一種水產品天然生物保鮮劑及其制備方法和應用
【專利摘要】本發明涉及一種水產品天然生物保鮮劑，按重量份數計由以下成分組成：硫酸軟骨素寡糖16～24份，抗氧化肽35～40份，姜黃提取物41～45份，除菌水300～450份；還涉及該生物保鮮劑的制備方法和在水產品保鮮中的應用。本發明中的生物保鮮劑無毒、無殘留、低成本，可有效避免水產品脂肪、蛋白質等不被氧化破壞，并保持水產品鮮亮的色澤；同時，充分利用姜黃提取物的廣譜抗菌活性，防止各種水產品常見菌在水產品中保藏過程中的滋生和繁殖，從而對水產品起到有效的保鮮作用，顯著延長水產品的保鮮期。此外，該保鮮劑的制備過程中，硫酸軟骨素寡糖和抗氧化肽均以水產品加工副產物為原料，可降低生產成本，提升水產品加工的產值，改善環境，具有顯著的社會效益。
【專利說明】
一種水產品天然生物保鮮劑及其制備方法和應用
技術領域
[0001] 本發明涉及水產品保鮮技術領域，尤其涉及一種水產品天然生物保鮮劑及其制備 方法和應用。
【背景技術】
[0002] 水產品由于味道鮮美、營養豐富，富含對心血管病具有療效的n~3不飽和脂肪酸 和其他活性物質，因此越來越受到人們的喜歡。由于魚蝦等水產品的肌肉中水分含量約 70%，組織脆弱、天然免疫物質少、不飽和脂肪酸易氧化及可溶性蛋白質含量高，因此比一 般的動物肉組織不易貯藏，容易降低品質，甚至腐敗。
[0003] 保鮮劑處理是水產品儲運處理中的常用手段，它不僅能有效減緩水產品鮮度下 降，并且能增加水產品的持水性，防止在儲運過程中變色。目前，常用的水產品保鮮劑一般 為化學保鮮劑，如專利號為ZL200710066793.7(授權公告號為CN 101002579B)的中國發明 專利《蝦類保鮮劑及其應用》公開了一種蝦類保鮮劑，該保鮮劑以亞硫酸鹽類結合一定量的 分散劑制成，雖然解決了蝦類保鮮冰中保鮮劑(包括亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、焦亞硫酸鹽、低 亞硫酸鹽)分布不均勻的問題，但亞硫酸鹽有毒性，不僅影響食用者的身體健康，而且也會 使得使用該種化學保鮮劑的蝦類產品不符合一些西方國家的食品安全規定，從而給生產企 業帶來經濟損失。
[0004] 生物保鮮劑是近幾年興起的一種新型保鮮劑，一般從動植物、微生物中提取或利 用現代生物工程技術得到，其以安全、健康等特點受到人們的關注。如申請號為 201410639965.5(申請公布號為CN 104322648 A)的中國發明專利《一種冰保鮮鯧魚的方 法》公開了一種茶多酚生物保鮮劑；申請號為200910234813.6(申請公布號為CN 102038270 A)的中國發明專利《貝類生物保鮮劑》公開了一種貝類生物保鮮劑，該生物保鮮劑由丙氨 酸、溶菌酶、甘氨酸、抗壞血酸、磷酸鎂組成。
[0005] 現有的生物保鮮劑與傳統水產品保鮮劑相比，安全性顯著提高，但大多數的生物 保鮮劑的保鮮效果不理想，還有待進一步提高。
【發明內容】
[0006] 本發明所要解決的第一個技術問題是針對現有技術而提供一種保鮮效果好的水 產品天然生物保鮮劑。
[0007] 本發明所要解決的第二個技術問題是針對現有技術而提供一種上述水產品天然 生物保鮮劑的制備方法。
[0008] 本發明所要解決的第三個技術問題是針對現有技術而提供一種上述水產品天然 生物保鮮劑在水產品保鮮中的應用。
[0009] 本發明解決上述第一技術問題所采用的技術方案為：一種水產品天然生物保鮮 劑，其特征在于，按重量份數計由以下成分組成:硫酸軟骨素寡糖16~24份，抗氧化肽35~ 40份，姜黃提取物41~45份，除菌水300~450份。
[0010] 上述方案中的硫酸軟骨素寡糖具有較強的抗氧化活性，能夠保護機體細胞膜免受 氧化損傷，同時也能防止水產品中脂肪的氧化;抗氧化肽能夠抑制空氣中的氧氣導致的水 產品脂肪氧化和變色，能夠保持食品的良好風味和鮮亮的色澤;姜黃乙醇提取物中含有姜 黃素、姜黃酮、龍腦、姜黃烯、石竹烯等多種活性成分，這些成分具有很好地抑菌和抗氧化作 用，能夠顯著抑制大腸桿菌、鰻弧菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、酵母菌和霉菌等多種水產 品中常見菌的生長和增殖，同時姜黃提取物中的姜黃素、姜黃酮均是良好的天然抗氧化成 分，與上述硫酸軟骨素寡糖和抗氧化肽配合作用，能夠抑制氧氣、自由基等對脂肪、蛋白質、 DNA和色素的氧化損傷。
[0011] 作為優選，所述硫酸軟骨素寡糖以水產品加工中產生的骨質副產物為原料制得， 降低生產成本，環保、經濟。
[0012] 本發明解決第二個技術問題所采用的技術方案為:上述水產品天然生物保鮮劑的 制備方法，包括以下步驟:分別制備上述硫酸軟骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黃提取物，按上 述質量份數將硫酸軟骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黃提取物混合，加入除菌水，攪拌均勻得所 需的水產品天然生物保鮮劑。
[0013] 作為優選，所述硫酸軟骨素寡糖通過以下步驟制得：
[0014] (1)以金槍魚骨、魷魚喉骨為原料，煮沸后剔除殘留的肌肉、脂肪和其他結締組織， 搗碎勻漿后得勻漿液；
[0015] ⑵按照體積比1:1~2在上述勾衆液中加入丙酮，攪拌脫脂2~3h，靜置，棄去丙酮 層，得脫脂固形物；
[0016] (3)按固液比1:1~3g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節 pH為5.0~7.0，攪拌均勻，得混合物；
[0017] (4)將上述混合物升溫至50~60°C，加入菠蘿蛋白酶，加酶量為1000~2000U/g，酶 解時間為6~10h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第一次酶解液；
[0018] (5)調節上述第一次酶解液的pH為8.0~9.0，加入堿性蛋白酶，加酶量為1500~ 3000U/g，酶解溫度為50~55°C，攪拌酶解3~6h，升溫至75°C處理lOmin得第二次酶解液；
[0019] (6)將上述第二次酶解液4000~5000rpm離心10min，取上清液；
[0020] (7)在上述上清液中加入體積分數60~90 %的乙醇，pH6.0~8.5條件下，沉淀獲得 硫酸軟骨素；
[0021] (8)按料液比1:20~25g/mL向上述硫酸軟骨素中加入上0.4mol/L鹽酸溶液，65~ 80°C水浴攪拌酸解18~24h;冷卻至室溫，加入氫氧化鈉中和，冷凍干燥，得硫酸軟骨素寡 糖。
[0022]作為優選，所述抗氧化肽通過以下步驟制得：
[0023] (1)取洗凈后的金槍魚、魷魚加工副產物，組織搗碎勻漿后的勻漿液，備用；
[0024] (2)按照料液比1:6~9g/mL向上述勾衆液中加入異丙醇，于35~40 °C下攪拌脫脂 24~48h，然后5000~8000rpm離心15min，棄去上清，收集脫脂固形物沉淀；
[0025] (3)按固液比1:3~5g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節 pH為5.0~7.0，攪拌均勻，得混合物。
[0026] (4)上述混合物攪拌升溫至50~60°C，加入風味蛋白酶，加酶量為1000~2000U/g， 50~60°C酶解3~6h，得到酶解產物;將上述酶解產物升溫至75°C以上，并保持10~15min， 滅酶，冷卻至室溫，于5000rpm離心1 Omin，得到酶解液，凍干得酶解物干粉；
[0027] (5)將上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液，配成20~25mg/mL的溶 液，于0.1~〇.15MPa的工作壓力和20~25°C的溫度下，分別采用截留分子量7kDa、5kDa、 3kDa和lkDa的超濾膜對所得酶解產物進行超濾處理，收集各組分，通過測定各組分對DPPH 自由基的清除能力，確定各組分的抗氧化能力，收集抗氧化能力最強的組分并制得干粉； [00 28] (6)將上述抗氧化能力最強的組分用pH 6? 5~7? 5的磷酸鹽緩沖液配成20~25mg/ mL的溶液，經葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用pH6.5~7.5磷酸鹽緩沖液進行洗脫，根據 220nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠過濾酶解 抗氧化肽，凍干得抗氧化肽。
[0029]作為優選，所述姜黃提取物通過以下步驟制得：
[0030] (1)姜黃塊根粉碎后過40~50目篩，制得姜黃粉；
[0031] (2)將上述姜黃粉與60~85%乙醇以質量體積比1: 5~10混合均勻，旋轉提取2小 時，離心或者過濾，取清液，得姜黃提取液，將該姜黃提取液濃縮20~25倍，得姜黃提取濃縮 液；
[0032] (4)按照藥液輔料比1:4~8,向上述濃縮液中加入糊精或玉米淀粉，混合均勻；
[0033] (5)65~8(TC烘干10~12h，得干燥產物；
[0034] (6)將上述干燥產物粉碎，過100目篩，得姜黃提取物干粉制劑。
[0035]本發明技術第三個技術問題所采用的技術方案為:上述水產品天然生物保鮮劑在 水產品保鮮中的應用:新鮮水產品預處理后噴灑或浸泡于上述保鮮劑中，密封包裝后置于1 ~4°C保藏。
[0036]作為優選，所述的水產品為魚類，應用上述保鮮劑對魚類進行處理時包括以下步 驟:新鮮魚類去除內臟，洗凈瀝干，將上述保鮮劑均勻地噴灑于魚體表面，接著將其進行真 空氣調包裝，最后將包裝后的魚類冷藏，冷藏溫度為1~4°C。如此處理，可使魚肉保持較好 的新鮮度和口感。
[0037] 進一步，作為優選，所述的水產品為蝦類，應用上述保鮮劑對蝦類進行處理時包括 以下步驟:將鮮活蝦類用冰水猝死，接著將其浸泡于濃度為20~30%的保鮮劑溶液中50~ 60min，將蝦類從保鮮劑溶液中撈出瀝干，密封保藏后置于4 °C保藏。如此處理，可有效避免 蝦體黑變、腐敗變質，保持蝦體的新鮮度。
[0038]與現有技術相比，本發明的優點在于:本發明中的生物保鮮劑無毒、無殘留、低成 本，選用硫酸軟骨素寡糖、抗氧化肽和姜黃提取物三種物質進行合理組配，使三者的生物活 性有機結合，充分利用他們的抗氧化活性，可有效避免水產品脂肪、蛋白質等不被氧化破 壞，并保持水產品鮮亮的色澤；同時，充分利用姜黃提取物的廣譜抗菌活性，防止各種水產 品常見菌在水產品中保藏過程中的滋生和繁殖，從而對水產品起到有效的保鮮作用，顯著 延長水產品的保鮮期。此外，該保鮮劑的制備過程中，硫酸軟骨素寡糖和抗氧化肽均以水產 品加工副產物為原料，可降低生產成本，提升水產品加工的產值，改善環境，具有顯著的社 會效益。
【具體實施方式】
[0039]以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0040] 實施例1:水產品天然生物保鮮劑的制備
[0041] 本實施例中的水產品天然生物保鮮劑通過以下步驟制備：
[0042] 1、硫酸軟骨素寡糖的制備
[0043] (1)以金槍魚骨、魷魚喉骨為原料，將該原料煮沸lh，然后剔除殘留的肌肉、脂肪和 其他結締組織，用高速組織搗碎機勻漿，得勻漿液；
[0044] (2)按照體積比1:1在上述勻漿液中加入丙酮，150rpm攪拌脫脂2h，靜置，棄去丙酮 層，得脫脂固形物；
[0045 ] (3)按固液比1:1 g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mo 1 /L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 5.0, 攪拌均勻，得混合物；
[0046] (4)將上述混合物升溫至50°C，加入菠蘿蛋白酶，加酶量為1000U/g，酶解時間為 6h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第一次酶解液；
[0047] (5)調節上述第一次酶解液的pH為8.0，加入堿性蛋白酶，加酶量為1500U/g，酶解 溫度為50°C，攪拌酶解3h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第二次酶解液；
[0048] (6)將上述第二次酶解液4000rpm離心10min，取上清液；
[0049] (7)在上述上清液中加入體積分數60 %的乙醇，pH6.0條件下，沉淀獲得硫酸軟骨 素；
[0050] (8)按料液比1: 20g/mL向上述硫酸軟骨素中加入濃度0.4mo 1/L鹽酸溶液，65°C水 浴攪拌酸解24h;冷卻至室溫，加入氫氧化鈉中和，冷凍干燥，得硫酸軟骨素寡糖。
[00511 2、抗氧化肽的制備
[0052] (1)取洗凈后的金槍魚、魷魚加工副產物（魚皮、碎肉以及魚頭），用高速組織搗碎 機勻漿，得勻漿液，備用；
[0053] (2)按照料液比1: 9g/mL向上述勻漿液中加入異丙醇，于40 °C下攪拌脫脂24h，然后 5000rpm離心15min，棄去上清，收集脫脂固形物沉淀；
[OOM] (3)按固液比l:3g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 5.0, 攪拌均勻，得混合物；
[0055] (4)上述混合物攪拌升溫至60°C，加入風味蛋白酶，加酶量為1000U/g，60°C酶解 3h，得到酶解產物;將上述酶解產物升溫至75 °C以上，并保持10~15min，滅酶，冷卻至室溫， 于5000rpm離心10min，得到酶解液，凍干得酶解物干粉；
[0056] (5)將上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液，配成20mg/mL的溶液，于 0.1~0.15MPa的工作壓力和20~25°C的溫度下，分別采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和 lkDa的超濾膜對所得酶解產物進行超濾處理，收集各組分，通過測定各組分對DPPH自由基 的清除能力，確定各組分的抗氧化能力，收集抗氧化能力最強的組分并制得干粉;本實施例 中，分子量小于lkDa的肽類組分抗氧化能力最強；
[0057] (6)將上述分子量小于lkDa的超濾酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液配 成20mg/mL的溶液，經過葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用pH 6.5~7.5磷酸鹽緩沖液進行洗 脫，根據220nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠過 濾酶解抗氧化肽，凍干得抗氧化肽。
[0058] 3、姜黃提取物的制備
[0059] (1)姜黃塊根粉碎后過50目篩，制得姜黃粉；
[0060] (2)將上述姜黃粉與60%乙醇以質量體積比1:5混合均勻，lOOrpm旋轉提取2小時， 3000rpm離心1 Omin，重復提取3次，取清液，得姜黃提取液，將該姜黃提取液濃縮20倍，得姜 黃提取濃縮液；
[0061 ] (4)按照藥液輔料比1:4，向上述濃縮液中加入糊精或玉米淀粉，混合均勻；
[0062] (5) 65 °C烘干12小時，得干燥產物；
[0063] (6)上述干燥產物粉碎，過100目篩，得姜黃提取物干粉制劑。
[0064] 4、取16份上述制備的硫酸軟骨素寡糖、40份上述制備的抗氧化肽、44份上述姜黃 提取物，混合均勻，加入300份除菌水，得所需的水產品天然生物保鮮劑。
[0065] 實施例2:水產品天然生物保鮮劑的制備
[0066] 本實施例中的水產品天然生物保鮮劑通過以下步驟制備：
[0067] 1、硫酸軟骨素寡糖的制備
[0068] (1)以金槍魚骨、魷魚喉骨為原料，將該原料煮沸lh，然后剔除殘留的肌肉、脂肪和 其他結締組織，用高速組織搗碎機勻漿，得勻漿液；
[0069] (2)按照體積比1:2在上述勻漿液中加入丙酮，150rpm攪拌脫脂3h，靜置，棄去丙酮 層，得脫脂固形物；
[0070] (3)按固液比1: 2g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 6.0,攪拌均勻，得混合物；
[0071] (4)將上述混合物升溫至60 °C，加入菠蘿蛋白酶，加酶量為1500U/g，酶解時間為 8h，升溫至75 °C處理1 Omin滅酶，得第一次酶解液；
[0072] (5)調節上述第一次酶解液的pH為9.0，加入堿性蛋白酶，加酶量為2100U/g，酶解 溫度為55°C，攪拌酶解4h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第二次酶解液；
[0073] (6)將上述第二次酶解液5000rpm離心10min，取上清液；
[0074] (7)在上述上清液中加入體積分數75%的乙醇，pH8.5條件下，沉淀獲得硫酸軟骨 素；
[0075] (8)按料液比1: 25g/mL向上述硫酸軟骨素中加入濃度為0.4mo 1/L鹽酸溶液，80°C 水浴攪拌酸解21h;冷卻至室溫，加入氫氧化鈉中和，冷凍干燥，得硫酸軟骨素寡糖。
[0076] 2、抗氧化肽的制備
[0077] (1)取洗凈后的金槍魚、魷魚加工副產物（魚皮、碎肉以及魚頭），用高速組織搗碎 機勻漿，得勻漿液，備用；
[0078] (2)按照料液比l:8g/mL向上述勻漿液中加入異丙醇，于35°C下攪拌脫脂48h，然后 8000rpm離心15min，棄去上清，收集脫脂固形物沉淀；
[0079 ] (3)按固液比1: 5g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mo 1 /L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 6.0，攪拌均勻，得混合物。
[0080] (4)上述混合物攪拌升溫至50°C，加入風味蛋白酶，加酶量為1500U/g，50°C酶解 6h，得到酶解產物;將上述酶解產物升溫至75 °C以上，并保持10~15min，滅酶，冷卻至室溫， 于5000rpm離心10min，得到酶解液，凍干得酶解物干粉；
[0081 ] (5)將上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液，配成25mg/mL的溶液，于 0.1~0.15MPa的工作壓力和20~25°C的溫度下，分別采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和 lkDa的超濾膜對所得酶解產物進行超濾處理，收集各組分，通過測定各組分對DPPH自由基 的清除能力，確定各組分的抗氧化能力，收集抗氧化能力最強的組分并制得干粉;本實施例 中，分子量小于lkDa的肽類組分抗氧化能力最強；
[0082] (6)將上述分子量小于lkDa的超濾酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液配 成25mg/mL的溶液，經過葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用pH 6.5~7.5磷酸鹽緩沖液進行洗 脫，根據220nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠 過濾酶解抗氧化肽，凍干得抗氧化肽。
[0083] 3、姜黃提取物的制備
[0084] (1)姜黃塊根粉碎后過40目篩，制得姜黃粉；
[0085] (2)將上述姜黃粉與60~85%乙醇以質量體積比1:10混合均勻，200rpm旋轉提取2 小時，過濾，重復提取3次，取清液，得姜黃提取液，將該姜黃提取液濃縮20~25倍，得姜黃提 取濃縮液；
[0086] (4)按照藥液輔料比1:6，向上述濃縮液中加入糊精或玉米淀粉，混合均勻；
[0087] (5) 80 °C烘干10小時，得干燥產物；
[0088] (6)上述干燥產物粉碎，過100目篩，得姜黃提取物干粉制劑。
[0089] 4、取18份上述制備的硫酸軟骨素寡糖、37份上述制備的抗氧化肽、43份上述姜黃 提取物，混合均勻，加入350份除菌水，攪拌均勻，得所需的水產品天然生物保鮮劑。
[0090] 實施例3:水產品天然生物保鮮劑的制備
[0091] 本實施例中的水產品天然生物保鮮劑通過以下步驟制備：
[0092] 1、硫酸軟骨素寡糖的制備
[0093] (1)以金槍魚骨、魷魚喉骨為原料，將該原料煮沸lh，然后剔除殘留的肌肉、脂肪和 其他結締組織，用高速組織搗碎機勻漿，得勻漿液；
[0094] (2)按照體積比1:1在上述勻漿液中加入丙酮，150rpm攪拌脫脂2h，靜置，棄去丙酮 層，得脫脂固形物；
[0095] (3)按固液比l:3g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 7.0,攪拌均勻，得混合物；
[0096] (4)將上述混合物升溫至50°C，加入菠蘿蛋白酶，加酶量為2000U/g，酶解時間為 l〇h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第一次酶解液；
[0097] (5)調節上述第一次酶解液的pH為8 ? 0，加入堿性蛋白酶，加酶量為3000U/g，酶解 溫度為50°C，攪拌酶解6h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第二次酶解液；
[0098] (6)將上述第二次酶解液4000rpm離心10min，取上清液；
[0099] (7)在上述上清液中加入體積分數90%的乙醇，pH7.0條件下，沉淀獲得硫酸軟骨 素；
[0100] (8)按料液比l:23g/mL向上述硫酸軟骨素中加入上0.4mol/L鹽酸溶液，65~80°C 水浴攪拌酸解24h;冷卻至室溫，加入氫氧化鈉中和，冷凍干燥，得硫酸軟骨素寡糖。
[0101] 2、抗氧化肽的制備
[0102] (1)取洗凈后的金槍魚、魷魚加工副產物(魚皮、碎肉以及魚頭），用高速組織搗碎 機勻漿，得勻漿液，備用；
[0103] (2)按照料液比l:9g/mL向上述勻漿液中加入異丙醇，于40°C下攪拌脫脂36h，然后 7000rpm離心15min，棄去上清，收集脫脂固形物沉淀；
[0104] (3)按固液比1: 4g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 7.0,攪拌均勻，得混合物。
[0105] (4)上述混合物攪拌升溫至60°C，加入風味蛋白酶，加酶量為2000U/g，55°C酶解 4.5h，得到酶解產物;將上述酶解產物升溫至75 °C以上，并保持10~15min，滅酶，冷卻至室 溫，于5000rpm離心10min，得到酶解液，凍干得酶解物干粉；
[0106] (5)將上述酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液，配成20~25mg/mL的溶 液，于0.1~〇.15MPa的工作壓力和20~25°C的溫度下，分別采用截留分子量7kDa、5kDa、 3kDa和lkDa的超濾膜對所得酶解產物進行超濾處理，收集各組分，通過測定各組分對DPPH 自由基的清除能力，確定各組分的抗氧化能力，收集抗氧化能力最強的組分并制得干粉;本 實施例中，分子量小于lkDa的肽類組分抗氧化能力最強；
[0107] (6)將上述分子量小于lkDa的超濾酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液配 成25mg/mL的溶液，經過葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用pH 6.5~7.5磷酸鹽緩沖液進行洗 脫，根據220nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠 過濾酶解抗氧化肽，凍干得抗氧化肽。
[0108] 3、姜黃提取物的制備
[0109] (1)姜黃塊根粉碎后過50目篩，制得姜黃粉；
[0110] (2)將上述姜黃粉與60~85%乙醇以質量體積比1:7混合均勻，150rpm旋轉提取2 小時，3000rpm離心10min，重復提取3次，取清液，得姜黃提取液，將該姜黃提取液濃縮20~ 25倍，得姜黃提取濃縮液；
[0111] (4)按照藥液輔料比1:8，向上述濃縮液中加入糊精或玉米淀粉，混合均勻；
[0112] (5) 70 °C烘干11小時，得干燥產物；
[0113] (6)上述干燥產物粉碎，過100目篩，得姜黃提取物干粉制劑。
[0114] 4、取20份上述制備的硫酸軟骨素寡糖、35份上述制備的抗氧化肽、45份上述姜黃 提取物，混合均勻，加入400份除菌水，攪拌均勻，得所需的水產品天然生物保鮮劑。
[0115]實施例4:水產品天然生物保鮮劑的制備
[0116] 與實施例1不同的是，實施例4中，取24份上述制備的硫酸軟骨素寡糖、35份上述制 備的抗氧化肽、41份上述姜黃提取物，混合均勻，加入450份除菌水，攪拌均勻，得所需的水 產品天然生物保鮮劑。
[0117] 實施例5:對大黃魚的保鮮處理實驗
[0118] 實驗組:取實施例1~實施例4中制備的生物保鮮劑進行大黃魚的保鮮處理:將新 鮮大黃魚去除內臟，清洗干凈，瀝干后將該生物保鮮劑均勻噴灑于大黃魚體和魚肉表面，然 后包裝入袋。包裝入袋后，用氣調包裝機抽真空、充氣和熱封口進行氣調包裝。將包裝好的 大黃魚進行冷藏，冷藏溫度為1~4°C。
[0119] 對照組：與實驗組不同的是，對照組采用市售的常規水產品保鮮劑對大黃魚進行 處理，其他處理方式與實驗組相同。處理60天后，將實驗組和對比組中的大黃魚進行檢驗， 檢驗結果如表2、表3所示。
[0120] (1)感官評價效果檢驗
[0121]表1魚肉感官評定評分標準
[0123]表2大黃魚感官評定結果
[0125] 由表2可知，本發明的水產品生物保鮮劑能夠顯著提高大黃魚的保鮮效果，保證了 大黃魚的氣味、色澤和質地，延長保鮮期。
[0126] (2)菌落總數的測定
[0127] 測定方法參考GB/T4789.2-2010操作，無菌條件下取25g大黃魚魚肉，放于225ml含 玻璃珠的無菌生理鹽水中，充分混勻，制成1:10的稀釋液，根據樣品腐敗程度，選擇合適稀 釋度，每個稀釋度做三次平行，采用倒平板法測定菌落總數，4個實施例的菌落總數測定結 果分別為8.67 X 104CFU/g、1.19 X 105CFU/g、9.45 X 104CFU/g，對照組的平均測定結果為 3.17X105CFU/g。可見，本發明中的水產品生物保鮮劑具有良好的抗菌性，能夠顯著抑制大 黃魚保鮮過程中細菌的增殖。
[0128] (3)揮發性鹽基氮(TVB-N)的測定
[0129] 將魚去鱗、去皮沿背脊取肌肉部分，組織搗碎機搗碎，按照國標GB/T 5009.44-2003，測定肉中TVB-N的含量，結果參見表3。
[0130]表3生物保鮮劑對大黃魚揮發性鹽基氮含量的影響
[0132] 由表4可見，采用本發明的生物保鮮劑的實驗組中（實施例1至實施例4)，揮發性鹽 基氮的含量均比對照組顯著下降，表明本發明中的生物保鮮劑能夠顯著延長大黃魚的保鮮 期。
[0133] 實施例6:對南美白對蝦的保鮮處理實驗
[0134] 實驗組:取實施例1~實施例4中制備的生物保鮮劑進行南美白對蝦的保鮮處理： 將鮮活南美白對蝦放入冰水中猝死，接著將對蝦浸泡在配制好的20 %保鮮劑中60min，瀝干 后用聚乙烯食品袋包裝密封后置于4°C冰箱中。
[0135] 對照組：與實驗組不同的是，對照組采用市售的常規水產品保鮮劑對南美白對蝦 進行處理，其他處理方式與實驗組相同。處理10天后，將實驗組和對比組中的南美白對蝦進 行檢驗，檢驗結果如表4、表5所示。
[0136] (1)菌落總數的測定
[0137] 參考GB/T4789.2-2010進行操作，測定對蝦的菌落總數，結果如表4所述。
[0138] 表4保鮮劑對南美白對蝦菌落總數的影響(CFU/g)
[0140] (2)揮發性鹽基氮(TVB-N)的測定
[0141] 對蝦去頭、去殼取肌肉切碎，按照國標GB/T 5009.44-2003測定蝦肉中TVB-N的含 量。
[0142] 表5生物保鮮劑對南美白對蝦肉中揮發性鹽基氮含量的影響
[0144] 由表4和表5可見，本發明生物保鮮劑能夠顯著抑制南美白對蝦菌落總數的增長， 同時也顯著抑制了蝦肉中揮發性鹽基氮的產生，具有顯著的保鮮效果。
[0145] 綜上可見，本發明中的水產品天然生物保鮮劑保鮮效果較好，具有顯著的抗氧化 活性和抗菌性，可有效避免水產品脂肪、蛋白質等不被氧化破壞，并保持水產品鮮亮的色 澤，能有效防止各種水產品常見菌在水產品中保藏過程中的滋生和繁殖，從而對水產品起 到有效的保鮮作用，顯著延長水產品的保鮮期。
【主權項】
1. 一種水產品天然生物保鮮劑，其特征在于，按重量份數計由以下成分組成:硫酸軟骨 素寡糖16~24份，抗氧化肽35~40份，姜黃提取物41~45份，除菌水300~450份。2. 如權利要求1所述的水產品天然生物保鮮劑，其特征在于，所述硫酸軟骨素寡糖以水 產品加工中產生的骨質副產物為原料制得。3. -種如權利要求1所述的水產品天然生物保鮮劑的制備方法，其特征在于包括以下 步驟:分別制備上述硫酸軟骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黃提取物，按上述質量份數將硫酸軟 骨素寡糖、抗氧化肽以及姜黃提取物混合，加入除菌水，攪拌均勻得所需的水產品天然生物 保鮮劑。4. 如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述硫酸軟骨素寡糖通過以下步驟制 得： (1) 以金槍魚骨、魷魚喉骨為原料，煮沸后剔除殘留的肌肉、脂肪和其他結締組織，搗碎 勻漿后得勻漿液； (2) 按照體積比1:1~2在上述勻漿液中加入丙酮，攪拌脫脂2~3h，靜置，棄去丙酮層， 得脫脂固形物； (3) 按固液比1:1~3g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mo 1 /L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 5.0~7.0，攪拌均勻，得混合物； (4) 將上述混合物升溫至50~60°C，加入菠蘿蛋白酶，加酶量為1000~2000U/g，酶解時 間為6~10h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第一次酶解液； (5) 調節上述第一次酶解液的pH為8.0~9.0，加入堿性蛋白酶，加酶量為1500~3000U/ g，酶解溫度為50~55°C，攪拌酶解3~6h，升溫至75°C處理10分鐘滅酶，得第二次酶解液； (6) 將上述第二次酶解液4000~5000rpm離心10min，取上清液； (7) 在上述上清液中加入體積分數60~90%的乙醇，pH6.0~8.5條件下，沉淀獲得硫酸 軟骨素； (8) 按料液比1:20~25g/mL向上述硫酸軟骨素中加入上0.4mol/L鹽酸溶液，65~80°C 水浴攪拌酸解18~24h;冷卻至室溫，加入氫氧化鈉中和，冷凍干燥，得硫酸軟骨素寡糖。5. 如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述抗氧化肽通過以下步驟制得： (1) 取洗凈后的金槍魚、魷魚加工副產物，組織搗碎勻漿后的勻漿液，備用； (2) 按照料液比1:6~9g/mL向上述勾衆液中加入異丙醇，于35~40 °C下攪拌脫脂24~ 48h，然后5000~8000rpm離心15min，棄去上清，收集脫脂固形物沉淀； (3) 按固液比1: 3~5g/mL向上述脫脂固形物中加入0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，調節pH為 5.0~7.0，攪拌均勻，得混合物。 (4) 上述混合物攪拌升溫至50~60°C，加入風味蛋白酶，加酶量為1000~2000U/g，50~ 60 °C酶解3~6h，得到酶解產物;將上述酶解產物升溫至75 °C以上，并保持10~15min，滅酶， 冷卻至室溫，于5000rpm離心10min，得到酶解液，凍干得酶解物干粉； (5) 將上述酶解物干粉溶于pH 6 · 5~7 · 5的磷酸鹽緩沖液，配成20~25mg/mL的溶液，于 0.1~0.15MPa的工作壓力和20~25°C的溫度下，分別采用截留分子量7kDa、5kDa、3kDa和 lkDa的超濾膜對所得酶解產物進行超濾處理，收集各組分，通過測定各組分對DPPH自由基 的清除能力，確定各組分的抗氧化能力，收集抗氧化能力最強的組分并制得干粉； (6) 將上述抗氧化能力最強的組分用pH 6.5~7.5的磷酸鹽緩沖液配成20~25mg/mL的 溶液，經過葡聚糖凝膠G-25柱層析分離，用pH 6.5~7.5磷酸鹽緩沖液進行洗脫，根據220nm 下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中DPPH自由基清除活性最高組分為凝膠過濾酶解抗氧化 肽，凍干得抗氧化肽。6. 如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述姜黃提取物通過以下步驟制得： (1) 姜黃塊根粉碎后過50目篩，制得姜黃粉； (2) 將上述姜黃粉與60~85%乙醇以質量體積比1:5~10混合均勻，旋轉提取2小時，離 心或者過濾，取清液，得姜黃提取液，將該姜黃提取液濃縮20~25倍，得姜黃提取濃縮液； (4) 按照藥液輔料比1:4~8,向上述濃縮液中加入糊精或玉米淀粉，混合均勻； (5) 65~80 °C烘干10~12小時，得干燥產物； (6) 上述干燥產物粉碎，過100目篩，得姜黃提取物干粉制劑。7. -種如權利要求1所述的水產品天然生物保鮮劑在水產品保鮮中的應用，其特征在 于，新鮮水產品預處理后噴灑或浸泡于上述保鮮劑中，密封包裝后置于1~4°C保藏。8. 如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的水產品為魚類，應用上述保鮮劑對魚 類進行處理時包括以下步驟:新鮮魚類去除內臟，洗凈瀝干，將上述保鮮劑均勻地噴灑于魚 體表面，接著將其進行真空氣調包裝，最后將包裝后的魚類冷藏，冷藏溫度為1~4°C。9. 如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述的水產品為蝦類，應用上述保鮮劑對蝦 類進行處理時包括以下步驟:將鮮活蝦類用冰水猝死，接著將其浸泡于濃度為20~30%的 保鮮劑溶液中50~60min，將蝦類從保鮮劑溶液中撈出瀝干，密封保藏后置于4°C保藏。
【文檔編號】A23L3/3562GK105851200SQ201610256480
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月22日
【發明人】王進波, 齊莉莉, 梅樂和, 胡升, 喻鵬飛
【申請人】浙江大學寧波理工學院