一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法
【專利摘要】本發明提供一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，包括以下重量份的原料：雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8份，所述雨生紅球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，所述鹽地堿蓬植物鹽，黃酮含量為2.6~2.7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg；本發明還提供所述含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，包括超聲波提取步驟。本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質過氧化的能力，能夠殺死B16、THP?1、Hacat 和A549癌細胞，對癌細胞的增殖有一定的抑制作用。
【專利說明】
一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法
技術領域
[0001] 本發明涉及一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方法，屬于植物鹽提取工 藝技術領域。
【背景技術】
[0002] 雨生紅球藻又被叫做湖生紅球藻或湖生血球藻，是一種普遍存在的綠藻，屬于團 藻目，紅球藻科。我們現在知道這種藻在適宜它生長的條件下廣泛存在于自然界中。大量研 究表明雨生紅球藻對蝦青素的積累速率和生產總量較其它綠藻高，而且雨生紅球藻所含蝦 青素及其酯類的配比（約70%的單酯，25%的雙酯及5%的單體)與水產養殖動物自身配比極為 相似，這是通過化學合成和利用紅發夫酵母等提取的蝦青素所不具備的優勢.此外，雨生紅 球藻中蝦青素的結構以3S-3 'S型為主，與鮭魚等水產生物體內蝦青素結構基本一致;而紅 發夫酵母中蝦青素結構則為3R-3 R型. 食鹽的食用是人類進步的重要階梯，長期以來人類依靠海水曬鹽及井鹽、巖鹽開采等 方法制造食鹽，滿足自身需求。但人類長期食用的鹽類基本上是無機物，只能滿足人體自身 對無機鹽的需求，難以適應由于生活水平提升造成的人類對多種功能食物的需求，特別是 目前市場上食鹽基本為氯化鈉，過高的Na+攝入對人體的血壓、血脂等均有明顯的負面影 響。
[0003] 基于以上情況，目前印度率先在世界上利用海蓬子生產出植物鹽，據報道，這種植 物鹽富含鉀、鈣、鎂、鐵等微量元素，加工過程中無需添加任何化學物質，因此堪稱"天然營 養鹽"。
[0004] 鹽地堿蓬是一年生草本積鹽植物，植物學分類為藜科(chenopodiaceae)堿蓬屬 (suaeda forsk. exscop)，主要生長于海濱、湖邊、荒漠等處的鹽堿荒地，是一種典型的鹽堿 地指示植物，在渤海沿岸及新疆、內蒙等地的鹽堿地區有著廣泛的分布。我國共有堿蓬屬植 物20種及1個變種，常見種為灰綠堿蓬（suaeda. glanca bunge)和鹽地堿蓬（S. salsa(L.) Pall)，產量最大的是灰綠堿蓬。目前對堿蓬屬植物的研究主要集中在灰綠堿蓬、鹽地堿蓬 及翅堿蓬。
[0005] 鹽地堿蓬是世界上含鹽量最高的草本植物之一，全鹽量高達4.54%。在陰離子中， Cl-占全鹽的47.14%，在陽離子中，Mg2+占全鹽的20.04%，此外脂肪、蛋白質外，礦物質、微 量元素和維生素的含量豐富，適于進行植物鹽生產開發，但目前相關部門尚未對這一問題 給予充分重視。如天津渤海沿岸地區大部分為高鹽堿度的灘涂及濕地，極易適合堿蓬的生 長。長期以來，這些堿蓬自生自滅，一直沒有引起人們的足夠重視。
[0006] 現有技術存在以下缺陷： (1) 現有植物鹽，抑制豬油脂質過氧化的能力作用不明顯； (2) 現有植物鹽，對B16(小鼠黑色素瘤細胞)癌細胞殺死作用不明顯； (3) 現有植物鹽，對THP-I(前骨髓性白血病細胞)癌細胞殺死作用不明顯； (4) 現有植物鹽，對Hacat(人角化細胞的腫瘤樣細胞)癌細胞殺死作用不明顯； (5) 現有植物鹽，對A549(人肺腺癌細胞)癌細胞殺死作用不明顯； (6) 現有植物鹽的制備方法中，雨生紅球藻提取物中提取的蝦青素得率低。
【發明內容】
[0007] 本發明為解決以上技術問題，提供一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽及其制備方 法，以實現以下發明目的： (1)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質過氧化的能力。
[0008] (2)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死B16(小鼠黑色素瘤細 胞)癌細胞，對癌細胞的增殖有一定的抑制作用。
[0009] (3)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死THP-I (前骨髓性白血 病細胞），對癌細胞的增殖有一定的抑制作用。
[0010] (4)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死HacaU人角化細胞的 腫瘤樣細胞)癌細胞，對癌細胞的增殖有一定的抑制作用。
[0011] (5)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死A549(人肺腺癌細胞）， 對癌細胞的增殖有一定的抑制作用。
[0012] (6)本發明含雨生紅球藻提取物的植物鹽制備方法，雨生紅球藻提取物的制備方 法中，蝦青素得率高。
[0013]為解決以上技術問題，本發明采用的技術方案如下： 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，所述植物鹽，原料包括雨生紅球藻提取物和鹽地 堿蓬植物鹽。
[0014] 以下是對上述技術方案的進一步改進： 所述植物鹽，包括以下重量份的原料：雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8 份。
[0015] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%。
[0016] 所述鹽地堿蓬植物鹽，黃酮含量為2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg。
[0017] -種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，所述雨生紅球藻提取物的制備包 括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取頻率為30~50 KHZ。
[0018] 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取 功率為60~80W。
[0019] 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，聲波 提取時間5~13min。
[0020] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括稀堿破壁步驟，所述稀堿溶液的濃度為0.04 ~0.3mol/L，浸泡時間為16~20 h。
[0021] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括層析步驟，所述層析步驟，洗脫液濃度為40~ 90%，所述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液。
[0022] 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括干燥步驟，所述干燥步驟，干燥時間為9~ 16h，冷凍溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力為0~15pa。
[0023] 采用以上技術方案，本發明的有益效果為： (1)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，具有抑制豬油脂質過氧化的能力，連 續7天測定添加有本發明含荔枝核提取物的植物鹽的豬油的POV值，空白豬油在75°C促氧化 條件下，經過5天的時間，POV值已經達到了 15.9me〇/kg，對比之下，添加有含荔枝核提取物 的植物鹽豬油的POV值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白豬油的低。
[0024] (2)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死B16(小鼠黑色素瘤細 胞)癌細胞，具有抑制癌細胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細胞株培 養液2周，B16的死細胞比例為18.8~21.8%，對照組為0.12%。
[0025] (3)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死THP-I (前骨髓性白血 病細胞），具有抑制癌細胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細胞株培養 液2周，THP-I死細胞比例為20.8~23.5%，對照組為0.26%。
[0026] (4)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死HacaU人角化細胞的 腫瘤樣細胞)癌細胞，具有抑制癌細胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌 細胞株培養液2周，Hacat死細胞比例為13.1~17.9%，對照組為0.08%。
[0027] (5)本發明制備的含雨生紅球藻提取物的植物鹽，能夠殺死A549(人肺腺癌細胞）， 具有抑制癌細胞增殖的作用，用含雨生紅球藻提取物的植物鹽處理癌細胞株培養液2周， A549死細胞比例為22.8~28.5%，對照組為0.11%。
[0028] (6)本發明含雨生紅球藻提取物的植物鹽制備方法，雨生紅球藻提取物的制備方 法中，奸青素得率尚，得率為3.3~3.5%。
【具體實施方式】
[0029] 以下對本發明的優選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優選實施例僅用 于說明和解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0030] 實施例1 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物4份、鹽地堿蓬植物鹽6份。
[0031] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0032] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0033]實施例2-種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物3份、鹽地堿蓬植物鹽7份。
[0034] 所述雨生紅球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0035] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0036]實施例3-種含雨生紅球藻提取物的植物鹽 以重量份計，包括以下原料組分： 雨生紅球藻提取物2份、鹽地堿蓬植物鹽8份。
[0037]所述雨生紅球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%，EPA含 量為5.2~5.5%，其中，EPA含量為EPA在總脂肪酸中所占的百分含量。
[0038] 所述鹽地堿蓬植物鹽，鈉含量為15.20~15.30%;鉀含量為3.4~3.5%;黃酮含量為 2 · 6~2 · 7mg/g; Ca 含量為 2600~2700mg/kg; Fe 含量為690~700mg/kg。
[0039] 實施例4 一種雨生紅球藻提取物的制備方法 包括以下步驟： (1)原料粉碎 將原料雨生紅球藻去泥沙和表面雜質后放置于烘箱中在50°C下烘焙8h， 用氣流式超微粉碎機粉碎，得到雨生紅球藻超微粉； 氣流式超微粉碎機工作壓力為0.5~l.OMPa、系統風量為3m3/min，分級機轉速1500~ 3000r/min，加料速度 10kg/h。
[0040] (2)稀堿破壁 將雨生紅球藻超微粉進行稀堿處理； 所述稀堿處理是指將雨生紅球藻超微粉放入稀堿溶液中浸泡，然后過濾烘干。
[0041] 所述稀堿浸泡的浸泡時間為16~20 h; 所述稀堿溶液的濃度為〇. 04~0.3mol/L; 所述稀堿為石灰水溶液。
[0042] (3)超聲波提取： 將經過稀堿處理的雨生紅球藻超微粉置于水浴中，將超聲波探頭插入水浴，在30KHz、 6〇rf進行超聲波提取5min，提取的同時進行攪拌，然后按照上述工藝參數重復提取5次，得 提取液。
[0043] (4)層析 將所述PH為4~5的提取液過處理好的聚酰胺樹脂柱，所述聚酰胺樹脂柱的柱體積 300mL;以600mL水，用鹽酸調pH為3后，進行洗脫除雜，除雜流速為300mL/hr; 然后用40~90%的洗脫液洗脫，洗脫流速300mL/hr; 收集洗脫液并在60~80 °C，壓強為0.08~0.1 MPa下減壓濃縮至含水量小于等于5%; 所述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液； (5)真空干燥 將上述洗脫液用濾膜進行超濾，收集超濾后得到的濾出液，即得雨生紅球藻提取物濃 縮液； 經過真空冷凍干燥，得雨生紅球藻提取物； 其中，所述的超濾選截留分子量為40~120KD的超濾膜； 所述真空冷凍干燥，冷凍干燥時間為9~16h，冷凍溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力 為0~15pa; 真空冷凍干燥后，所述雨生紅球藻提取物含量水小于2%。
[0044] 下述實施例5~實施例10是對實施例4所述雨生紅球藻提取物制備方法的優化，即： 采用實施例4的雨生紅球藻提取物的制備方法，只改變(3)超聲波提取步驟，對提取頻率、提 取功率和超聲波提取時間做多因素分析，采用常規方法對提取的雨生紅球藻提取物進行各 項具體物質的含量進行測定。
[0045] 表1提取頻率、提取功率和超聲波提取時間的多因素分析(實施例5~實施例10 )
由上述多因素分析試驗可知，實施例7~實施例8是優選實施例，即提取頻率為41~45 KHZ、提取功率為74~77W和超聲波提取時間11~13min。
[0046] 實施例11 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法 包括以下步驟： 一、雨生紅球藻提取物的制備 采用實施例4的雨生紅球藻提取物的制備方法，只改變(3)層析步驟，改變提取頻率、提 取功率和超聲波提取時間三個因素，改變為提取頻率為41~45 KHZ、提取功率為74~77W和超 聲波提取時間11~13min，得雨生紅球藻提取物。
[0047] 二、鹽地堿蓬植物鹽的提取 (1)超聲波水浸提 A、 將堿蓬粉與水按照1:5~10的質量比混勻，加入堿液調節pH為8~10以提取出蛋白質 組分，在50~60 °C下提取40~50min，提取完成后離心分離，取濕殘渣； B、 向上述濕殘渣中加入濕殘渣質量3~10倍的蒸餾水，加酸調節至pH為4~8,制得水溶 性提取液； C、 將上述提取液置于超聲波提取器中，超聲波功率為150~200w，提取時間為1-30min； D、 提取完畢后離心分離，取上清液，濃縮至原體積的1/4~1/3,得濃縮液。
[0048] (2)酶解工藝 將上清液用無機堿調pH為6.5~7.5，在50 °C~60°C下，加入中性蛋白酶，酶解反應2h~ 6h; 所述的堿蓬粉與中性蛋白酶的質量比為1: 〇. 〇〇 1~1: 〇. 〇 1; 再降溫至30 °C~40 °C，用無機堿調pH為7.5~8.5，加入堿性蛋白酶，酶解反應2h~6h， 得酶解液； 所述的堿蓬粉與堿性蛋白酶的質量比為1:0.0 O1~1:0.01; 酶解后經脫色、脫重金屬、過濾和干燥步驟后，得到鹽地堿蓬植物鹽。
[0049] 三、稱量 按照配方稱量雨生紅球藻提取物和鹽地堿蓬植物鹽。
[0050] 四、混合 將稱取好的雨生紅球藻提取物和鹽地堿蓬植物鹽攪拌、混合均勻，制成混合粉末，得含 雨生紅球藻提取物的植物鹽。
[0051 ]應用效果： 1、本發明含雨生紅球藻提取物的植物鹽對豬油POV值測定試驗及效果 本發明的發明人用實施例1~實施例3所得的含雨生紅球藻提取物的植物鹽添加到豬油 中，其中，本發明的含雨生紅球藻提取物的植物鹽的質量百分含量為0.15%，測定豬油的POV 值，并以未添加本發明含雨生紅球藻提取物的植物鹽的空白豬油作對比，實驗結果如表3。 [0052] 弄3 POV倌賄時間的奪化結里（80Γ)
從表3可知，添加有實施例1~實施例3組的含雨生紅球藻提取物的植物鹽豬油的POV值 比空白豬油低，空白豬油在80°C促氧化條件下，經過5天的時間，POV值已經達到了 15.9meo/ kg，對比之下，添加有0.2%的實施例1~實施例3的含雨生紅球藻提取物的植物鹽豬油的POV 值5天的POV值在13.6~13.9meo/kg，比空白豬油的低，即添加有實施例1~實施例3的含雨生 紅球藻提取物的植物鹽豬油具有抑制豬油脂質過氧化的能力。
[0053]、本發明含雨生紅球藻提取物的植物鹽抑制癌細胞的試驗及效果 按常規方法培養附著性癌細胞株，分成4組，對照組和實施例1~實施例3組。實施例1組~ 實施例3組在培養液中添加本發明實施例1~實施例3所述含雨生紅球藻提取物的植物鹽，添 加量為〇.7mg/ ml，對照組不作處理。培養2周后，用常規方法測定活細胞數，并與對照組比 較，計算培養2周后的死細胞比例。實驗處理數據如表4所示。
[0054]表4抑制癌細胞試驗的死細胞比例
除非另有說明，本發明中所采用的百分數均為重量百分數，本發明所述的比例，均為質 量比例。
[0055]最后應說明的是：以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可 以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的 保護范圍之內。
【主權項】
1. 一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述植物鹽，原料包括雨生紅球藻 提取物和鹽地堿蓬植物鹽。2. 根據權利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，包括以下重 量份的原料:雨生紅球藻提取物2~4份，鹽地堿蓬植物鹽6~8份。3. 根據權利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述雨生紅 球藻提取物，蛋白質含量為21.2~26.1%，蝦青素含量2.7~3.2%。4. 根據權利要求1所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽，其特征在于，所述鹽地堿 蓬植物鹽，黃酮含量為2 · 6~2 · 7mg/g，Ca含量為2600~2700mg/kg。5. -種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于，所述雨生紅球藻提取 物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取頻率為30~50 KHZ。6. 根據權利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，提取功率為60~ 8017. 根據權利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備包括超聲波提取步驟，所述超聲波提取步驟，聲波提取時間5 ~13min〇8. 根據權利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括稀堿破壁步驟，所述稀堿溶液的濃度為0.0 4~ 0.3mol/L，浸泡時間為16~20 h。9. 根據權利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在于， 所述雨生紅球藻提取物的制備還包括層析步驟，所述層析步驟，洗脫液濃度為40~90%，所 述洗脫液為低級的醇、酮、酯的一種或幾種以任意比例組合的水溶液。10. 根據權利要求5所述的一種含雨生紅球藻提取物的植物鹽的制備方法，其特征在 于，所述雨生紅球藻提取物的制備還包括干燥步驟，所述干燥步驟，干燥時間為9~16h，冷凍 溫度為-38~-52°C，干燥室真空壓力為0~15pa。
【文檔編號】A23L33/105GK105962285SQ201610294010
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月3日
【發明人】王勝
【申請人】王勝