一種從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法。a、取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，然后剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中進行粉碎，使得組織塊粉碎，得粉碎液；b、將粉碎液利用500目篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液；c、將步驟b的濾液移到玻璃容器中，常溫靜止8?12h，蟲黃藻與組織液分層，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸；即可獲得鮮活蟲黃藻。利用本發明的方法可以獲得純度96％以上的鮮活蟲黃藻，從而為硨磲幼體培育提供餌料，為蟲黃藻純化培養提供原料，為研究硨磲與蟲黃藻共生機制研究提供實踐基礎。
【專利說明】
_種從碎碟外套膜中提取蟲黃藻的方法
技術領域
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[0001]本發明屬于海洋農業中生物餌料培養技術領域，具體涉及一種從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法。
【背景技術】
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[0002]蟲黃藻(Zooxanthe I Ia;復數Zooxanthel Iae)是海藻的一種，是多種海洋動物和原生動物內的一種金黃色細胞間共生菌，特別是珊瑚綱生物，如石珊瑚和熱帶海葵等常見。據估計，每mm3的珊瑚組織內有3萬個蟲黃藻，它們與珊瑚蟲互惠共存。蟲黃藻大多數都是自養生物，并會為宿主提供易位式還原碳化物，如:葡萄糖、甘油、氨基酸等光合作用的產物。蟲黃藻亦有在其他原生動物和一些無脊椎動物共生，如硨磲、foraminiferans和放射蟲等。
[0003]硨磲主要分布在印度洋、太平洋海域。特別在印尼、緬甸、馬來西亞、菲律賓、澳大利亞等國的低潮區附近的珊瑚礁間或較淺的礁內較多。它們都生活在熱帶海域的珊瑚礁環境中。我國的臺灣、海南、西沙群島及其它南海島嶼也有分布，分別為庫氏硨磲、無鱗硨磲、鱗硨磲、長硨磲、番紅硨磲、硨蠔等。硨磲常與大量蟲黃藻(Zooxanthellae)共生。這種單胞藻可在硨磲體內循環，并可進行光合作用，供硨磲豐富的營養。硨磲的外套膜邊緣有一種叫玻璃體的結構，能聚合光線，可使蟲黃藻大量繁殖。傳統意義上，絕大部分單胞藻游離在海水中，不與其他有機體共生;而蟲黃藻與硨磲組織互惠共生，為其提供主要營養來源，具有獨特的生活方式。那么，如何研發一種快速、簡便高效的方法從硨磲的組織內將蟲黃藻提取出來，成為本發明的主要創新點。
【發明內容】
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[0004]本發明的目的是提供一種快速、簡便高效的從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法。本發明能從硨磲外套膜中提取到鮮活蟲黃藻，從而為硨磲幼體培育提供餌料，為蟲黃藻純化培養提供原料，為研究硨磲與蟲黃藻共生機制研究提供實踐基礎。
[0005]本發明的從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0006]a、取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，然后剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水棒汁機中進行粉碎，使得組織塊粉碎，得粉碎液；
[0007]b、將粉碎液利用用500目篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液；
[0008]C、將步驟b的濾液移到玻璃容器中，蟲黃藻密度控制在300萬個/ml以下，常溫靜止8-12h，蟲黃藻與組織液分層，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸即可以獲得純度96%以上的鮮活蟲黃藻。
[0009]優選，所述的取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，然后剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中進行粉碎，使得組織塊粉碎，得粉碎液優選是以鮮活的硨磲外套膜作為材料，利用解剖剪剪取硨磲外套膜上顏色較深部分，再利用解剖剪將顏色較深部分的外套膜剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中，采用渦旋攪拌器粉碎2-3min，使得組織塊完全粉碎，得到粉碎液。
[0010]優選，所述的取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，其取的部位是外層外套膜，因為硨磲外套膜分為兩層，外層顏色深，蟲黃藻含量高，內層顏色較淺，蟲黃藻含量低。
[0011]優選，所述的放置于盛有新鮮海水榨汁機中優選是在每毫升新鮮海水中加入0.Ι-ο.2g 的剪成小塊的外套膜的量加入。因為組織塊過多 ，會出現大量粘稠狀碎沫 ，不利于蟲黃藻完全過濾，組織塊過少，蟲黃藻獲得密度太小。
[0012]優選，所述的采用榨汁機的渦旋轉速為15000-18000轉/min，轉數過低不利于組織全完粉碎;轉數過高，容易破壞蟲黃藻。
[0013]所述的500目篩絹網過濾，是為了盡力去除雜質，還要保證蟲黃藻提取效率，因為蟲黃藻大小在5_6μπι，確保蟲黃藻能夠完全留在濾液中。
[0014]利用本發明的方法可以獲得純度96%以上的鮮活蟲黃藻，從而為硨磲幼體培育提供餌料，為蟲黃藻純化培養提供原料，為研究硨磲與蟲黃藻共生機制研究提供實踐基礎。
【具體實施方式】
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[0015]以下實施例是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。
[0016]實施例1:
[0017]a、外套膜剪取:于2014年5月，從海南采集6個鱗硨磲空運至中國科學院南海海洋研究所熱帶海洋生物與生態重點實驗，利用培育珊瑚的海鹽配制鹽度為32ppt的海水，水溫控制在26-28 °C，微充氣暫養鱗硨磲3天。以這些鮮活的硨磲外套膜作為材料，利用解剖剪剪取顏色較深部分，即剪取硨磲的外層外套膜；
[0018]b、組織粉碎:利用解剖剪將步驟a中的硨磲的外層外套膜剪成小塊，之后放置于盛有新鮮海水榨汁機中，小塊的外層外套膜的密度為0.15g/ml，即每ml新鮮海水中含有0.15g的小塊的外層外套膜，采用渦旋攪拌器粉碎，15000轉/min，3min，組織塊100%粉碎，得到粉碎液；
[0019]C、過濾:將粉碎液利用25微米網孔(500目)篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液；
[0020]d、重懸:轉移步驟(C)中的濾液至玻璃容器中，蟲黃藻密度為300萬個/ml，靜止8h，蟲黃藻與組織液分層，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸；即可以獲得純度96%以上的鮮活蟲黃藻。
[0021]實施例2
[0022]a、外套膜剪取:于2014年10月，從海南采集9個長硨磲空運至中國科學院南海海洋研究所熱帶海洋生物與生態重點實驗，利用培育珊瑚的海鹽配制鹽度為33ppt的海水，水溫控制在27-28 °C，微充氣暫養長硨磲2天。以這些鮮活的硨磲外套膜作為材料，利用解剖剪剪取顏色較深部分，即剪取外層外套膜；
[0023]b、組織粉碎:利用解剖剪將步驟a中的外層外套膜剪成小塊，之后放置于盛有新鮮海水榨汁機中，小塊的外層外套膜的密度為0.2g/ml，即每ml新鮮海水中含有0.2g的小塊的外層外套膜，采用榨汁機，渦旋轉速為18000轉/min，攪拌2min，組織塊10 %粉碎，得到粉碎液；
[0024]c、過濾:將粉碎液利用25微米網孔(500目)篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液；
[0025]d、重懸:轉移步驟(C)中的濾液至玻璃容器中，蟲黃藻密度為240萬個/ml，靜止1h，蟲黃藻與組織液分離，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸;既可以獲得純度98%以上的鮮活蟲黃藻。
[0026]實施例3
[0027]a、外套膜剪取:于2015年3月，從海南采集13個番紅硨磲空運至中國科學院南海海洋研究所熱帶海洋生物與生態重點實驗，利用培育珊瑚的海鹽配制鹽度為33ppt的海水，水溫控制在26-27°C，微充氣暫養番紅硨磲I天。以這些鮮活的硨磲外套膜作為材料，利用解剖剪剪取顏色較深部分，即剪取外層外套膜；
[0028]b、組織粉碎:利用解剖剪將步驟a中的外層外套膜剪成小塊，之后放置于盛有新鮮海水榨汁機中，小塊的外層外套膜的密度為0.lg/ml，即每ml新鮮海水中含有0.1g的小塊的外層外套膜，采用榨汁機粉碎，渦旋轉速為18000轉/min，3min，組織塊100 %粉碎，得到粉碎液；
[0029]c、過濾:將粉碎液利用25微米網孔(500目)篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液；
[0030]d、重懸:轉移步驟(C)中的濾液至玻璃容器中，蟲黃藻密度為200萬個/ml，靜止12h，蟲黃藻與組織液分層，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸；即可以獲得純度近乎100%的鮮活蟲黃藻。
【主權項】
1.一種從硨磲外套膜中提取蟲黃藻的方法，其特征在于，包括以下步驟: a、取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，然后剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中進行粉碎，使得組織塊粉碎，得粉碎液； b、將粉碎液利用500目篩絹網過濾濾液，丟棄濾渣，留下濾液； c、將步驟b的濾液移到玻璃容器中，蟲黃藻密度控制在300萬個/ml以下，常溫靜止8-12h，蟲黃藻與組織液分層，之后倒掉濾液，留下沉淀物，加入新鮮海水，重懸；即可獲得鮮活蟲黃藻。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，然后剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中進行粉碎，使得組織塊粉碎，得粉碎液是以鮮活的硨磲外套膜作為材料，利用解剖剪剪取硨磲外套膜上顏色較深部分，再利用解剖剪將顏色較深部分的外套膜剪成小塊，再放置于盛有新鮮海水榨汁機中，粉碎2_3min，使得組織塊完全粉碎，得到粉碎液。3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的取鮮活硨磲的外套膜上顏色較深的部分，其取的部位是外層外套膜。4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的放置于盛有新鮮海水榨汁機中是以每毫升新鮮海水中加入0.1 -0.2g的剪成小塊的外套膜的量加入。5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的榨汁機的渦旋轉速為15000-18000轉/min0
【文檔編號】A23K50/80GK105876275SQ201610261535
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月25日
【發明人】張躍環, 肖述, 李軍, 喻子牛
【申請人】中國科學院南海海洋研究所