專利名稱：：用芽孢桿菌屬菌株產生高光學純度l-乳酸的方法
技術領域：
：本發明涉及用某種芽孢桿菌屬菌株產生高光學純度L-乳酸的方法。更具體地說，本發明涉及以低的價格產生高光學純度L-乳酸的方法。本發明也涉及同時產生高光學純度L-乳酸和殺蟲毒素的方法。L-乳酸已用作產生聚乳酸(一種可生物降解的塑料)的起始物質。L-乳酸已在許多領域(包括食品和藥物、釀造、制革以及光學材料)得以應用。本發明的細菌產生的殺蟲毒素已引起人們的注意，因為它與習用的農業化學品不同，對人畜無害。當L-乳酸在產生聚乳酸中用作起始物質時，如Kulkarni等[Biodegradablepoly(lacticacid)polymersKukarni，R.k.，Moore，E.G.，Hegyeli，A.F.，andLeonard，F.，J.Biomed.Mater.Res.，5，169-181(1971)]和Ohara[Poly-L-lacticacidasbiodegradableplasticOhara，H.，Biosci.Indust.，52，642-644(1994)]所報道的，起始乳酸的光學純度越高，所產生的聚合物的結晶程度越高。高結晶度的聚乳酸適用于彈性薄膜和纖維。如Sato等，[PropertiesoftheferroelecticpolymerliquidcrystalscontainingachirallacticacidderivativegroupSato，K.，Eguchi，T.，Toshida，Y.，Yoshinaga，K.，andTakasu，Y.，Polymerpreprints，Japan，39，1962-1964(1990)]和Yoshinaga等[Propertiesoftheferroelectricpolymerliquidcrystalscontainingachirallacticacidderivativegroup(II)Yoshinaga，K.，Eguchi，T.，Sato，K.，Toshida，Y.，andTakasu，Y.，PolymerPreprints，Japan，39，1962-1964(1990)]所提及的高純度的乳酸可用作液態晶體。聯合國食品和農業組織(FAO)以及世界衛生組織(WHO)推薦的用于嬰兒喂養的乳酸是L-乳酸[FAOandWHOtoxicologicalevaluationofcertainfoodadditiveswith，areviewofgeneralprinciplesandofspecifications，p.23，WHO，Geneva(1974)]。因此，乳酸的L-異構體是有用的，并且需要高光學純度。L-乳酸通常用發酵方法產生，所述發酵方法包括(1)使用糞鏈球菌的方法[用濾器-床-型反應器產生乳酸；Ohara，H.，Hiyama，K.，andYoshida，T.，J.Ferment.Bioeng.76，73-75(1993)]；(2)使用瑞士乳芽孢桿菌的方法[在兩個系列恒化器中用瑞士乳芽孢桿菌從乳清連續產生乳酸Aeschlimann，A.，DiStasei，L.，andvonStockar，U.，EnzymeMicrobiol.Technol.，12，926-932]；(3)使用Lactobacillusamylovororus的方法[從豬waste-com發酵得到的一個新淀粉水解種；Nakamura，L.K.andCrowell，C.D.，Div.Ind.Microbiol.20，531-540(1979)]；(4)使用德彼利氏乳芽孢桿菌的方法[用固定化德彼利氏乳芽孢桿菌產生L-乳酸Stenroos，S.L.，Linko，Y.Y.，andLinko，P，Bacteriol.Lett.4，159-164(1982)]；和(5)使用Lactococcuslactis的方法[采用酶滅活方案的計算機模擬L-乳酸批量發酵Ishizaki，A.andKobayashi，G.，J.Ferment.Bioeng.70，139-140(1990)]。以上(1)到(5)是用乳酸菌產生L-乳酸的方法。這些乳酸菌是高度營養缺陷型的，如Boer等報道的[經懸浮和攪拌連續培養BacillusLaevolacticus產生D-乳酸Boer，J.P.de，Mattos，M.J.T.de，和NeijsselO.M.，Appl.Microbiol.Biotechnol.，34，149-153(190)]需要昂貴的培養基。昂貴的培養基增加了L-乳酸產品的價格。鑒于上述情況，人們報道了使用細菌而不是乳酸菌的方法。例如Tamada等描述了使用米根霉的方法[用γ射線誘導聚合制備的聚合物支持物經固定化米根霉細胞產生L(+)-乳酸Tamada，M.，Bagum，A.A.，andSadai，S.，J.Ferment.Bioeng.74379-383(1992)]。在這一方法中，培養時間長達40-50小時，導致低的生產效率。就乳酸的D-異構體而言，以上提到的參考資料(Appl.Microbiol.Biotechnol.，34149-153)中有用BacillusLaevolactis產生該異構體的報道。但這一方法不適于產生L-乳酸。JP-A-58-40093、JP-B-60-6200和USP5079164公開了用凝結芽孢桿菌產生L-乳酸的方法。然而，凝結芽孢桿菌與用于本發明的細菌相比，是高度營養缺陷型的，因此，需要昂貴的培養基。這種微生物產生的L-乳酸的光學純度也比本發明的菌株產生的要低(＜70％)。也未發現能產生殺蟲毒素的凝結芽孢桿菌。盡管在JP-A-3-27291中公開了用凝結芽孢桿菌的生產方法，但其中一點也未說明所產生的異構體的類型(L或D)和所產生的乳酸的光學純度。在JP-A-2-76592中，公開了用芽孢桿菌菌株產生乳酸的方法，但說明書中沒有公開用芽孢桿菌菌株實際產生乳酸。本發明的第一個目的是通過提供一種用屬于芽孢桿菌屬的特定菌株產生高光學純度的L-乳酸的方法來給出上述問題的一種解決辦法。本發明的第二個目的是提供一種使用某種芽孢桿菌屬的菌株同時產生高光學純度L-乳酸和殺蟲毒素，從而降低高純度L-乳酸總的生產價格的方法。本發明的第三個目的是提供一種用能夠以不低于95％的高光學純度產生L-乳酸的新芽孢桿菌菌株產生高光學純度L-乳酸的方法。本發明的第四個目的是提供一種能夠以不低于95％的高光學純度產生L-乳酸的新芽孢桿菌菌株。在本發明的第一實施方案中，經培養至少一種屬于芽孢桿菌屬的菌株產生了光學純度不低于70％的L-乳酸，所述的芽孢桿菌選自由炭疽芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、BacillusLentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌菌株組成的組。用于本實施方案的芽孢桿菌菌株能夠從可同化的碳源產生L-乳酸。在本發明的第二實施方案中，經培養至少一種菌株同時獲得了光學純度不低于70％的L-乳酸和一種殺蟲毒素，所述的菌株選自由蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌菌株組成的組。用于本實施方案的芽孢桿菌菌株能夠從可同化的碳源產生L-乳酸和一種殺蟲毒素。本發明的第三實施方案的特征是經培養能夠從可同化的碳源產生L-乳酸的Bacillussp.SHO-1(FERMBP-5682)菌株以低的生產價格產生了光學純度不低于95％的L-乳酸。本發明的第四實施方案是一種能夠以不低于95％的高光學純度產生L-乳酸的微生物學新芽孢桿菌菌株。以下將詳細描述本發明。用于本發明的第一實施方案中的菌株包括能產生光學純度不低于70％的L-乳酸的屬于炭疽芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌的菌株。通過使用上述芽孢桿菌屬的菌株，能夠產生光學純度不低于70％的L-乳酸。如Bergey′sManualofSystematicBacteriologyVol.2(1986)，P.H.A.Sneath(ed.)，williams&wilkins，P1113所述，在這些微生物中，炭疽芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌非常相近，以致細菌學區分這些種很困難。這三個種顯示出對卵黃卵磷脂酶反應陽性的共同特征。用于本發明的第二實施方案中的能同時產生高光學純度的L-乳酸和一種殺蟲毒素的芽孢桿菌屬的菌株包括蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌菌株。在本發明的第三實施方案中，用Bacillussp.SHO-1(FERMBP-5682)(一種芽孢桿菌屬新菌株)能夠產生不低于95％的高光學純度的L-乳酸。在以下第四實施方案中詳細描述了這一新菌株。在第四實施方案中，使用了Bacillussp.SHO-1(FERMBP-5682)菌株。這一菌株能以非常高的光學純度產生L-乳酸。這一菌株是發明人按以下方法從牛奶分離到的將牛奶樣品在BCP(溴甲酚紫)計數平板瓊脂(NissuiPharmaceutical，Co.，Ltd.)上制成條，然后將其置入BBLGasPak中，并于34℃培養24小時。在產酸的菌落周圍瓊脂平板的顏色由紫變黃。用接種環挑出顯示出顏色變化的菌落中的細菌，再在新鮮的BCP計數平板瓊脂上制成條。這一過程重復2-5次。將如此篩選出的菌落轉移到含2％葡萄糖、1％酵母提取物、1％蛋白胨和3.5％磷酸氫二鉀的10ml液體培養基中(用HCl調pH至7.0)，并于34℃下在GasPak中培養24小時。通過分析培養液體中包含的L-乳酸的光學純度并選擇以高光學純度產生L-乳酸的菌株，可以獲得目標菌株Bacillussp.SHO-1。按本說明書實施例中的方法進行液體培養基中L-乳酸的光學純度分析。所獲得細菌菌株基本上是純的。Bacillussp.SHO-1的細菌學性質如下(1)形態學形狀桿狀大小5μm長×2μm寬移動性+孢子形成+孢子囊無隆起形狀橢圓位置中間至亞端(2)生理學革蘭氏染色+過氧化氫酶活性+卵黃卵磷脂酶反應+吲哚產生-V.P.試驗+可同化的糖葡萄糖+麥芽糖+果糖+蔗糖-乳糖+棉籽糖-甘露糖醇-以上性質說明菌株SHO-1屬于芽孢桿菌屬。就以上所列性質來說，菌株SHO-1與已知的芽孢桿菌菌株沒有區別。然而，如實施例中所說明的，這一菌株具有以非常高的光學純度產生L-乳酸的能力。因此，因為菌株SHO-1在這一點上不同于任何已知的芽孢桿菌菌株，所以這一菌株被認為是屬于芽孢桿菌屬的一個新菌株。菌株Bacillussp.SHO-1已以保藏號BP-5682保藏在NationalInstituteofBioscienceandHuman-Technology，AgencyofIndustrialScienceandTechnology，MinistryofInternationalTradeandIndustry。菌株Bacillussp.SHO-1非常有用，這是因為與其它乳酸菌和凝結芽孢桿菌相比它是低營養缺陷型的，并且能在太昂貴的培養基中生長，從而使得能以低的價格產生高光學純度的L-乳酸。就碳源來說，只要是可同化的，任何糖均可用于本發明的第一和第二實施方案中。除了葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、乳糖、甘露糖醇外，也可以使用淀粉。用于第三實施方案中的優選的碳源包括葡萄糖、麥芽糖、果糖和乳糖。培養基中的糖濃度通常在2-15％(重量)范圍內。廉價的物質(例如，蛋白胨、干酪乳清、玉米漿和酵母提取物)也可以用作次要起始物質。培養基中這些次要物質的濃度通常為約0.1-2％(重量)，培養基中蛋白胨的濃度通常為約0.5-2％(重量)。培養基也可以含有無機鹽(例如，磷酸鉀和磷酸銨)、pH調節劑(例如，苛性蘇打、鹽酸和各種緩沖液)、鎂化合物、錳化合物等。細菌細胞通常用STR(攪拌罐反應器)經分批方法培養，但也可以用CSTR(連續罐反應器)經連續方法培養。細胞也可以固定在藻酸鈣、角叉菜膠或光凝結(photosetting)樹脂上，或者用膜型或電透析型反應器培養。例如，Coulman等(AppliedEnvironmentalMicrobiology，34，725-732(1977))、StieberandGerhardt(BiotechnologyandBioengineering，23，523-534(1981)和其它出版物描述了膜型反應器。MajorandBull(BiotechnologyandBioengineering，34，592-599(1989))和其它出版物描述了交叉流動型膜型反應器。盡管培養pH值和溫度取決于所使用的細胞，但本發明的第一、第二和第三實施方案中的培養pH值和溫度通常分別為6.0-8.0和25-40℃。最佳條件根據所使用的細胞確定。在本發明中，需氧培養是可能的，但厭氧培養是優選的。芽孢桿菌屬的細菌是需氧菌或兼性厭氧菌，通常在需氧條件下進行通氣等來培養。在這種需氧條件下，糖類(如葡萄糖)在三羧酸循環中經丙酮酸被代謝掉。在本發明中，通過在厭氧條件下培養芽孢桿菌屬的微生物可以以較高轉化率從丙酮酸獲得高光學純度L-乳酸。通過吹入二氧化碳氣體或惰性氣體(如，氮氣、氬氣)可以保持厭氧條件。任何習用的方法都可用于將所述細胞接種到培養基中。任何習用的方法也都可用于分離和純化所產生的L-乳酸和所形成的可同時獲得的殺蟲毒素。按照本發明的第一實施方案，L-乳酸可以以不低于70％的高光學純度產生，這是因為培養了能夠以不低于70％的光學純度從可同化的碳源產生L-乳酸的芽孢桿菌菌株，這些菌株屬于炭疽芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、BacillusLentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌。此外，因為這些芽孢桿菌屬的菌株與乳酸菌比較為低營養缺陷型的，可以在廉價的培養基中培養，所以L-乳酸可以以較低的價格產生。在本發明的第三實施方案中，L-乳酸可以以不低于95％的高光學純度產生，這是因為培養了能夠以不低于95％的光學純度從可同化的碳源產生L-乳酸的Bacillussp.SHO-1。此外，因為Bacillussp.SHO-1與乳酸菌和凝結芽孢桿菌比較為低營養缺陷型的，可以在廉價的培養基中培養，所以L-乳酸可以以較低的價格產生。此外，在本發明的第二實施方案中，培養也能產生殺蟲毒素的芽孢桿菌屬的菌株(例如，蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌)，能夠同時產生光學純度不低于70％的L-乳酸和一種殺蟲毒素，因而可以以較低的總價格產生L-乳酸。實施例此后通過下列實施例詳細地描述本發明。實施例1于34℃在BrainHeartInfusionMedium(BectonDickinson生產)中培養蠟狀芽孢桿菌JCM215210小時，產生種子培養物。取該種子培養物0.1ml接種到在兩只試管中的10ml液體培養基中。含有10g/l蛋白胨(NihonPharmaceutical生產的聚蛋白胨S)、20g/l葡萄糖和35g/l磷酸氫二鉀的液體培養基用1MHCl調pH7.0。各試管用可通過氣體的聚氧硅烷塞子塞上，如下所述，在一只試管中進行厭氧培養，在另一只試管中進行需氧培養。將試管置于BBKGasPak(BectonDickinson生產)中，并于34℃下靜置培養10小時。由于這一培養在GasPak中進行，其厭氧狀態的程度高于以下所述的振蕩培養。試管不置于BBKGasPak(BectonDickinson生產)中，于34℃和120rpm下振蕩培養10小時。培養后，按下述方法測定乳酸產量(g/l)、葡萄糖耗量(g/l)、轉化率(％)和光學純度(％)。〈乳酸產量和葡萄糖耗量〉乳酸產量和葡萄糖耗量分別基于發酵液中乳酸濃度(g/l)和葡萄糖耗量(g/l)，在以下所示的條件下用高效液相層析法(HPLC)測定。乳酸產量是所產生的L-和D-異構體的總量。HPLCLC-6A(ShimadzuCorpoation生產)檢測器示差折光儀(RID-6A，ShimadzuCorporation生產)柱Shim-packSCR-101H(ShimadzuCorporation生產)柱溫60℃洗脫液高氯酸的2.5mmol水溶液流速0.9ml/min[轉化率]用下列公式計算轉化率其中乳酸產量是所產生的L-和D-異構體的總量。[光學純度]用下列公式計算L-乳酸的光學純度光學純度(％)＝100×(L-D)/(L+D)其中L是L-乳酸濃度，D是D-乳酸的濃度。發酵液樣品經UF膜(UFPI，MILLIPORE)過濾，以除去分子量不低于5000的分子。濾液進行高效液相層析試驗，以測定發酵液中的L-和D-乳酸的濃度。HPLCLC-6A(ShimadzuCorporation生產)檢測器分光光度計(SPD-6AV，ShimadzuCorporation生產)柱CRS10W(MitsubishiChemical生產)柱溫30℃檢測長度254nm洗脫液2mMCuSO4流速0.5ml/min實施例2用蘇云金芽孢桿菌亞種kurustakiATCC33679代替蠟狀芽孢桿菌JCM2152(實施例1中使用的菌株)，用與實施例1相同的方法培養，并測定乳酸產量(g/l)、葡萄糖耗量(g/l)、轉化率(％)和光學純度(％)。比較實施例1用凝結芽孢桿菌JCM2257代替蠟狀芽孢桿菌JCM2152(實施例1中使用的菌株)，用與實施例1相同的方法培養，并測定乳酸產量(g/l)、葡萄糖耗量(g/l)、轉化率(％)和光學純度(％)。比較實施例2用枯草芽孢桿菌JCM1465代替蠟狀芽孢桿菌JCM2152(實施例1中使用的菌株)，用與實施例1相同的方法培養，并測定乳酸產量(g/l)、葡萄糖耗量(g/l)、轉化率(％)和光學純度(％)。表1顯示了實施例1和2以及比較實施例1和2的結果。表1用葡萄糖+蛋白胨培養基產生的乳酸及其化學純度如表1所示，使用蠟狀芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌時，L-乳酸以較高的轉化率和較高的光學純度產生，厭氧培養中也比需氧培養中獲得更高的轉化率和更高的光學純度。另一方面，當使用凝結芽孢桿菌時，即使是在需氧培養中，只產生較少量的乳酸，并且光學純度低于70％。在厭氧培養中無乳酸產生。當使用枯草芽孢桿菌菌株時，在厭氧和需氧條件下均產生乳酸，但其濃度和轉化率分別為0.1g/l，25.0％和3.7g/l，49.3％。這些水平不符合實際應用的需要。應當指出，除蛋白胨外，不需要別的非葡萄糖次要起始物質，這對乳酸菌而言幾乎是不可能的。換句話說，蠟狀芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌與乳酸菌和凝結芽孢桿菌比較是低營養缺陷型的，任何培養基，只要含有葡萄糖和蛋白胨就都可使用，說明它們可由廉價的培養基以較高的光學純度產生L-乳酸。實施例3在包含10g/l蛋白胨(NihonPharmaceutical生產的聚蛋白胨S)、5g/l磷酸銨、和100g/l葡萄糖的培養基中培養蘇云金芽孢桿菌亞種kurustakiATCC33679，用500ml恒溫箱(培養液的體積500ml)，30℃下以60rpm攪拌，用6M苛性蘇打維持pH7.0。在30℃的15小時培養中，以30ml/min通入氮氣來保持厭氧條件。發酵液中的乳酸濃度為98g/l，光學純度為99.5％。經離心(20000G，15分鐘)從這一發酵液收獲細胞，獲得30g細胞(濕重)，相差顯微鏡發現0.6×2μ梭狀晶體。用經150w超聲波破碎儀破碎10分鐘的細胞飼喂20只秋野暝幼蟲，七只幼蟲在1小時內死亡，10只在1-2小時內死亡，3只在2-5小時內死亡。簡單地說，當使用蘇云金芽孢桿菌時，以高轉化率和高光學純度獲得了L-乳酸，同時獲得了一種殺蟲毒素。這些結果說明，可以以較低的總價格產生L-乳酸。實施例4按下述方法分離Bacillussp.SHO-1。將牛奶在BCP計數平板瓊脂(NissuiPharmaceutical生產)上制成條，然后將其置入BBLGasPak中，并于34℃培養24小時。在生長的菌落中，產酸的一個菌落周圍瓊脂平板的顏色由紫變黃，這是由于其中包含的溴甲酚紫的顏色改變。用接種環挑出該菌落，再在新鮮的BCP計數平板瓊脂上制成條。這一過程重復5次。將如此篩選的菌落接種到含2％葡萄糖、1％酵母提取物、1％蛋白胨和3.5％磷酸氫二鉀的10ml液體培養基中(用1MHCl調pH至7.0)，并于34℃下在GasPak中培養24小時。分析所得培養液選擇以高光學純度產生L-乳酸的微生物菌株。如此便獲得了Bacillussp.SHO-1菌株。實施例5于34℃在BrainHeartInfusionMedium(BectonDickinson生產)中培養Bacillussp.SHO-110小時，產生種子培養物。取該種子培養物0.1ml接種到在兩只試管中的10ml液體培養基中。含有10g/l蛋白胨(NihonPharmaceutical生產的聚蛋白胨S)、20g/l葡萄糖和35g/l磷酸氫二鉀的液體培養基用1MHCl調pH7.0。各試管用可通過氣體的聚氧硅烷塞子塞上，如實施例1所述，在一只試管中進行厭氧培養。在另一只試管中進行需氧培養。比較實施例3用凝結芽孢桿菌JCM2257代替Bacillussp.SHO-1(實施例5中使用的菌株)，用與實施例5相同的方法培養，并測定乳酸產量(g/l)、葡萄糖耗量(g/l)、轉化率(％)和光學純度(％)。表2顯示了實施例5以及比較實施例3的結果。表2用葡萄糖+蛋白胨培養基產生的乳酸及其光學純度</tables>如表2所示，在實施例5中使用Bacillussp.SHO-1時，L-乳酸以較高的轉化率和較高的光學純度產生，厭氧培養中也比需氧培養中獲得更高的轉化率和更高的光學純度。另一方面，在比較實施例3中使用凝結芽孢桿菌時，即使是在需氧培養中，產生較少量的乳酸，并且光學純度低于70％。在厭氧培養中無乳酸產生。鑒于實施例5的結果，應當指出，除蛋白胨外，不需要別的非葡萄糖次要起始物質，這對乳酸菌幾乎是不可能的。換句話說，Bacillussp.SHO-1與乳酸菌和凝結芽孢桿菌比較是低營養缺陷型的，可使用任何培養基，說明它們可由廉價的培養基以較高的光學純度產生L-乳酸。實施例6在包含10g/l蛋白胨(NihonPharmaceutical生產的聚蛋白胨S)、5g/l磷酸銨、和100g/l葡萄糖的培養基中，用500ml恒溫箱(培養液的體積500ml)，30℃下以60rpm攪拌培養Bacillussp.SHO-1，用6M苛性蘇打維持pH7.0。在30℃的15小時培養中，以30ml/min通入氮氣來保持厭氧條件。發酵液中的乳酸濃度為97g/l，光學純度為99.9％。以上描述了本發明，明顯的是可以用許多方式變化本發明。這些變化并不脫離本發明的精神和范圍，所有這些對本領域技術人員顯而易見的修改應當包括在所附權利要求的范圍內。權利要求1.一種產生光學純度不低于70％的L-乳酸的方法，該方法包括下列步驟(1)培養能夠從可同化的碳源產生光學純度不低于70％的L-乳酸的芽孢桿菌屬的微生物；和(2)從培養液收集光學純度不低于70％的L-乳酸。2.按照權利要求1的方法，其中所說的芽孢桿菌屬的微生物選自由下列微生物組成的組炭疽芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢桿菌和球形芽孢桿菌。3.按照權利要求1的方法，其中所說的芽孢桿菌屬的微生物是Bacillussp.SHO-1(FERMBP-5682)。4.按照權利要求2的方法，其中所說的可同化的碳源是選自由葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、乳糖、甘露糖醇和淀粉組成的組的至少一種。5.按照權利要求3的方法，其中所說的可同化的碳源是選自由葡萄糖、麥芽糖、果糖和乳糖組成的組的至少一種。6.按照權利要求1的方法，其中的培養步驟(1)在厭氧條件下進行。7.一種同時產生光學純度不低于70％的L-乳酸和一種殺蟲毒素的方法，該方法包括下列步驟(1)培養能夠從可同化的碳源產生光學純度不低于70％的L-乳酸和一種殺蟲毒素的芽孢桿菌屬的微生物；和(2)從培養液收集光學純度不低于70％的L-乳酸和所說的殺蟲毒素。8.按照權利要求7的方法，其中所說的芽孢桿菌屬的微生物選自由下列微生物組成的組蘇云金芽孢桿菌、幼蟲芽孢桿菌、Bacilluslentimorbus、日本甲蟲芽孢菌和球形芽孢桿菌。9.按照權利要求7的方法，其中所說的可同化的碳源是選自由葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、果糖、乳糖、甘露糖醇的淀粉組成的組的至少一種。10.按照權利要求7的方法，其中的培養步驟(1)在厭氧條件下進行。11.能夠產生光學純度不低于95％的L-乳酸的微生物Bacillussp.SHO-1(FEREBP-5682)。全文摘要一種產生光學純度不低于70％的L-乳酸的方法，該方法包括下列步驟(1)培養能夠從可同化的碳源產生光學純度不低于70％的L-乳酸的芽孢桿菌屬的微生物；和(2)從培養液收集光學純度不低于70％的L-乳酸。文檔編號C12P7/40GK1155011SQ9612192公開日1997年7月23日申請日期1996年10月26日優先權日1995年10月27日發明者小原仁實,矢幡雅人申請人:株式會社島津制作所