一種制備那西肽預混劑的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種制備那西肽預混劑的方法。
【背景技術】
[0002]那西肽是有12個氨基酸及其衍生物組成的多肽，屬于大分子物質，在體內不吸收，是一種新型的在動物體內不殘留的飼料添加劑。
[0003]那西肽作為一種新型的飼料添加劑不但能促進畜禽生長，提高飼料效率，而且還具有不易產生耐藥性，無殘留，對環境影響小，對人畜安全，這些特點完全符合人們對飼料添加劑的要求，而且它不僅能廣泛應用于畜禽業而且還能廣泛應用于水產業，具有一定的社會效益和經濟效益。
[0004]目前那西肽預混劑的生產方法主要有以下兩種:(I)發酵液經過干燥后，菌絲體與輔料混合。(2)發酵液經過提取得到粗品，然后與輔料混合。其中前者是較為常用的方法，但是與法規有所相悖，已經逐漸被后者取代。而后者工藝的關鍵是以更加經濟的方法從發酵液中得到粗品，常用的方法有兩種:(1)選擇與水互溶的溶劑對菌絲進行浸提，該方法浸提效果好，但選擇性差，雜質含量高，后續處理較為復雜。(2)選擇與水不互溶的溶劑對菌絲進行浸提，經過固液分離、有機溶劑濃縮后，用乙醚等溶劑洗滌，然后用硅膠柱層析得到純品，再與輔料進行混合，該方法工藝復雜。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是提供一種從那西肽發酵液中制劑提取那西肽粗品，進行制備那西肽預混劑的方法，該方法工序短、收率高、操作簡單，解決了現有技術中制備那西肽預混劑不符合法規要求和工藝復雜、收率低的問題。
[0006]為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是:
[0007]一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:包括以下操作步驟:
[0008](I)向那西肽發酵液中加入酸性物質至pH值為中性；
[0009](2)向步驟⑴所得的發酵液中加入二氯甲烷，在20-25?攪拌2_4h，然后進行固液分離，收集液體，靜置分層，二氯甲烷相收集，為一次浸提液；
[0010](3)向固液分離后的菌絲加入與步驟(2)中二氯甲烷等體積的水和二氯甲烷，20-25?攪拌2-4h，然后進行固液分離，收集液體，靜置分層，二氯甲烷相收集，得到二次浸提液；
[0011 ] (4)將步驟(2)和步驟(3)所得到的一次浸提液和二次浸提液混合，加入飽和食鹽水進行洗滌2-3次，至水洗液無色，然后進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體，將該淡黃色固體與玉米粉進行混合制粒，即得到那西肽預混劑。
[0012]進一步的技術方案在于:所述步驟(I)加入的酸性物質調pH至6.5-7.5，所述酸性物質為草酸。
[0013]進一步的技術方案在于:所述步驟(2)中發酵液與二氯甲烷的體積比為1:0.8-1.1o
[0014]進一步的技術方案在于:所述步驟(3)中二氯甲烷與水的體積比為0.9-1.1:1。
[0015]進一步的技術方案在于:所述步驟(4)中一次浸提液和二次浸提液混合后與飽和食鹽水的體積比為1:0.7-1.0，淡黃色固體與玉米粉的質量比為1:98.5-99.5。
[0016]進一步的技術方案在于:所述步驟(2)中所述固液分離方法為:板框過濾、離心過濾中的任意一種。
[0017]采用上述技術方案所產生的有益效果在于:
[0018]本發明所述制備那西肽預混劑的方法，使那西肽在酸性或堿性條件下較為穩定，減少了二氯甲烷的揮發，除去了大量的水溶性雜質，步驟大大簡化，法規符合度高，工序短，收率高，適于推廣應用。
【具體實施方式】
[0019]下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明的一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0020]在下面的描述中闡述了很多具體細節以便于充分理解本發明，但是本發明還可以采用其他不同于在此描述的其它方式來實施，本領域技術人員可以在不違背本發明內涵的情況下做類似推廣，因此本發明不受下面公開的具體實施例的限制。
[0021]實施例1
[0022]取那西肽的發酵液(效價2023ug/mL) 1L調節pH值至7.14，加入1L 二氯甲烷，常溫攪拌4h，然后進行板框過濾，濾液靜置Ih分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相10.1L，備用。
[0023]板框過濾后的菌絲加入1L水和1L 二氯甲烷進行二次浸提，常溫攪拌4h，然后進行板框過濾，濾液靜置Ih分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相10.2L，備用。
[0024]將一次浸提液和二次浸提液混合，共20.3L，加入16L的飽和食鹽水進行洗滌，重復兩次，得到19.9L 二氯甲烷溶液，然后進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體21.32g，HPLC檢測純度為93.1 %，則粗品收率為98.1 %。粗品加入177.2g輔料，制備I %那西肽預混劑。
[0025]實施例2
[0026]取那西肽的發酵液(效價1879ug/mL) 1L調節pH值至6.83，加入9.6L 二氯甲烷，常溫攪拌3h，然后進行板框過濾，濾液靜置Ih分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相9.7L，備用。
[0027]板框過濾后的菌絲加入9.9L水和9.8L二氯甲烷進行二次浸提，常溫攪拌4h，然后進行板框過濾，濾液靜置Ih分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相9.9L，備用。
[0028]將一次浸提液和二次浸提液混合，共19.6L，加入15L的飽和食鹽水進行洗滌，重復兩次，得到19.4L 二氯甲烷溶液，然后進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體19.68g，HPLC檢測純度為92.6%，則粗品收率為97.0%o粗品加入162.5g輔料，制備I %那西肽預混劑。
[0029]實施例3
[0030]取那西肽的發酵液(效價2173呢/1^)51^調節？!1值至7.01，加入5.IL 二氯甲烷，常溫攪拌4h，然后進行板框過濾，濾液靜置50min分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相5.17L，備用。
[0031]板框過濾后的菌絲加入4.9L水和5.0L 二氯甲烷進行二次浸提，常溫攪拌4h，然后進行離心過濾，濾液靜置48min分層，下層為二氯甲烷相，收集二氯甲烷相5.04L，備用。
[0032]將一次浸提液和二次浸提液混合，共10.21L,加入8.0L的飽和食鹽水進行洗滌，重復兩次，得到10.07L 二氯甲烷溶液，然后進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體11.09g，HPLC檢測純度為94.0%，則粗品收率為95.9%。粗品加入93.16g輔料，制備I %那西肽預混劑。
[0033]本發明所述制備那西肽預混劑的方法，先將那西肽的發酵液調節pH值至中性，目的:那西肽在酸性或堿性條件下不穩定，在中性條件較為穩定。
[0034]然在發酵液中加入等體積的二氯甲烷，常溫攪拌2_4h，然后進行固液分離，收集液體，靜置分層，大量水溶性雜質被留在水相中，二氯甲烷相含有的水溶性雜質較少，為一次浸提液。
[0035]為了提高收率，固液分離后的菌絲加入等量的水和二氯甲烷進行二次浸提，其步驟與一次浸提相同，得到二次浸提液。在進行浸提的過程中加入了水，一方面減少了二氯甲烷的揮發，另一方面除去了大量的水溶性雜質。
[0036]將一次浸提液和二次浸提液混合，加入一定量的飽和食鹽水進行洗滌2-3次，除去了絕大部分雜質，使后續步驟大大簡化，可以直接進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體，將該固體按照一定的比例與輔料進行混合制粒，即得到那西肽預混劑。
[0037]本發明所述那西肽的發酵液可以采用本領域常用菌種經過發酵后得到的發酵液。本發明所提供的制備那西肽預混劑的方法，法規符合度高，工序短，收率高，適于推廣應用。
【主權項】
1.一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:包括以下操作步驟: (1)向那西肽發酵液中加入酸性物質至pH值為中性； (2)向步驟(I)所得的發酵液中加入二氯甲烷，在20-25?攪拌2-4h，然后進行固液分離，收集液體，靜置分層，二氯甲烷相收集，為一次浸提液； (3)向固液分離后的菌絲加入與步驟(2)中二氯甲烷等體積的水和二氯甲烷，20-25?攪拌2-4h，然后進行固液分離，收集液體，靜置分層，二氯甲烷相收集，得到二次浸提液； (4)將步驟(2)和步驟(3)所得到的一次浸提液和二次浸提液混合，加入飽和食鹽水進行洗滌2-3次，至水洗液無色，然后進行減壓蒸餾，得到淡黃色固體，將該淡黃色固體與玉米粉進行混合制粒，即得到那西肽預混劑。
2.根據權利要求1所述的一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:所述步驟(I)加入的酸性物質調PH至6.5-7.5，所述酸性物質為草酸。
3.根據權利要求1所述的一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:所述步驟(2)中發酵液與二氯甲烷的體積比為1:0.8-1.1o
4.根據權利要求1所述的一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:所述步驟(3)中二氯甲烷與水的體積比為0.9-1.1:1。
5.根據權利要求1所述的一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:所述步驟(4)中一次浸提液和二次浸提液混合后與飽和食鹽水的體積比為1:0.7-1.0，淡黃色固體與玉米粉的質量比為1:98.5-99.5。
6.根據權利要求1所述的一種制備那西肽預混劑的方法，其特征在于:所述步驟(2)中所述固液分離方法為:板框過濾、離心過濾中的任意一種。
【專利摘要】本發明公開了一種制備那西肽預混劑的方法，涉及醫藥技術領域。該方法將發酵液pH值調至中性后，加入二氯甲烷，常溫攪拌2-4h，進行浸提，經過兩次浸提后，將一次浸提液和二次浸提液混合，加入食鹽水洗滌至水洗液無色，然后減壓蒸餾，得到淡黃色固體，與輔料進行混合制粒，即得到那西肽預混劑。本發明所提供的制備那西肽預混劑的方法，法規符合度高，工序短，收率高，適于推廣應用。
【IPC分類】A23K1-16
【公開號】CN104719634
【申請號】CN201510067918
【發明人】宋志倩
【申請人】河北圣雪大成制藥有限責任公司
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月10日