專利名稱：深層發酵法生產的冬蟲夏草保健營養液的制作方法
技術領域：
本發明公開了一種深層發酵法生產的冬蟲夏草保健營養液，它屬于醫藥工業技術領域，也屬于保健食品技術領域，也屬于生物工程技術領域。本發明菌種在中國典型培養物保藏中心的保藏號為S—W229 CCTCC M94052。
冬蟲夏草是一種藥用真菌，屬子囊菌綱，麥角菌科，蟲草屬，蟲草菌[Cordycepssinensis(Berk)Sacc]，它是一種名貴中藥材，可與人參、鹿茸相媲美。是三大補品之一。冬蟲夏草具有藥用功效的最早文字記載是1757年(清乾隆二十二年)吳儀洛所撰寫的《本草從新》，它明確指出冬蟲夏草具有“保肺益腎，止血化痰已癆嗽”的功效。事實上，人們在生活實踐中將冬蟲夏草作為藥用藥材，要比文字記載早得多。藏族同胞早已用它入藥，稱之為“雅扎貢布”，直譯就是冬蟲夏草。
冬蟲夏草是滋補藥，這早已為人們所知，《本草綱目拾遺》、《文房肆考》中確有關于冬蟲夏草治虛損的記載。冬蟲夏草能作為滋補佳品，經我國多年研究證明，它含有18種氨基酸，其中包括人體必需的8種氨基酸，還含有人體造血所必需的維生素B12。這些成份既能治病，也能滋補身體。但是，冬蟲夏草真正能治病的有效成份，是經現代科學技術鑒定了的冬蟲夏草中所含的蟲草酸及蟲草素等成份，這些成份具有擴張氣管、鎮靜、抗多種細菌、降血壓的功效。據有關民間醫療資料冬蟲夏草多用于治療肺結核、老人畏寒、咳嗽、衰弱、貧血虛弱、遺精陽萎、自汗盜汗、腰膝酸痛、神經衰弱、病后久虛、咯血吐血、慢性腎炎等癥都獲得很好的效果。
在1960年代初曾有人報告蛹蟲[Cordyceps militaris(L.)Link]的菌絲體培養液中有一種代謝產物——冬蟲夏草素(Cordycepin)對小鼠艾氏腹水癌(EC)及人鼻咽癌細胞有抑制作用，1979年有人用天然冬蟲夏草的提取物對小鼠艾氏腹水癌進行了抗癌試驗，發現此提取物對EC有明顯的抑制作用。近年，不少人用冬蟲夏草的人工培養菌絲體提取物作抗癌作用研究，發現其具有一定的抗腫瘤作用。
由于冬蟲夏草具有多種醫療和滋補功能，近年來，人們對它的需求量越來越大，且已暢銷世界各地。鑒于野生冬蟲夏草分布在海撥3500～4000米的高山草甸的山坡上，生長周期長，加之近年來冬蟲夏草資源受到很大的破壞，造成野生冬蟲夏草資源嚴重短缺。據1941年日本國小林統計，冬蟲夏草全屬共137種，中國有26種，全屬中90％以上寄生于昆蟲。而這種鱗翅目昆蟲要求的生態環境苛刻，很難進行人工培養，因此，我國科學工作者從1960年代起，就開始進行人工發酵法培養冬蟲夏草的研究工作。有的采用把菌種接種到蝙蝠蛾幼蟲上；有的采用動物性蛋白朊作培養基的組份，且生產規模尚小，口服液的口感不理想。
本發明的目的是為克服冬蟲夏草寄生于鱗翅目昆蟲要求生態環境的苛刻，本發明擬提出一種人工培養方法，在投料、接種后經深層發酵之產物，其發酵液即可制成冬蟲夏草保健口服液，其菌絲體則能直接加工成高效滋補成品，且在生物工程生產中無廢物排泄出來，不污染環境。在培養基中，擬去掉動物性蛋白，用農副產品代替動物性蛋白。此外，制成的冬蟲夏草保健口服液應是氣味清香、口感好、包澤乳白的口服液。
為實現本發明目的所采取的技術措施是發酵法培養冬蟲夏草菌絲體工藝流程包括培養、提取、滅菌、封裝。(1)培養以植物性蛋白朊、黃豆芽汁、葡萄糖、淀粉、復合氨基酸配制成菌絲體菌種培養基的斜面培養，經兩次菌種搖瓶菌種種子培養，再經一級、二級菌種種子培養，然后在發酵罐作深層發酵培養，深層發酵完畢后實行放罐，液體和菌絲體可混作為保健營養液。(2)提取采用高速冷凍離心，離心速率14000rps/M，離心20分鐘，將發酵液進行過濾，分別收集冬蟲夏草菌絲體和濾液。(3)配制制劑3.1冬蟲夏草菌絲體粉劑對冬蟲夏草菌絲體減壓低溫干燥，然后粉碎，獲得粉劑。3.2菌絲體抽取物用包括乙醇的溶劑將活性物質腺嘌呤核苷、尿嘧啶等提取出來。3.3培養基的組成配方其配方為植物性蛋白朊占≥2到7％；黃豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；復合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余為水。口服保健營養液制劑裝入制劑并中經滅菌后即封閉而成產品。
與已有技術相比較，本發明已達到的技術效果本發明的冬蟲夏草保健營養液的感觀指標為乳白色液體，內含有乳白色珠狀菌絲球，呈微甜酸味，無異味，無臭味，無雜質。理化指標發酵罐發酵后離心分離出的上清液，它含腺嘌呤核苷10.09μg/ml，尿嘧啶1.5μg/ml。菌絲體含腺嘌呤核苷7.3μg/g，尿嘧啶3.5μg/g。離心后，上清液含氨基多糖0.47mg/ml，菌絲體含氨基多糖29mg/g。微生物指標細菌總數(個/ml)≤100；大腸菌群(個/100ml)＜3；致病菌，未檢出。質量指標還原糖≥10mg/ml；氨基酸＞100mg/100ml。理化檢驗、微生物檢驗按國家GB標準執行。質量標準中，還原糖按國家GB標準檢驗；氨基酸含量為按日立835—50型氨基酸系列分析儀測定的數據。
本發明的冬蟲夏草保健營養液，富含多糖、氨基酸，還含有人體造血所需的維生素B12。經測定，本發明的產品含有組成蛋白質成份的18種氨基酸。其中，人體不能自身合成的8種必需的氨基酸含量較高，特別是與兒童智力及體格發育有關的平時被稱為“半必需”的精氨酸及組氨酸，其含量也很高。氨基多糖作為增強免疫能力的物質是為試驗所證明了的。本發明的營養液含有的多糖中就具有氨基多糖，它是一種理想的溫性緩補劑。
本發明的冬蟲夏草保健營養液經“食品安全性毒理學試驗”急性毒性試驗屬無毒級；三項致突變試驗均為陰性，表明該受試物無明顯遺傳毒性。經“骨髓微核試驗”，與對照組結果一致為陰性，與陽性對照組比較，差異極顯著(P＜0.01)。經“沙門氏菌/微粒體測試致突變試驗”，評價方法為自發回變數超過1倍以上為陽性，測試結果本受試物菌落回變數與陰性對照組比較未超過1倍，結果為陰性。“精子畸形試驗”結果與陰性對照組比較，結果基本一致。
下面結合實施例，對本發明的技術方案作進一步說明菌種斜面培養基以植物蛋白朊、葡萄糖、淀粉配成斜面培養基。將與保藏于中國典型培養物保藏中心保藏的一樣的冬蟲夏草菌體進行斜面菌種培養，然后經500ml和5000ml三角瓶內兩次該菌絲體培養，再經1001、5001一級、二級種子罐內，兩次該菌絲體種子培養，接著在5噸發酵罐內發酵培養該菌絲體，經在25—30℃、PH值自然發酵4～6天，發酵完畢后，放罐，過濾，分別收集過濾液和菌絲體，制成保健營養液，經滅菌、封裝而成產品。
權利要求
1.保藏號為S—W229 CCTCC M94052的深層發酵法的冬蟲夏草菌種，其特征在于它屬于囊菌綱，麥角菌科，冬蟲夏草屬，冬蟲夏草菌，其拉丁名為Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc。
2.一種深層發酵法生產的冬蟲夏草保健營養液，其特征在于本發明的工藝流程包括培養、提取、滅菌、封裝，先用斜面培養基對菌絲體斜面培養，經兩次菌種搖瓶菌種種子培養，再經一級、二級菌種罐種子培養，然后在發酵罐中作深層發酵培養，發酵完畢后，進行過濾、提取，分別收集冬蟲夏草菌絲體和濾液，經滅菌、封裝而成產品。
3.按權利要求2所述的冬蟲夏草保健營養液，其特征在于菌絲體培養的溫度為≥25到30℃；培養時間為≥4到6天。
4.按權利要求2或3所述的冬蟲夏草保健營養液，其特征在于本發明的培養基的配方為植物性蛋白朊占≥2到7％；黃豆芽汁液占≥0.5到1.2％；淀粉占≥4到6％；葡萄糖占≥4到6％；復合氨基酸占≥0.1到0.3％；其余為水。
5.按權利要求2所述的冬蟲夏草保健營養液，其特征在于a.冷凍離心過濾的離心轉速為14000rps/分，離心時間20分鐘；b.分離出的冬蟲夏草菌絲體，減壓低溫干燥，粉碎后得冬蟲夏草菌絲體粉劑；c.菌絲體抽取物，用包括乙醇的溶劑將腺嘌呤核苷和尿嘧啶活性物質抽取；d.發酵完畢后放罐出的液體和菌絲體混制成保健營養液。
全文摘要
本發明涉及了一種經國家典型培養物保藏中心保藏菌種的深層發酵法生產的冬蟲夏草保健營養液，它的工藝流程包括培養、提取、滅菌、封裝；冬蟲夏草菌絲體經斜面培養，經兩次菌種搖瓶菌種培養，再經一級、二級菌種罐培養，然后在發酵罐中作深層發酵培養，完畢后進行過濾、提取，分別收集過濾液和菌絲體，制成冬蟲夏草保健營養液，滅菌、封裝成產品。它是滋補佳品，含有18種氨基酸，包括人體必需的8種氨基酸。
文檔編號C12N1/14GK1164571SQ9611970
公開日1997年11月12日 申請日期1996年12月13日 優先權日1996年12月13日
發明者張世偉 申請人:張世偉