專利名稱：：用作敏感性試驗和抗微生物治療的佐劑的甜菜堿的制作方法
技術領域：
：本發明涉及用于確定含有分枝菌酸結構的細菌的敏感性特征的組合物和方法。本發明的組合物和方法尤其可作為佐劑用于敏感性試驗和抗微生物治療，最特別地是涉及β-內酰胺家族抗生素的試驗和治療。發明背景治療感染細菌的患者的當代方法包括篩選用于治療的抗生素。最常規的治療是根據醫生的經驗。過于簡單地，醫生只是選擇一種據認為對與患者癥狀有關的最常見傳染物有效的廣譜抗生素。然而在某些情況下，合適治療劑的選擇基于敏感性試驗。敏感性試驗通過確定何種治療劑具有成功治療一種特定病原體的最高可能性、以及何種抗微生物劑最可能是無效的來指導開業醫生。敏感性試驗是一種重要的工具，尤其當患者被確定為具有分枝桿菌感染時，最特別地當患者患結核病(TB由結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)復合體細菌(MTB)引起)時，更是如此。當前的聯邦政府建議包括對TB的所有新病例進行敏感性試驗(Tenover，F.C.等人，臨床微生物學雜志(Jour.Clin.Micro.)31767-770(1993))。敏感性試驗是一種無價的工具，實際上所有的醫生時時依賴它來為患者選擇合適的抗生素療法。治療細菌感染的方法為特定化合物的活性譜所限制。例如，不是所有的細菌都對特定的抗微生物化合物敏感。不同種類的細菌可耐受不同種類抗生素的作用。一般而言，特定抗生素的活性譜就其作用的微生物的種類而言屬于分立的組(例如，真菌對細菌，或者革蘭氏陽性菌對革蘭氏陰性菌)。抗生素通過干擾多種細胞功能發揮其作用。例如，已知不同種類的抗生素干擾細胞壁合成、RNA/DNA合成、DNA復制或蛋白質合成的多個方面。由于多種原因細菌對不同的抗生素有抗性。Quintiliani，R.等人，在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》(ManualofClinicalMicrobiology)，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1308-1326頁中綜述了幾種這樣的抗性機制并指出，抗生素必須首先進入細胞，只有這樣才能在作用位點發揮其作用。抗性的基礎可能是由于生物的通透性，或者作用位點的分子構型也許是不相容的或不復存在的。另外，細菌可修飾、破壞或消除藥劑。抗性可以是先天的或是獲得的。獲得抗性可通過遺傳物質(例如轉座因子)的獲得或通過DNA復制的固有的不忠實性(例如點突變)。分枝桿菌似乎具有一種另外的抗性機制。Heifets，L.B.等人，在《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》(DrugSusceptibilityintheChemotherapyofMycobaterialInfections)，Heifets，L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)，第13-57頁將傳染性MTB細胞的亞群分類為活躍生長的或處于休眠的不同階段。休眠使這些亞群在患者治療期間幸存。敏感性的復雜模式使治療分枝桿菌感染進一步復雜化。例如，盡管通常可用異煙肼(INH)和/或吡嗪酰胺(PZA)有效地治療MTB感染，但MAC分離株一般耐受這些藥物，而偶發分枝桿菌(M.fortuitum)和龜分枝桿菌(M.chelonae)分離株通常耐受所有的一線抗結核藥。結核病是當今世界上最流行的傳染病，傳染了世界人口的大約三分之一，約17億人(Kochi，A.，結核(Tubercle)721-6(1991))。另外，相比其它任何單發的傳染病，結核病在世界范圍內使更多人喪生(每年大約3百萬)(發病率與死亡率周報(MorbidityandMortalityWeeklyReport)42961-964(1993))。大多數TB病例在發展中國家，然而，MTB的多藥抗藥性(MDR)菌株(MDR-TB)在全球已成為一個重要問題(世界衛生組織(文件WHO/TB/96.198)危險的組群，WHO1996年結核病流行報告(WHOReportontheTuberculosisEpidemic1996)(1996))。除非采取措施阻止MDR-TB的增加，否則結核病成為發展中國家和工業化國家中最常見死因的歷史重現將不可避免。其它分枝桿菌如鳥分枝桿菌(M.avium)復合體(MAC)、副結核分枝桿菌(M.paratuberculosis)、潰瘍分枝桿菌(M.ulcerans)、麻風分枝桿菌(M.leprae)、堪薩斯分枝桿菌(M.kansasii)和偶發分枝桿菌復合體也是常見的病原體(參見Wayne，L.G.，臨床微生物學綜述(Clin.Micro.Rev.)51-25(1992)或Falkinham，J.O.，臨床微生物學綜述9177-215(199)關于不同分枝桿菌病原體的綜述)。MAC在所有晚期AIDS患者的幾乎半數中引起傳播性疾病(Nightingale，S.D.等人，傳染病雜志(Jour.Infect.Dis.)1651082-1085(1992))。世界衛生組織估計，到2000年為止感染人免疫缺陷病毒(HIV)的人數將超過4千萬(世界衛生組織(文件WHO/GPA/CNP/EVA/93.1)全球AIDS計劃(1993))。副結核分枝桿菌(鳥分枝桿菌的一個亞種)在反芻動物中引起副結核病。據估計，副結核病使美國農產品加工業(例如，牛奶和牛肉)每年損失超過15億美元，這是由于較低的生產力和繁殖力所致(Whitlock，R，第三屆國際副結核病討論會會刊，第514-522頁(1991)；Whitlock，R.等人，第89屆美國動物健康協會年會會刊，第484-490頁(1985))。分枝桿菌病耗費了大量的社會費用。迄今為止最常用并最佳表征的抗生素化合物種類是β-內酰胺。由于這些抗生素的深入性和廣泛性，用這些藥劑治療分枝桿菌感染的能力將具有顯著的優點。已有限成功地嘗試了β-內酰胺在用來治療分枝桿菌感染的治療方案中的應用(Chambers，H.F.等人，抗微生物劑化學治療(Antimicrob.AgentsChemo.)392620-2624(1995))。通過定位抗性機制擴大分枝桿菌的敏感性尤其對β-內酰胺的敏感性的能力在有效治療分枝桿菌感染中具有重要的潛力。在此所述的本發明概述了其中分枝桿菌敏感性可被表征的新方法和組合物。這些方法和組合物改變這些細菌的敏感性，以增強抗生素尤其是β-內酰胺抗生素的效力。這些方法和組合物將使其作為有效治療的一部分用于確定和/或治療這類感染。發明概述在來源于已用ThorntonWO95/27076和美國專利5,658,749的方法處理的生物學標本的液體培養瓶中，為了試圖控制不希望的污染細菌的生長，發明者在標準抗微生物制劑(即PANTA)中添加第三代頭孢菌素，頭孢噻甲羧肟(CASNo.72558-82-8)。發明者驚奇并意外地發現，當按照ThorntonWO95/27076和美國專利5,658,749用C18-羧丙基甜菜堿(CB-18)作為處理劑并與該抗微生物制劑組合使用時，液體培養敏感性顯著并驚人地降低。為了設法保持ThorntonWO95/27076和美國專利5,658,749所提供的診斷敏感性的優點，發明者進行研究來表征并消除這種液體培養敏感性的降低。這些研究產生了一類方法和組合物，其中可使用ThorntonW095/27076和美國專利5,658,749的甜菜堿樣化合物改變分枝桿菌對抗生素尤其對β-內酰胺家族抗生素的敏感性。這些方法可用于表征及改變細菌、尤其是分枝桿菌、最特別地是結核分枝桿菌復合體細菌對抗微生物化合物的敏感性，并用作抗微生物治療的佐劑。本發明進一步包括一種用于敏感性試驗的組合物，該組合物含有與一種或多種甜菜堿樣去污劑混合的一種或多種抗生素。本發明進一步包括一種用于確定微生物敏感性的試劑盒，該試劑盒含有緊鄰或相鄰的一種或多種甜菜堿樣去污劑與一種或多種抗生素。附圖簡述圖1A和圖1B概述了用來表征結核分枝桿菌分離株ATCC27294和571/573-BAL在CB-18/12B/PANTA/caz培養系統中的重要生長/處理參數的實驗設計。圖2A-2H顯示當使用圖1A和圖1B所示實驗設計檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。菱形PANTA；正方形P/caz。圖2AATCC27294，L-J，在緩沖液中處理，轉種于緩沖液中；圖2BATCC27294，L-J，在緩沖液中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖2CATCC27294，L-J，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于緩沖液中；圖2DATCC27294，L-J，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖2EATCC27294，7Hll-選擇性，在緩沖液中處理，轉種于緩沖液中；圖2FATCC27294，7H11-選擇性，在緩沖液中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖2GATCC27294，7H11-選擇性，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于緩沖液中；圖2HATCC27294，7H11-選擇性，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中。圖3A-3H顯示當使用圖1A和圖1B所示實驗設計檢測結核分枝桿菌分離株571/573-BAL時的生長曲線。菱形PANTA；正方形P/caz。圖3A571/573-BAL，L-J，在緩沖液中處理，轉種于緩沖液中；圖3B571/573-BAL，L-J，在緩沖液中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖3C571/573-BAL，L-J，在CB-18(383μg/m1)中處理，轉種于緩沖液中；圖3D571/573-BAL，L-J，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖3E571/573-BAL，7H11-選擇性，在緩沖液中處理，轉種于緩沖液中；圖3F571/573-BAL，7H11-選擇性，在緩沖液中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中；圖3G571/573-BAL，7H11-選擇性，在CB-18(383μg/m1)中處理，轉種于緩沖液中；圖3H571/573-BAL，7H11-選擇性，在CB-18(383μg/ml)中處理，轉種于CB-18(17μg/mlCB-18終濃度)中。圖4概述了用來以低濃度接種體在卵磷脂中轉種的實驗設計。該設計用來檢驗卵磷脂中和CB-18效應的能力。該實驗設計也檢驗不同接種體時的CB-18效應。圖5A-5F顯示當使用圖4所示實驗設計檢測結核分枝桿菌分離株571/573-BAL時的生長曲線。圖5A和圖5B檢測5,000倍稀釋的細菌原液(約165±54cfu)。圖5C和圖5D檢測25,000倍稀釋的細菌原液(約33±11cfu)，圖5E和圖5F檢測100,000倍稀釋的細菌原液(約8±3cfu)。菱形R.F.中的緩沖液；正方形P/caz中的緩沖液；三角形R.F.中的卵磷脂；“x”P/caz中的卵磷脂。圖5A轉種于緩沖液或緩沖液/卵磷脂中；圖5B轉種于CB-18(17μg/ml)或CB-18/卵磷脂(17μg/ml@)中；圖5C轉種于緩沖液或緩沖液/卵磷脂中；圖5D轉種于CB-18(17μg/ml)或CB-18/卵磷脂(17μg/ml@)中；圖5E轉種于緩沖液或緩沖液/卵磷脂中；圖5F轉種于CB-18(17μg/ml)或CB-18/卵磷脂(17μg/ml@)中。圖6概述了CB-18和TMA-18滴定實驗的實驗設計，其用來比較CB-18的作用與季銨鹽溴化三甲基十八烷銨(TMA-18)的作用。圖7A-7C顯示當使用圖6所示實驗設計檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P/caz。圖7A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖7B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖7C7H11-選擇，轉種于TMA-18(3.4μg/ml終濃度)中。圖8A-8C顯示當使用圖6所示實驗設計檢測結核分枝桿菌分離株571/573-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P/caz。圖8A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖8B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖8C7H11-選擇，轉種于TMA-18(3.4μg/ml終濃度)中。圖9概述了用于CB-18滴定的實驗設計，其應用表7所列不同分枝桿菌種檢驗不同CB-18濃度時的CB-18效應。圖10A和圖10B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cax；三角形3μg/mlCB-18；“x”7μg/m1CB-18；“*”13μg/mlCB-18；圓形27μg/mlCB-18；垂直影線54μg/mlCB-18；水平虛線109μg/mlCB-18。圖10A，無P-cax時的滴定。圖10B，在P-cax存在下進行的每種滴定。圖11A和圖11B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測結核分枝桿菌分離株571/573-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cax；三角形3μg/mlCB-18；“x”7μg/mlCB-18；“*”13μg/mlCB-18；圓形27μg/mlCB-18；垂直影線54μg/mlCB-18；水平虛線109μg/mlCB-18。圖11A，無P-cax時的滴定。圖11B，在P-cax存在下進行的每種滴定。圖12A和圖12B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測鳥分枝桿菌分離株ATCC25291時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-caz；三角形7μg/mlCB-18；“x”13μg/mlCB-18；“*”27μg/mlCB-18。圖12A，無P-caz時的滴定。圖12B，在P-caz存在下進行的每種滴定。圖13A和圖13B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測鳥分枝桿菌復合體分離株802-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-caz；三角形7μg/mlCB-18；“x”13μg/mlCB-18；“*”27μg/mlCB-18。圖13A，無P-caz時的滴定。圖13B，在P-caz存在下進行的每種滴定。圖14A和圖14B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測偶發分枝桿菌分離株ATCC6841時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cft；三角形7μg/mlCB-18；“x”13μg/mlCB-18；“*”27μg/mlCB-18；圓形54μg/mlCB-18；垂直影線109μg/mlCB-18。圖14A，無P-cft時的滴定。圖14B，在P-cft存在下進行的每種滴定。圖15A和圖15B顯示當使用圖9所示CB-18滴定實驗檢測偶發分枝桿菌復合體分離株495-JHH時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cft；三角形7μg/mlCB-18；“x”13μg/mlCB-18；“*”27μg/mlCB-18；圓形54μg/mlCB-18；垂直影線109μg/mlCB-18。圖15A，無P-cft時的滴定。圖15B，在P-cft存在下進行的每種滴定。圖16概述了MTB分離株對抗生素篩選實驗設計，其用來檢驗應用不同抗生素對表8所列結核分枝桿菌分離株的CB-18作用。圖17A和圖17B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖17A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖17B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖18A和圖18B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株571-BAL時的生長曲線。正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖18A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖18B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖19A和圖19B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株573-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖19A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖19B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖20A和圖20B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株535-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖20A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖20B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖21A和圖21B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株896-BAL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖21A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖21B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖22A和圖22B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株040-TBR時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖22A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖22B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖23A和圖23B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株061-TBR時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖23A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖23B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖24A和圖24B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株512-JHH時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖24A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖24B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖25A和圖25B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株538-JHH時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖25A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖25B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖26A和圖26B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株52-96-BOL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖26A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖26B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖27A和圖27B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗檢測結核分枝桿菌分離株57-96-BOL時的生長曲線。菱形R.F.；正方形PANTA；三角形P-caz；“x”P/cfp；“*”P/cax；圓形P/cft。圖27A7H11-選擇，轉種于緩沖液中。圖27B7H11-選擇，轉種于CB-18(17μg/ml終濃度)中。圖28A和圖28B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗的改進方案檢測結核分枝桿菌分離株572/573-BAL時的生長曲線。在這些實驗中，檢測了另外的非-β-內酰胺抗生素。菱形R.F.；正方形P-caz；三角形紅霉素；“x”頭孢曲松。圖28A抗生素篩選，轉種于R.F.中。圖28B抗生素篩選，轉種于CB-18中。圖29A和圖29B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗的改進方案檢測結核分枝桿菌分離株061-TBR時的生長曲線。在這些實驗中，檢測了另外的非-β-內酰胺抗生素。菱形R.F.；正方形P-caz；三角形多粘菌素B；“x”竹桃霉素；“*”林可霉素；圓形萘啶酮酸；垂直影線青霉素G；水平虛線頭孢曲松。圖29A抗生素篩選，轉種于R.F.中，圖29B抗生素篩選，轉種于CB-18中。圖30A和圖30B顯示當使用圖16所示抗生素篩選實驗的改進方案檢測結核分枝桿菌分離株57-96-BOL時的生長曲線。在這些實驗中，檢測了另外的非-β-內酰胺抗生素。菱形R.F.；正方形P-caz；三角形萘啶酮酸；“x”青霉素G；“*”頭孢噻甲羧肟；圓形頭孢曲松。圖30A抗生素篩選，轉種于R.F.中，圖30B抗生素篩選，轉種于CB-18中。圖31概述了去污劑篩選實驗設計，其用來就類似于CB-18的引起誘發敏感性的能力，篩選表10所列出的幾種甜菜堿樣去污劑和其它去污劑。圖32A顯示在圖31所述實驗中使用的所有對照的群集生長曲線，圖32B顯示所選的幾種去污劑的群集生長曲線，以突出結果的多樣性。圖32A去污劑對照菱形，緩沖液/R.F.；正方形，緩沖液/PANTA；三角形，緩沖液/P-cax；圖32B所選的去污劑菱形，吐溫80；正方形，硬脂酸；三角形，detainePB；“x”，SB-18；“＝”crosultaineE30；開環形，velvetexOLB；閉環形，C18-羧乙基甜菜堿。圖33概述了CB-18對EDTA實驗設計，其用來比較在此處的培養系統中CB-18的作用與EDTA的作用。圖34A和圖34B顯示在圖33的實驗中檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。圖34A轉種于所示的R.F.、P/cax或17μg/mlCB-18中菱形，R.F.中的緩沖液；正方形P/cax中的緩沖液；三角形R.F.中的CB-18；“x”P/cax中的CB-18。圖34B轉種于所示的含85μg/mlMgCl2的17μg/mlCB-18中或17μg/mlEDTA中菱形，R.F.中的CB-18和MgCl2；正方形P/cax中的CB-18和MgCl2；三角形R-F.中的EDTA；“x”P/cax中的EDTA。圖35A和圖35B顯示在圖33的實驗中檢測結核分枝桿菌分離株571-573-BAL時的生長曲線。圖35A轉種于所示的R.F.、P/cax或17μg/mlCB-18中菱形，R.F.中的緩沖液；正方形P/cax中的緩沖液；三角形R.F.中的CB-18；“x”P/cax中的CB-18。圖35B轉種于所示的17μg/mlCB-18與85μg/mlMgCl2或17μg/mlEDTA中菱形，R.F.中的CB-18和MgCl2；正方形P/cax中的CB-18和MgCl2；三角形R.F.中的EDTA；“x”P/cax中的EDTA。圖36概述了分枝桿菌敏感性試驗的實驗設計，其用來將分枝桿菌敏感性試驗的現行實踐與本發明的甜菜堿敏感性試驗相關聯。圖37顯示在圖36的實驗中檢測結核分枝桿菌分離株ATCC27294時的生長曲線。圖37A顯示用0.5MacFarland標準作為接種體(檢測為6.28±0.57×105cfu)時的甜菜堿敏感性結果。圖37B、37C、37D和37E分別顯示用10×(62,800±5,700cfu)、100×(6,280±570cfu)、1,000×(628±57cfu)和10,000×(63±6cfu)稀釋的MacFarland標準作為接種體時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cax；三角形15μg/mlCB-18；“x”30μg/mlCB-18；“*”60μg/mlCB-18；圓形含P/cax的15μg/mlCB-18；垂直影線含P/cax的30μg/mlCB-18；水平虛線含P/cax的60μg/mlCB-18。圖38顯示在圖36的實驗中檢測結核分枝桿菌分離株571/573-BAL時的生長曲線。圖38A顯示用0.5MacFarland標準作為接種體(檢測為1.11±0.18×106cfu)時的甜菜堿敏感性結果。圖38B、38C、38D和38E分別顯示用10×(111,000±17,900cfu)、100×(11,100+1,790cfu)、1,000×(1,110±179cfu)和10,000×(111±18cfu)稀釋的MacFarland標準作為接種體時的生長曲線。菱形R.F.；正方形P-cax；三角形15μg/mlCB-18；“x”30μg/mlCB-18；“*”60μg/mlCB-18；圓形含P/cax的15μg/mlCB-18；垂直影線含P/cax的30μg/mlCB-18；水平虛線含P/cax的60μg/mlCB-18。圖39(A、B、C)。圖39A顯示如YuanY.等人，美國國家科學院院報(Proc.Natl.Acad.Sci.)9312828-12833(1996)所述用來修飾分枝菌酸的酶機制。圖39B顯示硫代二十四酸作為這些相同酶的酶抑制劑起作用的機制形成的穩定過渡態類似物為锍羧基甜菜堿。圖39C概述了這種锍羧基甜菜堿合成的一種可能的合成機制。優選實施方案詳述在以下的敘述中，廣泛應用了在藥學領域和體外敏感性試驗中使用的許多術語。為了提供對本說明書和權利要求書包括這些術語所給定的范圍的清晰和一致的理解，提供了下列定義。“CB-18效應”意思是在甜菜堿樣去污劑存在下某些細菌尤其是分枝桿菌對抗生素的敏感性的提高。顯示該效應的方法是，在有效水平的一種或多種抗生素存在下、在有無一種或多種甜菜堿樣去污劑尤其是CB-18的情況下，體外培養一種微生物，例如一種傳染物或臨床分離株或其能夠生長的活提取物。甜菜堿樣去污劑的存在提高了某些細菌特別是分枝桿菌對抗生素的敏感性。細菌生長可以用定性或定量的方式來描述。定性結果的一個實例是簡單地指出生長或不生長。定量結果的一個實例是如本領域所知將培養天數與生長指數相比。生長指數的實例包括簡單的分級符號(例如，“-、±、1+、2+、3+和4+”)和數字指示(例如0-999)，如BACTEC12B培養系統(BectonDickinson，Cockeysville，MD，美國)所產生的。CB-18效應可以以生長的完全終止而顯示，或者對自身的總的生長無影響來表示，也可以表示為如本領域所知在生長的指數期的抑制、延遲或生長曲線斜率的降低(即生長速率的下降)。CB-18效應的重要方面在于，在微生物如傳染物或臨床分離株的一種或多種生長特征中具有觀察到的變化，這種變化在本發明的甜菜堿敏感性試驗的過程中顯示。實施例10例證了這一點，其中提供了與多種甜菜堿樣去污劑組合的不同抗生素。觀察到的變化與分離株對存在的抗生素的敏感性提高相一致。“甜菜堿敏感性試驗”意思是，為了建立微生物(例如傳染物或臨床分離株)或不同微生物的混合物的抗生素敏感性的一種模型，與一種或多種抗生素組合的一種或多種甜菜堿樣去污劑在體外試驗中的應用。在甜菜堿敏感性試驗中，使含有微生物例如均一群的微生物或微生物的型/變體/分離株等混合物的標本與含有一種抗生素和一種甜菜堿樣去污劑的組合物相接觸，并根據標本中微生物的生存力測定標本中微生物對該抗生素的敏感性。甜菜堿敏感性試驗是本發明方法的第一種實施方案。如本領域所知，該甜菜堿敏感性試驗能在一種微量滴定格式、在培養瓶中或在含有固體培養基的平板中完成。標準液體培養基格式的實例包括BACTEC(Becton-Dickinson，Cockeysville，MD)、ESPMycoSystemIITM(DIFCOLaboratories，Detroit，MI)或MT/BacTTM(OrganonTeknika，Durham，NC)。標準固體培養基的實例包括本領域所知的Mueller-Hinton瓊脂或其它相當的培養基。這些培養格式中必須添加如此處所述的適當組合、適當濃度的合適的抗生素和甜菜堿樣去污劑。與任何敏感性試驗一樣，該試驗的目的在于確定具有成功消除患者感染的最高可能性的抗生素。如本領域所知，微生物如臨床分離株或傳染物是“敏感的”意思是，該微生物(例如分枝桿菌)被一種抗生素有害地影響，這樣使這種臨床分離株或傳染物失能、非傳染或不能存活(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1281-1307頁(在此引入作為參考))。在此所用的“敏感的”與“敏感性”同義。當確定一種微生物如臨床分離株或傳染物對一種特定抗生素敏感時，稱該抗生素對這種分離株或傳染物有“活性”或對其是“活性的”。如本領域所知，“敏感性試驗”意思是一種體外試驗，籍此確定一種微生物如臨床分離株或傳染物對一系列抗微生物化合物的敏感性(Jorgensen，J.H.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1277-1280頁；Woods，G.L等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1327-1404頁；國家實驗室標準委員會，《對于需氧生長細菌的稀釋抗微生物敏感性試驗的方法》，第四版，許可的標準M7-A4Villanova，PA(1997)；國家實驗室標準委員會，《抗微生物平板敏感性試驗的執行標準》，第六版，許可的標準M2-A6Villanova，PA(1997)；國家實驗室標準委員會，《體外敏感性試驗標準與質量控制參數的發展》，許可的標準M23-AVillanova，PA(1994)；國家實驗室標準委員會，《對于結核分枝桿菌的抗分枝桿菌敏感性試驗》，試行標準M24-Tvillanova，PA(1995)(在此全部引入作為參考))。所有敏感性試驗的目的都在于更精確地預測成功的治療性介入。如本領域所知，“抗生素”意思是對傳染物的生存力、完整性、傳染性或感應性具有不利作用的本領域已知的任何化合物(參見Murray，P.R.等人編，《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)，第1281-1307頁和第1385-1404頁；Kucers，A.等人，《抗生素的應用》(TheUseofAntibiotics)第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)；以及Lorian，V.編，《實驗室醫學抗生素》(AntibioticsinLaboratoryMedicine)第二版，Williams&Wilkins，Baltimore，MD，在此全部引入作為參考)。不同種類抗生素的實例包括β-內酰胺抗生素、β-內酰胺酶抑制劑、氨基糖苷和氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯和林可酰胺(lincosamide)，以及糖肽、脂肽和多肽、磺胺和甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星，其全部都可與本發明的方法結合使用。在此使用時術語抗生素與“抗微生物劑”、“治療劑”或“藥物”同義。所有抗生素都是藥物或治療劑，但不是所有的藥物或治療劑都是抗生素。“佐劑”意思是一種化學化合物，其本身可具有或者也許不具有抗微生物活性，但當與一種或多種抗生素組合時(即同時)，該化合物協同作用增強了這些抗生素的作用。佐劑可用來提高敏感性試驗或抗微生物治療。治療佐劑的一個實例是β-內酰胺酶抑制劑(見下文)。在此所述的方法和組合物不是講β-內酰胺酶抑制劑本身作為佐劑的應用，而是甜菜堿樣去污劑作為佐劑的應用；然而，甜菜堿樣去污劑可單獨使用或與其它佐劑包括β-內酰胺酶抑制劑組合使用。術語“甜菜堿樣”與WO95/27076和美國專利5,658,749中所用的“SB-18樣”同義，在此兩篇都引入作為參考。根據WO95/27076和美國專利5,658,749的甜菜堿樣去污劑具有分散分枝桿菌索(和塊)和/或補償分枝桿菌浮力的能力。成索的分枝桿菌如結核分枝桿菌復合體(MTB)生物的分散有利于檢測，這是由于其提高了所測等分試樣代表整個標本的可能性。能分散索的甜菜堿樣去污劑具有超過16個碳原子的烷基鏈長度，含18-20個碳原子的烷基鏈是最優選的。甜菜堿樣去污劑也具有利于分枝桿菌如不成塊生長的鳥分枝桿菌復合體(MAC)收集的能力，這是由于其在某種程度上補償了這些生物的天然浮力。這種補償優選地通過一種包括去污劑向細菌細胞內移動的機制而發生。補償浮力的甜菜堿樣去污劑優選地具有超過12個碳原子的烷基鏈長度，最優選地是16-20個碳原子。因此，在此所用的“甜菜堿樣”包括WO95/27076的表2和表3和美國專利5,658,749中所述的結構，在此兩篇都引入作為參考，其中包括，例如，如WO95/27076和美國專利5,658,749所述具有SB-18樣活性的CB樣、SB樣、HSB樣、PB樣、StB樣、PhB樣、SoB樣、RevB樣、AO樣、cAB樣和ImB樣化合物。“甜菜堿樣”去污劑包括表1所示結構的兩性離子化合物。這些結構在本發明的方法中應該是最有用的。表1最有用的甜菜堿樣去污劑顯示了最有用的甜菜堿的通用結構。R1為疏水性烷基鏈，α為連接R1與陽離子β的“鍵”。R2和R3當需要時修飾陽離子。R4為連接該陽離子與陰離子γ的“橋”。>“CB樣”意為含羧酸鹽(-COO)部分作為陰離子的甜菜堿樣去污劑(例如羧基甜菜堿樣)。“SB樣”意為含磺酸鹽(-SO3)部分作為陰離子的甜菜堿樣去污劑(例如磺基甜菜堿樣)。“HSB樣”意為含磺酸鹽部分作為陰離子并且橋中含羥基(-OH)的甜菜堿樣去污劑(例如羥磺基甜菜堿樣)。“PB樣”意為含磷酸鹽(-OPO3)、膦酸鹽(-PO3)或亞膦酸鹽(-PO2)部分作為陰離子的甜菜堿樣去污劑(例如磷酸甜菜堿樣)。“StB樣”意為含硫酸鹽(-OSO3)部分作為陰離子的甜菜堿樣去污劑(例如硫酸甜菜堿樣)。“AO樣”意為含氧化物基團(-O)作為陰離子的甜菜堿樣去污劑(例如氧化胺樣)。“PhB樣”意為含鏻(-P-)部分作為陽離子的甜菜堿樣去污劑(例如鏻甜菜堿樣)。“SoB樣”意為含锍(-S-)部分作為陽離子的甜菜堿樣去污劑(例如锍甜菜堿樣)。“正烷基甜菜堿”意為含銨(-N-)部分作為陽離子的甜菜堿樣去污劑(例如正烷基甜菜堿樣)。“ImB樣”意為含咪唑啉部分作為陽離子的甜菜堿樣去污劑(例如咪唑啉甜菜堿樣)。“RevB樣”意為其中烷基鏈與陰離子共價連接、與陽離子相對的甜菜堿樣去污劑(例如反向甜菜堿樣)。“cAB樣”意為其中烷基鏈與橋共價連接、與陽離子或陰離子相對的甜菜堿樣去污劑(例如c-烷基甜菜堿樣)。“CB-18”意為N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八銨，內鹽。CB-18也被稱為N，N-二甲基-N-(正十八烷基)-N-(3-羧丙基)銨內鹽，或C18-羧丙基甜菜堿。CB-18被分配為CASNo.78195-27-4。“SB-18”意為N-十八烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.13177-41-8)。“SB-16”意為N-十六烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.2281-11-0)。“SB-14”意為N-十四烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.14933-09-6)，“SB-12”意為N-十二烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.14933-08-5)。“臨床分離株”意思是一種純化的可引起傳染的細菌菌株，這種臨床分離株來源于感染了這種傳染物的患者。一種或多種臨床分離株可來源于相同的患者，或者相同的分離株可來源于不同患者，如醫院暴發期間所見的(Pittet，D.等人，內科醫學檔案(ArchivesofInternalMedicine)1551177-1184，(1995))。這些臨床分離株一般通過標本處理與培養方法的組合來純化。這樣這些臨床分離株是活的，因此可用于在體外試驗(如敏感性試驗)中就其對抗生素的敏感性進一步分析和檢測。純化這些臨床分離株的方法包括本領域已知的方法和步驟，尤其是Kent，P.T.等人，“公共衛生分枝桿菌學III級實驗室指南”，美國衛生與人類服務部，疾病控制中心，Atlanta，GA(1985)第31-70頁，和Nolte，F.S.等人，在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第400-437頁，對于分枝桿菌的分離所述的方法，或是Clarridge，J.E.等人，在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第357-378頁，和Beaman，B.L.等人，在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第379-399頁，分別對于棒桿菌屬(Corynebacterium)和諾卡氏菌屬(Nocardia)的分離所概述的方法(在此全部引入作為參考)。“傳染物”意思是一種傳染性微生物，尤其是本領域所知的一種傳染性細菌。根據本發明的方法所特別關注的傳染物包括那些含有分枝菌酸結構的傳染物，例如，可引起疾病的分枝桿菌，最特別地是結核分枝桿菌復合體細菌(Isenberg，H.D.等人，于Murray，P.R.等人編，《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.1995，第5-18頁(在此引入作為參考))。患有由這種傳染物引起的疾病的人類或動物患者被稱為具有由這種傳染物引起的“感染”，或是“感染有”這種傳染物。引起疾病的傳染物被稱為是“致病的”。一般不致病且為患者正常菌群一部分的細菌被稱為是腐生的。在某些情況下，例如當患者被免疫損害或免疫抑制時(例如，感染了HIV，或含AIDS復合體，或經受器官移植后)，這類腐生微生物也能引起傳染。一名患者能感染有一種或多種傳染物。如本領域所知，“分枝菌酸結構”意思是在α位置被替換為適度長度的脂族鏈的β-羥酸(Goren，M.B.，細菌學綜述(Bact.Rev.)3633-64(1966)，在此引入作為參考)。含有棒桿菌分枝菌酸的生物的一個實例是白喉棒桿菌(Corynebacteriumdiphtheria)；含有諾卡菌分枝菌酸的生物的一個實例是星狀諾卡氏菌(Nocardiaasteroides)；含有分枝菌酸的生物的一個實例是結核分枝桿菌(參見Funke，G.等人，臨床微生物學綜述(Clin.Micro.Rev.)10125-159(1997)對棒狀桿菌的進一步討論(在此引入作為參考))。這些分枝菌酸樣分子在此統稱為“分枝菌酸結構”。在例如Lederer，E.，脂類的化學及物理學(Chem.Phys.Lipids)1294-315(1967)；Lederer，E.，純粹及應用化學(PureAppl.Chem.)25135-165(1971)中也可發現代表性分枝菌酸結構的其它列表，包括某些不飽和的、環丙烷樣、甲氧基化的和酮酸，兩篇在此都引入作為參考。“分枝菌酸結構”是酸穩定性分子。“抗微生物治療”意思是通過任何合適的方法用有效水平的含抗生素的組合物在體內治療人類或動物患者；例如，通過口服、注射、敷用或吸入這種抗生素。包含抗生素的本發明組合物的輸送也包括但不限于藥物通過靜脈內方式的引入、作為軟膏的活性成分或通過吞服。抗微生物治療的目的在于破壞傳染物的生存力、完整性或感應性，使得被傳染的患者或動物擺脫、消除或克服感染。抗微生物治療是指，單獨使用或組合使用-即同時或連續使用-一類或多類藥物或一類特定抗生素中的一種或多種藥物。在此使用時抗微生物治療與“抗生素治療”或“治療”同義。“有效量”意思是足以達到所希望的目標的量。例如，當在抗微生物治療過程中使用時，有效量是導致微生物感染好轉的量。這種好轉可能是對微生物的直接作用，或是一種間接作用，其使得與有效量的接觸損害該微生物，這樣提高該微生物對第二種藥劑的敏感性。如果將一種材料從純化前與之相關的材料中基本上純化到實行希望的方法或分析所需的程度，那么這種材料被稱為“基本上不含污染物”。因此，這些污染物或者完全缺乏或者以低濃度存在，此低濃度使得污染物的存在(1)當將含有這種材料的制劑的對需要該制劑的患者施用時，不妨礙所希望的治療效果，且(2)不會由于這種制劑的施用而傷害患者。“施用”或對患者“施用”是指，通過醫學領域中已知的、適于達到希望的目的的任何適當方法，將希望的物質引入希望的部位，如需要該物質的人或動物的部位，這些方法包括但不限于腸內、腸胃外(例如靜脈內)和離子滲透施用。也可以以局部置于感染部位的繃帶的形式施用，繃帶是設計用來提供本發明的抗生素和甜菜堿樣去污劑的有效釋放的。“同時施用”或對患者“同時施用”兩種或多種藥劑，如一種抗生素和一種甜菜堿樣去污劑，是指以一種制劑的形式一起施用或以各個制劑的形式分開施用這些藥劑。“藥學可接受的鹽”意為包括由藥學可接受的酸或堿形成的鹽，例如但不限于酸，如硫酸、鹽酸、硝酸、磷酸等，或者堿，如堿或堿土金屬的氫氧化物、氫氧化銨、烷基氫氧化銨等。術語“藥學可接受的載體”意為包括藥學可接受的溶劑、載體、稀釋劑等，它們被用作本發明的制劑的添加劑，以便為這些化合物的施用提供載體或佐劑。術語“治療(treatment)”或“治療(treating)”意為包括將有效量的一種或多種希望的藥劑對需要這些藥劑的患者或對象施用，其目的包括一種疾病的預防、好轉、防止或治愈，或者據認為對這些藥劑敏感的微生物的根除。使一種含微生物的標本“接觸”本發明的組合物，是指將該微生物與該組合物混合，或者以另外的方式提供該微生物與該組合物之間的接觸。本發明者偶然發現，當至少一種甜菜堿樣去污劑如C18-羧丙基甜菜堿(CB-18)與抗微生物化合物組合時，可根據誘發的敏感性區分分枝桿菌的臨床分離株。發明者認為，該現象可用于就其對這些抗微生物化合物的敏感性而表征這些臨床分離株，也通常表征微生物和傳染物。另外，發明者也認為該現象可用于在體內治療中以協同的方式提高這些分枝桿菌對這些抗微生物化合物的敏感性。因此，在最廣泛的實施方案中，本發明涉及一種表征微生物對抗微生物化合物的敏感性的方法。在一種優選實施方案中，所試微生物是一種傳染物或分離株。在一種更優選的實施方案中，表征并測定微生物對β-內酰胺抗生素的敏感性。在一種更優選的實施方案中，所試微生物從取自患者的標本中獲得，該患者被懷疑感染有不希望的含分枝菌酸結構的細菌，或處于感染的危險中，或確定已被感染。本發明的敏感性試驗在此被稱為甜菜堿敏感性試驗。該敏感性試驗的結果就在此所述的CB-18效應方面表征研究中的標本中存在的微生物，如臨床分離株或傳染物。即，本發明的敏感性試驗鑒定標本中存在的微生物是否對所試的抗生素敏感。優選地，通過本發明的敏感性試驗，鑒定標本中存在的微生物所敏感的一種或多種抗生素或其與其它有效藥劑如甜菜堿樣去污劑的組合。然而，同樣重要的是，通過本發明的敏感性試驗，鑒定標本中存在的微生物所不敏感的一種或多種抗生素或其與其它藥劑如甜菜堿樣去污劑的組合。其結果使衛生專業人員能更有效地選擇一種合適的抗微生物療法來治療患者，或者對于該微生物用其它方式消毒希望的采取標本的部位。在第二種優選實施方案中，本發明涉及一種應用甜菜堿樣去污劑作為佐劑在抗生素治療中治療患者的方法，這些患者被懷疑感染有不希望的細菌或具有感染的危險或確定已被感染。在一種優選實施方案中，這些不希望的細菌含有分枝菌酸結構。這種抗生素療法可用于以本發明的一種或多種抗生素與一種或多種甜菜堿樣去污劑的組合來治療這種感染。抗生素與甜菜堿樣去污劑的組合比單獨的抗生素療法更有效地治療患者，這是由于相比在無甜菜堿樣去污劑時應用抗生素，該組合能更快或更有效地破壞細菌的完整性，這樣致使傳染物失能、非傳染或無法存活。在第三種優選實施方案中，本發明涉及一種消毒或用其它方式防止不希望的微生物生長的方法，方法是對感染部位或懷疑含有該微生物的環境提供一種或多種抗生素與一種或多種甜菜堿的組合。本發明的敏感性試驗尤其可用于表征、估計和確定一種微生物特別是一種臨床分離株和/或傳染物對抗微生物劑的敏感性。這些微生物所致疾病可用有效量的一種或多種抗生素與甜菜堿樣去污劑的組合來治療，本發明的敏感性試驗證明該組合為治療該微生物所致感染的治療過程中的有效成分。在本發明的敏感性方法中，一組濃度的特定甜菜堿樣去污劑的應用提供了關于該去污劑效能的有用信息，應用多于一種甜菜堿樣去污劑的試驗是優選的。能檢測如希望的一樣多的甜菜堿樣去污劑或其組合。優選地至少檢測五種，盡管任何數目例如10、15、20、25或30或更多種去污劑在不同的稀釋度中也易于檢測。敏感性試驗提供關于該濃度甜菜堿樣去污劑與所選抗生素組合的作用的其它信息。特定甜菜堿樣去污劑的工作濃度或有效濃度取決于所用的去污劑。通常，有效濃度范圍為從最有效結構的0.1μg/ml到最無效結構的1mg/ml，對于大多數甜菜堿樣去污劑，1μg/ml-100μg/ml是最有效的濃度。在本發明的敏感性試驗方法中，這些甜菜堿樣去污劑可單獨使用或與其它甜菜堿樣去污劑組合使用。盡管在本發明的方法中至少一種抗生素是提供敏感性信息所必需的，但預計在甜菜堿敏感性試驗中將使用多于一種的抗生素。能檢測如希望的一樣多的抗生素或抗生素的組合。優選地至少檢測五種，盡管任何數目例如10、15、20、25或30或更多種抗生素在不同的稀釋度中也易于檢測。特定抗生素的濃度取決于所用的抗生素。通常，有效濃度范圍為從最有效抗微生物劑的0.1μg/ml到最無效化合物的100μg/ml，對于大多數抗生素，0.5μg/ml-64μg/ml是最有效的濃度。在本發明的方法中，這些抗生素可單獨使用或與其它抗生素組合使用。如同其它敏感性試驗一樣(Woods，G.L.等人，于Murray，P.R.等人編，《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1327-1404頁)，合理地預期，接種體的變化將影響甜菜堿敏感性試驗所產生的結果。接種體通過標準方法制備，包括挑取菌落或類似于本領域所知的MacFarland標準。圖5A-5F和實施例8所示的實驗結果顯示，幾個細胞到幾千個細胞的接種體的CB-18效應是可比的。通常，在此方面1個細胞到105個細胞是有效的，100-10,000個細胞是最有效的，大約1,000個細胞是優選的。低于10個細胞時，抽樣問題(例如抽樣誤差)可使試驗的結果模糊不清，高于105個細胞時，由于覆蓋系統而影響結果。1,000-10,000個細胞的接種體能使對照以適時的方式生長。然而，可使用用于觀察CB-18效應的任何接種體，并且在此方面，本發明的甜菜堿敏感性試驗類似于其它的體外敏感性試驗。在此所述的甜菜堿敏感性試驗所提供的信息是分離株、甜菜堿樣去污劑和抗生素動態相互作用的結果。甜菜堿敏感性試驗組合這三種成分，并且使技術人員能確定并調節抗生素和甜菜堿樣去污劑與接種體的適當濃度，用此方法引起CB-18效應，由此提供關于研究中的臨床分離株的特性和/或敏感性的最有用信息。實施例7顯示，在本發明的敏感性和治療方法中某些甜菜堿樣去污劑可能比其它的更有用。例如，包含對鍵的修飾的結構在此處的敏感性試驗中顯示降低的活性，并因而在治療試驗中顯示活性降低。另外，含有橋的修飾的甜菜堿樣去污劑在此處的敏感性試驗中也顯示減弱的活性，并因而在治療試驗中顯示活性降低。表1顯示那些在本發明的方法中最有用的結構。最有用的甜菜堿樣去污劑是不含修飾的甜菜堿樣去污劑，例如，其中R1為簡單的烷基，鍵(α)為簡單的亞甲基，R2和R3為氫或甲基(取決于所用的陽離子)，R4無組分。甜菜堿樣去污劑對含有分枝菌酸的細菌的毒性取決于陰離子(γ)、橋長度(R4)和烷基鏈長度(R1)。通常，在此方面必須考慮到甜菜堿的表面活性性質與作為佐劑的作用之間的平衡。例如，表面活性性質取決于陰離子的酸堿性質和烷基鏈長度。大多數離子型去污劑是磷酸甜菜堿(PO4)，而大多數非離子型去污劑是硫酸甜菜堿(SO4)。預計磷酸甜菜堿特別有毒，而硫酸甜菜堿有溶解性問題。因此，磺基甜菜堿和羧基甜菜堿是優選的，羧基甜菜堿是最優選的。根據通透性討論(實施例9)，預計羧基甜菜堿具有最優選的陰離子，而CB-18具有銨陽離子，合理地預計锍甜菜堿具有最優選的陽離子。因此，優選的結構包括正烷基磺基甜菜堿，特別優選的結構是正烷基羧基甜菜堿，最優選的結構是烷基锍羧基甜菜堿。甜菜堿的表面活性性質隨漸增的鏈長度而改變。較長的烷基鏈具有較低的臨界膠束濃度(CMC)，或者相反地，較短的烷基鏈需要較高的濃度來達到CMC。烷基鏈的長度能根據用途而改變。例如，由于較短的烷基鏈需要較高的濃度來達到CMC，那么當用于第二種實施方案時(即，抗微生物治療中)，較短的鏈是優選的，特別是當通過靜脈內途徑輸送時在本發明的治療方法中使用。此外，可使用經吸入的治療性輸送，因為可用于這種輸送的組合物較少被濃度與CMC間的關系所限制；同樣，能使用較長的烷基鏈。在第一種實施方案中(即，在體外敏感性試驗中)，可改變鏈長度的相關性，以鑒定能使可觀察到的CB-18效應達到最大的去污劑。烷基鏈長度為8-22個碳原子的甜菜堿樣去污劑是優選的，12-18個碳原子的烷基鏈長度是特別優選的，16-18個碳原子的烷基鏈長度是最優選的。為保證鹽溶的能力，最小的橋長度應當是丙烯。對微生物的毒性也隨橋長度而變(Tsubone，K.等人，藥物科學雜志(Jour.Pharm.Sci)80441-444(1991))。例如，乙烯和丁烯都顯示比丙烯更高的毒性。可能乙烯橋具有溶解性問題，這取決于所用的離子。因此，進一步的考慮需要使適當的烷基鏈長度與離子及橋結構匹配，以避免這些問題。例如，較長的烷基鏈需要較強極性的離子組合(SO4＜SO3＜CO2＜PO4)和利于鹽溶的橋結構。-CmH2m-(其中m≥1)類型的橋結構是優選的，具有6≥m≥3的相同結構的橋是最優選的。根據Tsubone，K.等人，藥物科學雜志80441-444(1991)，用于修飾陽離子的組分也影響毒性(例如，毒性與R2和R3的長度負相關(見表1))。橋的長度和陽離子組分可根據用途而變化。例如，由于較短的烷基鏈可用于第二種實施方案中(即抗微生物治療中)，所以m≥2的橋結構是可接受的，因為溶解性與較短鏈相關性不高。另外，經吸入的輸送要求甜菜堿樣去污劑是可溶的，并且m≥3的橋結構是必需的。如上所述，通過改變陰離子可進一步改變甜菜堿的極性。此外，可改變橋長度與用于修飾陽離子的組分的相關性，以使在第一種實施方案中(即體外試驗中)觀察到的CB-18效應達到最大。已檢測了幾種羧基甜菜堿，并顯示了在本發明的方法中的CB-18效應。它們包括C16-羧甲基甜菜堿(CASNo.693-33-4)、C18-羧乙基甜菜堿(CASNo.30612-73-8)、C18∶1-羧甲基甜菜堿(CASNo.871-37-4)和C18-羧丙基甜菜堿(CASNo.78195-27-4)。利用亞甲基橋(“羧甲基甜菜堿”R4＝-CH2-)或亞甲基鍵(α＝-CH2-)并且只根據烷基鏈長度而變化的最有用的羧基甜菜堿的實例是C10(CASNo.2644-45-3)、C11(CASNo.2956-38-9)、C12(CASNo.683-10-3)、C13(CASNo.23609-76-9)、C14(CASNo.2601-33-4)、C15(CASNo.23609-77-0)、C16(CASNo.693-33-4)和C18(CASNo.820-66-6)。存在一個C12-羧甲基甜菜堿(CASNo.6232-16-2)的實例，即N，N二乙基(R3＝R4＝-CH2CH3)；和一個其中烷基含有雙鍵的實例C18∶1(CASNo.871-37-4)。利用乙基橋(“羧乙基甜菜堿”R4＝-CH2CH2-)、亞甲基鍵(α＝-CH2-)并且只根據烷基鏈長度而變化的最有用的羧基甜菜堿的實例包括C12(CASNo.16527-85-8)、C13(CASNo.132621-79-5)、C14(CASNo.69725-38-3)、C16(CASNo.42416-43-3)和C18(CASNo.30612-73-8)。在適當條件下，R2和R3為氫原子的羧乙基甜菜堿的一個實例是CASNo.1462-54-0(C12-β丙氨酸)。利用丙基橋(“羧丙基甜菜堿”R4＝-CH2CH2CH2-)、亞甲基鍵(α＝-CH2-)并且只根據烷基鏈長度而變化的最有用的羧基甜菜堿的實例包括C11(CASNo.150147-53-8)、C12(CASNo.15163-30-1)、C14(CASNo.146959-90-2)、C15(CASNo.146959-91-3)、C16(CASNo.71695-32-4)和C18(CASNo.78195-27-4)。利用丁基橋(“羧丁基甜菜堿”R4＝-CH2CH2CH2CH2-)、亞甲基鍵(α＝-CH2-)的有用羧基甜菜堿的一個實例是C12(CASNo.120139-51-7)。利用戊基橋(“羧戊基甜菜堿”R4＝-CH2CH2CH2CH2CH2-)、亞甲基鍵(α＝-CH2-)的最有用的羧基甜菜堿的兩個實例是C12(CASNo.76392-97-7)和C16(CASNo.73565-98-7)。利用己基橋(“羧己基甜菜堿”R4＝-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)、亞甲基鍵(α＝-CH2-)的有用羧基甜菜堿的一個實例是C12(CASNo.132621-80-8)。存在用芐基作為橋官能團(R4＝-CH2-C6H4-)的幾種羧基甜菜堿的實例。有兩種C12實例，一種其中羧基官能團位于4位或對位(CASNo.71695-31-3)，一種其中羧基官能團位于2位或鄰位(CASNo.71695-34-6)。有兩種C16實例，一種其中羧基官能團位于4位或對位(CASNo.71695-33-5)，一種其中羧基官能團位于2位或鄰位(CASNo.71695-35-7)。因此，“羧基甜菜堿樣”(“CB樣”)不僅包括那些如WO95/27076和美國專利5,658,749所述用羧基作為陰離子(γ＝-COO)的結構，最特別地指表1所示的那些甜菜堿樣結構，而且將包括如上文所述的R1、α、R2、R3、β和R4的所有可能的組合。除羧基甜菜堿之外，可與本發明的方法結合使用的其它易于獲得的甜菜堿包括磺基甜菜堿，例如高度純化的(即研究級)“SB”系列去污劑，特別是SB-18(N-十八烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.13177-41-8))、SB-16(N-十六烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.2281-11-0))、SB-14(N-十四烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.14933-09-6))和SB-12(N-十二烷基-N，N-二甲基-3-銨基-1-丙基-磺酸鹽(CASNo.14933-08-5))。大多數可商業獲得的甜菜堿被用來生產去污劑、洗發劑、美容劑和其它盥洗用品。這些甜菜堿主要來源于天然油如椰子油、牛油、小麥胚芽、巴西棕櫚油、蓖麻油、低芥酸菜子油、豆油和菜籽油。合理地預期，所有這些甜菜堿樣去污劑都可與本發明的方法結合使用。本發明尤其可用于表征和檢測臨床分離株，或治療由傳染性微生物尤其是親脂性或包裹于蠟狀莢膜中的微生物引起的疾病，該微生物的特征在于其外細胞壁(外膜)中含有分枝菌酸結構，例如，尤其是棒桿菌分枝菌酸、諾卡菌分枝菌酸和分枝菌酸。本發明的方法涉及一種檢測微生物如分枝桿菌對抗生素的敏感性的方法。在一種非常優選的實施方案中，該微生物是臨床分離株。本發明的方法也涉及一種治療方法，其中與抗生素組合使用甜菜堿樣去污劑通過抗生素療法治療患者(人或動物)。在本發明方法的試驗或治療中最終使用的甜菜堿將取決于標本中存在的微生物，優選地細菌。這些試驗方法或治療方案可用于任何希望的微生物，尤其是任何希望的細菌。在一種非常優選的實施方案中，該微生物是分枝桿菌屬的群或復合體或其成員。例如，所試細菌可包括任何希望的分枝桿菌屬的群或復合體或分枝桿菌屬的種，最優選的是分枝桿菌復合體，如結核分枝桿菌(MTB)復合體、鳥分枝桿菌(MAC)復合體、MAIS復合體和偶發分枝桿菌復合體。所試細菌也可包括速生和緩生分枝桿菌，包括指出的和未指出的光色原、非光色原、暗產色菌株。根據本發明可表征或處理任何分枝桿菌，包括田野分枝桿菌(M.agri)、膿腫分枝桿菌(M.abscessus)、M.acetamidolyticum、非洲分枝桿菌(M.africanum)、愛知分枝桿菌(M.aichiense)、亞洲分枝桿菌(M.asiaticum)、金色分枝桿菌(M.aurum)、南非分枝桿菌(M.austroafricanum)、鳥分枝桿菌、牛分枝桿菌(M.boyis)、牛分枝桿菌(BCG)、龜分枝桿菌(M.chelonae)、千田分枝桿菌(M.chitae)、楚布分枝桿菌(M.chubuense)、庫氏分枝桿菌(M.cookii)、迪氏分枝桿菌(M.diernhoferi)、杜氏分枝桿菌(M.duvalii)、詭詐分枝桿菌(M.fallax)、產鼻疽分枝桿菌(M.farcinogenes)、微黃分枝桿菌(M.flavescens)、偶發分枝桿菌、加地斯分枝桿菌(M.gadium)、胃分枝桿菌(M.gastri)、淺黃分枝桿菌(M.gilyum)、戈登分枝桿菌(M.gordonae)、嗜血分枝桿菌(M.haemophilum)、胞內分枝桿菌(M.intracellulare)、堪薩斯分枝桿菌、科莫斯分枝桿菌(M.komossense)、麻風分枝桿菌、鼠麻風分枝桿菌(M.lepraemurium)、海分枝桿菌(M.marinum)、瑪爾摩分枝桿菌(M.malmoense)、田鼠分枝桿菌(M.microti)、莫里奧卡分枝桿菌(M.moriokaense)、新金色分枝桿菌(M.neoaurum)、無色分枝桿菌(M.nonchromogenicum)、奧布分枝桿菌(M.obuense)、副偶然分枝桿菌(M.parafortuitum)、副結核分枝桿菌、外來分枝桿菌(M.peregrinum)、草分枝桿菌(M.phlei)、豬分枝桿菌(M.porcinum)、多孔分枝桿菌(M.poriferae)、灰塵分枝桿菌(M.pulveris)、羅德島分枝桿菌(M.rhodesiae)、瘰疬分枝桿菌(M.scrofulaceum)、塞內加爾分枝桿菌(M.senegalense)、石氏分枝桿菌(M.shimoidei)、猿分枝桿菌(M.simiae)、恥垢分枝桿菌(M.smegmatis)、泥炭蘚分枝桿菌(M.sphagni)、斯氏分枝桿菌(M.szulgai)、土分枝桿菌(M.terrae)、抗熱分枝桿菌(M.thermoresistible)、東海分枝桿菌(M.tokaiense)、次要分枝桿菌(M.triviale)、結核分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、母牛分枝桿菌(M.vaccae)、蟾分枝桿菌(M.xenopi)，及其血清變型。結核分枝桿菌、非洲分枝桿菌、牛分枝桿菌、牛分枝桿菌(BCG)和田鼠分枝桿菌為結核分枝桿菌復合體(MTB)的成員。土分枝桿菌、次要分枝桿菌和無色分枝桿菌是土分枝桿菌復合體的成員。鳥分枝桿菌和胞內分枝桿菌是鳥分枝桿菌復合體(MAC)的成員；鳥分枝桿菌至少有三種獨特血清群，胞內分枝桿菌有超過25種的血清變型。MAIS群(鳥分枝桿菌-胞內分枝桿菌-瘰疬分枝桿菌)包括具有鳥分枝桿菌復合體和瘰疬分枝桿菌兩者的生物化學性質、但不與鳥分枝桿菌復合體分枝桿菌同源核酸探針(例如，AccuProbe(Gen-Probe，SanDiego，CA))雜交的分枝桿菌。堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌、猿分枝桿菌和亞洲分枝桿菌是光色原的實例。瘰疬分枝桿菌、斯氏分枝桿菌、蟾分枝桿菌、戈登分枝桿菌和微黃分枝桿菌是暗產色菌株的實例。鳥分枝桿菌、胞內分枝桿菌、胃分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌、土分枝桿菌和次要分枝桿菌都是非光色原的實例。非洲分枝桿菌、亞洲分枝桿菌、鳥分枝桿菌、牛分枝桿菌、牛分枝桿菌(BCG)、庫氏分枝桿菌、胃分枝桿菌、戈登分枝桿菌、嗜血分枝桿菌、胞內分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、麻風分枝桿菌、鼠麻風分枝桿菌、海分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌、田鼠分枝桿菌、無色分枝桿菌、副結核分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、石氏分枝桿菌、猿分枝桿菌、斯氏分枝桿菌、土分枝桿菌、次要分枝桿菌、結核分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌和蟾分枝桿菌都是緩生(需要超過7天)分枝桿菌種的實例。田野分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、M.acetamidolyticum、愛知分枝桿菌、金色分枝桿菌、南非分枝桿菌、龜分枝桿菌、千田分枝桿菌、楚布分枝桿菌、迪氏分枝桿菌、杜氏分枝桿菌、詭詐分枝桿菌、產鼻疽分枝桿菌、微黃分枝桿菌、偶發分枝桿菌、加地斯分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、科莫斯分枝桿菌、莫里奧卡分枝桿菌、新金色分枝桿菌、外來分枝桿菌、奧布分枝桿菌、副偶然分枝桿菌、草分枝桿菌、豬分枝桿菌、多孔分枝桿菌、灰塵分枝桿菌、羅德島分枝桿菌、塞內加爾分枝桿菌、恥垢分枝桿菌、泥炭蘚分枝桿菌、抗熱分枝桿菌、東海分枝桿菌和母牛分枝桿菌都是速生(需要少于7天)分枝桿菌種的實例。存在多種分枝桿菌種并可根據本發明治療的疾病和病癥的實例特別包括結核病(結核分枝桿菌復合體)、麻風病(麻風分枝桿菌(人麻風病)和鼠麻風分枝桿菌(嚙齒動物麻風病))、由鳥分枝桿菌復合體細菌引起的鳥類疾病、AIDS患者和鳥分枝桿菌所致其它患者的機會感染和超感染(Nightingale，S.D.等人，傳染病雜志1651082-1085(1992))、以及由如下特殊分枝桿菌引起的任何感染，例如牛分枝桿菌(在獸醫學中特別重要)、偶發分枝桿菌(從動物和人的病灶分離的一種土壤細菌)、胞內分枝桿菌(尤其在感染AIDS病毒患者中所見的機會感染)、副結核分枝桿菌(在人類克羅恩氏病(節段性回腸炎)的診斷中特別重要)、堪薩斯分枝桿菌(是一種罕見但毀滅性的傳染物，通常與肺部疾病有關)、海分枝桿菌(感染冷血動物和魚；也從人肢端表層肉芽腫中分離到)、副結核分枝桿菌(牛副結核病的病原體；其生長非常緩慢，在確定其為陰性之前必須持續培養16周)和潰瘍分枝桿菌(Buruli潰瘍的病因)。Wayne，L.G.等人，臨床微生物學綜述51-25(1992)和Falkinham，O.等人，臨床微生物學綜述9177-215(1996)中討論了上述和其它多種疾病，兩篇在此都引入作為參考。甜菜堿樣去污劑能作為佐劑單獨使用(如果該去污劑具有抗微生物活性)或與抗生素組合使用。例如，在第一種優選實施方案中，甜菜堿樣去污劑是敏感性試驗表的一部分(如實施例10所述)，其中單獨使用并與抗生素或其它甜菜堿樣去污劑組合使用該去污劑，來表征臨床分離株的敏感性。在第二種優選實施方案中，在抗微生物治療過程中單獨使用或與抗生素組合使用本發明的甜菜堿樣去污劑。盡管可代替抗生素單獨使用甜菜堿樣去污劑，但更優選的是與抗生素組合使用。在任一實施方案中，甜菜堿樣去污劑的使用可以是單獨的或與其它佐劑組合的，既可以同時地也可以連續地。例如，甜菜堿樣去污劑能與其它甜菜堿樣去污劑或與其它佐劑如β-內酰胺酶抑制劑組合使用。在第二種實施方案中，本發明的方法準備用有效量的本發明的組合物治療需要這種治療的人類或動物患者，該組合物包含單獨的甜菜堿樣去污劑或與甜菜堿樣去污劑組合的抗生素。在此使用的抗微生物療法也包括這種組合。甜菜堿樣去污劑的輸送可以通過能供給患者有效水平的任何途徑，例如，口服或肌肉注射，或者尤其是通過靜脈滴注，最特別地是吸入或敷用這些組合物。相比甜菜堿樣去污劑能以分開的方式和溶液提供抗生素，或者它們能一起提供。甜菜堿樣去污劑或許不能很好地耐受口服或肌肉注射，而靜脈滴注可能是一種可行的輸送途徑；然而，必須注意血液中甜菜堿的濃度。盡管加入甜菜堿至臨界膠束濃度(CMC)以上是可行的，但如果由于血液成分的溶解而使全血水平升高到CMC以上則可導致并發癥。合理地預期在感染部位的注射是可行的輸送手段，然而，這只在很少情況中是可能的。優選地，通過最直接的途徑輸送或者如有可能直接向感染部位輸送組合物或者至少甜菜堿樣去污劑。在這點上，對于分枝桿菌感染，尤其是為呼吸道感染的結核病，吸入應該是最優選的輸送方法。用于輸送本發明的甜菜堿樣去污劑的吸入裝置的一個實例在設計上類似于當前用于舒喘寧-哮喘的一種β阻斷劑-輸送的裝置(例如，Allen&Hanburys所售的舒喘靈，Allen&Hanburys為Glaxo的一個公司，ResearchTrianglePark，NC)。優選地通過以軟膏的形式直接向患處敷用甜菜堿樣去污劑(含或不含抗生素)來治療分枝桿菌感染如潰瘍分枝桿菌所致感染(Buruli潰瘍)。治療這些微生物感染的臨床領域的普通技術人員能容易地確定對患者施用特定甜菜堿樣去污劑的量和方案。通常，抗生素和甜菜堿樣化合物的劑量依如下的考慮而變所用抗生素和甜菜堿樣化合物的類型；年齡；健康狀況；所治療的病癥；如果有的話，同時治療的種類、治療的頻率和希望的效果的性質；組織損傷的程度；性別；癥狀持續時間；以及如果有的話，禁忌征，和各個醫生所調節的其它變量。能以一次或多次應用施用劑量以獲得希望的結果。通常，有效濃度包括從對于最有效結構(例如羧乙基甜菜堿)的0.1μg/kg到最無效結構(例如表10所列的那些“無影響”的羧基甜菜堿)的1mg/kg，對于大多數甜菜堿樣去污劑而言，1μg/kg-100μg/kg是最有效的濃度。當以軟膏的形式使用本發明的甜菜堿樣去污劑時，有效濃度為對于最有效結構的0.1μg/ml到最無效結構的1mg/ml，對于大多數甜菜堿樣去污劑而言，1μg/ml-100μg/ml是最有效的濃度。在本發明的治療方法中，可單獨使用或與其它甜菜堿樣去污劑組合使用這些去污劑。優選地，甜菜堿施用時間與施用抗生素的時間相同。特定抗生素的濃度取決于所用的抗生素。可以用本發明的方法，以本領域已知的治療劑量或以經本發明的敏感性試驗鑒定為治療上有效的濃度，提供抗生素。本發明的方法中可用的不同種類抗生素的實例包括β-內酰胺抗生素、與β-內酰胺抗生素組合的β-內酰胺酶抑制劑、氨基糖苷和氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯和林可酰胺，以及抗生素糖肽、脂肽和多肽、磺胺和甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星。已知對分枝桿菌具有顯著活性的抗生素包括但不限于丁胺卡那霉素、阿奇霉素、與任一β-內酰胺酶抑制劑組合的任一β-內酰胺、卷曲霉素、頭孢氰唑、頭孢西丁、環丙沙星、克拉霉素、氯苯吩嗪、環絲氨酸、氨苯砜、紅霉素、乙胺丁醇(EMB)、乙硫異煙胺、亞胺培南、異煙肼(INH)、卡那霉素、二甲胺四環素、氧氟沙星、對氨基水揚酸、丙硫異煙胺、吡嗪酰胺(PZA)、利福平(RMP)、利福布汀、司氟沙星、磺胺甲基異惡唑與甲氧芐啶、鏈霉素(SM)、四環素、thiacetazole和紫霉素(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用)》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1352-1437頁)。全部都可用于本發明的方法中。如本領域所知，“β-內酰胺”意思為含有β-內酰胺環作為其結構組分的任何青霉素、頭孢菌素、單菌霉素和碳青霉烯抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.1995第1281-1286頁；Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第3-584頁)。所有β-內酰胺都可用于本發明的方法中。如本領域所知，“青霉素”意思為含有6-氨基青霉烷酸化學核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1281-1282頁)。青霉素的實例包括但不限于甲氧西林、萘夫西林、鄰氯苯甲異惡唑青霉素、雙氯西林、苯唑西林、氨芐青霉素、巴氨西林、羧芐青霉素、替卡西林、美洛西林和哌拉西林，尤其是阿洛西林。合理地預期，具有與上述任何青霉素化合物同源的化學結構的青霉素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“頭孢菌素”意思為含有7-氨基頭孢菌酸化學核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1282-1285頁)。可用于本發明方法的頭孢菌素的實例包括但不限于頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢氨芐、頭孢噻啶、頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢尼西、頭孢芐胺四唑、頭孢丙烯、頭孢呋辛、氯碳頭孢、頭孢氰唑、頭孢替坦、頭孢克肟、頭孢氨噻、頭孢泊肟和頭孢唑肟，特別是頭孢西丁、頭孢哌酮和頭孢噻甲羧肟，最特別地是頭孢曲松。合理地預期，具有與上述任何頭孢菌素化合物同源的化學結構的頭孢菌素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“單菌霉素”意思為含有β-內酰胺環作為化學核且含有不同側鏈的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1285頁)。可用于本發明方法的單菌霉素的實例包括但不限于氨曲南。合理地預期，具有與上述單菌霉素化合物同源的化學結構的單菌霉素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“碳青霉烯”意為含有β-內酰胺環作為化學核且在6位含羧乙基側鏈(反式構型)且在核中缺乏硫或氧原子的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1285-1286頁)。可用于本發明方法的碳青霉烯的實例包括但不限于亞胺培南、美羅培南、帕民培南和biapenem。合理地預期，具有與上述任何碳青霉烯化合物同源的化學結構的碳青霉烯也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“β-內酰胺酶抑制劑”意為含有修飾的β-內酰胺結構作為化學核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1286-1287頁)。已知這些在分離時具有有限抗菌活性的化合物與β-內酰胺協同作用。β-內酰胺酶抑制劑干擾降解β-內酰胺的酶(例如β-內酰胺酶)。例如，β-內酰胺酶降解β-內酰胺。這種情況下，微生物有效地避開β-內酰胺的作用，從而賦予傳染物抗性。因此，β-內酰胺酶抑制劑可作為β-內酰胺治療的佐劑與β-內酰胺抗生素組合使用。當也使用β-內酰胺時，可用于本發明方法的β-內酰胺酶抑制劑的實例包括但不限于棒酸、舒巴坦和他佐巴坦。合理地預期，具有與上述任何β-內酰胺酶抑制劑化合物同源的化學結構的β-內酰胺酶抑制劑也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“氨基糖苷”或“氨基環醇”意為含有通過糖苷鍵與氨基環醇核連接的氨基糖的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1287-1288頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第585-750頁)。可用于本發明方法的氨基糖苷和氨基環醇的實例包括但不限于鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、紫蘇霉素、奈替米星、新霉素、新霉素B和巴龍霉素。合理地預期，具有與上述任何氨基糖苷和氨基環醇化合物同源的化學結構的氨基糖苷和氨基環醇也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“喹諾酮”或“氟喹諾酮”意為含有具有不同側鏈的1，5-二氮雜萘核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1288-1290頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1203-1275頁)。可用于本發明方法的喹諾酮的實例包括但不限于奧索利酸、西諾沙星、氟甲喹、米洛沙星、羅索沙星、吡哌酸、諾氟沙星、依諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、替馬氟沙星、氟羅沙星、培氟沙星、氨氟沙星、司氟沙星、左氧氟沙星、克林沙星，特別是萘啶酮酸。合理地預期，具有與上述任何喹諾酮或氟喹諾酮化合物同源的化學結構的喹諾酮或氟喹諾酮也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“四環素”意為含有氫并四苯結構作為核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1290-1291頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第979-1044頁)。可用于本發明方法的四環素的實例包括但不限于四環素、氯四環素、土霉素、二甲基氯四環素、脫甲四環素、甲烯土霉素、賴氨甲四環素、羥甲金霉素、強力霉素和二甲胺四環素。合理地預期，具有與上述任何四環素化合物同源的化學結構的四環素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“大環內酯”意為含有一個具有兩個附加糖、紅霉脫氧糖胺和紅霉支糖大環內酯環與及多種替代的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1291-1292頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第851-892頁)。可用于本發明方法的大環內酯的實例包括但不限于紅霉素、竹桃霉素、螺旋霉素、交沙霉素、薔薇霉素、克拉霉素、阿奇霉素(也稱為azalide)、地紅霉素、羅紅霉素、氟紅霉素和羅他霉素。合理地預期，具有與上述任何大環內酯化合物同源的化學結構的大環內酯也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“林可酰胺”意為含有一種與氨基糖連接的氨基酸的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1292-1293頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第819-850頁)。可用于本發明方法的林可酰胺的實例包括但不限于林可霉素和克林霉素。合理地預期，具有與上述任何林可酰胺化合物同源的化學結構的林可酰胺也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“糖肽”或“脂肽”意為含有肽與糖類或脂類成分之一或兩者的組合的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1293頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1045-1072頁)。可用于本發明方法的糖肽和脂肽的實例包括但不限于萬古霉素、游壁菌素、潛霉素(也稱作YL146032)和雷冒拉寧(也稱作MDL62198)。合理地預期，具有與上述任何糖肽和脂肽化合物同源的化學結構的糖肽和脂肽也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“多肽抗生素”意為含有環多肽結構或肽連接的氨基酸的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1295-1296頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第899-913頁)。可用于本發明方法的多肽抗生素的實例包括但不限于多粘菌素A、B、C、D和E，以及桿菌肽和短桿菌肽。合理地預期，具有與上述任何多肽抗生素化合物同源的化學結構的多肽抗生素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“磺胺”意為含有類似于對氨基苯甲酸的核心結構的抗生素，如本領域所知，“甲氧芐啶”意為是嘧啶類似物的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1293-1295頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1075-1117頁)。可用于本發明方法的磺胺的實例包括但不限于對氨基苯磺酰胺、乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲異嘧啶、柳氮磺胺吡啶、高磺胺、磺胺甲異惡唑、磺胺甲氧嗪、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺二乙三嗪、周效磺胺、磺胺甲吡嗪、磺胺胍、琥珀酰磺胺噻唑和酞磺胺噻唑。在本發明的方法中甲氧芐啶可單獨使用或與任何磺胺組合使用。合理地預期，具有與上述任何磺胺化合物同源的化學結構的磺胺和甲氧芐啶類似物也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“硝基咪唑”意為含有一個硝基咪唑核的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1297頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1290-1343頁)。可用于本發明方法的硝基咪唑的實例包括但不限于甲硝基羥乙唑、磺甲硝咪唑、硝唑嗎啉、氯甲硝咪唑、卡咪唑和另丁硝唑。合理地預期，具有與上述任何硝基咪唑化合物同源的化學結構的硝基咪唑也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“氯霉素”意為含有一個硝基苯環作為結構核心的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1296-1297頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第757-807頁)。可用于本發明方法的氯霉素的實例包括但不限于氯霉素和甲砜氯霉素。合理地預期，具有與上述任何氯霉素化合物同源的化學結構的氯霉素也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“利福平”意為含有一個柄型或大環結構核心的抗生素(安沙霉素抗生素)(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1298頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第914-970頁)。可用于本發明方法的利福平的實例包括但不限于利福平、利福霉素SV、利福霉素B(利福酰胺)和利福布汀。合理地預期，具有與上述任何利福平化合物同源的化學結構的利福平也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“硝基呋喃”意為具有一個含硝基的雜環的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1298-1299頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1276-1289頁)。可用于本發明方法的硝基呋喃的實例包括但不限于硝呋惡酮、硝基糖腙、呋喃唑酮和硝基呋喃托英。合理地預期，具有與上述任何硝基呋喃化合物同源的化學結構的硝基呋喃也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“烏洛托品”意為含有叔胺的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1299頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第1344-1348頁)。可用于本發明方法的叔胺的實例包括但不限于烏洛托品、扁桃酸酯、馬尿酸烏洛托品。合理地預期，具有與上述任何烏洛托品化合物同源的化學結構的叔胺也可用于本發明的方法中。如本領域所知，“莫匹羅星”(也稱為假單胞菌酸)意為含有獨特的9-羥基-壬酸部分的抗生素(Yao，J.D.C.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1299-1300頁；和Kucers，A.等人，《抗生素的應用》第四版，J.B.LippincottCo.Philadelphia，PA(1987)第754-756頁)。合理地預期，具有與上述莫匹羅星化合物同源的化學結構的化合物也可用于本發明的方法中。對感染有結核分枝桿菌復合體細菌(MTB)的患者的治療一般包括一種藥物或多種藥物的組合。用于治療TB的優選的首選藥物(“一線”藥物)包括異煙肼(INH)、利福平(RMP)、吡嗪酰胺(PZA)、鏈霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)；次級(或“二線”)藥物包括環丙沙星、氧氟沙星、乙硫異煙胺和環絲氨酸。研究中的其它藥物包括丁胺卡那霉素、利福布汀、利福噴汀和司氟沙星(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁)。對含分枝菌酸結構的細菌有活性的任何藥物都可用于本發明的方法中。對感染有鳥分枝桿菌復合體(MAC)細菌的患者的抗微生物治療一般也包括一種藥物或有限數量的藥物的組合。治療MAC感染的一線藥物包括阿奇霉素、克拉霉素和EMB。二線藥物包括丁胺卡那霉素、氯苯吩嗪、環丙沙星和利福布汀。備用藥物包括環絲氨酸和SM(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁)。全部都可用于本發明的方法中。其它重要的分枝桿菌病原體，例如堪薩斯分枝桿菌，其治療一般使用如上所述用于治療TB或MAC感染的一種藥物或多種藥物的組合。速生菌(例如偶發分枝桿菌和龜分枝桿菌)感染的治療可以用丁胺卡那霉素或克拉霉素，以及某些β-內酰胺，尤其是頭孢菌素(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁)。全部都可用于本發明的方法中。本發明的方法尤其是治療方法中所使用的甜菜堿樣去污劑和/或抗生素，其施用可以以任何合適的藥理學或藥學可接受的形式，需要時可包括藥學可接受的鹽或載體。能以實現預防、緩解、防止或治愈人與動物的微生物感染狀況的任何形式施用它們。可用于本發明治療方法的抗生素的劑量是生產商推薦的劑量。例如在《醫生書桌參考》(Physician’sDeskReference)(PDR)，MedicalEconomicsCompany，Montvale，NewJersey，美國中可查到這些劑量。關于獸醫應用的劑量可見例如，《Merck獸醫手冊》(MerckVeterinaryManual)，Merck&Co.，Inc.，Rahway，NewJersey，美國。當以單個制劑的形式將抗生素和甜菜堿樣去污劑施用給需要它們的患者時，優選地對患者提供每種藥劑，以使藥劑同時以有效水平存在于該患者中。也就是，無論怎樣對患者單獨地提供這些藥劑，優選地使該患者感染部位的微生物與有效水平的抗生素和甜菜堿樣去污劑兩者同時接觸。因此，例如，能通過抗生素與甜菜堿樣去污劑的同時施用來治療患者，例如，通過抗生素的口服施用與甜菜堿樣去污劑的吸入或靜脈內施用。通過同時施用治療患者也可如下發生在相同制劑中，例如，在提供抗生素和甜菜堿樣去污劑兩者的軟膏或繃帶中，同時提供甜菜堿樣去污劑和抗生素。此外，對患者的治療方法也可以是，用抗生素或甜菜堿樣去污劑在二者中不僅含一種的情況下“預處理”患者，然后用抗生素和甜菜堿樣去污劑兩者或用預處理中不含的“另一種”-抗生素或甜菜堿樣去污劑-來“治療”患者，只要預處理對微生物的作用在治療時尚未消失即可。因此，例如，能用甜菜堿樣去污劑預處理患者，以在施用含或不合甜菜堿樣去污劑的抗生素之前損害微生物的通透性和/或生存力。此外，也能在施用含或不含抗生素的甜菜堿樣去污劑之前用抗生素預處理患者。在混合物中，抗生素和甜菜堿樣去污劑可各自在溶液中或各自為固體形式(尤其是懸液)。另外，一種或多種抗生素和/或一種或多種甜菜堿樣去污劑可在溶液中，而相同制劑中的其它任何抗生素或去污劑可為固體形式。腸胃外施用的本發明組合物的有用制劑包括無菌水溶劑或非水溶劑、懸液和乳劑。有用的非水溶劑的實例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油、魚油和可注射的有機酯。水載體的實例包括水、水-乙醇溶液、乳劑或懸液，包括鹽水和緩沖醫用腸胃外載體，包括氯化鈉溶液、林格葡萄糖溶液、葡萄糖+氯化鈉溶液、含乳糖的林格溶液或非揮發油。靜脈內載體的實例包括液體和養分補充劑、電解質補充劑，如基于林格葡萄糖的補充劑等。根據已知的技術，需要時使用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑，可配制注射用制劑，如油質溶液、懸液或乳劑。當活性化合物為水溶性形式如水溶性鹽形式時，無菌注射制劑可使用無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑，例如無菌無熱原水或1，3-丁二醇。在其它可接受的載體和可使用的溶劑中，為5％葡萄糖注射液、林格注射液和等滲氯化鈉注射液(如USP/NF所述)。當活性化合物為非水溶性形式時，可使用無菌的合適的油質懸液，其含有適當的親脂性溶劑或載體，如脂肪油，例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯。此外，也可使用注射水懸液，其含有提高粘性的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖，并且任選地也含有穩定劑。口服使用的藥物制劑可以如下獲得使活性化合物與固體賦形劑結合，任選地將得到的混合物制成顆粒，并在希望或必要時加入適當的輔助劑，之后加工該混合物或顆粒，以產生糖衣核心的片劑。合適的賦形劑包括，尤其是填充劑如糖，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨糖醇、纖維素制劑和/或磷酸鈣，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘合劑，如淀粉、漿糊，例如玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉或馬鈴薯淀粉、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或希望時的分裂劑，如上述淀粉，以及羧甲基淀粉、交聯的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或褐藻酸或其鹽如褐藻酸鈉。輔助劑首先是流動調節劑和潤滑劑，例如，硅石、滑石粉、硬脂酸或其鹽如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，希望時其具有合適的包被層，能耐受胃液，就此而言尤其是濃縮的糖溶液，其任選地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦、紫膠漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。為了產生耐受胃液的包被層，使用合適的纖維素制劑如乙酰基鄰苯二甲酸酯纖維素或羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯的溶液。例如，為了辨別或者為了表征活性化合物劑量的不同組合，可向片劑或糖衣包被中加入染料或色素。能口服使用的其它藥物制劑是由明膠制成的推入契合膠囊，以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨糖醇制成的軟密封膠囊。推入契合膠囊可含有顆粒形式的活性化合物，例如，與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂以及任選地穩定劑相混合。在軟膠囊中，活性化合物優選地溶解或懸浮于合適的液體如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇中，添加穩定劑也是可能的。用于直腸施用本發明的化合物的栓劑可如下制備，混合藥物與合適的栓劑基質如無刺激性的賦形劑，例如，可可脂、天然或合成的甘油三酯、鏈烷烴、聚乙二醇或高級鏈烷醇，尤其是常溫下為固體而體溫下為液體因此能在直腸內熔化并釋放藥物的基質。另外，使用由活性化合物與基質的組合所構成的明膠直腸膠囊也是可能的；可能的基質材料是，例如，液體甘油三酯、聚乙二醇或鏈烷烴。口服施用的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、錠劑、糖錠、粉劑和顆粒。在這些固體劑型中，活性化合物可與至少一種惰性稀釋劑如蔗糖、乳糖或淀粉混合。當正常施用時，這些劑型也可包含藥學輔助物質，例如硬脂酸鹽潤滑劑。也可用調節活性成分釋放的腸溶性或其它包被制備固體口服制劑。口服施用的液體劑型包括藥學可接受的乳劑、溶液、懸液、糖漿和酏劑，其含有本領域中通常使用的惰性無毒稀釋劑，如水和乙醇。這些組合物也可包含佐劑，如濕潤劑、乳化劑、懸浮劑、甜味劑、調味劑和芳香劑。也可借助于泵或以緩釋形式施用本發明的組合物。也可通過適當插入的導管，或通過使這些分子成為用來靶向特定器官的嵌合分子(或復合物)的一部分，向特定器官高濃度地輸送本發明的化合物。當需要長時間的重復注射以使患者的舒適達到最大時，以緩釋形式的施用對患者是更方便的。如果材料的生物活性不被消化過程所破壞并且化合物的特性使其通過腸組織時能被吸收，那么能以用于口服施用的劑型如片劑、膠囊、粉劑、軟膏、藥包或液體溶液使用在本發明的組合物和方法中使用的甜菜堿樣去污劑或抗生素。能以已知的方法生產本發明的藥物組合物，例如，借助于常規的混合、顆粒化、糖衣形成、溶解、冷凍干燥或類似的方法。也可通過以試劑盒的形式提供該方法中使用的試劑來方便地施行本發明的方法，尤其是敏感性試驗。這種試劑盒優選地含有合適的緩沖液、鹽、甜菜堿樣去污劑或其組合、抗生素或其組合，以及如希望時適當純度的水。在一種優選實施方案中，提供不同甜菜堿樣去污劑的集合和不同抗生素的集合。集合中的甜菜堿樣去污劑和/或抗生素可以不只適合一種特定微生物或是特別適合一種特定微生物。優選地至少提供5種不同的甜菜堿樣去污劑，盡管在優選實施方案中，也提供多于5種的選擇，例如10、15、20、25或30種，或其間的任何數量。優選地至少提供5種不同的抗生素，盡管在優選實施方案中，也提供多于5種的選擇，例如10、15、20、25或30種，或其間的任何數量。如果希望，特殊的試劑盒尤其可含有特定的微生物，特別是分枝桿菌，以優選地用作標準。在這樣的試劑盒中，如果非細菌成分未混合在一起，那么即使被限制于分開的容器或包裝中，這些成分也通常互相非常接近，并且與該試劑盒提供的任何微生物標本非常接近。CB-18預試驗本發明源自圍繞ThorntonWO95/27076和美國專利5,658,749所述發明的應用(實施例1所述的方法)的觀察。在實施例2中，使用該處理方法的研究結果顯示，將CB-18與用頭孢噻甲羧肟(caz)強化的抗微生物添加劑PANTA組合顯著影響液體培養敏感度(表6)。表6顯示，液體和固體培養基的NALC/NaOH培養敏感度分別為98.4％和75.4％，而對于用CB-18處理的同組標本，液體和固體培養基的敏感度分別為64.0％和83.1％。換句話說，盡管CB-18使總培養物敏感度提高46％(表3)，但CB-18液體培養物敏感度降低。更重要的是如下發現對于NALC/NaOH沉淀，涂片陽性與涂片陰性標本的液體培養敏感度的差異僅為4％(即，100％對95.8％)，而對于CB-18的相同比較顯示65％的差異(即，75.0％對45.4％)。由于對于兩種不同方法，涂片陽性與陰性標本的固體培養基敏感度間的差異是可比的(對于NALC/NaOH和CB-18分別為34％對39％)，所以最初認為用caz對PANTA的強化是液體培養敏感度降低的唯一原因。然而，實施例3(圖3A-3H)揭示，不僅CB-18具有影響所試分離株(571/573-BAL見表8)生長特征的能力，而且單獨的和與caz組合的PANTA也都具有影響該分離株生長特征的能力。當與抗生素組合加入CB-18時，該效應，即所謂的CB-18效應，是協同的和分級的效應。PANTA含有多粘菌素B、兩性霉素B、萘啶酮酸、甲氧芐啶和阿洛西林。兩性霉素B用來控制真菌污染，而其余抗生素全都具有抗細菌活性。多粘菌素B是一種與磷脂相互作用而改變通透性的多肽。萘啶酮酸是干擾DNA合成(在DNA促旋酶水平)的一種喹諾酮。甲氧芐啶是一種嘧啶類似物，一般與磺胺一起使用，也已知其干擾DNA合成(在二氫葉酸還原酶水平)。阿洛西林是一種青霉素，代表β-內酰胺抗生素，在細胞壁合成水平上發揮其作用。據報導萘啶酮酸、甲氧芐啶和阿洛西林都具有對分枝桿菌不同種的一定活性。CB-18與不含caz的PANTA組合能影響生長的事實(實施例3、圖3F和圖3H)顯示，該現象不只取決于頭孢噻甲羧肟的存在，而相反廣泛適用于不同種類的抗生素(見上文)。圖28-30突出了不同種類抗生素的應用的廣泛性。合理地預期，該現象將延伸到不同種類的抗生素。最初將頭孢噻甲羧肟摻入CB-18/12B/PANTA檢測系統中以控制污染(實施例1)，而不是犧牲分枝桿菌的生存力。在檢測不同頭孢菌素對分枝桿菌生存力的影響的實驗之后進行這種檢測。所試PANTA-頭孢菌素組合，除了頭孢噻甲羧肟之外，還包括不同組合的頭孢哌酮(cfp)、頭孢氨噻(cft)和頭孢曲松(cax)(例如，cfp/cft、cfp/cax和cfp/cft/cax)。實施這些實驗要使用大約7-15μg/ml的CB-18和結核分枝桿菌(ATCC27294)、鳥分枝桿菌(ATCC25291)、堪薩斯分枝桿菌(ATCC12478)、偶發分枝桿菌(ATCC6841)、蟾分枝桿菌(ATCC19250)和戈登分枝桿菌(ATCC14470)的不同ATCC型菌株。CB-18/12B/PANTA/caz組合是在初步研究中對這些分離株顯示最小影響的唯一制劑。例如，PANTA與cfp/cft、cfp/cax和cfp/cft/cax的組合在大多數所試分離株中都引起明顯延遲。PANTA/caz引起所試鳥分枝桿菌分離株的延遲，和所試戈登分枝桿菌分離株的明顯延遲。在CB-18預試驗中，CB-18/12B/PANTA/caz系統漏掉了14個涂片陽性標本(表6)。對這些涂片陽性分離株的分析顯示，5個是MTB，其它9個是不同的MOTT種，包括4個MAC、2個偶發分枝桿菌、1個戈登分枝桿菌、斯氏分枝桿菌和1個堪薩斯分枝桿菌。由這些數據得出的重要結論是，CB-18/12B/PANTA/caz系統影響了大范圍的分枝桿菌，MTB和MOTT兩者皆是。在無頭孢噻甲羧肟時CB-18效應是可觀察到的(實施例3)，也就是說，其它抗生素(例如，頭孢菌素、PANTA的其它成分和其它的抗生素)能引起不同分枝桿菌生長的延遲，系統對CB-18濃度的表觀敏感度導致實施例5和實施例6的實驗。實施例5的實驗就CB-18濃度的改變檢測了結核分枝桿菌、鳥分枝桿菌復合體和偶發分枝桿菌復合體分離株，而實施例6集中于結核分枝桿菌分離株的敏感性模式。表7總結了實施例5的實驗結果，圖10-15顯示應用不同分枝桿菌種的結果。表8總結了實施例6的實驗結果，圖17-27顯示所試結核分枝桿菌分離株的結果。圖28-30顯示，該現象擴展到所試β-內酰胺之外。盡管在實施例5和實施例6的實驗中種和分離株之間存在顯著差異，但都被CB-18與抗生素的組合在某種程度上協同影響。結核分枝桿菌分離株似乎是所試分枝桿菌種中最敏感的，而速生菌受較小程度的影響，但當與抗生素組合使用時其顯示最大的協同作用。鳥分枝桿菌復合體分離株顯示中度的反應。基本上，根據在CB-18和不同抗生素存在下的生長特征，能鑒別所有的分離株。因此，CB-18效應取決于所用的分離株和抗生素，適當濃度CB-18的存在對鑒別分離株是必要的。這隨后產生了如下概念對于鑒別分離株，不同甜菜堿可提供較高程度的敏感性。實施例7在試驗中使用了與重建液(R.F.)、PANTA或PANTA/cax組合的多種去污劑。表10總結了這些實驗的結果，圖32B顯示幾種不同去污劑的結果(在只有P-cax存在下)。因此，CB-18效應取決于分離株、去污劑和抗生素的動態相互作用，其中具有CB-18效應的應用。抗微生物療法、抗藥性和通透性就作用位點而言，抗生素不盡相同。例如，Yao，J.D.C.等人，在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1281-1307頁中論述了不同種類的抗微生物劑，并報告對于影響或妨礙細胞壁和細胞膜合成或完整性、蛋白質合成、核酸合成(例如，RNA和DNA前體兩者)和DNA復制的不同方面，以及只利于誘變的藥物，作用位點的范圍不同。細菌由于多種原因對不同抗生素不敏感(即有抗性)。Quintiliani，R.等人在Murray，P.R.等人編的《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1308-1326頁(在此引入作為參考)中論述了幾種這樣的機制。總之，抗生素必須首先進入細胞，然后在作用位點發揮其作用。抗藥性的基礎可能是由于(a)生物的通透性，(b)在特定臨床分離株中作用位點的分子構型可能是不相容的或完全不存在的，或者(c)細菌可以修飾、破壞或從細胞內間隙中泵出抗生素。在第一種情況中，如果細菌對于藥物是不通透的，那么抗生素不能到達作用位點發揮其影響。在第二種情況中，如果藥物能進入細菌，但作用位點(例如靶位點的3-D結構)使抗生素不能與之結合，或者如果作用位點不存在(例如，所述結構或酶不是表達的組分的一部分)，那么細菌將不受藥物影響。在最后一種情況中，如果抗生素能進入并且靶存在，那么細菌能通過降解抗生素、修飾抗生素以降低其毒性或從細胞內環境中移除/泵出抗生素而有效地避開藥物的作用。分枝桿菌感染的治療是非常有限的(見上文)，相比大多數微生物更是如此(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁)。這種不敏感性部分是由于該類細菌的不通透性分枝桿菌比大腸桿菌(Escherichiacoli)通透性低1,000-10,000倍(Jarlier，V.等人，細菌學雜志(Jour.Bact.)1721418-1423(1990)和Nikaido，H.等人，微生物學研究(Res.Microbiol.)142437-443(1991))。Connell，N.D.等人在《結核病.發病機理、保護及控制》(Tuberculosis.Pathogenesis，Protection，andControl)Bloom，B.R.編，ASM出版社，Washington，D.C.(1994)第333-352頁中論述了分枝桿菌的通透性特征，并聲明“龜分枝桿菌細胞壁的低通透性完全解釋了該微生物對頭孢菌素抗性的水平”。低通透性部分地導致分枝桿菌所顯示的敏感性的復雜模式。例如，MTB感染通常可用INH和/或PZA有效地治療，而MAC分離株一般耐受這些藥物。另外，偶發分枝桿菌和龜分枝桿菌分離株對所有的一線抗結核藥一般都有抗性(Inderlied，C.B.等人，于Murray，P.R.等人編《臨床微生物學手冊》，ASM出版社，Washington，D.C.(1995)第1385-1404頁)。Cynamon，M.H.等人在《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》Heifts，L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)第147-159中論述了關于治療這些速生菌所致感染的研究，并報導了敏感性的多種模式。例如，在所述抗生素的每種類別中(β-內酰胺、磺胺、大環內酯、氨基糖苷等)，描述了敏感性的范圍，從幾個百分點到100％，30％-60％是標準(取決于藥物及其濃度)。Heifts，L.B.在《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》Heifts。L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)第13-57頁中論述了對MTB和MAC的類似研究，并討論了敏感性的多樣性，但建議敏感性的模式盡管仍然多樣，但不是變化的。雖然通透性解釋了分枝桿菌的一部分重要的敏感性模式，但這些微生物似乎具有另外兩種在抗藥性中起重要作用的機制。第一，MTB感染似乎由細胞的亞群組成。這些亞群可被分類為(a)活躍生長的，(b)半休眠的-由于巨噬細胞的低pH，(c)半休眠的-具有散發的代謝爆發，和(d)休眠的(Heifts，L.B.于《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》，Heifts，L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)第13-57頁)。休眠使這些亞群在治療期間幸存。另一種機制可能是遺傳不穩定性。點突變的產生導致潛在治療靶位點的分子變異性。全部地，敏感性模式的變異性是這些機制的組合，主要機制或許取決于種甚至分離株本身。一般而言，在分枝桿菌中似乎最有效的抗性機制是通透性、增殖的調節(例如休眠)和靶位點的結構變異性。克服或繞過抗性的方法必須修飾通透性、理解并定位增殖或修飾抗生素的化學結構以更適當地“適合”靶位點。根據這一觀點，必須調和此處實施例中所示的5條信息。第一，CB-18效應的作用機制不同于季銨鹽的機制。后一組去污劑發揮普通的表面活性作用來破壞細胞膜并變性細胞蛋白質(Hugo，W.B.于《S.C.I.專題19號微生物學中的表面活性劑》(S.C.I.Monographno.19Surface-ActiveagentsinMicrobiology)LondonSoc.Chem.Industry，倫敦(1965)第69-82頁)。圖7A-7C和圖8A-8C比較了TMA-18與CB-18的作用，證實CB-18效應不同于季類去污劑的作用。然而在高濃度時，甜菜堿似乎模擬季類去污劑并導致通常有害的作用。第二，沒有抗生素后效應(PAE)。例如，與383μg/mlCB-18接觸90分鐘對生長特征沒有明顯影響(圖3C和圖3G)。如果CB-18效應是特異的，也就是說不引起通常有害的作用，但在活躍的代謝中需要最低濃度，那么PAE可能是最小的。異煙肼是一種沒有PAE的抗結核藥(Heifts，L.B.于《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》，Heifts，L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)第13-57頁)。第三點圍繞著如下事實在某些分離株中僅在重建液(R.F.)存在下(即，無抗生素時(圖10-15))可見CB-18效應。該效應是依賴分離株(圖17-27)的事實強烈提示，CB-18效應具有特異的作用位點，這與全世界的結果不符。換句話說，CB-18效應是分枝桿菌中最特別地是結核分枝桿菌復合體中敏感性模式微觀不均一性的反映。第四，CB-18效應不同于EDTA的作用(圖34-35)。EDTA通過提取并螯合穩定細胞壁結構的二價金屬陽離子而改變通透性。Rastogi，N.等人，抗微生物劑化學治療34759-764(1990)報導，在1mMEDTA(372.5μg/ml)中的生長被影響到在作者進行的“X/Y商”分析中無法使用這些數據的程度。EDTA和CB-18都以17μg/ml的濃度(大約等摩爾量)在實施例7的實驗中使用，而在本發明的試驗中顯示不同的表現。另外，Tsubone，K.，藥物科學雜志801051-1054(1991)顯示，在不同磷酸甜菜堿的螯合活性與抗微生物活性之間一般沒有或有極低的相關性。另外，表10評述了所試的不同甜菜堿。相對于含有相同橋但沒有酰胺丙基鍵的羧基甜菜堿，含有酰胺丙基鍵的羧基甜菜堿是無效的(比較HetaineCLA或SchercotaineWOAB與DeTainePB和VelvetexOLB)。預計酰胺丙基鍵不能干擾電荷中心之間的螯合，但如果作用位點性質上是生理學的(例如酶)，則應能干擾CB-18效應。第五，實施例7(圖32B)在試驗中檢測了吐溫80吐溫80在17μg/ml(13μM)時對571/573-BAL分離株無影響。這是相當令人感興趣的結果，因為幾名作者曾經報導向培養基中摻入吐溫80也導致敏感性的誘導(Hui，J.等人，抗微生物劑化學治療11773-779(1977)；Yamori，S.等人，微生物學與免疫學(Microbiol.Immunol.)35921-926(1991))。此處的數據提示，吐溫80發揮作用的機制不同于CB-18。例如，在高濃度的吐溫80時(例如1％(10mg/ml))，生長實際上是最佳的，高至10％的量也無抑制(Stinson，M.W.等人，美國呼吸道疾病綜述(Am.Rev.Resp.Dis.)104717-727(1971))。相反，大約3-7μg/ml的CB-18不引起生長的變化，而在54μg/ml(222μM)時兩種分離株(ATCC27294和571/573-BAL)的生長都被完全抑制(圖10A和圖11A)。在較窄的濃度范圍內(約13μg/ml-約27μg/ml之間，取決于分離株)CB-18效應是可觀察到的。最后，卵磷脂能克服CB-18效應。這與Barry，C.E.等人(美國專利5,610,198)的教導相反。Barry，C.E.等人(美國專利5,610,198)將卵磷脂列為其發明的佐劑。在此所述的本發明中，該磷脂可發揮作用來中和CB-18(類似于其與季鹽的靜電作用)或作為一種競爭性抑制劑(在作用位點干擾CB-18效應)。由于CB-18具有中性凈電荷，后一種假說似乎更有可能(即，將有最小的穩定的靜電作用)。如果脂類如卵磷脂作為競爭性抑制劑，那么這可解釋PAE的缺乏。如果如ThorntonWO95/27076所建議的將CB-18隔離于類脂體內，那么甜菜堿樣去污劑將無法作為表面活性劑起作用。如果分枝桿菌在CB-18效應的作用位點是異源的，則在不同甜菜堿樣去污劑存在下不同的臨床分離株應該有不同的表現(實施例7)。另外，如果改變通透性以利于治療劑進入靶位點，并且對于抗生素的靶位點而言有異源的臨床分離株群，那么預期也有該水平上的變異(如實施例5、6所見)。預計甜菜堿樣去污劑與不同抗生素的組合在行為方面顯示顯著的變異性。這種對兩個不同作用位點的信息的分析正是甜菜堿敏感性試驗將要提供的。本發明可定位一種或多種這樣的抗性機制(即，通透性、休眠或分子相容性)。下列說明不是為了支持下列假說，只是作為一種手段來闡明本發明的應用生長的延遲可能是負責休眠的機制被刺激的表現。例如，由于大多數抗生素具有天然的半衰期，如果CB-18效應引起分枝桿菌代謝的終止直到抗生素的毒性水平下降，那么CB-18效應可用來就增殖特征而言區分臨床分離株的性質。此信息在所用的藥物以及治療時間方面對臨床醫生是有價值的。其它機制與分枝桿菌的通透性有關。下列說明不是為了支持下列假說，只是作為一種手段來闡明本發明的應用甜菜堿樣去污劑可通過修飾分枝菌酸組合物的構象而改變分枝桿菌的通透性。最終結果是誘發的對抗生素的敏感性。由本發明獲得的信息在用于最有效治療的藥物方面對臨床醫生是有價值的。CB-18效應可能是分枝菌酸修飾模式改變的結果這一概念部分地基于Yuan，Y.等人，國家科學院院報9312828-12833(1996)的工作，并在實施例9中詳細檢驗。總之，對分枝菌酸的修飾直接與細胞壁的流動性有關。某些修飾降低細胞壁的流動性，而細胞壁流動性的下降可與通透性的降低相關。分枝桿菌的低通透性被認為在抗微生物抗性中起重要作用(Yuan，Y.等人，國家科學院院報926630-6634(1995)；Brennan，P.J.等人，生物化學年述(Annu.Rev.Biochem.)6429-63(1995))。記得Connell，N.D.等人在《結核病.發病機理、保護及控制》，Bloom，B.R.編，ASM出版社，Washington，D.C.(1994)第333-352頁中，將龜分枝桿菌對頭孢菌素的抗性唯一地歸因于通透性。對分枝菌酸的修飾通過一系列有關的依賴S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的酶反應而發生(圖39A)。Barry，C.E.等人(U.S.5,610,198)教導，能用硫代脂肪酸衍生物(“硫代二十四酸”)抑制對分枝菌酸的這種依賴SAM的修飾(圖39B)，來治療致病性分枝桿菌所致的感染。硫代二十四酸的過渡態結構類似于甜菜堿樣去污劑(Yuan，Y.等人，國家科學院院報9312828-12833(1996))，尤其是基于锍的羧基甜菜堿(表1和圖39B)。锍羧基甜菜堿不需要酶催化來激活，而只抑制這些依賴SAM的酶。與本發明的甜菜樣去污劑相比，硫代二十四酸是極端不溶的。換句話說，硫代二十四酸的Krafft溫度在生理標準(例如37℃)之上。其輸送將有顯著障礙。锍羧基甜菜堿是更加可溶的(甚至當R1＝18-20時，但尤其當R4≥3時(表1；Laughlin，R.，Langmuir7842-847(1991)))。甜菜堿樣結構直接解決溶解性問題并在某種程度上解決輸送問題。例如，如果靜脈內輸送，硫代二十四酸最可能為固相。因為甜菜堿更可溶，由于甜菜堿的較低Krafft溫度使低劑量的靜脈內輸送更可行。Barry，C.E.等人(美國專利5,610,198)也公開硫代二十四酸對緩生致病分枝桿菌特異。Barry，C.E.等人(美國專利5,610,198)進一步公開只有也干擾分枝菌酸合成的抗生素才能與這些硫代脂肪酸衍生物協同作用。本發明顯示，甜菜堿樣去污劑適用于大范圍的含分枝菌酸結構的細菌(即，棒桿菌、諾卡氏菌及分枝桿菌(實施例9))，本發明也能應用大范圍的抗生素(實施例5和實施例6)。锍羧基甜菜堿的合成可根據圖39C所示的合成，但使用本領域已知的方法實現相同目的的任何方法都是可接受的(March，《高級有機化學.反應、機理與結構》(AdvancedOrganicChemistry.Reactions，MechanismsandStructures)第四版，JohnWiley&Sons，紐約，NY(1992)；和Fieser等人，《有機合成試劑》(ReagentsforOrganicSynthesis)第1-16卷，JohnWiley&Sons，紐約，NY(1992)，兩篇在此都引入作為參考)。總之，不是為了進行下列說明，CB-18效應似乎是甜菜堿樣去污劑與特定作用位點間相互作用的結果。如果該相互作用是修飾含分枝菌酸結構的細菌的通透性，則最終結果為增加了抗生素在靶位點的有效濃度。例如，對于來源于CB-18預試驗的分離株(表7和表8)，如果這些分枝桿菌在靶位點(即肽聚糖合成)和β-內酰胺酶位點都顯示異質性，則在甜菜堿敏感性試驗中可預期到甚至更高程度的辨別率。一種情況中使用一種對特定β-內酰胺敏感的特定分離株，但由于通透性的不足該分離株可逃脫抗生素的作用。如果甜菜堿樣去污劑能提高該分離株的通透性，則β-內酰胺酶也許具有或者也許不具有在發揮作用之前破壞抗生素的能力。如果來源于所述分離株的β-內酰胺酶在破壞特定β-內酰胺結構的能力上不足，則改變通透性足以發揮破壞性的作用，觀察為CB-18效應。合理地預期，對于該實施例中討論的三種不同分子(β-內酰胺、甜菜堿樣去污劑和β-內酰胺酶)的作用位點而言，含有分枝菌酸結構的不同細菌具有顯著的結構差異。因此，由于能與大量可獲得的甜菜堿樣去污劑組合使用的大量可獲得的抗生素(尤其是β-內酰胺)，高度的辨別率是可能的。根據本發明的一種敏感性試驗使β-內酰胺作為抗結核治療中佐劑的應用成為可能，該試驗是非常有用的，因為迄今為止最常用且最佳表征的抗生素化合物種類是β-內酰胺。由于這些抗生素的深入性和廣泛性，用這些藥劑治療分枝桿菌感染的能力將具有明顯的優點。已有限成功地嘗試了β-內酰胺在用來治療分枝桿菌感染的治療方案中的應用。例如Chambers，H.F.等人，抗微生物劑化學治療392620-2624(1995)檢驗了5種MTB臨床分離株并檢驗了幾種不同種類的β-內酰胺。大多數分離株對青霉素和大多數頭孢菌素有抗性；然而，亞胺培南(一種碳青霉烯)顯示一定活性。將幾乎所有的β-內酰胺與一種β-內酰胺酶抑制劑組合是達到顯著敏感性所必要的。如上所述，β-內酰胺酶抑制劑干擾生物降解抗生素的抗性機制。有一個實例，其中抗生素治療定位了一種抗性機制，并由此增強任何基于β-內酰胺的化學治療。通過定位抗性機制擴大分枝桿菌對抗生素尤其對β-內酰胺抗生素的敏感性的能力，這在有效治療分枝桿菌感染中具有重要的潛力。在此所述的本發明使用定位一種機制的分子，該機制以在以前未描述過的方式影響細菌的抗性。對分離株512-JHH(圖24)和538-JHH(圖25)的分析，以及CB-18對經受體內抗結核菌素治療的分離株有顯著影響(表9)的事實，強調了甜菜堿樣去污劑的治療應用。現在已完全敘述了本發明，本領域的技術人員應當理解，在不影響本發明或其任何實施方案的精神或范圍的情況下，可在較寬和相當范圍的條件、參數等等之內實行本發明。在此引用的所有參考文獻在此全部引入作為參考。實施例實施例1CB-18處理與分枝桿菌培養最初由于在涉及為了分枝桿菌檢測而處理臨床標本的新方法的研究中所進行的觀察，而構想了在此所述的本發明。這些方法基于如WO95/27076中所述的Thornton的方法，并作為主要處理方法用于從臨床標本、最特別地從呼吸道標本中分離含有分枝菌酸結構的細菌，尤其是分枝桿菌。下面敘述了ThorntonWO95/27076的方法，并在本實施例的最后敘述了該方法所用試劑的制備。(1)將1-10ml痰或支氣管沖洗液置于50ml錐形管中注意盡管呼吸道標本是預計與此處所述方法結合使用的主要標本類型，但其它標本類型如水、土壤、組織、糞便等也能適于與以下方法結合使用。其中某些標本首先應被澄清，方法為在水或緩沖液中重懸浮，并使混合物通過裝備有20-60微米燒結材料(frit)的Spin-XII柱(CorningCostar，Boston，MA)。這種柱也可含有一種基質如Sephadex(SephadexG-50Pharmacia，Piscataway，NJ)或一種相當的樹脂以增強純化。然后任何標本都能如下所述處理。(2)向標本中加入等體積的0.5％NALC液化溶液(見下0.5％NALC/25mM檸檬酸鈉)并振蕩。(3)在室溫下溫育10分鐘(振蕩約5分鐘，然后即進行下一步驟)。(4)打開試管，向標本中加入過濾的無菌水至終體積約為35ml(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(5)加入4ml含甜菜堿樣去污劑的濃縮溶液，例如10×CB-18緩沖液(見下)10×CB-18＝10mMCB-18、0.5MTris-HClpH8.0、50mMNALC和1mMNaCl。(6)充分振蕩以完全混勻標本。(7)在搖動下(140轉/分)37℃溫育90分鐘。(8)振蕩，然后于30℃以4,000×g離心標本20分鐘。(9)充分潷析試管，向標本中加入500μl無菌水或緩沖液。(10)充分重懸浮沉淀塊，制備沉淀用于檢測，例如通過抗酸細菌染色法(即顯微鏡檢術)、培養、核酸擴增或免疫診斷。初步研究用來估計突破添加了PANTA的BACTEC12B液體培養基的污染物的性質，它使用來自QuestDiagnostics-Baltimore的廢棄的呼吸道標本(n＝277)。(注意BACTEC12B液體培養系統是本領域中用于培養分枝桿菌的標準方法之一，PANTA是一種抗微生物添加劑，含有多粘菌素B、阿洛西林、萘啶酮酸、甲氧芐啶和兩性霉素B該培養系統在此被稱為“12B/PANTA”(BectonDickinson，Cockeysville，MD.))。收集標本并根據上述方法用CB-18處理。將大約400-500μl每種沉淀物轉種于12B/PANTA上。通過形態學和/或革蘭氏染色鑒定所有污染物，從而鑒別為氧化酶/過氧化氫酶、陽性或陰性。然后使污染物形成物種(speciate)，并用MicroScan表(Dade，WestSacramento，CA)測定抗生素敏感性。結果顯示于表2中。表2顯示從40個標本中分離到57種污染物。以每個標本為基礎的污染率為14.4％(40÷277)。這提示，根據WO95/27076(例如CB-18)處理的呼吸道標本遇到的主要問題是革蘭氏陰性生物的存在(＞84％)。48種革蘭氏陰性分離株中約31種(64％)為腸桿菌科(Enterobacteriaceae)。最常見的分離株是斯氏普羅威登斯菌(Providenciastuartii)(n＝13)、假單胞菌屬(Pseudomonas)種(n＝11)和奇異變形桿菌(Proteusmirabilis)(n＝7)。因此，對污染率的顯著影響需要革蘭氏陰性生物發生率的降低。敏感性數據顯示，48種革蘭氏陰性菌中的40種對8μg/ml的頭孢噻甲羧肟敏感。由于這些數據和其它實驗的結果，決定應當用頭孢噻甲羧肟(8μg/ml終濃度)強化抗生素添加劑PANTA，以試圖控制此革蘭氏陰性污染(添加頭孢噻甲羧肟(caz)的12B/PANTA系統在此被稱為“12B/PANTA/caz”)。根據使用幾種ATCC分枝桿菌型菌株的平行實驗，認為頭孢噻甲羧肟可降低革蘭氏陰性污染的發生率，而不顯著影響分枝桿菌的生存力。10×CB-18緩沖液的制備(1)20×緩沖鹽1MTris-HClpH8.0、2mMNaCl(i)在1升量筒中加入約250ml水。(ii)加入Tris堿(Sigma，St.Louis，MO，目錄#T1503)、Tris-HCl(Sigma，St.Louis，MO，目錄#T3253)和NaCl(Sigma，St.Louis，MO，目錄#S7653)，混合(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(iii)加入其余的水至1升，并保證充分混勻。(iv)通過取出一小份檢查pH。pH應為±0.2pH單位。(v)過濾除菌(0.22μ濾膜)，分成50ml等份，室溫下貯存。(2)100×CB-18貯存液100mMCB-18*CB-18N，N-二甲基-N-(正十八烷基)-N-(3-羧丙基)銨內鹽(CASNo.78195-27-4)(i)將25ml分析級異丙醇(Baxter，McGawPark，IL，目錄#3043-1NY)與25ml水在量筒中混合，以制備50ml1∶1的異丙醇∶水(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(ii)將25ml異丙醇∶水(1∶1)溶液轉移至50ml錐形管中。(iii)稱取1.915克CB-18，將其置于含25ml剩余異丙醇∶水(1∶1)的量筒中。渦旋振蕩混勻。(iv)加入更多的異丙醇∶水(1∶1)溶液，至大約40ml，并輕輕渦旋振蕩。靜置溶液約20分鐘，大約每隔5分鐘輕輕渦旋振蕩一次。(v)CB-18溶解后(總共約30分鐘)，用異丙醇∶水(1∶1)溶液使終體積達到50ml，顛倒混勻。(vi)將溶液分入兩個50ml無菌塑料錐形管中，室溫下貯存。(3)10×CB-18緩沖液(i)確定待處理的標本數，將該數字插入下表中(該數字加1，以確保足夠的緩沖液)，計算所需每種成分的最終量，并如下所述制備適量的10×CB-18。</tables>(ii)合并20×緩沖鹽、NALC(Fluka，Ronkonkoma，NY，目錄#01039)和100×CB-18，用過濾的無菌水使之達到所需體積(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))，立即使用。注意在該方法的任何時候，若緩沖液中存在沉淀，切勿使用。該溶液在貯存與使用中應當保溫(例如，高于20℃)。不要冷藏該溶液。0.5％NALC液化溶液的制備(1)10×檸檬酸鈉貯存液0.25M二水合檸檬酸鈉</tables>(i)在100量筒中加入約25ml水(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(ii)加入二水合檸檬酸三鈉(Sigma，St.Louis，MO，目錄#C3434)，渦旋振蕩混合。加入其余的水至100ml，顛倒混勻。(iii)過濾除菌(0.22μ濾膜)，等分于50ml錐形管中。室溫下貯存。(2)0.5％NALC液化溶液(每日新鮮制備)(i)確定所需NALC液化溶液的大致體積。(ii)在50ml錐形管或量筒中合并10×檸檬酸鈉貯存液和NALC(Fluka，Ronkonkoma，NY，目錄#01039)，用水加至終體積(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(iii)立即使用，丟棄未用的部分頭孢噻甲羧肟貯存液和12B/PANTA/caz的制備(1)頭孢噻甲羧肟貯存液(36mg/ml)<>(i)在2ml容量瓶中混合1ml水和1M碳酸氫鈉(Sigma，St.Louis，MO目錄#S6297(在100ml水中溶解8.40克碳酸氫鈉，無菌過濾，以10ml和1ml的等份凍存))(注意使用過濾的無菌水(例如，GIBCO/BRL，Gaithersburg，MD，目錄#15230-022))。(ii)加入頭孢噻甲羧肟(Sigma，St.Louis，MO目錄#C3809)，立即用水使體積達到2ml。(iii)輕輕顛倒混合，直到溶液澄清。切勿在室溫以上加熱溶液(例如，不要在手中溫暖該溶液)。(iv)立即等分50μl部分于1.5ml微量離心管中，立即貯存于-70℃直到使用。(2)PANTA/caz的強化和使用(i)從冷藏箱中取出凍干的PANTA和重建液(R.F.)，從冷凍箱中取出1份50μl等份的頭孢噻甲羧肟貯存液(36mg/ml)。(ii)頭孢噻甲羧肟融化后，使用1個5ml注射器，向頭孢噻甲羧肟貯存液中加入1mlR.F.。通過將其吸入注射器中排出一次而混合。使用注射器，將全部內容物轉移到PANTA瓶中。(iii)向PANTA瓶中加入4毫升多R.F.(終體積＝5ml)。貼標簽“PANTA/caz”。(iv)使用前向每個12B瓶中加入100μlPANTA/caz(在加入標本2小時內加入抗生素)。(v)將未用的部分貯存于-20℃。48小時后丟棄(例如，不要凍融超過1次)。實施例2CB-18預試驗用CB-18處理呼吸道標本用于分枝桿菌(抗酸桿菌AFB)檢測，以試圖評價ThorntonWO95/27076的方法。呼吸道標本(n＝573)從QuestDiagnostics-Baltimore(BAL)的TB實驗室，以及QuestDiagnostics-Teterboro(TBR)，Washington，D.C.實驗室局(BOL)、JohnsHopkinsHospitals(JHH)和Baltimore的馬里蘭(Maryland)大學(UMB)分開并收集。來源地將每一標本分開，使得在當地用標準NALC/NaOH方法(Kent，P.T.等人，“公共衛生分枝桿菌學”，于《三級實驗室指南》，美國衛生與人類服務部，疾病控制中心，(1985)第31-46頁)處理每一標本的一半，并轉種于液體(BACTEC12B或BBLMGIT)和固體培養基(7H11、L-J或SeptiCheck)中，而把每一標本的另一半送到Quest-Baltimore設施，如實施例1所述以每天為基礎用CB-18處理標本。如上所述將CB-18沉淀轉種于12B/PANTA/caz和7H11選擇性斜面上。按照推薦的方法(Kent，P.T.等人，“公共衛生分枝桿菌學”，于《三級實驗室指南》，美國衛生與人類服務部，疾病控制中心，(1985)第57-69頁)進行所有涂片分析。該研究的結果在此稱為“CB-18預試驗”。在處理的573個標本中，根據所有方法(即，根據NaOH或CB-18，根據液體或固體培養)有106個AFB培養陽性標本。有8個戈登分枝桿菌分離株。在兩種方法間它們全部都是差異的、革蘭氏陰性的并且等分(即，CB-18漏掉了用NaOH分離的4個標本，反之亦然)。由于認為戈登分枝桿菌分離株是具有有限臨床意義的污染物(Wayne，L.G.等人，臨床微生物學綜述(Clin.Microbiol.Rev.)51-25(1992))，故將其從下列分析中省略因此分析了98個AFB培養陽性標本。表3總結了無戈登分枝桿菌分離株的培養結果。有52個一致的陽性標本、467個一致的陰性標本和46個不一致的標本。NaOH鑒定出總共61個陽性標本，敏感度為62.2％。CB-18鑒定出總共89個陽性標本，敏感度為90.8％。CB-18使聚集培養敏感度提高了大約46％。在98個培養陽性標本中，69個為非結核的分枝桿菌(MOTT)，29個為MTB。NaOH鑒定出33個MOTT陽性標本和28個MTB陽性標本。CB-18鑒定出64個MOTT標本，但僅25個MTB標本。NaOH處理的標本中的培養敏感度對于MOTT和MTB分別為47.8％和96.6％。CB-18處理的標本中的培養敏感度對于MOTT和MTB分別為92.8％和86.2％。CB-18使MOTT疾病陽性標本中的培養敏感度提高94.1％，但使MTB疾病陽性標本中的培養敏感度降低12.1％。表4顯示涂片分析的結果。有61個培養陽性標本通過任一處理方法也是涂片陽性的。有18個標本通過兩種處理方法都具有相同的涂片值，有19個標本其中兩種方法均報告了涂片陽性結果，但CB-18報告的值較高。不存在涂片陽性標本中NaOH具有較高涂片值的例子。有23個例子其中CB-18報告涂片陽性結果而NaOH報告涂片陰性結果。只有一個例子中NaOH報告涂片陽性結果而CB-18報告涂片陰性結果。根據涂片NaOH鑒定出98個培養陽性標本中的38個，敏感度為38.8％，而根據涂片CB-18鑒定出60個培養陽性標本中的18個，敏感度為61.2％。因此，CB-18使涂片敏感度提高大約58％。表4也顯示，涂片敏感度的增加是結核分枝桿菌(MTB)和非結核分枝桿菌(MOTT)兩者都增加的結果。</tables>應用CB-18涂片敏感度增加，但通過NALC/NaOH和CB-18涂片分析的特異性分別為99.8％和96.8％。有大量標本經CB-18報告為“涂片±”但未進行CB-18的確證培養。CDC指南(Kent，P.T.等人，“公共衛生分枝桿菌學”，于《三級實驗室指南》，美國衛生與人類服務部，疾病控制中心，(1985)第57-69頁)指示實驗室在沒有確證培養結果的情況下稱這些涂片±結果為“可疑的”。當用CB-18處理標本時存在特別大量的涂片±。獨立分析每種方法，即代替另一種處理方法的結果，并且包含這些涂片±結果，得到十分不同的結果。例如，表5的數據顯示，為NALC/NaOH培養陽性的61個標本中的37個也為NALC/NaOH涂片陽性。在89個培養陽性CB-18標本中，56個也是CB-18涂片陽性。NALC/NaOH涂片分析的敏感度和特異性分別為60.6％和99.6％，而CB-18分別為62.9％和91.2％。在CB-18發現的31個涂片±結果中(5+26＝31)，約42％(n＝13)經其它方法或從其它標本確證培養，或者能與以前的疾病相關聯，或者具有陽性擴增結果(即，證實分枝桿菌DNA的存在)。(注意根據CDC指南，16個涂片1+和2+CB-18培養陰性標本在表4的分析中被認為是CB-18涂片陽性-因此最初特異性降低(99.8％對96.8％(表4))。)總之，盡管CB-18使培養敏感度全面提高(表3)，但根據表5所示的分析，NALC/NaOH和CB-18的涂片特異性分別為99.6％和91.2％。表5所示的結果提示，CB-18處理對涂片技術本身沒有影響。例如，對于對載玻片的粘附而言，CB-18不改變細菌的“粘性”。這基于如下觀察相對于NALC/NaOH，CB-18使培養陽性標本的涂片敏感度提高了58％(表4)；然而，就通過該方法經涂片挑出的培養陽性標本的數量而言，每種方法大致相同(表560.6％對62.9％)。換句話說，培養仍然是更敏感的診斷技術，但CB-18似乎大致相同地影響兩種方法的總敏感度</tables>總之，通過每種方法鑒定的培養陰性且涂片陽性(即，涂片+和涂片±兩者)標本的數量明顯不同NALC/NaOH僅報告2個涂片陽性且培養陰性標本，而CB-18報告42個涂片陽性標本(包括CB-18涂片±但培養陰性的標本表5)。這些涂片±結果的正確性問題(即涂片特異性的降低)有重要意義。特別地，如果上述假設是正確的(例如，CB-18大致相同地影響兩種檢測方法的總敏感度)，則CB-18降低涂片分析的特異性。這對化驗員具有重要意義。如果該假設不正確，并且這些是有效的涂片結果，表明這些患者實際上感染了分枝桿菌，那么CB-18涂片分析的敏感度也許高于表4或表5所示。這后一種結論對醫生具有重要意義。為了理解這些結果，進行表6所示的分析。獨立檢查了在CB-18預試驗中使用的兩種不同處理方法的液體和固體培養的敏感度(表6)。對于處理方法(NaOH對CB-18)分析通過特定培養方法(液體對固體)分離的AFB培養陽性標本的數量。對于61個NaOH培養陽性標本而言45個液體和固體兩種培養均為陽性，15個僅液體培養為陽性，1個只在固體培養基上為陽性。檢查了89個CB-18培養陽性標本42個液體和固體兩種培養均為陽性，15個僅液體培養為陽性，32個只在固體培養基上為陽性。用NaOH和CB-18處理時液體培養的敏感度分別為98.4％和64.0％。用NaOH和CB-18處理時固體培養基的敏感度分別為75.4％和83.1％。對于NaOH處理的標本預期的結果為液體培養比固體培養基上的培養約敏感31％。相反，當用CB-18處理標本(如實施例1所述)，并轉種于12B/PANTA/caz和7H11選擇性斜面時，固體培養基大約敏感30％。在這些結果中有顯著的和意外的二分現象(dichotomy)。例如，盡管聚集培養敏感度提高約46％(表3)，但這種增加只是由于MOTT分離的增加(即，MTB培養敏感度降低)。與此明顯相反的是涂片敏感度的全面提高，其中貢獻幾乎同等地來自于MOTT和MTB兩種陽性標本(表4)。ThorntonWO95/27076建議，提高的敏感度是由于(i)與NaOH有關處理的有害影響的降低，(ii)由于補償生物固有的浮力而提高的離心回收效率，以及(iii)由于成索的生物的分散而增加的檢測可能性。提高的培養敏感度可能是由于所有這三方面的結合，而提高的涂片敏感度可能只是由于分散或增強的回收(涂片與生存力無關)。由于MOTT生物一般不能形成如MTB細菌一樣程度的索帶，所以提高的涂片敏感度最可能是由于回收增強。另外，直覺上，生存力肯定是培養敏感性的一個重要方面。二分現象來源于如下事實涂片數據顯示MOTT和MTB兩種生物中回收增強，但培養數據顯示MOTT生物中提高的生存力而MTB生物中降低的生存力。CB-18處理的標本中液體-固體培養敏感度的逆轉(表6)提示，二分現象是CB-18與PANTA/頭孢噻甲羧肟添加物中抗生素聯合的結果。例如，比較兩種不同處理方法的涂片陽性與涂片陰性標本的固體培養敏感度，顯示明顯的相似性。用NALC/NaOH處理時涂片陽性標本中固體培養基敏感度比涂片陰性標本高34％，用CB-18處理時高39％。液體培養數據的相同檢驗顯示，用NALC/NaOH處理時涂片陽性與涂片陰性標本間敏感度有較小差異(例如，4％的差異)，而用CB-18處理的相同組之間有顯著差異(例如，65％的差異)。用CB-18處理的涂片陽性標本中75％的液體培養敏感度是意外地且十分不尋常的(這14個標本包括5個MTB和9個MOTT4個MAC，2個偶發分枝桿菌，龜分枝桿菌、斯氏分枝桿菌和堪薩斯分枝桿菌各1個)。對于用NALC/NaOH處理的涂片陽性標本，100％的液體培養敏感度不是偶然發現的。Stone，B.L.等人，臨床微生物學雜志351030-1031(1997)報導，(用NALC/NaOH處理的)涂片陽性標本的液體培養敏感度也是99.3％(這是一次較大的研究n＝439)。從這些數據得出兩個結論。第一，CB-18/12B/PANTA/caz系統影響大范圍的分枝桿菌。例如，盡管5種漏過的MTB分離株由于其社會重要性而非常明顯，但MTB分離株僅占涂片陽性-液體培養陰性標本的36％(5÷14)，和該研究中所有AFB分離株的30％(29÷98)。類似地，MOTT分離株占涂片陽性-液體培養陰性標本的64％(9÷14)，和該研究中所有AFB分離株的70％(69÷98)。由于受影響的分離株的比例相同，這似乎是一個廣泛適用的現象CB-18與抗生素的有害組合對MTB和MOTT的影響類似。第二，CB-18/12B/PANTA/caz系統的影響可能是依賴接種體的。例如，類似于Eng，R.K.等人，抗微生物劑化學治療2642-47(1984)對于綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)所報導的，頭孢噻甲羧肟的最小抑制濃度(MIC)隨遞增的接種體而增加。由于涂片是每單位體積生物數量的直接反映，所以CB-18/12B/PANTA/caz系統更能影響涂片陰性標本-因此涂片陽性與涂片陰性標本的液體培養敏感度之間有65％的差異。在此研究中，以1mM(383μg/ml)的濃度使用CB-18。轉種于BACTEC12B中的標本中的CB-18濃度大概為35μg/ml-7μg/ml，這取決于標本的原始稠度、CB-18方法液化標本的能力和潷析后剩余的“反洗液”(即，原始處理的液體)的量。在一種最差的情況中(例如，稠的濃痰)，標本不能很好地液化，殘留大體積的原始處理基質。在這些情況下，基本將標本轉種于處理溶液中。向BACTEC12B瓶中加入400-500μl沉淀，終體積≈4.5ml，提供≈11倍的稀釋(即，35μg/ml)。在最好的情況下(例如，稀的支氣管沖洗物)，殘留≈100μl原始處理的基質。然后將沉淀重懸浮于500μl水中，提供≈5倍的稀釋。這些標本約為7μg/ml。盡管對于給定的標本不知道CB-18濃度為多少，但相應假定CB-18均勻地溶解于處理基質中，并且由于CB-18不被洗掉，所以對于每種標本有一定的濃度范圍，有時為7μg/ml-35μg/ml。固體基質與液體對應物十分不同。首先，向斜面中加入更小的體積(≈100μl)。這種較小的接種體部分地解釋了培養敏感度的差異。其次，加至斜面的任何CB-18都通過毛細管作用減至最小去污劑將被吸收到培養基內，遠離細菌，由此使其作用減到最小。總之，上述數據提示，抗生素和CB-18是協同有害的，該作用廣泛影響所有的分枝桿菌。實施例3CB-18中的處理對CB-18中的轉種為了試圖理解轉移入12B/PANTA/caz培養系統中的CB-18的動態相互作用，設計了圖1A和圖1B所概述的實驗(注意圖1A和圖1B是指相同的實驗—由于實驗設計的復雜性提供相同實驗的兩種不同構思)。使用兩種不同分離株結核分枝桿菌型菌株ATCC27294(ATCC，Rockville，MD)和來源于CB-18預試驗的臨床分離株571/573-BAL(注意“571/573-BAL”是指兩種分離株之一，這兩種分離株都來源于相同患者，但來源于同一天提交的兩種不同的自然標本(即，571-BAL和573-BAL(見表8并比較圖18與圖19))—這兩種分離株在所有方面都表現相同，并在本實施例和以后的實施例中可交換地使用)。將每種分離株培養于Lowenstein-Jensen(L-J)斜面或7H11選擇性斜面上(7H11選擇性斜面用多粘菌素B、羧芐青霉素、兩性霉素B和甲氧芐啶(BectonDickinson，Cockeysville，MD)強化)。從這些斜面上刮下細胞，置于緩沖液或含1mMCB-18的緩沖液中(如實施例1所述)，然后在相同緩沖液中稀釋1000倍(圖1A和圖1B)。在進一步稀釋前將每種細菌原液在搖動下(140轉/分)37℃溫育90分鐘。然后用緩沖液或0.5mMCB-18連續稀釋每種細菌原液，產生25,000×、50,000×和100,000×的終稀釋液(相對于原始原液(圖1A和圖1B))。然后將每一稀釋系列一式雙份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中添加有PANTA或用caz強化使得caz終濃度為8μg/ml的PANTA(P/caz)。在這些實驗中CB-18的濃度約為17μg/ml(如實施例2所述在大多數瓶中估計為7μg/ml-3μg/ml之間)。定期檢查培養瓶并記錄生長指數。將特定系列中全部6個培養瓶的生長指數平均，并對培養天數作圖。圖2A-2H顯示ATCC27294的結果，圖3A-3H顯示571/573-BAL的結果。ATCC27294分離株一般不被該實驗范例施加的任何條件所影響培養條件(L-J對7H11)或抗生素(PANTA對PANTA/caz)或處理溶液(緩沖液對CB-18)或轉種溶液(緩沖液對CB-18)對ATCC27294的生長特征都沒有顯著影響(圖2A-2H)。另外，571/573-BAL分離株被實驗方案的幾乎所有方面顯著影響。例如，571/573-BAL的行為不僅取決于如何為實驗準備分離株(L-J對7H11選擇性)，而且其行為也取決于頭孢噻甲羧肟的存在和轉種溶液的組成(例如，緩沖液對CB-18)。實際上，最重要的參數似乎是轉種溶液中CB-18的存在(比較圖3A與圖3B；3C與3D；3E與3F；及3G與3H)。在緩沖液中處理并轉種于CB-18中的細胞，直到恰好轉種前才與CB-18接觸。在圖3F中，在P/caz存在下轉種的分離株不生長。事實上，用來在圖3F和圖3H中生成P/caz生長曲線的12個瓶中只有3個實際生長。看來實際處理對生長特征具有最小的影響。例如，設計實驗，使細胞能在CB-18中處理并稀釋，使得培養瓶中CB-18的濃度約為0.68μg/ml(@25,000×)、0.34μg/ml(@50,000×)到0.17μg/ml(@100,000×)。這些不同稀釋度之間生長特征無顯著差異。比較圖3A和圖3C與圖3E和圖3G顯示，能在CB-18中處理細胞，但只要培養瓶中的CB-18濃度低于例如約1μg/ml，生長就不受阻礙。換句話說，用“CB-18”沒有“抗生素后效應”(Heifets，L.B.等人，于《分枝桿菌感染化學治療中的藥物敏感性》，Heifets，L.B.編，CRC出版社，Boston，MA(1991)，第13-57頁)。總之，與CB-18預試驗結合的上述數據顯示，不同分離株表現不同，這些分離株的表現影響分離株的敏感性(例如，在與抗生素接觸之前在7H11選擇性上培養的細胞(圖3E-3H))。然而最重要地，培養基中甜菜堿(例如CB-18)的存在加劇了這些分離株對也存在于培養基中的抗生素的敏感性。實施例4卵磷脂的加入克服CB-18效應低濃度接種體的檢測及與季銨鹽的比較實施例3所述實驗(圖1A和圖1B)顯示，CB-18作為主要診斷工具的應用需要進一步的改進。例如，CB-18必須從轉種溶液中去除，應使用低毒性的甜菜堿，或者CB-18效應必須被中和。這導致CB-18的作用可以被卵磷脂以類似于Patterson，R.A.，美國公共衛生雜志(Amer.Jour.PublicHealth)461429-1430(1956)和Wayne，L.G.，美國呼吸道疾病綜述80912-913(1959)所述的季銨鹽(例如，Ziphiran或氯化苯甲烴銨)的方式中和這一觀念。據認為季銨鹽對細菌和真菌生物具有相當普遍的有害作用。Hugo，W.B.在《S.C.I.專題19號微生物學中的表面活性劑》LondonSoc.Chem.Industry，倫敦(1965)第69-82頁中綜述了文獻，并總結了季鹽引起細胞膜破裂和胞內蛋白質一般變性(例如失活)的作用。Patterson，R.A.等人，美國公共衛生雜志461429-1430(1956)和Wayne，L.G.，美國呼吸道疾病綜述80912-913(1959)顯示，用卵磷脂(磷脂酰膽堿，一種磷脂)能克服分枝桿菌培養中季銨鹽的有害作用。圖4顯示一種實驗設計，其用來檢驗卵磷脂是否也能克服571/573-BAL的CB-18致敏作用。該實驗中，在7H11選擇性培養基中培養571/573-BAL分離株，用NALC/檸檬酸連續稀釋為約1000×。為了試圖檢驗接種體如何影響該試驗結果，制備三種不同的原液，一種系列在緩沖液中稀釋，一種系列在CB-18中稀釋。因此，在緩沖液或1.0mMCB-18中進行進一步的連續稀釋至2,500×、12,500×和50,000×。通過將這三種原液與緩沖液或卵磷脂的緩沖溶液(Sigma，St.Louis，MO；目錄#P5394(在100％乙醇中以100×濃縮液制備7.5％卵磷脂(3克于40ml中)，用實施例1的Tris緩沖液稀釋，立即使用))1∶1混合制備轉種溶液。三種不同轉種溶液的最終稀釋度約為5,000×、25,000×和100,000×。CB-18和卵磷脂在適當轉種溶液中的終濃度約為0.5mM。然后將每一系列一式四份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中添加了重建液(R.F.)或含有補加了8μg/ml頭孢噻甲羧肟的PANTA(P/caz)。溫育期間卵磷脂和CB-18的終濃度都約為17μg/ml。定期檢查培養瓶，記錄生長指數。平均特定系列的生長指數，并對培養天數作圖。也通過轉種于7H10平板(BectonDickinson，Cockeysville，MD)對三種原液(即，2,500×、12,500×和50,000×)的等份進行定量培養。7H10平板分析證明，在5,000×系列中每一瓶大約有165±54個菌落形成單位(cfu)，在25,000×系列中每一瓶大約有33±11cfu，在100,000×系列中每一瓶大約有8±3cfu。圖5A顯示轉種于緩沖液或含卵磷脂的緩沖液中的5,000×系列，圖5B顯示轉種于CB-18或與卵磷脂組合的CB-18中的5,000×系列。圖5C顯示在緩沖液或含卵磷脂的緩沖液中轉種的25,000×系列，圖5D顯示轉種于CB-18或與卵磷脂組合的CB-18中的25,000×系列。圖5E顯示轉種于緩沖液或含卵磷脂的緩沖液中的100,000×系列，圖5F顯示轉種于CB-18或與卵磷脂組合的CB-18中的100,000×系列。圖5A、5C和5E的檢驗證實，該濃度卵磷脂的添加對BACTEC12B試驗的敏感性即使有的話也只有很小的影響。另外，卵磷脂具有在某種程度上克服不含CB-18時抗生素制劑(P/caz)的有害作用的能力。圖5B、5D和5F的檢驗顯示，卵磷脂能克服單獨的或與抗生素組合的CB-18的有害作用。當接種體從165±54cfu降至33±11cfu至8±3cfu時，卵磷脂克服抗生素、CB-18或兩者組合的有害作用的能力似乎降低。然而在所有情況下，當作為轉種溶液的成分加入卵磷脂時，所有平行瓶都變為陽性。相反，CB-18與P/caz組合的所有平行瓶都是陰性(圖5B、5D和5F)。顯然，卵磷脂能克服CB-18效應。重復實驗證實了這些發現。季銨鹽圖5A-5F所示的結果表明，CB-18的作用機制類似于季銨類化合物(例如，一般的表面活性性質)。該結論基于卵磷脂能中和季銨去污劑和CB-18兩者的概念。大概，是通過兩種脂的靜電相互作用實現這種中和。陽離子季類去污劑與陰離子磷脂的相互作用似乎是合理的，但甜菜堿具有中性凈電荷。甜菜堿一卵磷脂的相互作用是短暫的。圖3C和圖3G的結果顯示，用CB-18處理但轉種于緩沖液中的細胞沒有“抗生素后效應”。如果CB-18的作用機制類似于季鹽(即，通常有害的)，則預計有某種延遲。例如，如果CB-18效應是去污劑表面活性性質的結果，那么細胞功能的破壞將不僅具有非特異的長期后果而且也將不依賴于分離株。為了試圖檢驗機制的相似性，平行測定CB-18與溴化三甲基十八烷基銨(TMA-18(Aldrich，Milwaukee，WI，目錄#35，924-6)類似于實施例1中對于CB-18所述在1∶1的水∶異丙醇中制為100×原液)。圖6概述了該實驗設計。在該實驗中，ATCC27294和571/573-BAL都在7H11選擇性培養基中培養，然后用NALC/檸檬酸連續稀釋為10,000×。通過用緩沖液、0.5mMCB-18或0.1mMTMA-18(所有濃度代表轉種溶液中的去污劑最終濃度)稀釋制備轉種溶液(即，最終稀釋度(50,000×))。然后將每一系列一式兩份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中添加有重建液(R.F.)、PANTA或用頭孢曲松強化的PANTA(8μg/ml終濃度P/cax)。溫育期間CB-18的終濃度約為17μg/ml。溫育期間TMA-18的終濃度約為3.4μg/ml。定期檢查培養瓶，記錄生長指數。平均特定系列的生長指數，并對培養天數作圖。圖7A-7C顯示一種實驗，其中將ATCC27294細胞轉種于上述不同溶液中，圖8A-8C顯示一種平行實驗，其中將571/573-BAL細胞轉種于相同系列中。使用ATCC27294的結果顯示，P/cax比單獨的PANTA(圖7A)或PANTA/caz組合(比較圖2A與圖7A)具有更有害的作用。在17μg/mlCB-18存在下，單獨PANTA中較小的延遲變得明顯，而P/cax制劑顯示明顯的延遲(圖7B)。在3.4μg/mlTMA-18存在下ATCC27294的培養在所有瓶中顯示明顯延遲(圖7C)。571/573-BAL分離株的行為在許多方面類似于ATCC27294分離株，具有微妙但明顯的差異。例如，在17μg/mlCB-18存在下，所有條件下的延遲變得明顯，P/cax制劑顯示驚人的延遲(圖8B)。在3.4μg/mlTMA-18存在下571/573-BAL的培養與ATCC27294相同在所有瓶中都觀察到明顯的延遲(圖8C)。這些實驗提示，CB-18發揮作用的機制不同于季銨鹽(例如TMA-18)。例如，在無任何添加的去污劑時(比較圖7A與圖8A)，或在低濃度CB-18的存在下(比較圖10A與圖11A)，ATCC27294和571/573-BAL的生長曲線實際上相同。當CB-18濃度增加時，可區別分離株(比較圖7B與圖8B)。進一步提高CB-18濃度時，分離株似乎再次有相似的行為在高濃度CB-18存在下兩者都不能生長(再次比較圖10A與圖11A)。這明顯不同于這兩種分離株在TMA-18存在下的行為(比較圖7C與圖8C)兩種分離株行為表現幾乎相同。如果CB-18與TMA-18的作用位點相同，則兩種分離株在所有條件下都應表現相似。如果兩種去污劑的作用位點不同，則預期兩種分離株在各自培養條件下表現的方式有差異。重要地是要記住，該結果是通過圍繞圖3C和圖3G的討論預見的CB-18不顯示抗生素后效應(實施例3)。觀察這些數據的另一種方式強調，CB-18與P/cax的組合似乎主要是協同的。例如，盡管分開的CB-18(圖7B)和P/cax(圖7A)對ATCC27294具有很小的影響，但這兩者的組合是協同的，而不是加成的。此外，圖8A和圖8B顯示，分開的P/cax和CB-18似乎影響571/573-BAL，然而，CB-18-P/cax組合雖然在某種程度上是加成的但主要是協同的。相反，分離的TMA-18是抑菌劑(圖7C和圖8C)，當與抗生素組合使用時，結果似乎主要是加成的。應用CB-18和TMA-18對這些及其它分離株的其它實驗證實了這兩種去污劑所發揮作用的微妙但明顯的性質。結論圖2H與圖7B的比較(ATCC27294分離株)，以及圖3H和圖8B與圖5B、5D、5F的比較(571/573-BAL分離株)，對于在CB-18存在下對抗生素的敏感性而言，產生重要的一點。例如，在圖3H和圖8B中，571/573-BAL分離株在CB-18與抗生素存在下生長。相反，在圖5B、5D和5F中，在相似條件下沒有單獨的重復生長。推理地，可合乎邏輯地認為這些差異是實際CB-18濃度、抗生素濃度或特定實驗中所用接種體(見實施例2和表6的討論，參照Eng，R.K.等人，抗微生物劑化學治療2642-47(1984)和接種體)或其組合的變化的結果。例如，相對于分別用來產生圖2H或3H和圖8B的實驗，在用來產生圖7B或圖5B、5D和5F的實驗中偶然使用較高濃度的CB-18或抗生素；或者圖7B、5B、5D和5F中的接種體低于其各自的對應物。由于向每一瓶中引入CB-18、抗生素和接種體的方式(即，使用1ml注射器)，可預期到所有三種變量在特定系列瓶與瓶之間的差異是規律而不是例外。如果在此使用的培養系統對任一種成分過于敏感，則如上所述的差異將變得明顯。在圖4和圖5A-5F所述實驗中，在不同接種體之間觀察到生長曲線的差異。這些差異主要是預期有較低輸入的延遲。相對于CB-18濃度或接種體的變化，抗生素濃度的變化為最小。對于CB-18濃度的變化而言，培養系統似乎更具靈活性。實施例5CB-18滴定NTB、MAC與速生菌的比較CB-18預試驗(實施例2)的結果提示，CB-18效應廣泛適用于大范圍的分枝桿菌種(表6)，實施例4提示，對于CB-18濃度而言該系統是靈活的。為了試圖證實這一假說，使用不同分枝桿菌種進行了圖9所述的實驗，其中幾種分枝桿菌種來源于CB-18預試驗。在此實驗中，試驗了結核分枝桿菌復合體、鳥分枝桿菌復合體和偶發分枝桿菌復合體分離株。所試結核分枝桿菌復合體分離株是ATCC27294和571/573-BAL。所試鳥分枝桿菌復合體分離株是ATCC25291和802-BAL；所試偶發分枝桿菌復合體分離株是ATCC6841和495-JHH。這些分離株的特征和實驗結果總結于表7中。所有分離株都在7H11選擇性培養基上培養，然后用NALC/檸檬酸連續稀釋為1,000×。通過用緩沖液或一系列不同的CB-18濃度稀釋制備轉種溶液(即，最終稀釋度(5,000×))。其中包括0.1mMCB-18、0.2mMCB-18、0.4mMCB-18、0.8mMCB-18、1.6mMCB-18或3.2mMCB-18。所有濃度代表轉種溶液中的最終去污劑濃度，但并不是所有分離株都在所有濃度試驗。然后將每一系列一式三份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中添加了重建液(R.F.)、PANTA或用頭孢曲松(8μg/ml終濃度P/cax)、頭孢噻甲羧肟(8μg/ml終濃度P/caz)或頭孢西丁(8μg/ml終濃度P/cft)強化的PANTA。結核分枝桿菌分離株被轉種于P-cax中，鳥分枝桿菌分離株被轉種于P-caz中，偶發分枝桿菌分離株被轉種于P-cft中。溫育期間CB-18的終濃度對于0.1mM系列約為3μg/ml，對于0.2mM系列約為7μg/ml，對于0.4mM系列約為13μg/ml，對于0.8mM系列約為27μg/ml，對于1.6mM系列約為54μg/ml，對于3.2mM系列約為109μg/ml。定期檢查培養瓶，記錄生長指數。平均特定系列的生長指數，并對培養天數作圖。圖10A和圖10B顯示一種實驗，其中在上述不同溶液中轉種結核分枝桿菌分離株ATCC27294，圖11A和圖11B顯示一種平行實驗，其中相同系列中轉種結核分枝桿菌分離株571/573-BAL。圖12A和圖12B顯示一種實驗，其中在上述不同溶液中轉種鳥分枝桿菌分離株ATCC25291，圖13A和圖13B顯示一種平行實驗，其中在相同系列中轉種鳥分枝桿菌分離株802-BAL。圖14A和圖14B顯示一種實驗，其中在上述不同溶液中轉種偶發分枝桿菌分離株ATCC6841，圖15A和圖15B顯示一種平行實驗，其中在相同系列中轉種偶發分枝桿菌分離株495-JHHL。當CB-18的濃度接近54μg/ml時結核分枝桿菌分離株ATCC27294的生存力下降(圖10A)，而當CB-18的濃度接近27μg/ml時結核分枝桿菌分離株571/573-BAL的生存力下降(圖11A)。培養基中含有抗生素時，當CB-18的濃度接近27μg/ml時ATCC27294的生存力下降(圖10B)，當CB-18的濃度接近13μg/ml時571/573-BAL的生存力下降(圖11B)。顯然，該系統對CB-18濃度的改變非常敏感。用這種敏感性能輕易地解釋實驗與實驗間的易變性。當CB-18的濃度接近27μg/ml時鳥分枝桿菌分離株ATCC25291的生存力下降(圖12A)，而鳥分枝桿菌復合體(MAC)分離株802-BAL的生存力在試驗濃度下不受影響(圖13A)。培養基中含有抗生素時，當CB-18的濃度接近13μg/ml時ATCC25291的生存力下降(圖12B)，當CB-18的濃度接近27μg/ml時802-BAL的生存力下降(圖13B)。在27μg/ml時曲線開始平臺期，因為三個瓶中只有一個成為陽性(圖13B)。此外，該系統對CB-18濃度的改變敏感。當CB-18的濃度接近109μg/ml時兩種偶發分枝桿菌分離株(ATCC6841和495-JHH)的生存力都下降(分別圖14A和圖15A)。培養基中含有抗生素時，當CB-18的濃度接近54μg/ml時ATCC6841的生存力下降(圖14B)，當CB-18的濃度接近27μg/ml時495-JHH的生存力下降(圖15B)。速生菌作為一種組群，似乎對單獨CB-18的作用更有抗性，但當與抗生素組合時顯示最佳協同作用。例如，495-JHH在109μg/mlCB-18時存活，但在P-cft存在下在13-27μg/ml時下降(圖15A和圖15B)。此外，571/573-BAL在13μg/mlCB-18時存活，但在P-cax存在下在7-13μg/ml時生存力下降(圖11A和圖11B)。兩種速生菌的結果是由如下觀點產生的有趣的結果Connell，N.D.等人在《結核病.發病機理、保護及控制》Bloom，B.R.編，ASM出版社，Washington，D.C.(1994)第333-352頁中將速生菌對頭孢菌素的抗性歸因于通透性。如果如實施例9所述，CB-18以某種方式影響通透性，那么此結果是可以預料的。*涂片值根據CDC指南報告。陽性培養物表示為“”符號隨后是一個數字。該數字代表陽性結果總天數。陰性培養物用“”符號突出。受污染的斜面用“cont.”符號標記，經受再消化的液體培養物用“”符號標記。ATCC27294株并非來自于CB-18預試驗。因而，培養結果無效(“NA”)。1M.av為鳥分枝桿菌。1M.fo為偶發分枝桿菌。由這些數據可得出幾點。第一，似乎存在CB-18的最小有效濃度低濃度的CB-18沒有誘發的作用，但高濃度的CB-18是殺細菌劑(甚至在無添加的抗生素時)。誘導能力取決于分枝桿菌種以及分離株本身。實施例6MTB分離株和抗生素的表征由實施例2、3和5得出的主要結論是，CB-18使正常情況下不敏感的某些分枝桿菌對抗生素變得敏感。在分離株和抗生素方面檢查了該現象的廣泛性。在有無CB-18的情況下對于不同β-內酰胺抗生素檢驗了來自CB-18預試驗(實施例2)的幾種分離株。在一系列附加實驗中，檢驗了其它(即，非β-內酰胺)抗生素。圖16概述了用來試驗不同MTB分離株的實驗設計。在7H11選擇性斜面上培養這些分離株(表8)，并用NALC/檸檬酸連續稀釋為大約10,000×。通過用緩沖液或0.5mMCB-18(終濃度)進一步稀釋制備轉種溶液(即，最終稀釋度(約50,000×))。然后將每一系列一式兩份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中添加了重建液(R.F.)、PANTA或用以下頭孢菌素強化的PANTA8μg/ml終濃度的頭孢噻甲羧肟(“P/caz”)、16μg/ml終濃度的頭孢哌酮(“P/cfp”)(Sigma，St.Louis，MO，目錄#C-4292在水中以72mg/ml制備頭孢哌酮，并以類似于對于頭孢噻甲羧肟所述的方式(實施例1)加入)、8μg/ml終濃度的頭孢曲松(“P/cax”)(Sigma，St.Louis，MO，目錄#C-5793在水中以36mg/ml制備頭孢曲松，并以類似于對于頭孢噻甲羧肟所述的方式(實施例1)加入)或8μg/ml終濃度的頭孢西丁(“P/cft”)(Sigma，St.Louis，MO，目錄#C-4786在水中以36mg/ml制備頭孢西丁，并以類似于對于頭孢噻甲羧肟所述的方式(實施例1)加入)。此外，溫育期間CB-18的終濃度約為17μg/ml。定期檢查培養瓶，記錄生長指數。平均特定系列的生長指數，并對培養天數作圖。篩選出11個分離株(包括ATCC27294株)。表8總結了使用的10個臨床分離株和試驗結果。圖17-27顯示代表性分離株。對于試驗中的行為而言，這些分離株中存在顯著的差異。>*涂片值根據CDC指南報告。陽性培養物表示為“”符號隨后是一個數字。該數字代表陽性結果總天數。陰性培養物用“”符號突出。受污染的斜面用“cont.”符號標記，經受再消化的液體培養物用“”符號標記。ATCC27294株并非來自于CB-18預試驗。因而，培養結果無效(“NA”)。除了在CB-18與P/cax組合時有較小延遲外，ATCC27294在CB-18誘導的敏感性方面顯示很小的差異或沒有差異(圖17A和圖17B)。這些結果與以前檢驗P/caz(比較圖2F與圖17B)和P/cax(比較圖7B與圖17B)的數據一致。在圖7B中而不是在圖17B中觀察到誘導的對PANTA敏感性的明顯差異，這或許是如實施例5所述實驗之間CB-18濃度改變的結果。571-BAL(圖18A和圖18B)和573-BAL(圖19A和圖19B)都再次顯示對所試所有藥物的敏感性的顯著誘導。只有當抗生素與CB-18組合時，才有對571/573-BAL的協同有害作用。類似于ATCC27294，535-BAL分離株不受此濃度CB-18的影響，然而，P-cax影響該分離株(圖20A和圖20B)。對INH、RIF和PZA有抗性的896-BAL分離株的行為也類似于ATCC27294(比較圖17A和17B與圖21A和21B)。分離株040-TBR和52-96-BOL在某種程度上受CB-18影響，然而，在這兩種分離株中CB-18的存在顯著影響對cax的敏感性(分別見圖22A和22B、圖26A和26B)。相反，061-TBR和57-96-BOL分離株在無CB-18時被所有抗生素影響，然而，CB-18的存在加劇抗生素的有害作用(分別見圖23A和23B、圖27A和27B)。512-JHH和538-JHH對(分別見圖24A和24B、圖25A和25B)是有趣的，這是由于以下觀點在CB-18預試驗過程中，當接觸CB-18時一種是自然的(512-JHH)，而另一種在抗結核菌素治療時接觸CB-18(538-JHH)。處理來自該患者中的4個標本(表9)。第一個標本于1996年2月8日提交，在必須遵循的24小時報告時間內報告為涂片陽性，在提交4天內呈現AFB培養陽性。在最初標本之后10天、從培養瓶中分離AFB之后大約1周、患者開始藥物治療后5天提交來自該患者的第二個標本(572-JHH)。在藥物治療開始后提交的三個標本都是CB-18/12B/PANTA/caz陰性的，只有兩個(538-JHH和541-JHH)在7H11斜面上為陽性。盡管在任何這些CB-18/12B/PANTA/caz差異中污染不起作用，但527-JHH具有4個提交物中最低涂片值的事實可以解釋有差異的7H11結果；然而，538-JHH在固體培養基上的明顯延遲(即49天)，對于涂片陽性標本來說是異常的。雖然用NALC/NaOH處理的類似標本相對于最初標本也延遲，但CB-18似乎顯著影響治療中該分離株的生存力。這與實施例3的討論和圖3所示系列(比較圖3B與圖3F、圖3D與圖3H)一致，并且提出甜菜堿樣去污劑作為治療佐劑的臨床應用*涂片值根據CDC指南報告。陽性培養物表示為“”符號隨后是一個數字。該數字代表陽性結果總天數。陰性培養物用“”符號突出。圖16的實驗設計也用來檢驗CB-18效應對于其它非β-內酰胺抗生素的廣泛性。在這些實驗中，在水或緩沖液中將抗生素(Sigma，St.Louis，MO)制備為貯存液，然后用重建液稀釋，并在接種前加入培養瓶中。對ATCC27294、571/573-BAL、061-TBR、52-96-BOL和57-96-BOL試驗制霉菌素(100μg/ml終濃度)、多粘菌素B(300單位終濃度)、紅霉素(4μg/ml終濃度)、竹桃霉素(2μg/ml終濃度)、青霉素G(8μg/ml終濃度)、萘啶酮酸(30μg/ml終濃度)、林可霉素(2μg/ml終濃度)、頭孢曲松(32μg/ml終濃度)和頭孢噻甲羧肟(16μg/ml終濃度)(在10％碳酸氫鈉中制備頭孢噻甲羧肟)。所有實驗都用R.F.和P-caz作為對照，加入CB-18的所有培養瓶都使用17μg/ml的終濃度。圖28顯示應用紅霉素和頭孢曲松的571/573-BAL分離株的結果。圖29顯示應用多粘菌素B、竹桃霉素、林可霉素、萘啶酮酸、青霉素G和頭孢曲松的061-TBR的結果。圖30顯示應用萘啶酮酸、青霉素G、頭孢噻甲羧肟和頭孢曲松的57-96-BOL的結果。這些結果表明，CB-18效應取決于分離株和抗生素兩者。有趣的是，16μg/ml終濃度的單獨的頭孢噻甲羧肟(即不合PANTA)是最有害的化合物之一。結論這些結果突出了結核分枝桿菌復合體關于抗微生物敏感性的微觀不均一性。盡管與這些觀察有關的機制尚未確定，但CB-18似乎使根據敏感性對結核分枝桿菌分離株的高度辨別力成為可能。這一信息可用來預測治療分枝桿菌感染尤其是MTB感染的更成功的治療方案。另外，CB-18誘導敏感性的事實提示該化合物本身也可能是一種有用的治療佐劑。“CB-18效應”，即誘導敏感性的能力，取決于甜菜堿樣去污劑(例如CB-18)、抗生素和分離株的動態相互作用。甜菜堿樣去污劑的最有效濃度應該取決于甜菜堿樣去污劑本身，并且能用本發明的篩選方法確定。實施例7篩選去污劑和其它甜菜堿樣結構為了試圖延伸實施例6的發現，發展了一種試驗來篩選CB-18的結構相應物。表10列出了在圖31概述的試驗中使用的去污劑。由于571/573-BAL分離株對敏感性誘導的敏感度，將其用作這些篩選實驗中的報道株。在7H11選擇性斜面上培養571/573-BAL分離株，并用NALC/檸檬酸鹽連續稀釋為約10,000×。通過用緩沖液、0.5mMCB-18或適當去污劑進一步稀釋制備轉種溶液(即，最終稀釋度(約50,000×))。將所有去污劑在1∶1異丙醇∶水中制備為100×濃縮液，在特定實驗系列中用作最終稀釋劑。每種去污劑的終濃度，使得得到的12B瓶含有約17μg/ml終濃度的特定去污劑。用緩沖液進行每一實驗系列，并將CB-18轉種對照一式兩份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中含有重建液(R.F.)、或是PANTA或添加了8μg/ml終濃度的頭孢曲松的PANTA(“P/cax”)。一次試驗5-7種去污劑。將含有MTB細胞的每種稀釋的去污劑一式兩份(每份400μl)轉種于添加了PANTA或P/cax的BACTEC12B瓶中。幾乎所有去污劑都試驗兩次。定期檢查培養瓶，并記錄生長指數。平均特定系列的生長指數，并對培養天數作圖。表10總結了檢測的去污劑及其結果。下列去污劑從Aldrich化學品公司(Milwaukee，WI)獲得芐基二甲基-硬脂酰氯化銨(目錄#22,901-6)、芐基二甲基-十四烷基氯化銨(目錄#29，279-6)和十八烷基三甲基溴化銨(目錄#35，924-6)。下列去污劑從Sigma化學品公司(St.Louis，MO)獲得混合的溴化烷基三甲基銨(目錄#M-7635)、軟脂酸(目錄#P-0500)、硬脂酸(目錄#S-4751)、CHAPS(目錄#C-3023)、脫氧膽酸(目錄#D-6750)、SB-18(C18-磺丙基甜菜堿)(目錄#0-8004)、Brij97(油烯基(聚氧乙烯)10)(目錄#P-6136)和Brij56(鯨蠟基(聚氧乙烯)10)(目錄#P-5759)。吐溫80(油酸的聚氧乙烯山梨聚糖酯)(目錄#1334875)從BoehringerMannheim(Indianapolis，IN)獲得。訂制的去污劑包括C18-羧乙基甜菜堿、C18-磺丁基甜菜堿、C16-羥丙基磺基甜菜堿、C16-酰胺丙基硫酸甜菜堿，它們由EcochemResearch，Inc.(Chaska，MN)合成，以及作為禮物從KAO基礎研究所(Tochigi，日本)獲得的C16-AHTMAP(一種反向甜菜堿)。化學甜菜堿(chembetaine)-S(大豆酰胺丙基羧甲基甜菜堿)作為樣品從Chemron公司(PasoRobles，CA)得到。DeTainePB(鯨蠟基羧甲基甜菜堿)作為樣品從DeForest，Inc.(BocaRaton，FL)獲得。HetaineCLA(carola酰胺丙基羧基甜菜堿)作為樣品從Heterene，Inc.(Paterson，NJ)獲得。RewotericAMR-4(牛脂甘氨酸酯)作為樣品從Sherex化學品公司(Dublin，OH)獲得。SchercotaineIAB(硬酯酰酰胺丙基羧基甜菜堿)和SchercoatineWOAB(麥芽酰胺丙基羧基甜菜堿)作為樣品從ScherChemicals，Inc.(Clifton，NJ)獲得。VelvetexOLB-50(油烯基羧甲基甜菜堿)作為樣品從Henkel公司，EmoryGroupCospha(Hoboken，NJ)獲得。CrosultaineE-30(埃勒克纖維酰胺丙基(erucamidopropyl)羥丙基磺基甜菜堿)作為樣品從Croda，Inc.(Parsippany，NJ)獲得。Mackamine02(氧化油酰胺)作為樣品從McIntyreGroup，LTD.(UniversityPark，IL)獲得。圖32A顯示了這些實驗的對照，圖32B顯示了代表性去污劑的結果。在圖32A中，將來自所有8個實驗的每一對照系列的雙份瓶平均并作圖，以顯示與抗生素(◆-PANTA，▲-P/cax)、CB-18(-單獨的CB-18)及兩者組合(□-CB-18/PANTA，●-CB-18/P-cax)影響有關的結果的趨勢。圖32B中所見的生長曲線是基于來自兩個實驗的雙份瓶的平均值，該實驗中將細胞轉種于添加了P/cax的BACTEC12B瓶中的各自去污劑中。如前所示，在無CB-18時PANTA或P/cax的存在不影響或最小影響571/573-BAL(比較圖3A、3E、8A和18A/19A與圖32A)。此外，單獨的CB-18對571/573-BAL株的生長特征有影響，CB-18與抗生素的組合是協同有害的，其中P/cax提供最大的生長抑制(圖32A-單獨的CB-18，□-CB-18/PANTA，●-CB-18/P-cax)。此外，關于去污劑的結構結果中有顯著的多樣性。總之，所試的所有季銨鹽在該濃度非常有活性，在試驗中完全抑制生長(表10)。另外，所試的陰離子脂肪酸或膽鹽對生長都沒有任何影響。顯示活性的羧基甜菜堿只是那些未修飾的羧基甜菜堿。例如，其中酰胺丙基被用來連接烷基鏈與陽離子(表1中的“α”)的羧基甜菜堿在該試驗中不顯示活性。此外，當與抗生素組合時無組分的羧基甜菜堿顯示強烈的抑制生長的能力，尤其是C18-羧乙基甜菜堿(CB-18的乙基橋相應物)。用C18-羧乙基甜菜堿對ATCC27294的進一步研究顯示非常窄的活性范圍(約7-13μg/ml)。圖32A和圖32B顯示當在該試驗中使用含亞甲基(DetainPB和VelvetexOLB)、乙烯(C18-羧乙基甜菜堿)和丙烯(CB-18)橋的簡單(即未修飾的)羧基甜菜堿時的變異性。這與Tsubone，K.等人，藥物科學雜志80441-44(1991)的數據一致，其中毒性與橋長度相關。“其它”種類的甜菜堿樣去污劑顯示混雜的結果。反向甜菜堿或硫酸甜菜堿(例如，-SO4)都不抑制生長。四種磺基甜菜堿(-SO3)中只有一種(即，CrosultaineE30)、三種非離子去污劑中有兩種(Brij56和Brij97)及所試的一種氧化胺(氧化油酰胺)能顯著抑制生長(表10)。盡管根據這些化合物在抗微生物制劑中的應用可預見氧化酰胺的明顯的殺菌活性(Michaels，E.B.，美國專利564，454和美國專利641,728)，但Brij化合物和CrosultaineE-30的活性仍是驚人的。除了CrosultaineE-30，在該試驗中似乎具有顯著活性的其它磺基甜菜堿只有SB-18。用SB-18對571/573-BAL的進一步研究顯示非常廣的活性范圍(約20-75μg/ml)。其它磺基甜菜堿都含有酰胺丙基鍵或羥丙基橋，表明類似于羧基甜菜堿，對主鏈結構的修飾似乎妨礙在此所述的活性。CrosultaineE-30既有酰胺丙基鍵又有羥丙基橋。盡管Brij化合物沒有對主鏈的修飾，但預計這些試劑能刺激生長。歷史上，曾報導非離子去污劑被雜質污染，只有純化后才能刺激生長(Dubos，R.J.等人，實驗醫學雜志(Jour.Exptl.Med.)83409-423(1946))。雜質可解釋應用Brij去污劑和CrosultaineE-30的結果。這些數據提出了觀察到的作用是由一種雜質引起的這一可能性。然而，提供的CB-18純度約為98％(個人通信，BobCarlson，EcochemResearch，Inc.，Chaska，MN)。因此，任何雜質在約0.34μg/ml時都必須在這些試驗中起作用(假定添加的CB-18的2％是一種雜質，則17μg/ml的2％約為0.34μg/ml)。在該試驗中TMA-18在低濃度時是抑制性的，10倍于以上濃度(圖7C和圖8C)。此外，盡管許多可商業獲得的甜菜堿可被合成機制產生的季鹽污染(例如，前體或合成副產物)，但在CB-18合成期間形成季鹽的可能性是非常不可能的(個人通信，BobCarlson，EcochemResearch，Inc.，Chaska，MN)。此外，在根據Weers，J.等人，Langmuir7854-867(1991)或Kazuo(JP8125139)的改進方法進行的CB-18合成過程中所產生的預期副產物，應預計無毒性(個人通信，BobCarlson，EcochemResearch，Inc.，Chaska，MN)。這些實驗(圖32B)也顯示，吐溫80在17μg/ml(13μM)時對571/573-BAL分離株無影響。Hui，J.等人，抗微生物劑化學治療11773-779(1977)改變吐溫80的濃度，顯示直到約0.005％(50μg/ml(38μM))才達到對利福平的敏感性誘導。更重要的是，較高濃度的吐溫80(高達0.05％(500μg/ml(380μM)))僅用來刺激生長。Stinson，M.W.等人，美國呼吸道疾病綜述104717-727(1971)報導在1％(10mg/ml(7.69mM))時達到最大刺激，而高達10％的量(100mg/ml(76.9mM))沒有其它的優越性，但也無抑制性。向培養基中添加吐溫80也許是本世紀在分枝桿菌學中最重要的診斷進展，因為它引起“快速”生長(Dubos，R.等人，實驗醫學雜志83409-423(1946))。Yamori，S.等人，微生物學與免疫學35921-926(1991)報導了當從0％到0.5％到2％滴定吐溫80時對某些藥物敏感性模式的改變。ODAC(一種培養添加劑，含有BSA、NaCl、葡萄糖、過氧化氫酶和油酸)的存在引起與吐溫80組合時敏感性的顯著改變。另一方面，CB-18在約3-7μg/ml時不引起生長的改變，但在13-27μg/ml時引起生長的完全抑制(圖10A和圖11A)。從這些實驗中得出的結論是，多種甜菜堿樣去污劑可用于本發明的方法中，敏感性誘導隨甜菜堿樣結構而變。每種甜菜堿樣去污劑必須為與本發明的方法結合使用而優化。通過將不同抗生素與不同甜菜堿樣去污劑組合，特別高度的區分分離株的辨別力是可能的。</tables>CB-18效應與EDTA實施例4顯示CB-18的作用不同于TMA-18，圖32B顯示CB-18的作用不同于吐溫80。試驗不同甜菜堿樣去污劑的結果提示，未修飾的結構可能是最有用的(表10)。為了試圖進一步區別CB-18效應與其它效應物如金屬螯合劑(例如，EDTA)，進行了圖33所述的實驗。EDTA通過提取并螯合穩定細胞壁結構的二價金屬陽離子而改變細菌的通透性。Rastogi，N.等人，抗微生物劑化學治療34759-764(1990)報導，在1mMEDTA(372.5μg/ml)中培養分枝桿菌的嘗試對生存力有顯著影響。假定甜菜堿根據其配位水的能力而以鹽的形式溶解(Tsujii，K.等人，物理化學雜志(Jour.Phys.Chem.)821610-1614(1978))，則引出CB-18效應是該化合物螯合活性的結果這一可能性。為了試圖區分CB-18效應與金屬螯合劑如EDTA的作用，發展了一種試驗來剖析CB-18的作用(圖33)。在7H11選擇性斜面上培養ATCC27294和571/573-BAL分離株，然后將每一種用NALC/檸檬酸鹽連續稀釋為約10,000×。通過用緩沖液、0.5mMCB-18、含2.5mMMgCl2的0.5mMCB-18或0.5mMEDTA(LifeTechnologies，Gaithersburg，MD)進一步稀釋制備轉種溶液(即，最終稀釋度(約50,000×))。溫育期間CB-18和EDTA的終濃度約為17μg/ml，溫育期間MgCl2的濃度約為85μg/ml。將每一實驗系列一式三份(每份400μl)轉種于BACTEC12B瓶中，瓶中含有重建液(R.F.)或添加了8μg/ml終濃度的頭孢曲松的PANTA(“P/cax”)。定期檢查培養瓶，并記錄生長指數。將特定系列的生長指數平均后對培養天數作圖。圖34A和圖34B顯示ATCC27294分離株的結果，圖35A和圖35B顯示571/573-BAL分離株的結果。EDTA在所用濃度對任一分離株的生長特征都沒有影響(圖34B和圖35B)。在這些實驗中使用的EDTA濃度比Rastogi，N.等人，抗微生物劑化學治療34759-764(1990)所用的濃度幾乎低22倍(372μg/ml對17μg/ml)。這些實驗中最令人感興趣的方面是CB-18/MgCl2組合。支持該實驗的假說是，如果CB-18能螯合MgCl2，則該相互作用或許能(在某種程度上)中和CB-18的作用。ATCC27294分離株不受單獨的CB-18影響(圖34A即，無MgCl2時)，而571/573-BAL分離株被單獨的CB-18抑制(圖35A)。加入5倍摩爾過量的MgCl2不顯示571/573-BAL生長特征的改善(圖35B)。在單獨的P/cax存在下ATCC27294或571/573-BAL都不顯示加劇的延遲；然而，在CB-18存在下P/cax再次顯示為協同有害的，對于571/573-BAL分離株更是如此(圖34A和圖35A)。向CB-18/P-cax組合中加入MgCl2似乎在某種程度上減輕了CB-18/P-cax組合的有害作用(圖34B和圖35B)，尤其是CB-18/P-cax對571/573-BAL的作用。如果MgCl2不減輕不合P-cax時的CB-18效應，但MgCl2減弱在P-cax存在下的敏感性，那么MgCl2肯定妨礙P-cax的作用。由于頭孢曲松(cax)作為二鈉鹽出售，所以該抗生素具有負的凈電荷(即-2)并且應能與MgCl2相互作用。TsuboneK.，藥物科學雜志801051-1054(1991)顯示，在不同磷酸甜菜堿的螯合活性與抗微生物活性之間一般存在很小的相關性或不存在相關性。這與CB-18效應不是螯合金屬離子的后果這一發現相一致。實施例8分枝桿菌敏感性試驗與CB-18效應進行敏感性試驗有多種方法。當前使用的標準方法包括(a)平板擴散試驗，(b)肉湯微量稀釋法，(c)瓊脂梯度，和(d)快速自動化儀器法。在這些方法中改變藥物的濃度并描述生長特征。已知接種體的量十分影響敏感性試驗的結果。當代的分枝桿菌學敏感性試驗按照如Vestal，A.L.疾病控制中心，[衛生部，教育與福利出版號(CDC)76-8230]第97-115頁(1975)所述的1％比例法。其特征在于將對照稀釋100倍(100×)并將在抗結核菌素存在下的生長與對照相比較。如果1％或更多的接種體對藥物有抗性，則所研究的分離株的生長將等同于或高于對照。若分離株是敏感的，或低于1％的接種體是抗性的，則其生長將弱于對照。結核敏感性試驗中的黃金標準是BACTECS.I.R.E或BACTECPZA試驗(BectonDickinson，Cockeysville，MD)。這是一種自動化肉湯法(Snider，D.E.等人，美國呼吸道疾病綜述123402-406(1981)；Siddiqi，S.H.等人，臨床微生物學雜志13908-912(1981)；Vincke，G.等人，抗微生物化學治療雜志(Jour.Antimicrob.Chemther.)10351-354(1982)；Roberts，G.D.等人，臨床微生物學雜志18689-696(1983)；及Tarrand，J.J.等人，臨床微生物學雜志21941-946(1985))。產品標簽說明，對照生長指數(GI)超過30(GIt＝0)后，在下一天讀取培養瓶(GIt+1)并確定這兩天之間的差異(GIt+1-GIt＝ΔGI對照)。在相同的這兩天讀取含試驗藥物的培養瓶，并用相同方法確定對于藥物的ΔGI藥物。若ΔGI對照＞＞ΔGI藥物，則認為分離株是敏感的。若ΔGI對照≥ΔGI藥物，則認為分離株是臨界的。若ΔGI對照＜ΔGI藥物，則認為分離株是抗性的。Heifets，L.，抗微生物劑化學治療401759-1767(1996)說明，8天的培養期間藥物存在下的GI不應超過50(當含藥物的培養瓶中接種體為104-105cfu/ml時)。為了試圖將此處的發現與S.I.R.E.試驗中所用的比例法相關聯，進行圖36所述的實驗。該實驗設計是用來估計分枝桿菌敏感性試驗的當前方法與使用甜菜堿樣去污劑觀察到的結果之間的相關性。例如，含MacFarland藥物瓶的對照為100×-R.F.瓶；10×稀釋藥物瓶的對照為1,000×-R.F.瓶；100×稀釋藥物瓶的對照為10,000×-R.F.瓶。在該實驗中，ATCC27294和571/573-BAL結核分枝桿菌分離株都在7H11選擇性培養基上培養2周。刮下細胞，將其懸浮于NALC/檸檬酸鹽中，超聲處理60秒，然后靜置。將溶液調節為0.5MacFarland標準，以10倍梯度連續稀釋10,000倍。除10,000×稀釋度之外，將每一稀釋系列一式兩份轉種于7H11中進行菌落計數，然后一式兩份接種于培養瓶中，瓶中含有R.F.、含8μg/ml終濃度頭孢曲松的PANTA(P-cax)、含有15μg/ml(或30μg/ml或60μg/ml)的單獨CB-18或與P-cax組合的CB-18(15μg/ml、30μg/ml或60μg/ml的CB-18)。將10,000×稀釋液一式兩份轉種于7H11上，并一式兩份接種于含R.F.或僅含P-cax的瓶中。菌落計數使對于每種分離株的0.5MacFarland標準估計成為可能。然后用這些估計值近似為每一稀釋度接種于12B瓶中的cfu數。以下顯示了對于每一系列轉種的cfu數。圖37A-37E顯示ATCC27294分離株的結果，圖38A-38E顯示571/573-BAL分離株的結果。在高輸入時(＞1×105cfu)，ATCC27294型菌株和571/573-BAL分離株的生長曲線都顯示異常的模式(圖37A和圖38A)。第一周中，甚至在30μg/mlCB-18時分離株的生長也未受妨礙。然而在含有P-cax的30μg/mlCB-18時，兩種分離株在第一周后都顯示異常的延遲。在60μg/mlCB-18時(在有或無抗生素時)，兩種分離株都生長，但以一種異常方式生長兩者最初都開始生長，但然后逐漸停止。只有ATCC27294分離株曾經恢復。BACTEC試驗使用14CO2釋放試驗。由于以每天為基礎讀取培養瓶，所以在前兩周中應從瓶中清除由于代謝而釋放的14CO2。天與天之間GI的差異是自最后一次讀取后產生的新14CO2的反映。只有前兩周以每天為基礎讀取培養瓶，陽性GI表示生長，但非指數升高的GI表示沒有新的生長。兩周后，每3-5天讀取培養瓶。此段時間內GI累積。無論如何，使用上述ΔG標準，在用MacFarland標準作為接種體的情況中，沒有一個描述分離株是敏感的或者能區別它們。因此，以超過105cfu接種培養瓶達不到預期目標，也就是說，是不予推薦的。對10×稀釋度的分析開始顯示易讀的結果。報導在P-cax存在下兩種分離株都在60μg/mlCB-18時敏感。報導在P-cax存在下只有571/573-BAL分離株在30μg/mlCB-18時敏感。稀釋系列的延續顯示，在100×稀釋度時認為在P-cax存在下ATCC27294分離株在30μg/mlCB-18時敏感。使用該接種體，報導在P-cax存在下571/573-BAL分離株在15μg/mlCB-18時敏感。1,000×稀釋度的檢驗顯示，結果與100×稀釋度時相同，但在最后兩種條件下(即，100×和1,000×)571/573-BAL分離株的生長曲線非常類似于較早的曲線(圖5A-5F和圖11)。從這些實驗中得出的結論有兩層。第一，能區別ATCC27294和571/573-BAL，但不是在所有條件下都能區別。第二，試驗的下限是一個生物，盡管另一方面，超過105的細菌加量將使系統超負荷。100-104個桿菌的輸入水平產生可讀的結果，其使分離株的辨別成為可能，103-104個桿菌的接種體將以適時的方式提供可報告的結果。實施例9分枝桿菌的通透性與CB-18效應關于CB-18發揮作用的機制的一種可能性與分枝桿菌的通透性有關。不是為了支持下列假說，下列說明只是作為一種手段來闡明本發明的應用甜菜堿樣去污劑可改變含有分枝菌酸結構的細菌的通透性，由此使該細菌變得對抗生素更加敏感。特別地，CB-18效應可能是分枝菌酸結構構象分布改變的結果。這主要基于Yuan，Y.等人，國家科學院院報9312828-12833(1996)的工作。總之，某些分枝桿菌具有改變其細胞壁流動性的能力(Liu，J.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996))。這是通過改變分枝菌酸的長度、改變分枝菌酸結構構象的組成或通過這兩者而實現的。換句話說，細胞壁分枝菌酸的長度和結構構象都影響細胞壁的熔解溫度。例如，當分枝菌酸的長度改變時，或者當反式比順式雙鍵的比例改變時，或者當環丙烷、羥化、甲基化和羰基的數量和/或構象改變時，分枝菌酸的熔解溫度也改變(Barry，C.E.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996))。例如在恥垢分枝桿菌中，當生長溫度升高時，分枝菌酸近端雙鍵中反式鏈烯的比例也相應提高，這又與這些脂的熔解溫度的升高(即，流動性的降低)相關聯。在結核分枝桿菌和鳥分枝桿菌中，當近端位置中反式環丙烷的比例提高時，這些分枝菌酸的熔解溫度也相應提高。據認為分枝桿菌細胞壁的流動性在通透性中起重要作用，因而有抗性(Yuan，Y.等人，國家科學院院報926630-6634(1995)；Brennan，P.J.等人，生物化學年述6429-63(1995))。龜分枝桿菌對頭孢菌素的抗性被認為只是由于通透性(Connell，N.D.等人，于《結核病，發病機理、保護及控制》，Bloom，B.R.編，ASM出版社，Washington，D.C.(1994)第333-352頁)。例如，Barry，C.E.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996)顯示，當恥垢分枝桿菌細胞壁的流動性降低時(即，當反式鏈烯的百分數升高時)，諾氟沙星和鵝脫氧膽酸鹽的攝取也都降低。Kaneda，K.等人，普通微生物學雜志(Jour.Gen.Microbiol.)1342213-2229(1988)顯示，在高度抗藥性速生菌中，大多數近端雙鍵是反式鏈烯。不同分枝菌酸構象的產生主要通過一系列結構相關的依賴S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的酶來完成。分子分析顯示，在結核分枝桿菌中存在四種結構相關的基因，它們編碼負責許多這種修飾的甲氧基分枝菌酸合酶(MMAS)(Yuan，Y.等人，國家科學院院報9312828-12833(1996))。這四種基因產物(MMAS-1、MMAS-2、MMAS-3和MMAS-4)都顯示與大腸桿菌環丙烷脂肪酸合酶(CFAS)及麻風分枝桿菌和結核分枝桿菌環丙烷分枝菌酸合酶(CMAS-1和CMAS-2)的強烈序列同源性。暗示它們共用一種通用的機制。該機制包括SAM和一種碳鎓中間產物(圖39A)。不同的產物由如下事實產生不同合酶在各自的活性位點具有不同的電子供體/受體，產生鏈烯、環丙烷、甲基化和羥化與甲基化的組合(Yuan，Y.等人，國家科學院院報93l2828-12833(1996))。在美國專利5,610,198中，Barry，C.E.等人指出，“硫代二十四酸”(硫代脂肪酸衍生物)能用來通過這些依賴SAM的反應的抑制來抑制致病分枝桿菌中分枝菌酸的環丙烷化和氧合(圖39B)。作為應用的證據試驗了四種“硫代二十四酸”。總之，這些類似物的抑制機制包括其作為合酶之酶反應前半段的底物的參與(尤其是，從SAM中的甲基轉移)。催化后，形成的結構是“穩定的過渡態類似物”(圖39B)。本質上，該化合物不是從活性位點釋放的，并作為一種典型的競爭性抑制劑。過渡態結構類似于甜菜堿樣去污劑。特別地，一種基于锍的羧基甜菜堿(表1和圖39B)锍羧基甜菜堿不需要酶的催化來激活，而直接抑制依賴SAM的修飾。在美國專利5,610,198中，Barry，C.E.等人也指出，這些硫二十四酸對腐生的分枝桿菌如恥垢分枝桿菌是無效的。與Barry等人的公開內容(美國專利5,610,198)相反，在此所述的本發明說明，這些腐生分枝桿菌對甜菜堿樣去污劑的作用敏感偶發分枝桿菌顯示CB-18與所試頭孢菌素之間最高程度的協同作用。例如，臨床分離株495-JHH不受頭孢西丁存在的影響，并能在109μg/mlCB-18存在下有某種程度地生長(圖15)。然而，當頭孢西丁與低至13μg/ml的CB-18組合時，在某種程度上影響生長，在27μg/mlCB-18時完全抑制。如果甜菜堿樣去污劑通過對依賴SAM的酶的作用在細胞壁流動性水平上影響分枝桿菌的通透性，則圖14和圖15的結果實際上就是預期的結果。該預期的基礎源于偶發分枝桿菌與恥垢分枝桿菌的相似性。Dobson，G.等人，在Goodfellow，M.等人編的《細菌分類學中的化學方法》(ChemicalMethodsinBacterialSystematics)，AcademicPress，倫敦(1985)第237-265頁和Brennan，P.J.等人，生物化學年述6429-63(1995)中總結了不同分枝桿菌種的分枝菌酸分布，顯示速生菌(例如，偶發分枝桿菌、龜分枝桿菌、恥垢分枝桿菌等)共有相似的分枝菌酸分布主要的分枝菌酸是α’型。Liu，J.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996)報導，當生長溫度升高時，恥垢分枝桿菌中的主要分枝菌酸酯(mycolate)變為α1和α2型。α1和α2型都長于α’型(α’＝C64，α1和α2＝C78-79)，α2型具有近端反式鏈烯，該結構賦予細胞壁最低的流動性或最低通透性。α2型在較高溫度時占優勢(α’、α1和α2分枝菌酸的結構都顯示于George，K.等人，生物化學雜志27027292-27298(1995))。當回顧Yuan，Y.等人，國家科學院院報9312828-12833(1996)對于這些依賴SAM的酶所提出的機制時(圖39A)反式鏈烯是依賴SAM的甲基化作用的產物，流動性與反式鏈烯的含量成反比，這些觀察的意義變得明顯。向培養基中加入CB-18可抑制反式鏈烯的形成，由此提高細胞壁的流動性，從而提高細胞對抗生素的通透性。一旦通透性緩解，抗生素就能更容易地進入細胞。特定抗生素的效能取決于分離株本身的性質(即，抗生素與所研究的分離株中藥物作用位點的相互作用)。最終結果是觀察到的CB-18效應。如果如Liu，J.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996)所述，脂肪酸的依賴SAM的修飾是分枝桿菌借之調節細胞壁流動性的一種通用機制，那么預計甜菜堿樣去污劑可影響大范圍的分枝菌酸結構，例如，棒形分枝菌酸酯(Durand，E.等人，歐洲生物化學雜志(Eur.Jour.Biochem.)93103-112(1979))和諾卡菌分枝菌酸酯(norcardiomycolates)。盡管前述討論合理地說明了在偶發分枝桿菌中觀察到的頭孢西丁與CB-18之間的極端協同作用(表7)，但沒有解釋結核分枝桿菌對甜菜堿樣去污劑的極端敏感性(表8)。例如，在無抗生素時結核分枝桿菌型菌株ATCC27294的生長在27μg/mlCB-18時受較小程度的影響，在54μg/mlCB-18時完全停止。在抗生素存在下，在13μg/mlCB-18時生長受較小程度的影響，在27μg/mlCB-18時不存在(圖10)。在無抗生素時571/573-BAL結核分枝桿菌分離株的生長在13μg/mlCB-18時受較小程度的影響，在27μg/mlCB-18時完全停止。在抗生素存在下，該分離株的生長在13μg/mlCB-18時不存在(圖11)。與偶發分枝桿菌試驗(圖14和圖15)相比，結核分枝桿菌對甜菜樣去污劑本身更敏感。顯然，緩生分枝桿菌，如結核分枝桿菌，不象速生分枝桿菌如恥垢分枝桿菌(Liu，J.等人，生物化學雜志27129545-29551(1996))那樣調節細胞壁的流動性。例如，Takayama，K.等人，美國呼吸道疾病綜述118113-117(1978)顯示結核分枝桿菌對生長溫度的極端敏感性偏離最適溫度幾度時，分枝菌酸合成停止，結核分枝桿菌不能存活。結核分枝桿菌對代替抗生素的本發明的甜菜堿樣去污劑或Barry，C.E.等人(U.S.5,610,198)的硫代二十四酸的敏感性，可能是結核分枝桿菌分離株對分枝菌酸合成的屬間干擾的敏感性的后果。例如，抑制分枝菌酸的環丙烷化或氧合將影響通透性并因而影響敏感性；分枝菌酸合成的干擾通常具有致死后果。在緩生分枝桿菌中僅在低CB-18濃度時觀察到誘發的對抗生素的敏感性。如果在含分枝菌酸結構的細菌中甜菜堿樣去污劑的作用位點是依賴SAM的合酶，則預期將抑制對脂肪酸(例如，分枝菌酸)的修飾，并在某些情況下引起分枝菌酸合成的停止。因此，甜菜堿樣去污劑在速生菌的處理中僅起一種輔助治療作用，但預期對多種緩生分枝桿菌具有輔助和致死兩種后果。例如，當與依賴SAM的抑制劑一起溫育的緩生分枝桿菌的通透性表現誘發的對抗生素的敏感性時，由于分枝菌酸合成的干擾而引起的對生存的不利影響也是明顯的并且可能是主要的因素。另一方面，速生分枝桿菌一般不受分離的甜菜堿樣去污劑存在的影響，但由于調節流動性的機制的抑制而顯示與抗生素的驚人的協同作用。Barry等人(美國專利5,610,198)也說明，只有抗分枝桿菌藥物如異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素、利福平、氨苯砜、利福布汀、克拉霉素、環丙沙星、氯苯吩嗪、阿奇霉素、乙硫異煙胺、丁胺卡那霉素或resorcinomycinA能與硫代二十四酸一起使用。在此所述并在實施例5和6中例證的本發明顯示，在CB-18存在下細菌生理學的某些方面改變，大概通透性改變在此所述的機制，從而誘發對大范圍抗生素的敏感性。因此，根據本發明，甜菜堿敏感性試驗將利用CB-18效應與多種抗生素，來鑒定所試分離株的天然敏感性，由此更有效地指導醫生。本發明的甜菜堿樣去污劑比Barry等人(U.S.5,610,198)的硫代二十四酸具有明顯的優點。例如，硫代二十四酸是極端不可溶的。換句話說，這些試劑的Krafft溫度遠遠高于生理標準。在適當濃度的輸送幾乎是不可能的。相反，本發明中使用的甜菜堿樣去污劑大部分是可溶的。例如，Hodge，D.等人，Langmuir7878-884(1991)已合成了一種Krafft值為20℃的C20-羧己基甜菜堿。盡管在此使用CB-18來表征CB-18效應，但顯然其它甜菜堿在這點上也是有用的。例如，根據結構，一種烷基锍羧基甜菜堿將是抑制分枝菌酸修飾的理想化合物。可通過對Zimmer，R.E.的一種改進方法(美國專利3,560,393)合成該烷基锍羧基甜菜堿。例如，能甲基化十八烷基硫醇并純化R1-S-R2，用于用合適類型的鹵化酯修飾(圖39C)。用陽離子交換層析純化將去除酯產生酸。實施例10用于篩選臨床分離株的甜菜堿敏感性表實施例5和實施例6顯示，在一種甜菜堿與多種不同抗生素匹配的試驗過程中，不同的臨床分離株行為表現不同。實施例6顯示，在不同去污劑與P/cax抗生素制劑組合的試驗中，一種臨床分離株行為表現不同。于是，為了敏感性試驗，發展并完善一種甜菜堿敏感性表。這種表將交叉使用不同的甜菜堿與不同的抗生素。在此所述的實施例顯示這種表是如何設計并用于敏感性試驗的。本實施例是作為一種手段來說明如何發展這種表，而不是作為本發明的限制。使用對于不同臨床分離株引起廣譜結果的不同甜菜堿，例如五種，連同對于不同臨床分離株引起廣譜結果的不同抗生素，例如五種，組成甜菜堿敏感性表。例如，確定5種抗生素α-1、α-2、α-3、α-4和α-5，并確定5種甜菜堿作為β-1、β-2、β-3、β-4和β-5。五種不同的甜菜堿樣去污劑條件可以是不同濃度的相同去污劑或其組合。同樣，五種不同抗生素可以是不同濃度的相同抗生素或其組合。表11顯示這5種甜菜堿如何與這5種抗生素相匹配以鑒定最有效的甜菜堿-抗生素組合。甜菜堿敏感性表下面敘述表11所示甜菜堿表的應用(1)在液體培養基(例如BACTEC12B)中或固體培養基(例如7H11斜面)上培養所述臨床分離株。(2)建立甜菜堿表。例如能在微量滴定板或單個瓶中建立該表。甜菜堿和抗生素可在合適的孔或瓶中凍干，然后用生長培養基重建，或者以抗生素、甜菜堿和肉湯的單個溶液混合來達到相同目的。前者是優選的。(3)用向每一孔或管中加入適量細胞(例如，100-10,000cfu)的方式制備細菌貯存液。如本領域所知，通過基于MacFarland標準的應用產生懸液能將這種貯存液調節到適量的細胞，然后稀釋到希望的終點。(4)將板、管或瓶溫育預定的時間，并使用所選方法檢查生長。生長的檢測可基于14C釋放(例如，BACTEC12BBecton-Dickinson，Cockeysville，MD)、O2消耗(ESPMycoSystemIITM，DIFCOLaboratories，Detroit，MI)、pH改變(MB/BacT，OrganonTeknika，Durham，NC)或本領域所知的其它標準技術，如濁度法。這種表也能用來分類臨床分離株。例如，如果已經知道甜菜堿借之發揮作用來增強抗微生物治療的機制，那么這種信息對于提高與甜菜堿-抗生素組合有關或無關的治療方案將有參考性。因此，存在兩種截然不同的終點。在第一種終點中，甜菜堿敏感性表被用作分類臨床分離株的一種手段。這種分類是用來更有效地確定與甜菜堿作為治療佐劑的應用無關的治療方案。在第二種終點中，甜菜堿敏感性試驗的目的在于確定特定甜菜堿樣去污劑與特定抗生素的組合(如下一個實施例(實施例11)所述)。實施例11甜菜堿樣去污劑作為治療佐劑的應用如實施例10所述，敏感性試驗有兩種終點。在一種終點中，甜菜堿表被作為一種典型的敏感性篩選法用于確定消除感染的最有效的治療方案，最明顯地是實施例10的表中的一種抗生素。在該終點中，治療方案不包括甜菜堿樣去污劑作為治療佐劑的應用。在另一種終點中，治療方案基于表中所含的一種或多種抗生素甜菜堿樣去污劑組合。在該終點中，從實施例10所述表的結果中獲得的認識是，例如，終點本身該信息對技術人員指定抗生素和甜菜堿樣去污劑的特定組合。在此情況下，甜菜堿必須與患者接觸。該實施例的目的在于描述甜菜堿如何用作治療佐劑。該實施例是作為一種手段來闡明如何發展這種表，并不是用作本發明的限制。在此所述的實施例和數據顯示，甜菜堿樣去污劑盡管在分開使用時具有有限的抗微生物效能，但在與一種或多種抗生素組合使用時是最有效的。為了使任何抗微生物治療有效，必須向微生物輸送抗生素。在本發明的方法中抗生素本身的輸送可以通過本領域所知的用于抗生素輸送的標準方法。本實施例的目的在于描述如何向傳染物輸送甜菜堿。因此，在根據本發明的方法接受佐劑治療的患者中，如果希望，能通過一種方法輸送甜菜堿而通過另一種方法輸送抗生素。輸送甜菜堿樣去污劑的標準方法在本領域中已知，包括口服、肌肉注射、靜脈滴注、在感染部位注射或吸入。然而，甜菜堿樣去污劑是表面活性劑，通過口服或肌肉注射可能不能很好地耐受。例如，大量甜菜堿樣去污劑的口服可能會導致胃腸疼痛，大量甜菜堿的注射可能會導致細胞結構的溶解，引起注射部位的刺激。當應用靜脈滴注時，必須注意血液中甜菜堿的濃度。盡管加入甜菜堿至臨界膠束濃度(CMC)以上是可行的，但如果由于血液成分的溶解而使全血水平升高至CMC以上則可引起并發癥。在感染部位注射也可能是一種可行的輸送方法；不幸地，這只在很少的情況中才是可能的，例如由傳播性MAC疾病引起的結核性損害或肉芽瘤性損害。在一種優選實施方案中，通過吸入輸送甜菜堿。結核病主要是一種呼吸道感染。結核性損害一般出現于肺的上葉。假使肺的表面覆蓋有一種天然表面活性劑，向感染部位輸送甜菜堿樣去污劑的有效途徑可能類似于哮喘病患者中β-阻斷劑或類固醇的輸送。例如，某些類固醇和β-阻斷劑一般以微結晶的形式輸送，如Ventolin(由Allen&Hanburys生產，Allen&Hanburys為Glaxo的一個公司，ResearchTrianglePark，NC)。現已完全敘述了本發明，本領域的技術人員應當理解，在不影響本發明或其任何實施方案的精神或范圍的情況下，可在較寬和相等范圍的條件、參數等之內進行本發明。權利要求1.一種敏感性試驗的方法，該方法包括使微生物與含有抗生素和甜菜堿樣去污劑的組合物相接觸，并且根據該微生物在該組合物中的生存力表征該微生物對該抗生素的敏感性。2.權利要求1的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑選自CB樣、SB樣、HSB樣、PB樣、StB樣、PhB樣、SoB樣、RevB樣、AO樣、cAB樣和ImB樣去污劑。3.權利要求2的方法，其中該甜菜堿樣去污劑是CB樣去污劑。4.權利要求3的方法，其中該CB樣去污劑具有結構其中R1為C8-C22；α為-CH2-、-CH(OH)-、-(CO)-NH-CH2CH2CH2-、-O-或-C(0)-；n為0或1；β為-N-、-P-或-S-；R2為-H、-CH3、-C2H5、-C3H7或-C4H9；R3為-H、-CH3、-C2H5、-C31H7或-C4H9；R4為-CH2-、-C2H4-、-C3H6-、-C4H8-、-C5H10-、-C6H12-、-CH2-C6H4-、-CmH2m-、-CH(OH)CH2CH2-、-CH2CH(OH)CH2-或-CmH2m-1(OH)-，其中m≥1；以及γ為-COO。5.權利要求4的方法，其中所述CB樣去污劑選自N-(羧甲基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.693-33-4)、椰油羧甲基甜菜堿和(CASNo.68424-94-2)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-9-十八烷-1-銨，內鹽(CASNo.871-37-4)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-3-((1-氧十八烷基)氨基)-1-丙銨，內鹽(CASNo.6179-44-8)、3-氨基-N(羧甲基)-N，N-二甲基-1-丙銨N-C8-C22酰基衍生物，內鹽(CASNo.84082-44-0)、N-(羧甲基)-3-((12-羥基-1-氧-9-十八烷基)氨基)-N，N-二甲基-1-丙銨，內鹽(CASNo.71850-81-2)、椰油酰胺丙基羧甲基甜菜堿(CASNo.61789-39-7和CASNo.61789-40-0)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.16527-85-8)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十三烷銨，內鹽(CASNo.132621-79-5)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.69725-38-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.42416-43-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.30612-73-8)、N-十二烷基-β-丙氨酸(CASNo.1462-54-0)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十一烷銨，內鹽(CASNo.150147-53-8)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.15163-30-1)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.146959-90-2)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十五烷銨，內鹽(CASNo.146959-91-3)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.71695-32-4)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.78195-27-4)、N-(4-羧丁基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.120139-51-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.76392-97-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.73565-98-7)、N-(6-羧己基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.132621-80-8)、4-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-31-3)、2-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-34-6)、4-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-33-5)、2-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-35-7)、牛脂甘氨酸酯(CASNo.70750-46-8)、大豆酰胺丙基羧甲基甜菜堿，以及巴西棕櫚酰胺丙基羧甲基甜菜堿。6.權利要求5的方法，其中所述羧基甜菜堿是N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CB-18)(CASNo.78195-27-4)7.權利要求2的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑是SB樣去污劑。8.權利要求7的方法，其中該SB樣去污劑選自SB-18、SB-16、SB-14和SB-12。9.權利要求8的方法，其中該SB樣去污劑是SB-16。10.權利要求8的方法，其中該SB樣去污劑是SB-18。11.權利要求2的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑是SoB樣去污劑。12.權利要求1-11任一項的方法，其中所述組合物含有兩種或多種甜菜堿樣去污劑。13.權利要求1的方法，其中所述抗生素選自β-內酰胺抗生素、氨基糖苷、氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯、林可酰胺、糖肽、脂肽、多肽抗生素、磺胺、甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星。14.權利要求13的方法，其中該抗生素是β-內酰胺抗生素。15.權利要求14的方法，其中該β-內酰胺抗生素選自青霉素、頭孢菌素、單菌霉素和碳青霉烯抗生素。16.權利要求15的方法，其中該β-內酰胺抗生素是青霉素。17.權利要求16的方法，其中該青霉素選自阿洛西林、甲氧西林、萘夫西林、鄰氯苯甲異噁唑青霉素、雙氯西林、苯唑西林、氨芐青霉素、巴氨西林、羧芐青霉素、替卡西林、美洛西林和哌拉西林。18.權利要求15的方法，其中該類抗生素是頭孢菌素。19.權利要求18的方法，其中該頭孢菌素選自頭孢西丁、頭孢哌酮、頭孢噻甲羧肟、頭孢曲松、頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢氨芐、頭孢噻啶、頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢尼西、頭孢芐胺四唑、頭孢丙烯、頭孢呋辛、氯碳頭孢、頭孢氰唑、頭孢替坦、頭孢克肟、頭孢氨噻、頭孢泊肟和頭孢唑肟。20.權利要求19的方法，其中該頭孢菌素是頭孢曲松。21.權利要求15的方法，其中所述β-內酰胺抗生素是單菌霉素。22.權利要求21的方法，其中該單菌霉素是氨曲南。23.權利要求15的方法，其中所述β-內酰胺抗生素是碳青霉烯。24.權利要求23的方法，其中該碳青霉烯選自亞胺培南、美羅培南、帕民培南和biapenem。25.權利要求24的方法，其中該碳青霉烯是亞胺培南。26.權利要求13-25任一項的方法，其中所述組合物進一步含有一種β-內酰胺酶抑制劑。27.權利要求26的方法，其中該β-內酰胺酶抑制劑選自棒酸、舒巴坦和他佐巴坦。28.權利要求13的方法，其中所述抗生素是氨基糖苷或氨基環醇。29.權利要求28的方法，其中該氨基糖苷或氨基環醇選自鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、紫蘇霉素、奈替米星、新霉素、新霉素B和巴龍霉素。30.權利要求13的方法，其中所述抗生素是喹諾酮。31.權利要求30的方法，其中該喹諾酮選自萘啶酮酸、奧索利酸、西諾沙星、氟甲喹、米洛沙星、羅索沙星、吡哌酸、諾氟沙星、依諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、替馬氟沙星、氟羅沙星、培氟沙星、氨氟沙星、司氟沙星、左氧氟沙星和克林沙星。32.權利要求13的方法，其中所述抗生素是四環素。33.權利要求13的方法，其中所述抗生素是大環內酯。34.權利要求33的方法，其中該大環內酯選自紅霉素、竹桃霉素、螺旋霉素、交沙霉素、薔薇霉素、克拉霉素、阿奇霉素、地紅霉素、羅紅霉素、氟紅霉素和羅他霉素。35.權利要求13的方法，其中所述抗生素是林可酰胺。36.權利要求13的方法，其中所述抗生素是糖肽。37.權利要求13的方法，其中所述抗生素是脂肽。38.權利要求13的方法，其中所述抗生素是多肽抗生素。39.權利要求13的方法，其中所述抗生素是磺胺。40.權利要求13的方法，其中所述抗生素是甲氧芐啶。41.權利要求13的方法，其中所述組合物含有兩種或多種抗生素。42.權利要求41的方法，其中該抗生素是磺胺和甲氧芐啶。43.權利要求42的方法，其中該磺胺是磺胺甲基異噁唑。44.權利要求13的方法，其中所述抗生素是氯霉素。45.權利要求13的方法，其中所述抗生素是異煙肼。46.權利要求13的方法，其中所述抗生素是硝基咪唑。47.權利要求13的方法，其中所述抗生素是利福平。48.權利要求47的方法，其中該利福平選自利福平、利福霉素SV、利福霉素B(利福酰胺)和利福布汀。49.權利要求48的方法，其中該利福平是利福平。50.權利要求48的方法，其中該利福平是利福布汀。51.權利要求13的方法，其中所述抗生素是硝基呋喃。52.權利要求13的方法，其中所述抗生素是烏洛托品。53.權利要求13的方法，其中所述抗生素是莫匹羅星。54.權利要求1的方法，其中所述抗生素選自丁胺卡那霉素、阿奇霉素、與任一β-內酰胺酶抑制劑組合的任一β-內酰胺、卷曲霉素、頭孢氰唑、頭孢西丁、環丙沙星、克拉霉素、氯苯吩嗪、環絲氨酸、氨苯砜、紅霉素、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、亞胺培南、異煙肼、卡那霉素、二甲胺四環素、氧氟沙星、對氨基水揚酸、丙硫異煙胺、吡嗪酰胺、利福平、利福布汀、司氟沙星、磺胺甲基異噁唑與甲氧芐啶、鏈霉素、四環素、thiacetazole和紫霉素。55.一種抗微生物治療的方法，用于感染了一種微生物或有感染該微生物危險的患者，該方法包括以足以殺死該微生物的量和時間對該患者同時施用甜菜堿樣去污劑和抗生素。56.權利要求55的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑選自CB樣、SB樣、HSB樣、PB樣、StB樣、PhB樣、SoB樣、RevB樣、AO樣、cAB樣和ImB樣去污劑。57.權利要求56的方法，其中該甜菜堿樣去污劑是CB樣去污劑。58.權利要求57的方法，其中該CB樣去污劑具有結構其中R1為C8-C22；α為-CH2-、-CH(OH)-、-(CO)-NH-CH2CH2CH2-、-O-或-C(O)-；n為0或1；β為-N-、-P-或-S-；R2為-H、-CH3、-C2H5、-C3H7或-C4H9；R3為-H、-CH3、-C2H5、-C31H7或-C4H9；R4為-CH2-、-C2H4-、-C3H6-、-C4H8-、-C5H10-、-C6H12-、-CH2-C6H4-、-CmH2m-、-CH(OH)CH2CH2-、-CH2CH(OH)CH2-或-CmH2m-1(OH)-，其中m≥1；以及γ為-COO。59.權利要求58的方法，其中所述CB樣去污劑選自N-(羧甲基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.693-33-4)、椰油羧甲基甜菜堿和(CASNo.68424-94-2)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-9-十八烷-1-銨，內鹽(CASNo.871-37-4)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-3-((1-氧十八烷基)氨基)-1-丙銨，內鹽(CASNo.6179-44-8)、3-氨基-N(羧甲基)-N，N-二甲基-1-丙銨N-C8-C22酰基衍生物，內鹽(CASNo.84082-44-0)、N-(羧甲基)-3-((12-羥基-1-氧-9-十八烷基)氨基)-N，N-二甲基-1-丙銨，內鹽(CASNo.71850-81-2)、椰油酰胺丙基羧甲基甜菜堿(CASNo.61789-39-7和CASNo.61789-40-0)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.16527-85-8)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十三烷銨，內鹽(CASNo.132621-79-5)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.69725-38-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.42416-43-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.30612-73-8)、N-十二烷基-β-丙氨酸(CASNo.1462-54-0)，N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十一烷銨內鹽(CASNo.150147-53-8)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.15163-30-1)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.146959-90-2)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十五烷銨，內鹽(CAS1No.146959-91-3)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.71695-32-4)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.78195-27-4)、N-(4-羧丁基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.120139-51-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.76392-97-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.73565-98-7)、N-(6-羧己基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.132621-80-8)、4-羧基-N-十二烷基-N，N-三甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-31-3)、2-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-34-6)、4-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-33-5)、2-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-35-7)、牛脂甘氨酸酯(CASNo.70750-46-8)、大豆酰胺丙基羧甲基甜菜堿，以及巴西棕櫚酰胺丙基羧甲基甜菜堿。60.權利要求59的方法，其中所述羧基甜菜堿是N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CB-18)(CASNo.78195-27-4)61.權利要求56的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑是SB樣去污劑。62.權利要求61的方法，其中該SB樣去污劑選自SB-18、SB-16、SB-14和SB-12。63.權利要求62的方法，其中該SB樣去污劑是SB-16。64.權利要求62的方法，其中該SB樣去污劑是SB-18。65.權利要求56的方法，其中所述甜菜堿樣去污劑是SoB樣去污劑。66.權利要求56-65任一項的方法，其中所述方法包括對患者施用兩種或多種甜菜堿樣去污劑。67.權利要求55的方法，其中所述抗生素選自β-內酰胺抗生素、氨基糖苷、氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯、林可酰胺、糖肽、脂肽、多肽抗生素、磺胺、甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星。68.權利要求67的方法，其中該抗生素是β-內酰胺抗生素。69.權利要求68的方法，其中該β-內酰胺抗生素選自青霉素、頭孢菌素、單菌霉素和碳青霉烯抗生素。70.權利要求69的方法，其中該抗生素是青霉素。71.權利要求70的方法，其中該青霉素選自阿洛西林、甲氧西林、萘夫西林、鄰氯苯甲異噁唑青霉素、雙氯西林、苯唑西林、氨芐青霉素、巴氨西林、羧芐青霉素、替卡西林、美洛西林、青霉素和哌拉西林。72.權利要求69的方法，其中該抗生素是頭孢菌素。73.權利要求72的方法，其中該頭孢菌素選自頭孢西丁、頭孢哌酮、頭孢噻甲羧肟、頭孢曲松、頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢氨芐、頭孢噻啶、頭孢噻吩、頭孢匹林、頭孢拉定、頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢尼西、頭孢芐胺四唑、頭孢丙烯、頭孢呋辛、氯碳頭孢、頭孢氰唑、頭孢替坦、頭孢克肟、頭孢氨噻、頭孢泊肟和頭孢唑肟。74.權利要求73的方法，其中該頭孢菌素是頭孢曲松。75.權利要求69的方法，其中所述抗生素是單菌霉素。76.權利要求75的方法，其中該單菌霉素是氨曲南。77.權利要求69的方法，其中所述抗生素是碳青霉烯。78.權利要求77的方法，其中該碳青霉烯選自亞胺培南、美羅培南、帕民培南和biaapenem。79.權利要求78的方法，其中該碳青霉烯是亞胺培南。80.權利要求68-80任一項的方法，其中所述方法進一步包括對患者施用β-內酰胺酶抑制劑。81.權利要求80的方法，其中該β-內酰胺酶抑制劑選自棒酸、舒巴坦和他佐巴坦。82.權利要求67的方法，其中所述抗生素是氨基糖苷或氨基環醇。83.權利要求82的方法，其中該氨基糖苷或氨基環醇選自鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、紫蘇霉素、奈替米星、新霉素、新霉素B和巴龍霉素。84.權利要求67的方法，其中所述抗生素是喹諾酮。85.權利要求83的方法，其中該喹諾酮選自萘啶酮酸、奧索利酸、西諾沙星、氟甲喹、米洛沙星、羅索沙星、吡哌酸、諾氟沙星、依諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、替馬氟沙星、氟羅沙星、培氟沙星、氨氟沙星、司氟沙星、左氧氟沙星、克林沙星。86.權利要求67的方法，其中所述抗生素是四環素。87.權利要求67的方法，其中所述抗生素是大環內酯。88.權利要求87的方法，其中該大環內酯選自紅霉素、竹桃霉素、螺旋霉素、交沙霉素、薔薇霉素、克拉霉素、阿奇霉素、地紅霉素、羅紅霉素、氟紅霉素和羅他霉素。89.權利要求67的方法，其中所述抗生素是林可酰胺。90.權利要求67的方法，其中所述抗生素是糖肽。91.權利要求67的方法，其中所述抗生素是脂肽。92.權利要求67的方法，其中所述抗生素是多肽抗生素。93.權利要求67的方法，其中所述抗生素是磺胺。94.權利要求67的方法，其中所述抗生素是甲氧芐啶。95.權利要求55的方法，其中對患者施用兩種抗生素。96.權利要求95的方法，其中該抗生素是磺胺和甲氧芐啶。97.權利要求96的方法，其中該磺胺是磺胺甲基異噁唑。98.權利要求67的方法，其中所述抗生素是氯霉素。99.權利要求67的方法，其中所述抗生素是異煙肼。100.權利要求67的方法，其中所述抗生素是硝基咪唑。101.權利要求67的方法，其中所述抗生素是利福平。102.權利要求101的方法，其中該利福平選自利福平、利福霉素SV、利福霉素B(利福酰胺)和利福布汀。103.權利要求102的方法，其中該利福平是利福平。104.權利要求102的方法，其中該利福平是利福布汀。105.權利要求67的方法，其中所述抗生素是硝基呋喃。106.權利要求67的方法，其中所述抗生素是烏洛托品。107.權利要求67的方法，其中所述抗生素是莫匹羅星。108.權利要求55的方法，其中所述抗生素選自丁胺卡那霉素、阿奇霉素、與任一β-內酰胺酶抑制劑組合的任一β-內酰胺、卷曲霉素、頭孢氰唑、頭孢西丁、環丙沙星、克拉霉素、氯苯吩嗪、環絲氨酸、氨苯砜、紅霉素、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、亞胺培南、異煙肼、卡那霉素、二甲胺四環素、氧氟沙星、對氨基水揚酸、丙硫異煙胺、吡嗪酰胺、利福平、利福布汀、司氟沙星、磺胺甲基異噁唑與甲氧芐啶、鏈霉素、四環素、thiacetazole和紫霉素。109.權利要求1或55任一項的方法，其中所述微生物在其外膜中具有分枝菌酸結構。110.權利要求109的方法，其中該微生物是分枝桿菌屬。111.權利要求110的方法，其中該分枝桿菌選自田野分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、M.acetamidolyticum、非洲分枝桿菌、愛知分枝桿菌、亞洲分枝桿菌、金色分枝桿菌、南非分枝桿菌、鳥分枝桿菌、牛分枝桿菌、牛分枝桿菌(BCG)、龜分枝桿菌、千田分枝桿菌、楚布分枝桿菌、庫氏分枝桿菌、迪氏分枝桿菌、杜氏分枝桿菌、詭詐分枝桿菌、產鼻疽分枝桿菌、微黃分枝桿菌、偶發分枝桿菌、加地斯分枝桿菌、胃分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、戈登分枝桿菌、嗜血分枝桿菌、胞內分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、科莫斯分枝桿菌、麻風分枝桿菌、鼠麻風分枝桿菌、海分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌、田鼠分枝桿菌、莫里奧卡分枝桿菌、新金色分枝桿菌、無色分枝桿菌、奧布分枝桿菌、副偶然分枝桿菌、副結核分枝桿菌、外來分枝桿菌、草分枝桿菌、豬分枝桿菌、多孔分枝桿菌、灰塵分枝桿菌、羅德島分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、塞內加爾分枝桿菌、石氏分枝桿菌、猿分枝桿菌、恥垢分枝桿菌、泥炭蘚分枝桿菌、斯氏分枝桿菌、土分枝桿菌、抗熱分枝桿菌、東海分枝桿菌、次要分枝桿菌、結核分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、母牛分枝桿菌、蟾分枝桿菌。112.權利要求111的方法，其中該分枝桿菌是結核分枝桿菌復合體(MTB)的一員。113.權利要求112的方法，其中該微生物是結核分枝桿菌。114.權利要求111的方法，其中該微生物是鳥分枝桿菌(MAC)復合體的一員。115.權利要求111的方法，其中該微生物是MAIS組的一員。116.權利要求111的方法，其中該微生物是潰瘍分枝桿菌。117.權利要求111的方法，其中該微生物是堪薩斯分枝桿菌。118.權利要求111的方法，其中該微生物是龜分枝桿菌。119.權利要求111的方法，其中該微生物是偶發分枝桿菌。120.一種用于敏感性試驗的組合物，該組合物含有與一種或多種甜菜堿樣去污劑混合的一種或多種抗生素。121.權利要求121的組合物，其中至少一種甜菜堿樣去污劑選自CB樣、SB樣、HSB樣、PB樣、StB樣、PhB樣、SoB樣、RevB樣、AO樣、cAB樣和ImB樣去污劑。122.權利要求122的組合物，其中該甜菜堿樣去污劑是CB樣去污劑。123.權利要求123的組合物，其中該CB樣去污劑具有結構其中R1為C8-C22；α為-CH2-、-CH(OH)-、-(CO)-NH-CH2CH2CH2-、-O-或-C(O)-；n為O或1；β為-N-、-P-或-S-；R2為-H、-CH3、-C2H5、-C3H7或-C4H9；R3為-H、-CH3、-C2H5、-C31H7或-C4H9；R4為-CH2-、-C2H4-、-C3H6-、-C4H8-、-C5H10-、-C6H12-、-CH2-C6H4-、-CmH2m-、-CH(OH)CH2CH2-、-CH2CH(OH)CH2-或-CmH2m-1(OH)-，其中m≥1；以及γ為-COO。124.權利要求124的組合物，其中所述CB樣去污劑選自N-(羧甲基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.693-33-4)、椰油羧甲基甜菜堿和(CASNo.68424-94-2)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-9-十八烷-1-銨，內鹽(CASNo.871-37-4)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-3-((1-氧十八烷基)氨基)-1-丙銨，內鹽(CASNo.6179-44-8)、3-氨基-N(羧甲基)-N，N-二甲基-1-丙銨N-C8-C22酰基衍生物，內鹽(CASNo.84082-44-0)、N-(羧甲基)-3-((12-羥基-1-氧-9-十八烷基)氨基)-N，N-二甲基-1-丙銨，內鹽(CASNo.71850-81-2)、椰油酰胺丙基羧甲基甜菜堿(CASNo.61789-39-7和CASNo.61789-40-0)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.16527-85-8)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十三烷銨，內鹽(CASNo.132621-79-5)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.69725-38-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.42416-43-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.30612-73-8)、N-十二烷基-β-丙氨酸(CASNo.1462-54-0)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十一烷銨，內鹽(CASNo.150147-53-8)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.15163-30-1)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.146959-90-2)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十五烷銨，內鹽(CASNo.146959-91-3)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.71695-32-4)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.78195-27-4)、N-(4-羧丁基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.120139-51-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.76392-97-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.73565-98-7)、N-(6-羧己基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.132621-80-8)、4-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-31-3)、2-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-34-6)、4-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-33-5)、2-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-35-7)、牛脂甘氨酸酯(CASNo.70750-46-8)、大豆酰胺丙基羧甲基甜菜堿，以及巴西棕櫚酰胺丙基羧甲基甜菜堿。125.權利要求125的組合物，其中所述羧基甜菜堿是N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CB-18)(CASNo.78195-27-4)126.權利要求121的組合物，其中所述甜菜堿樣去污劑是SB樣去污劑。127.權利要求126的組合物，其中該SB樣去污劑選自SB-18、SB-16、SB-14和SB-12。128.權利要求127的組合物，其中該SB樣去污劑是SB-16。129.權利要求127的組合物，其中該SB樣去污劑是SB-18。130.權利要求120-129任一項的組合物，其中所述組合物含有兩種或多種甜菜堿樣去污劑。131.權利要求120的組合物，其中所述抗生素選自β-內酰胺抗生素、氨基糖苷、氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯、林可酰胺、糖肽、脂肽、多肽抗生素、磺胺、甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星。132.一種用于測定微生物敏感性的試劑盒，該試劑盒含有緊鄰或相鄰的一種或多種甜菜堿樣去污劑與一種或多種抗生素。133.權利要求132的試劑盒，其中至少一種甜菜堿樣去污劑選自CB樣、SB樣、HSB樣、PB樣、StB樣、PhB樣、SoB樣、RevB樣、AO樣、cAB樣和ImB樣去污劑。134.權利要求133的試劑盒，其中該甜菜堿樣去污劑是CB樣去污劑。135.權利要求134的試劑盒，其中該CB樣去污劑具有結構其中R1為C8-C22；α為-CH2-、-CH(OH)-、-(CO)-NH-CH2CH2CH2-、-O-或-C(O)-；n為0或1；β為-N-、-P-或-S-；R2為-H、-CH3、-C2H5、-C3H7或-C4H9；R3為-H、-CH3、-C2H5、-C31H7或-C4H9；R4為-CH2-、-C2H4-、-C3H6-、-C4H8-、-C5H10-、-C6H12-、-CH2-C6H4-、-CmH2m-、-CH(OH)CH2CH2-、-CH2CH(OH)CH2-或-CmH2m-1(OH)-，其中m≥1；以及γ為-COO。136.權利要求135的試劑盒，其中所述CB樣去污劑選自N-(羧甲基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.693-33-4)、椰油羧甲基甜菜堿和(CASNo.68424-94-2)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-9-十八烷-1-銨，內鹽(CASNo.871-37-4)、N-(羧甲基)-N，N-二甲基-3-((1-氧十八烷基)氨基)-1-丙銨，內鹽(CASNo.6179-44-8)、3-氨基-N(羧甲基)-N，N-二甲基-1-丙銨N-C8-C22酰基衍生物，內鹽(CASNo.84082-44-0)、N-(羧甲基)-3-((12-羥基-1-氧-9-十八烷基)氨基)-N，N-二甲基-1-丙銨，內鹽(CASNo.71850-81-2)、椰油酰胺丙基羧甲基甜菜堿(CASNo.61789-39-7和CASNo.61789-40-0)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.16527-85-8)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十三烷銨，內鹽(CASNo.132621-79-5)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.69725-38-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.42416-43-3)、N-(2-羧乙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.30612-73-8)、N-十二烷基-β-丙氨酸(CASNo.1462-54-0)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十一烷銨，內鹽(CASNo.150147-53-8)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.15163-30-1)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十四烷銨，內鹽(CASNo.146959-90-2)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十五烷銨，內鹽(CASNo.146959-91-3)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.71695-32-4)、N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CASNo.78195-27-4)、N-(4-羧丁基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.120139-51-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.76392-97-7)、N-(5-羧戊基)-N，N-二甲基-1-十六烷銨，內鹽(CASNo.73565-98-7)、N-(6-羧己基)-N，N-二甲基-1-十二烷銨，內鹽(CASNo.132621-80-8)、4-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-31-3)、2-羧基-N-十二烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-34-6)、4-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-33-5)、2-羧基-N-十六烷基-N，N-二甲基-苯甲烷銨，內鹽(CASNo.71695-35-7)、牛脂甘氨酸酯(CASNo.70750-46-8)、大豆酰胺丙基羧甲基甜菜堿，以及巴西棕櫚酰胺丙基羧甲基甜菜堿。137.權利要求136的試劑盒，其中所述羧基甜菜堿是N-(3-羧丙基)-N，N-二甲基-1-十八烷銨，內鹽(CB-18)(CASNo.78195-27-4)138.權利要求133的試劑盒，其中所述甜菜堿樣去污劑是SB樣去污劑。139.權利要求138的試劑盒，其中該SB樣去污劑選自SB-18、SB-16、SB-14和SB-12。140.權利要求139的試劑盒，其中該SB樣去污劑是SB-16。141.權利要求139的試劑盒，其中該SB樣去污劑是SB-18。142.權利要求132-141任一項的試劑盒，其中所述試劑盒含有不同甜菜堿樣去污劑的集合。143.權利要求132的試劑盒，其中所述抗生素選自β-內酰胺抗生素、氨基糖苷、氨基環醇、喹諾酮、四環素、大環內酯、林可酰胺、糖肽、脂肽、多肽抗生素、磺胺、甲氧芐啶、氯霉素、異煙肼、硝基咪唑、利福平、硝基呋喃、烏洛托品和莫匹羅星。全文摘要本發明涉及方法和組合物,其用于使用甜菜堿樣去污劑對含分枝菌酸結構的細菌進行敏感性試驗,以及使用相同去污劑誘導這類細菌的敏感性。文檔編號C12Q1/18GK1264430SQ98805996公開日2000年8月23日申請日期1998年5月1日優先權日1997年5月2日發明者C·G·索恩頓申請人:研究技術集成責任有限公司