一種乳酸鏈球菌素微乳液的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品防腐保鮮技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有抑食源性致病菌的含有乳酸鏈球菌素的微乳液。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸鏈球菌素是乳酸鏈球菌產(chǎn)生的一種多肽類抑菌物質(zhì)，屬于天然安全的生物防腐劑，也稱為乳酸鏈球菌肽，英文名稱為NISIN，由34個(gè)氨基酸殘基組成，分子量約為3500Da。乳酸鏈球菌素因由乳酸菌產(chǎn)生，可抑制大多數(shù)革蘭氏陽性細(xì)菌，且對(duì)芽孢桿菌的孢子有較好的抑制效果，在人體內(nèi)可以降解為氨基酸而不存在安全問題，目前作為防腐劑被廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)。乳酸鏈球菌素是一種淺棕色到白色的固體粉末，在水中的溶解度較小，較易溶解于酸性溶液中，幾乎不溶于堿性溶液。
[0003]微乳液具有穩(wěn)定性高、增溶量大、界面張力低等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、日用化工等領(lǐng)域，應(yīng)用前景十分廣闊。在食品領(lǐng)域中，微乳技術(shù)在飲料生產(chǎn)、熱敏性物料包埋、食品防腐等方面的應(yīng)用逐漸增多，目前成為研究熱點(diǎn)。目前微乳液的制備方法主要包括超聲波乳化或者高壓均質(zhì)乳化等方法，在超聲乳化和均質(zhì)過程中需添加適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣?br>[0004]食源性疾病是引起食品安全的重要問題，世界衛(wèi)生組織將食源性疾病定義為:“凡是通過攝食進(jìn)入人體的，使人體患感染性或中毒性的疾病。”試驗(yàn)性疾病主要由食源性致病菌引起，導(dǎo)致腹瀉、中毒等多種疾病，每年造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。常見的食源性致病菌包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等。
[0005]乳酸鏈球菌素作為高效的安全性天然防腐劑有較廣的應(yīng)用，但其溶解性相對(duì)較低，且價(jià)格較高，通過添加乳化劑等成分，制備含有乳酸鏈球菌素的微乳液，可以提高其應(yīng)用效果，如目前乳酸鏈球菌素以抑制革蘭氏陽性菌為主，通過超聲波乳化結(jié)合高壓均質(zhì)處理相結(jié)合的方法制備微乳液有可能拓寬乳酸鏈球菌素的應(yīng)用范圍。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]1.為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種(乳酸鏈球菌素微乳液，該微乳液含有乳酸鏈球菌素、調(diào)和油、曲拉通X-100、95 %乙醇、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和純凈水等成分，經(jīng)超聲波和高壓均質(zhì)處理后，提高了乳酸鏈球菌素的溶解性，得到具有良好穩(wěn)定性的微乳液，該微乳液具有良好的抑制革蘭氏陽性菌如枯草芽孢桿菌外，還能夠抑制革蘭氏陰性菌如大腸桿菌和金黃色葡萄球菌)。
[0007]2.乳酸鏈球菌素在應(yīng)用過程中存在溶解性低，以抑制革蘭氏陽性細(xì)菌為主，且因乳酸鏈球菌素是天然的防腐劑，價(jià)格相對(duì)較高，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于肉制品、八寶粥、飲料等不同食品的防腐，但進(jìn)行微乳化處理進(jìn)行抗菌的研究報(bào)道不多。為提高乳酸鏈球菌素應(yīng)用過程中的均勻性和應(yīng)用效果，采用超聲乳化和高壓均質(zhì)技術(shù)對(duì)含有乳酸鏈球菌素和乳化劑的溶液進(jìn)行處理，得到了穩(wěn)定的微乳液。
[0008]3.與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明構(gòu)建了一種含有乳酸鏈球菌素的微乳液，拓寬了乳酸鏈球菌素的應(yīng)用范圍和作用效果，降低了其實(shí)際應(yīng)用成本，在食源性致病菌控制方面顯示了較好的效果。
[0009]4.本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0010](I)精確稱量一定量的乳酸鏈球菌素，以0.02M鹽酸水溶液為溶劑配制成含有乳酸鏈球菌素的溶液，
[0011](2)吸取一定的乳酸鏈球菌素溶液于大試管中，依次添加95%乙醇、色拉油、曲拉通X-100、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨，并以去離子水補(bǔ)充至10mL,以上各步驟均充分搖動(dòng)試管，使試管內(nèi)溶液混合均勻，
[0012](3)將混合好的溶液置于超聲波清洗器中進(jìn)行超聲乳化處理，采用200W功率處理幾分鐘，隨后將乳化液置于高壓均質(zhì)機(jī)(ATS engineering INC)進(jìn)行高壓均質(zhì)處理，其中壓力 200_600bar，均質(zhì)時(shí)間 2_10min，
[0013](4)對(duì)所得到的微乳液，采用激光粒度分布儀進(jìn)行粒度分析，
[0014](5)將得到的微乳液適量混合或涂布于牛肉膏蛋白胨平板上，以混合或涂布無菌水的平板為對(duì)照，再分別涂布一定濃度的微生物懸液，對(duì)比乳酸鏈球菌素的抑菌情況。
[0015]目前，乳酸鏈球菌素的應(yīng)用過程中存在溶解性不好、成本較高和抑菌譜不廣等問題，且少有將乳酸鏈球菌素作為抑菌成分進(jìn)行微乳化制備的研究，為了提高乳酸鏈球菌素應(yīng)用過程中的應(yīng)用效果，采用超聲乳化和高壓均質(zhì)技術(shù)對(duì)含有乳酸鏈球菌素、乙醇、色拉油、曲拉通X-100、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨等成分的溶液進(jìn)行乳化和均質(zhì)處理，得到了穩(wěn)定的微乳液。與現(xiàn)有乳酸鏈球菌素的應(yīng)用方法和技術(shù)相比，乳酸鏈球菌素的超聲波和均質(zhì)處理提高了其應(yīng)用范圍，獲得了具有良好穩(wěn)定性的微乳液，在革蘭氏陽性細(xì)菌和食源性致病陰性細(xì)菌的抑制方面具有良好的效果。
【附圖說明】
[0016]圖1為乳酸鏈球菌素微乳液粒徑分布圖。
[0017]圖2為100 μ L0.5% (m / v)乳酸鏈球菌素微乳液抑菌效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]實(shí)施例1
[0019]本實(shí)施例中微乳液的配方含有乳酸鏈球菌素、95%乙醇、調(diào)和油、曲拉通X-100、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和純凈水。首先以0.02M的鹽酸溶液配制5%的乳酸鏈球菌素溶液，通過移液槍、吸量管等吸取乳酸鏈球菌素溶液0.5mL，依次加入95%乙醇0.3mL，調(diào)和油0.1mL,曲拉通X-1000.lmL，吐溫800.lmL，十六烷基三甲基溴化銨(10%水溶液)0.2mL于大試管中，滴加過程中以漩渦振蕩器進(jìn)行混合，并逐漸少量多次加入純凈水，補(bǔ)充至混合物溶液總量為100mL。然后采用超聲波對(duì)混合溶液進(jìn)行超聲處理，處理功率200W，處理時(shí)間為3min,之后再通過高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)處理,均質(zhì)壓力300bar,均質(zhì)時(shí)間5min,即可得均勻一致的微乳液，高壓均質(zhì)后，乳液的均勻度明顯提高，放置過程的穩(wěn)定性也有顯著增力口。將50 μ L微乳液涂布于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基后，加入100 μ L稀釋至16濃度的枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄糖球菌懸液，空白對(duì)照組首先以無菌水50 μ L涂布，再加入100 μ L上述菌液，在37°C培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)，滴加微乳液的平板上枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄糖球三種微生物的數(shù)量分別為空白對(duì)照的21.5%，22.3%和4%，微乳液具有良好的抑菌效果。
[0020]實(shí)施例2
[0021]本實(shí)施例中微乳液的配方含有乳酸鏈球菌素、95%乙醇、調(diào)和油、曲拉通X-100、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和純凈水。首先以0.02M的鹽酸溶液配制5%的乳酸鏈球菌素溶液，通過移液槍、吸量管等吸取乳酸鏈球菌素溶液4mL，依次加入95%乙醇3mL，調(diào)和油4mL,曲拉通X-1002mL，吐溫801mL，十六烷基三甲基溴化銨(10%水溶液)3mL于大燒杯中，滴加過程中以漩渦振蕩器進(jìn)行混合，并逐漸少量多次加入純凈水，補(bǔ)充至混合物溶液總量為1000mL。然后采用超聲波對(duì)混合溶液進(jìn)行超聲處理，處理功率200W，處理時(shí)間為6min，之后再通過高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行均質(zhì)處理，均質(zhì)壓力500bar，均質(zhì)時(shí)間8min，即可得均勻一致的微乳液，高壓均質(zhì)后乳液的均勻度和穩(wěn)定性明顯提高。將100μ L微乳液涂布于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基后，加入10uL稀釋至16濃度的枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄糖球菌懸液，空白對(duì)照組首先以無菌水100 μ L涂布，再加入100 μ L上述菌液，在37°C培養(yǎng)36小時(shí)后計(jì)數(shù)，滴加微乳液的平板上枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和金黃色葡萄糖球三種微生物的數(shù)量分別為空白對(duì)照的8.5%，14.3%和2.1 %，所得的微乳液顯示了良好的抑菌效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種(乳酸鏈球菌素微乳液)，其特征在于:(該微乳液含有乳酸鏈球菌素、調(diào)和油、曲拉通X-100、95%乙醇、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和純凈水等成分，經(jīng)超聲波和高壓均質(zhì)處理后，提高了乳酸鏈球菌素的溶解性，得到具有良好穩(wěn)定性的微乳液，該微乳液具有良好的抑制革蘭氏陽性菌如枯草芽孢桿菌外，還能夠抑制革蘭氏陰性菌如大腸桿菌和金黃色葡萄球菌)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的(一種乳酸鏈球菌素微乳液)，其特征在于: (1)一種含有乳酸鏈球菌素的微乳液，該微乳液含有具有抑菌成分的乳酸鏈球菌素，其含量(m / V)在 0.1-0.4%0 (2)一種含有乳酸鏈球菌素的微乳液，該微乳液中還含有調(diào)和油、曲拉通X-100、.95%乙醇、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和水等成分，其中調(diào)和油百分比(V / V)為.0.5-4 % %，曲拉通X-100百分比(V / V)為0.5 % -3 %，95 %乙醇百分比(v / V)為I%-5%，吐溫80百分比(V / v)為1% _3%，十六烷基三甲基溴化銨(10%水溶液)百分比(V / V)為0.05-4%,其余為去離子水,乳液總量為100份。 (3)一種含有乳酸鏈球菌素的微乳液，該微乳液制備的具體方法如下: ①精確稱量一定量的乳酸鏈球菌素，以0.02M的鹽酸水溶液配制成0.2-0.8%的乳酸鏈球菌素水溶液， ②吸取5mL的乳酸鏈球菌素溶液于大試管中，依次添加95%乙醇、色拉油、曲拉通X-100、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨至(2)中濃度，并以去離子水補(bǔ)充至10mL,以上各步驟均充分搖動(dòng)試管，使試管內(nèi)溶液混合均勻， ③將混合好的溶液置于超聲波清洗器中進(jìn)行超聲乳化處理，采用200W功率處理.2-10min,隨后將乳化液置于高壓均質(zhì)機(jī)(ATS engineering INC)進(jìn)行高壓均質(zhì)處理,其中壓力 200-600bar，均質(zhì)時(shí)間 2_10min， ④所得微乳液一部分用于粒度分析，采用激光粒度分布儀(BT-9300H，丹東市百特儀器有限公司)進(jìn)行粒度分析測(cè)定，一部分用于抑菌實(shí)驗(yàn)。 (4)一種乳酸鏈球菌素微乳液，該微乳液先后采用超聲波乳化和高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)兩種方法進(jìn)行處理，經(jīng)一定時(shí)間處理后，所得的微乳液各成分分散均勻一致，達(dá)到穩(wěn)定的狀態(tài)，且相比較實(shí)際應(yīng)用過程中減少了乳酸鏈球菌素的用量。 (5)一種乳酸鏈球菌素微乳液，該微乳液具有良好的拮抗枯草芽孢桿菌的作用，配制乳酸鏈球菌素百分含量(m / v)分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的微乳液，各取5(^1^混合于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板上，以滴加無菌水的平板為空白對(duì)照，測(cè)定微乳液對(duì)微生物的抑制率，所得乳酸鏈球菌素微乳液具有明顯的抑制革蘭氏陰性和陽性菌的效果。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種乳酸鏈球菌素微乳液，包括其制備方法和應(yīng)用范圍，屬于食品保鮮技術(shù)領(lǐng)域。該微乳液含有乳酸鏈球菌素、調(diào)和油、曲拉通X-100、95％乙醇、吐溫80、十六烷基三甲基溴化銨和純凈水等成分，經(jīng)超聲波超聲和高壓均質(zhì)處理后，提高了乳酸鏈球菌素的溶解性，得到具有較好穩(wěn)定性的微乳液，該微乳液具有良好的抑制枯草芽孢桿菌的性能，還能夠抑制革蘭氏陰性菌如大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。
【IPC分類】A23L3-3571
【公開號(hào)】CN104770827
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410016022
【發(fā)明人】蔡成崗, 張慧, 劉彩琴, 金建昌, 王楠, 嚴(yán)小平, 朱敏
【申請(qǐng)人】浙江樹人大學(xué)
【公開日】2015年7月15日
【申請(qǐng)日】2014年1月13日