的鈣源。
[0007] 二甲基砜(MSM)是一種有機硫化物，是人體膠原蛋白合成的必要物質。關節炎患者 軟骨含硫量只有正常人軟骨含硫量的1/3，補充胱氨酸可增加關節炎患者軟骨含硫量，而經 同位素硫35的二甲基砜試驗已表明，胱氨酸中的硫，是從二甲基砜的硫獲得的。二甲基砜可 以鎮痛，它可以阻止疼痛神經信號的傳播，也可以改善膠原連接，修復受傷的組織。動物實 驗證明，二甲基砜確實可以遏制膝關節的惡化，也可以增加皮質醇的效力，而不是數量。皮 質醇是人體內的自然抗發炎激素。二甲基砜還可以抑制成纖維細胞的生成，而成纖維細胞 則是造成浮腫的主要因素。
[0008] 葛根是豆科植物野葛或甘葛藤的干燥根，性味甘、辛、涼，歸脾、胃經，具有解肌退 熱、生津、透疹、升陽止瀉之功效。現代藥理學研究證明葛根能擴張冠狀血管，改善微循環， 降低血液高粘狀態，有活血化瘀功效，還有改善心律失常，降血脂，抗氧化、降低血糖及解酒 的功能，葛根小劑量能夠顯著抑制去卵巢小鼠骨密度的下降；抑制股骨干骺端骨量的下降 和骨小梁寬度的減少；同時抑制了破骨細胞數的增加。其中高劑量的葛根對骨密度和骨量 的提高甚至明顯高出正常組，顯示其有顯著療效。
[0009] 現有技術中公開的增加骨密度及抗炎鎮痛作用的藥物，主要由硫酸軟骨素、鹽酸 氨基葡萄糖、碳酸鈣、透明質酸鈉制成，雖然可在一定程度上改善骨質疏松、修復關節軟骨， 緩解骨質疏松及骨關節軟骨組織損傷或退行性病變，但效果并不顯著，無法滿足患者實際 需求。

【發明內容】

[0010] 本發明針對現有技術的不足，提供一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物 及其制備方法。
[0011] 本發明技術方案如下：
[0012] -種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物，原料藥組分如下，均為重量份：
[0013] 硫酸軟骨素10~60份、鹽酸氨基葡萄糖10~60份、碳酸鈣10~50份、透明質酸鈉1 ~10份、二甲基砜1~10份、葛根提取物1~20份。
[0014] 根據本發明優選的，所述葛根提取物中葛根異黃酮的質量百分比含量不低于 40% 〇
[0015] 根據本發明優選的，原料藥組分如下，均為重量份：
[0016] 硫酸軟骨素20~40份、鹽酸氨基葡萄糖20~40份、碳酸鈣20~35份、透明質酸鈉2 ~5份、二甲基砜1~2份、葛根提取物8~12份。
[0017] 根據本發明進一步優選的，原料藥組分如下，均為重量份：
[0018] 硫酸軟骨素27份、鹽酸氨基葡萄糖27份、碳酸鈣30份、透明質酸鈉4份、二甲基砜1 份、葛根提取物11份。
[0019] 上述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物在制備具有增加骨密度、抗炎鎮痛 作用的保健品中的應用。
[0020] 根據本發明優選的，所述保健品的劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑;進一步優選的，所 述片劑為薄膜包衣片劑、分散片、含化片、口嚼片。
[0021] 上述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物的薄膜包衣片劑，組分如下，均為重 量份：
[0022] 原料藥120~200份、填充劑0.1~50份、崩解劑0.1~2份、潤滑劑0.1~2份、粘合劑 1~3份、薄膜包衣劑3~5份。
[0023]根據本發明優選的，所述填充劑為微晶纖維素；
[0024] 根據本發明優選的，所述崩解劑為交聯聚維酮(PVPP);
[0025] 根據本發明優選的，所述潤滑劑為硬脂酸鎂；
[0026] 根據本發明優選的，所述粘合劑為聚維酮K30;
[0027] 根據本發明優選的，所述薄膜包衣劑為胃溶型藥用薄膜包衣劑。
[0028] 上述薄膜包衣片劑的制備方法，步驟如下：
[0029] (i)將葛根提取物單獨制粒，過20目篩，整粒，制得葛根提取物顆粒；
[0030] (i i)按質量百分比濃度8~12 %的比例將薄膜包衣劑溶解于體積濃度為70 %的乙 醇溶液中，制得薄膜包衣液；
[0031] (iii)將透明質酸鈉、二甲基砜和填充劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑通過等量遞增法 混合均勻后與硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、碳酸鈣、步驟（i)制得的葛根提取物顆粒混合 均勻，采用濕法制粒，壓片，采用步驟(ii)制得的薄膜包衣液包衣，即得。
[0032] 上述制粒、等量遞增法、濕法制粒、壓片、包衣等步驟均為本領域的常規步驟，相關 條件步驟均按現有技術操作。
[0033] 本發明所述各原料藥的主要藥效如下：
[0034] 1、硫酸軟骨素
[0035]藥理藥效及臨床研究顯示，本品具有以下作用：（1)潤滑及支撐關節作用；（2)保護 軟骨組織；（3)修復軟骨、促進軟骨再生。因此，硫酸軟骨素一方面可以通過保護軟骨達到治 療骨關節炎的作用，另一方面還可以通過緩解各種癥狀達到修復軟骨、促進軟骨再生。硫酸 軟骨素作為保健品，經過多年應用，證明硫酸軟骨素對改善老年退行性關節炎、風濕性關節 炎效果顯著；
[0036] 2、鹽酸氨基葡萄糖
[0037]藥理藥效及臨床研究顯示，本品具有以下作用：（1)潤滑關節、保護軟骨組織；（2) 緩解關節疼痛，抑制及消退關節變性形成；（3)促進鈣吸收，預防骨質疏松。因此，鹽酸氨基 葡萄糖不僅可以用于治療和預防全身各種關節的骨性關節炎，還可以通過促進鈣的吸收起 到預防骨質疏松的作用；
[0038] 3、透明質酸鈉
[0039]藥理藥效及臨床研究顯示，本品具有以下作用：（1)對關節腔潤滑及緩沖應力；（2) 減少關節內滲液；（3)修復損傷的軟骨。因此，透明質酸鈉是治療骨關節炎的一種安全、理 想、有效的藥物，對骨性關節炎可以起到良好的治療作用。
[0040] 4、碳酸鈣
[0041] 雖然鈣是增加骨密度的主要成分，但鈣的吸收受很多因素影響，所以大部分人群 在日常補鈣時經常出現"易補難收"的情況。據研究，年齡因素對鈣吸收的影響最大，處于生 長發育期的兒童和青少年人鈣的吸收能力強，年齡增加，鈣的吸收率就下降。嬰幼兒可高達 50~60%，兒童青少年30~40%，成年人20~30%，中年人10~20%，60歲以上低于10%。所 以，中老年人群最容易出現骨質疏松，補充鈣質的同時更應該注重鈣的吸收。
[0042] 5、二甲基砜
[0043] 關節炎主要是關節軟骨的退行性病變和繼發性骨質增生。由于關節連接處的粘液 膜是由含硫蛋白和葡萄糖胺等組成。含硫的蛋白質中主要是由含硫的胱氨酸組成，而胱氨 酸中的硫元素主要來源于二甲基砜。含硫的蛋白膠原和葡萄糖胺等，具有促進膠原蛋白的 產生，增加水的結合，幫助修復損傷軟骨的功能，可使受傷軟骨恢復正常，骨膜液更濃，更有 粘性，從而加強骨膜的保護功能，減輕骨關節的摩擦，減少痛苦。此外，關節炎患者服用鎮痛 藥，經常引起胃脹、頭痛等副作用，但如在飲食中加入二甲基砜，可以克服這一副作用。
[0044] 6、葛根提取物
[0045] 葛根作為衛生部公布的藥食兩用資源，具有增加骨密度、改善原發性骨質疏松癥 狀、改善腦血液循環、降血糖血脂、解酒等作用。葛根中所含的異黃酮類物質能夠調節骨代 謝、促進骨形成，提高骨組織的內硬度，增加骨密度;葛根異黃酮能顯著提高去卵巢大鼠全 身骨礦含量(BMC)和全身骨礦密度(BMD)，能提高股骨相對質量體積，甚至恢復骨灰鈣鹽密 度到假手術組(正常)水平;能顯著改善骨生物力學指標，提高股骨和脛骨的最大負荷和結 構強度;葛根異黃酮對去卵巢大鼠脛骨微量元素作用的研究表明，葛根異黃酮能提高脛骨 鋅、鎂、錳、銅、鉻的含量，改善去勢大鼠的微量元素丟失狀況。葛根總黃酮也被證實有改善 去勢大鼠的骨密度、骨鈣含量和骨重量的作用;葛根素能抑制去卵巢大鼠骨的高轉換狀態， 增加脛骨礦物質量和無機元素含量，提示葛根素能有效改善骨代謝，對去卵巢大鼠的骨質 疏松有防治作用。葛根素可以促進成骨細胞增殖，還能增強堿性磷酸酶活性、促進礦化結節 形成，表明它對成骨細胞分化也有促進作用。葛根素可能通過促進成骨細胞增殖和分化來 促進骨形成葛根能降低骨質疏松癥患者的骨轉換率，抑制骨吸收。
[0046] 有益效果
[0047] 1、本發明首次將硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、透明質酸鈉、碳酸鈣、二甲基砜、葛 根提取物六種成分進行配伍，制備具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物;在增加骨密度 方面能起到較好的療效;各組分具有協同作用，更容易促進鈣的吸收，能夠更好地增加骨密 度;經動物功能試驗證明，本組合物能顯著提高大鼠的股骨重量、骨鈣含量、股骨中點密度 和股骨遠心端骨密度;依據《保健食品檢驗與評價技術規范(2003年版)》判定標準，表明本 發明組合具有增加骨密度的功能；
[0048] 2、本發明所述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物中，本發明采用硫酸軟骨 素與鹽酸氨基葡萄糖配合使用，經實驗驗證，二者配合后結合其他藥效成分使用，具有止 痛，促進軟骨再生的功效，對不同時期軟骨損傷均有一定的保護和治療作用，可以較好地延 緩骨關節炎的進展;透明質酸鈉與鹽酸氨基葡萄糖配合使用，具有改善關節的功能;透明質 酸和硫酸軟骨素配合使用，可明顯緩解骨關節炎患者的臨床癥狀;碳酸鈣與葛根提取物配 合使用，具有改善原發性骨質疏松癥患者的骨代謝，增加骨密度的功能，有效的改善骨質疏 松的病理癥狀;二甲基砜與硫酸軟骨素配合使用，可以增強軟骨的形成，有效的輔助關節炎 的治療；
[0049] 3、本發明所述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物安全有效，毒理試驗證明， 分別以人體每日推薦量的25倍、50倍、100倍本發明組合物經灌胃給予大鼠，連續30天，各劑 量組動物體重增加、進食量及食物利用率與陰性對照藥組相比均無顯著性差異(P>〇.05)， 血液學指標、血生化指標、臟器絕對重量及臟/體比值與陰性對照組相比無顯著差異(P> 0.05 )，病理組織學檢查，本發明組合物對受檢臟器無明顯損傷；
[0050] 4、本發明所述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物在硫酸軟骨素、鹽酸氨基 葡萄糖與鈣劑的基礎上，增加增強軟骨、潤滑關節、減輕關節疼痛、增加骨密度功能的活性 成分，以硫酸軟骨素、碳酸鈣為主活性成分，與透明質酸鈉、鹽酸氨基葡萄糖、二甲基砜、葛 根提取物組合，對骨關節保健具有良好的協同作用，將上述幾種對骨關節均有保健作用的 活性成分進行復方組合制成制劑，符合保健要求，原料副作用小、效果好，具有廣闊的市場 前景。
【具體實施方式】
[0051]下面結合實施例，對本發明的技術方案做進一步闡述，但本發明所保護范圍不限 于此。
[0052]原料來源
[0053]硫酸軟骨素山東海鈺生物技術有限公司有售。
[0054]鹽酸氨基葡萄糖濟南海得貝海洋生物工程有限公司有售。
[0055] 碳酸鈣北京惠康源生物科技有限公司有售。
[0056] 葛根提取物西安百川生物科技有限公司有售，經檢測，葛根提取物中葛根異黃酮 含量的質量百分比含量多40%。
[0057] 透明質酸鈉山東福瑞達生物化工有限公司有售。
[0058] 二甲基砜鄭州荔諾生物科技有限公司有售。
[0059] 微晶纖維素北京鳳禮精求商貿有限責任公司有售。
[0060] 交聯聚維酮北京鳳禮精求商貿有限責任公司有售。
[0061] 硬脂酸鎂北京鳳禮精求商貿有限責任公司有售。
[0062]聚維酮K30北京鳳禮精求商貿有限責任公司有售。
[0063] 胃溶型藥用薄膜包衣劑北京鳳禮精求商貿有限責任公司有售。
[0064] 單一成分碳酸鈣增加骨密度的功能性評價實驗
[0065] 鈣是構成動物骨骼組織的重要礦物質成分，碳酸鈣是《維生素、礦物質化合物名 單》中的物質，是法規允許使用的鈣源。為表明碳酸鈣增加骨密度的有效性，對碳酸鈣進行 了如下相關性試驗。
[0066] 1材料和方法
[0067] 1.1實驗動物和環境:Wistar雄性大鼠，體重約60~75克。實驗環境溫度22°C ±2 。(：，相對濕度50 % ±10%。
[0068] 1.2劑量設置和受試給予方式
[0069] 低鈣基礎飼料配方如下表1:
[0070] 表1低鈣基礎飼料配方(Ca2+計，150mg/100g)
[0072]劑量設置：在《維生素、礦物質的種類和用量》中規定鈣的有效劑量和安全劑量 250mg-lOOOmg/天之間，劑量安全有效。因此，在試驗中設置了4個碳酸鈣劑量組如下表2。 [0073] 表2不同碳酸鈣劑量組
[0075] 受試各組均喂低鈣基礎詞料，飲用去離子水。經口每日一次灌胃給予大鼠受試，灌 胃體積按lml/lOOg.bw計。低鈣對照組以等體積的去離子水代替受試物溶液灌胃。連續給予 3個月后測試增加骨密度功能的各項指標。
[0076] 1.3主要儀器:NORLAND STRATEC型雙能X線骨密度儀。
[0077] 1.4實驗方法
[0078] 1.4.1體重測定:禁食12小時后，測定體重。每周測定動物體重一次。
[0079] 1.4.2股骨重量測定：動物喂養3個月后處死，剝離出右側股骨，于105°C烤箱中烤 至恒重，稱量骨干重。
[0080] 1.4.3骨鈣含量及飼料中鈣含量測定:低鈣基礎飼料樣品經均勻混合，在烘箱中烘 干，置干燥器冷卻，取出研磨。取大鼠右側股骨在l〇5°C烘干至恒重，稱量骨干重，然后粉碎、 研磨。用EDTA滴定法測定低鈣基礎飼料和股骨樣品中鈣含量。低鈣基礎飼料中鈣含量為 146 · 0mg/100g，符合實驗要求。
[00811 1.4.4股骨骨密度測定：用美國產NORLAND STRATEC型雙能X線骨密度儀測量股骨 中點及股骨遠心端的骨密度。
[0082] 1.5實驗數據統計：采用SPSS統計軟件進行各實驗組與對照組的單因素方差分析 和組間比較。
[0083] 2實驗結果
[0084] 2.1對大鼠體重的影響
[0085]表3實驗大鼠的初始體重(?:S >
[0087] 表3可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。 12 表4實驗大鼠第4周時體重(&T±S ) 2

[0091] 表4可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。
[0092] 表5實驗大鼠第8周時體重:)
[0094]表5可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。
[0095] 表6實驗大鼠終末體重(f±.S >
LUUV/」 表6叫見，與仳鈣對照組比牧，谷組動物體重差丼尤統計字葸乂（Ρ>?.05)。
[0098] 2.2股骨重量
[0099] 表7各組動物股骨重量(￡±S ): 123 與低鈣對照組比較Τ<0·05
2 由表7可見，與低鈣對照組相比，碳酸鈣2、3、4組股骨重量差異均有統計學意義(Ρ <0.05)。4種碳酸鈣劑量組股骨重量較低鈣對照組均呈現增加趨勢，碳酸鈣1組較低鈣對照 組、碳酸鈣2組較碳酸鈣1組增加趨勢明顯，而碳酸鈣2、3、4組之間增加趨勢不明顯。 3 2.3骨鈣含量
[0104] 表8各組動物股骨鈣含量(￡± S )
[0106]與低鈣對照組比較$<0.05
[0107] 由表8可見，與低鈣對照組相比，碳酸鈣2、3、4組骨鈣含量差異均有統計學意義(P <0.05)。4種碳酸鈣劑量組骨鈣含量較低鈣對照組均呈現增加趨勢，碳酸鈣1組較低鈣對照 組、碳酸鈣2組較碳酸鈣1組增加趨勢明顯，而碳酸鈣2、3、4組之間增加趨勢不明顯。
[0108] 2.4股骨骨密度
[0109] 表9各組動物股骨中點骨密度(￡±:S )
[0111] 與低鈣對照組比較$<〇 .05
[0112] 由表9可見，與低鈣對照組相比，碳酸鈣2、3、4組股骨中點骨密度差異均有統計學 意義斤<0.05)。4種碳酸鈣劑量組股骨中點骨密度較低鈣對照組均呈現增加趨勢，碳酸鈣1 組較低鈣對照組、碳酸鈣2組較碳酸鈣1組增加趨勢明顯，而碳酸鈣2、3、4組之間增加趨勢不 明顯。
[0113] 表10各組動物股骨遠心端骨密度(f±.S )
[0116] 與低鈣對照組比較*Ρ<0·05
[0117] 由表10可見，與低鈣對照組相比，碳酸鈣2、3、4組股骨遠心端骨密度差異均有統計 學意義(Ρ<〇.05)。4種碳酸鈣劑量組股骨遠心端骨密度較低鈣對照組均呈現增加趨勢，碳 酸鈣1組較低鈣對照組、碳酸鈣2組較碳酸鈣1組增加趨勢明顯，而碳酸鈣2、3、4組之間增加 趨勢不明顯。
[0118] 3 小結
[0119] 按照法定鈣的有效劑量和安全劑量設置的4組碳酸鈣劑量組，與低鈣對照組相比， 均能提高大鼠的股骨重量、骨鈣含量、股骨中點密度和股骨遠心端骨密度，且呈現增加趨 勢，碳酸鈣2、3、4組股骨重量差異均有統計學意義(P<0.05)。碳酸鈣1組較低鈣對照組、碳 酸鈣2組較碳酸鈣1組增加趨勢明顯，而碳酸鈣2、3、4組之間增加趨勢不明顯。本實驗表明， 每日攝入一定劑量的鈣，可以增加骨密度，預防骨質疏松，當每日鈣服用量增加到一定量 后，其骨密度不再明顯增加。
[0120] 實施例1、增加骨密度的功能性評價
[0121]硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、透明質酸鈉、碳酸鈣、二甲基砜、葛根提取物六種成 分不同配比制成的組合物，其增加骨密度的作用效果有一定差異。為表明本發明的增加骨 密度的有效性，考察不同配比的組方增加骨密度的作用效果，對本發明進行了如下相關性 試驗。
[0122] 本實施例所用實驗方法與上述"單一成分碳酸鈣增加骨密度的功能性評價實驗" 方法相同，低鈣對照組配方與"單一成分碳酸鈣增加骨密度的功能性評價實驗"中的低鈣對 照組配方一致，碳酸鈣組配方與"單一成分碳酸鈣增加骨密度的功能性評價實驗"中的碳酸 鈣1組配方一致。
[0123] 本發明實施例設置如下組方與對比，詳見表11:
[0124] 表11不同配比組方與對比 1234 實驗結果如下：
2 1、對大鼠體重的影響 3 表12實驗大鼠的初始體重) 4

L〇13〇」表12可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。 [0131 ] 表13實驗大鼠第4周時體重S' )
[0133] 表13可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。 1 表14實驗大鼠第8周時體重:(￡±S )

[0137] 表14可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。
[0138] 表15實驗大鼠終末體重(sTtS )
[0140]由表15可見，與低鈣對照組比較，各組動物體重差異無統計學意義(P>0.05)。2、 股骨重量
[0141] 表16各組動物股骨重量)

[0144] 與低鈣對照組比較*Ρ<0·05廣Ρ<0·01
[0145] 由表16可見，與低鈣對照組相比，組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方 7、對比1、對比2、對比3、對比4及碳酸鈣組股骨重量差異均有統計學意義（P<0.01，Ρ< 0.05)。組方I、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方7、對比I、對比2、對比3、對比4股骨重 量較碳酸酸鈣組均明顯增加，其中組方2股骨重量較其他組方增加程度更為明顯。
[0146] 3、骨鈣含量
[0147] 表17各組動物股骨鈣含量(f± S )
[0149] 與低鈣對照組比較*Ρ<0·05廣Ρ<0·01
[0150] 由表17可見，與低鈣對照組相比，組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方 7、對比1、對比2、對比3、對比4及碳酸鈣組骨鈣含量差異均有統計學意義（P<0.01，Ρ< 0.05)。組方I、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方7、對比I、對比2、對比3、對比4骨鈣含 量較碳酸酸鈣組均明顯增加，其中組方2骨鈣含量較其他組方增加程度更為明顯。
[0151] 4、股骨骨密度
[0152] 表18各組動物股骨中點骨密度>
L0154J 與低鈣對照組比較Τ<0·05/Τ<0·01
[0155] 由表18可見，與低鈣對照組相比，組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方 7、對比1、對比2、對比3、對比4及碳酸鈣組股骨中點骨密度差異均有統計學意義(Ρ<0.01，Ρ <0.05)。組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方7、對比1、對比2、對比3、對比4股骨 中點骨密度較碳酸酸鈣組均明顯增加，其中組方2股骨中點骨密度較其他組方增加程度更 為明顯。
[0156] 表19各組動物股骨遠心端骨密度(￡±S >

[0159] 與低鈣對照組比較*Ρ<0·05廣Ρ<0·01
[0160] 由表19可見，與低鈣對照組相比，組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方 7、對比1、對比2、對比3、對比4及碳酸鈣組股骨遠心端骨密度差異均有統計學意義（Ρ< 0.01，Ρ<0.05)。組方1、組方2、組方3、組方4、組方5、組方6、組方7、對比1、對比2、對比3、對 比4股骨遠心端骨密度較碳酸酸鈣組均明顯增加，其中組方2股骨遠心端骨密度較其他組方 增加程度更為明顯。
[0161] 5、小結
[0162] 從實驗數據可以看出：（1)本發明組合物（組方）與碳酸鈣組、低鈣對照組、對比相 比，均能提高大鼠的股骨重量、骨鈣含量、股骨中點密度和股骨遠心端骨密度，均有統計學 意義(P<0.01，Ρ<0.05); (2)本發明組合物增加骨密度效果明顯優于碳酸鈣組；（3)組方1、 組方2、組方3的成分配比用量組合，所得組合物對于動物股骨中點及股骨遠心端的骨密度 具有較為顯著的增加作用，明顯優于對比1和對比2,尤其是組方2作用最好，六種成分能達 到最佳協同作用。
[0163] 實施例2、骨關節炎治療作用的功能性評價
[0164] 1材料和方法
[0165] 1.1動物:SD大鼠，清潔級，150~180g，雌雄各半，96只。
[0166] 1.2試驗組設置及受試給予方式
[0167] 1.2.1樣品配制及試驗分組
[0168] 所有受試樣品均用0.3%黃原膠研磨配成均勻混懸液備用，受試樣品以組方1、組 方2、組方3、對比1制成的片劑作為試驗樣品（配比設置見表20)。
[0169] 表20本發明組合物不同配比設置
[0172] 96只大鼠購入飼養1周，測定體重后，隨機分為以下6組，每組16只大鼠：（1)對照組 (0.3%黃原膠）；（2)模型組(0.3%黃原膠）；（3)組方1; (4)組方2; (5)組方3; (6)對比1。
[0173] 1.2.2給予方式:灌胃給藥，lml/lOOg體重，每天上午給藥1次，每周給藥7天。
[0174] 2試驗方法
[0175] 2.1骨關節炎模型的建立
[0176] 將4 %木瓜蛋白酶(生理鹽水溶解)與0.3mo 1/L半胱氨酸溶液(生理鹽水溶解)體積 比1:1混置〇.5h后，分別在造模的第1、3、7天將混合液?οομL注入大鼠右膝關節腔內，對照組 同法注射等量生理鹽水，造模后正常飼養。各組大鼠連續給藥3周，術次給藥后禁食過夜，處 死1/2(雌雄各4只)進行下列指標檢測。
[0177] 2.2檢測指標
[0178] 各組大鼠連續給藥3周，術次給藥后禁食過夜，分別處死1/2(雌雄各4只）進行關節 大體觀察、生化測定、組織病理學檢查指標的檢測。
[0179] 2.3數據處理及統計方法
[0180]各組數據均以表示，組間比較采用t檢驗考察顯著性，以Ρ<0.05作為顯著性指標。
[0181] 3 結果
[0182] 3.1關節大體觀察結果
[0183] 造模3周后，與對照組相比，模型組膝關節無明顯關節腔積液，大部分動物出現滑 膜腫脹、增厚，顏色加深，股骨內髁關節面，軟骨層厚度下降，未見關節面糜爛、軟骨嚴重缺 損、關節面潰瘍形成、軟骨剝脫等嚴重病變;3個本發明組合物組動物整體而言關節滑膜和 軟骨的變化狀況與模型組相似，但嚴重程度有一定的減輕;1個本發明組合物對比組動物整 體而言關節滑膜和軟骨的變化狀況與模型組相似，嚴重程度有一定的減輕，但與3個組方組 相比仍較嚴重，見表21。
[0184] 表21對大鼠骨關節炎模型關節大體形態的影響(n = 8, )
[0186] 3.2對血清MDA和SOD水平的影響
[0187] 與正常對照組相比，模型組、對比組以及各治療組血清MDA和SOD水平均無顯著改 變，見表22。
[0188] 表22對大鼠骨關節炎模型血清MDA和SOD水平的影響(n = 8, ￡±S ) LU'vuj ?. ?對天τ襖官宙日眾椐貸重的影_
[0191] 造模3周后，與對照組相比，模型組軟骨組織中蛋白聚糖含量明顯減少(Ρ<0.05)。 3個本發明組合物組改善較明顯(Ρ<〇.05)，1個本發明組合物對比組軟骨組織中蛋白聚糖 含量明顯減少(Ρ<〇. 05)，見表23。
[0192] 表23對大鼠骨關節炎模型關節軟骨蛋白聚糖含量的影響(η = 8，=Γ±5)
[0194] ，<0.05,與對照組比較;#Ρ<0.05,與模型組比較
[0195] 3.4組織病理學檢查
[0196]各組軟骨和滑膜組織病理學檢查結果表明，各組軟骨表面平整，均未見明顯增生， 模型組滑膜下組織見數量不等的炎細胞浸潤，與模型組相比，本發明3組組合物對實驗所致 大鼠骨關節炎中滑膜病變均有一定的治療作用。
[0197] 4 小結
[0198] 本試驗造模3周后，大鼠關節滑膜和軟骨出現不同程度的病變，軟骨蛋白聚糖含量 減少，本發明組合物對上述改變有明顯的改善作用，本發明所述組合物對于木瓜蛋白酶誘 導大鼠軟骨降解骨關節炎模型具有明顯療效。
[0199] 實施例3、鎮痛作用的功能性評價
[0200] 1.對醋酸致小鼠扭體反應的影響
[0201] 1.1劑量與分組
[0202] 選用健康ICR種小白鼠60只，雌雄各半，體重18~22g，試驗共設6組，分別為模型組 (0.5 % CMC-Na)、陽性藥組(阿司匹林200mg/kg)、本發明組合物組(3個組合物配比見表24)， 每組10只動物，各組配成相應濃度混懸液，給藥體積均為l〇ml/kg。
[0203] 表24本發明組合物不同配比設置
[0205] 1.2致痛及給藥方法
[0206]各組動物試驗前禁食12h，飲水不限。灌胃給予相應藥物30min后，腹腔注射0.6% 醋酸（0.2ml/只），記錄注射后15min內小鼠出現扭體的次數。以小鼠出現腰部肌肉反復收 縮、拱背、臀部扭轉和后肢伸展為扭體反應陽性。按下列公式計算藥物抑制扭體百分率： [0207] 抑制率（％ )=(對照組扭體數-給藥組扭體數)/對照組扭體數X 100%
[0208] 1.3 結果
[0209]陽性藥組、3個本發明組合物組以及1個本發明組合物對比組可顯著減少小鼠扭體 次數，見表25。
[0210] 表25對醋酸致小鼠扭體反應的影響(n = 10, )
[0212] **P<0.01與模型組比較。
[0213 ] 2.對小鼠熱痛豎尾痛閾值的影響
[0214] 2.1劑量與分組
[0215] 選用健康ICR種小白鼠60只，雌雄各半，體重18~22g，試驗共設6組，分別為模型組 (0.5 % CMC-Na)、陽性藥組(阿司匹林200mg/kg)、本發明組合物組(見表27)，每組10只動物， 各組配成相應濃度混懸液，給藥體積均為l〇ml/kg。
[0216] 2.2致痛及給藥方法
[0217] 健康雄性ICR小鼠，體重18~22g，隨機分組，試驗前各組小鼠禁食過夜，試驗當天 各組灌胃相應受試藥物(各組配制不同濃度），給藥前及給藥后不同時間將小鼠尾下部垂直 浸入(50.0±0.5°C)恒溫水浴內，浸入長度3cm左右，以尾回縮出水面的潛伏期為測痛指標， 作為痛閾值。分別測定給藥前的痛閾值2次，取其平均值作為基礎痛閾。灌胃給予相應藥物 后，測定給藥后〇. 5、I、2h各小鼠的痛閾值。
[0218] 2.3對小鼠熱痛豎尾痛閾值的影響
[0219] 陽性藥組、3個本發明組合物和1個本發明對比組可明顯提高小鼠熱痛閾值(P< 0·05，Ρ<0·01)，見表 26。
[0220] 表26對小鼠熱痛豎尾痛閾值的影響(η = 10, GS )
[0222] *Ρ<0·05，**Ρ<0·01 與模型組比較。
[0223] 3 小結
[0224]本發明組合物可顯著減少小鼠扭體次數，可明顯提高小鼠熱痛閾值。提示本發明 組合物具有一定的鎮痛作用。
[0225] 由上述實施例1~3的相關實驗結果可以看出，本發明組合物由六種成分以最佳比 例組合而成，除具有較好的增加骨密度功能以外，該組合物還具有緩解關節疼痛、修復和促 進軟骨再生、抑制骨代謝、潤滑關節及延緩骨關節炎進展的功能，可明顯緩解骨關節炎患者 的臨床癥狀。
[0226] 實施例4
[0227] -種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物的薄膜包衣片劑，原料組分如下： [0228]硫酸軟骨素150g、鹽酸氨基葡萄糖350g、葛根提取物101g、碳酸鈣280g、透明質酸 鈉34g、二甲基砜12.5g、微晶纖維素303g、聚維酮K30 llg、PVPP 5.5g、硬脂酸鎂5.5g，胃溶 型藥用薄膜包衣劑22g。
[0229] 上述薄膜包衣片劑的制備方法，步驟如下：
[0230] (i)將葛根提取物單獨制粒，過20目篩，整粒，制得葛根提取物顆粒；
[0231] (i i)按質量百分比濃度8~12 %的比例將薄膜包衣劑溶解于體積濃度為70 %的乙 醇溶液中，制得薄膜包衣液；
[0232] (iii)將透明質酸鈉、二甲基砜和微晶纖維素、PVPP、硬脂酸鎂、聚維酮K30通過等 量遞增法混合均勻后與硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、碳酸鈣、步驟(i)制得的葛根提取物 顆粒混合均勻，采用濕法制粒，壓片，采用步驟（ii)制得的薄膜包衣液包衣，片重為I. Ig/ 片，壓制成1000片，即得。
[0233] 實施例5
[0234] -種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物的薄膜包衣片劑，組分如下：
[0235] 硫酸軟骨素250g、鹽酸氨基葡萄糖250g、葛根提取物101g、碳酸鈣280g、透明質酸 鈉34g、二甲基砜12.5g、微晶纖維素153g、聚維酮K30 llg、PVPP 5.5g、硬脂酸鎂5.5g，胃溶 型藥用薄膜包衣劑22g。
[0236] 制備方法同實施例4。
[0237] 實施例6
[0238] -種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物的薄膜包衣片劑，組分如下：
[0239]硫酸軟骨素350g、鹽酸氨基葡萄糖150g、葛根提取物101g、碳酸鈣280g、透明質酸 鈉34g、二甲基砜12.5g、微晶纖維素2.2g、聚維酮K30 llg、PVPP 5.5g、硬脂酸鎂5.5g，胃溶 型藥用薄膜包衣劑22g。
[0240]制備方法同實施例4。
【主權項】
1. 一種具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物，其特征在于，原料藥組分如下，均為 重量份： 硫酸軟骨素10~60份、鹽酸氨基葡萄糖10~60份、碳酸|丐10~50份、透明質酸鈉1~10 份、二甲基砜1~10份、葛根提取物1~20份。2. 如權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述葛根提取物中葛根異黃酮的質量百分 比含量不低于40%。3. 如權利要求1所述的組合物，其特征在于，原料藥組分如下，均為重量份： 硫酸軟骨素20~40份、鹽酸氨基葡萄糖20~40份、碳酸鈣20~35份、透明質酸鈉2~5 份、二甲基砜1~2份、葛根提取物8~12份。4. 如權利要求3所述的組合物，其特征在于，原料藥組分如下，均為重量份： 硫酸軟骨素27份、鹽酸氨基葡萄糖27份、碳酸鈣30份、透明質酸鈉4份、二甲基砜1份、葛 根提取物11份。5. 權利要求1所述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物在制備具有增加骨密度、抗 炎鎮痛作用的保健品中的應用。6. 如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述保健品的劑型為片劑、顆粒劑、膠囊劑； 進一步優選的，所述片劑為薄膜包衣片劑、分散片、含化片、口嚼片。7. 權利要求1所述具有增加骨密度、抗炎鎮痛作用的組合物的薄膜包衣片劑，其特征在 于，組分如下，均為重量份： 原料藥120~200份，填充劑0· 1~50份、崩解劑0· 1~2份、潤滑劑0· 1~2份、粘合劑1~3 份、薄膜包衣劑3~5份。8. 如權利要求7所述的薄膜包衣片劑，其特征在于，所述填充劑為微晶纖維素;優選的， 所述崩解劑為交聯聚維酮(PVPP);優選的，所述潤滑劑為硬脂酸鎂;優選的，所述粘合劑為 聚維酮K30。9. 如權利要求7所述的薄膜包衣片劑，其特征在于，所述薄膜包衣劑為胃溶型藥用薄膜 包衣劑。10. 權利要求7所述薄膜包衣片劑的制備方法，其特征在于，步驟如下： (i)將葛根提取物單獨制粒，過20目篩，整粒，制得葛根提取物顆粒； (i i)按質量百分比濃度8~12 %的比例將薄膜包衣劑溶解于體積濃度為70 %的乙醇溶 液中，制得薄膜包衣液； (i i i)將透明質酸鈉、二甲基砜和填充劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑通過等量遞增法混合 均勻后與硫酸軟骨素、鹽酸氨基葡萄糖、碳酸鈣、步驟(i)制得的葛根提取物顆粒混合均勻， 采用濕法制粒，壓片，采用步驟(ii)制得的薄膜包衣液包衣，即得。
【文檔編號】A23L33/105GK106072651SQ201610570478
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月19日
【發明人】吳世德, 徐傳彬, 吳維群, 賈美春, 許敏, 韓苗苗, 譚倩, 徐鑫
【申請人】山東明仁福瑞達制藥股份有限公司