專利名稱：一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發酵工藝的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種Bt菌液體深層發酵工藝，屬生物技術領域。Bt菌屬于一種微生物，國內外已廣泛用于農作物及林、果、蔬菜和倉庫害蟲的防治。提高發酵水平，降低生產成本是進一步推廣應用的關鍵。目前發達國家采用的工藝，發酵液效價可達到3000IU/mg (見國外生防P185)。我國八·五攻關取得重大進展，發酵水平已能達到2000-3000IU/mg(見國家八·五攻關總結)，但波動范圍過大，毒力不穩定。
本發明的目的是要提供一種Bt液體深層發酵工藝，采用本工藝，可顯著提高發酵液毒力效價，選用優良菌種發酵，發酵毒力效價可達到4500-5000IU(PX)/mg；發酵液毒力效價波動范圍控制在20％以內；縮短發酵周期，有效地抗噬菌體干擾。
本發明的目的是這樣實現的。用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、氯化鉀、豆油或其它消泡劑配制發酵培養基，經高溫蒸汽消毒后降溫至35℃接種，變溫變風量攪拌通氣發酵28-35小時，80％芽孢與伴孢晶體分離，90％以上芽孢成熟為發酵終點。發酵液經毒力檢測后按行業標準要求，調配加工成粉劑或液劑。
下面結合實例對本發明作進一步說明。
1、配料魚粉100-150kg，酵母粉60-70kg，玉米粉280-350kg，豆餅粉50-80kg，加水7600kg，調PH至7.5，加入0.3％碳酸鈣，0.1％氯化鉀，0.15％豆油，打入12立方米發酵罐，夾層或列管通蒸汽預熱至80℃后，罐內直接通入蒸汽，維持0.15mPa攪拌消毒40分鐘。
2、冷卻至35℃接種，通氣攪拌發酵。發酵采用變溫、變風量發酵，溫度變化過程是0-5小時 34±1℃5-8小時 31±1℃8-13小時28±1℃13-15小時 32±1℃15小時后34±1℃根據各項參數確定最大通氣量為245立方米/小時，根據最大通氣量確定風量變化過程是0-2小時80立方米/小時2-5小時120立方米/小時5-7小時150立方米/小時7-9小時220立方米/小時9小時以后 245立方米/小時發酵28-29小時取樣鏡檢，80％芽孢與伴孢晶體分離，90％芽孢分化成熟，停止發酵，泵入后加工處理車間。
3、加入3％二甲苯，0.3％農孔-600，充分攪拌后取樣生測，經生測毒力效價為4800IU(PX)/mg，加入2120kg自來水，充分攪拌后混勻，配制成4000IU(PX)/mg藥液，再進行其它后處理，裝瓶，即得毒力效價為4000IU(PX)/mg乳劑成品。
權利要求
1.一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發酵工藝，包括配料、消毒、冷卻、接種，發酵及風量和溫度控制，生測步驟。其特征在于采用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、氯化鉀作為基本原料按比例配制培養基；在發酵過程中采用變風量、變溫條件。
2.根據權利要求1所述的Bt液體深層發酵工藝，其特征是用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、氯化鉀按以下要求配制發酵培養基。(1)總固形物含量為4-9.5％(2)飼料酵母用量∶豆餅粉用量∶玉米粉用量∶魚粉用量＝1.0∶1.0-1.8∶4.0-6.0∶3.0-5.0(3)培養基中碳酸鈣含量為0.2-0.3％，氯化鉀含量為0.05-0.1％(4)碳氮比為3.5-6.5∶1.0
3.根據權利要求1所述的Bt液體深層發酵工藝，其特征是采用變溫發酵，溫度與發酵時間的對應關系是0-4±1小時 34±1℃4±1-8±2小時31±1℃8±2-13±2小時 28±1℃13±2小時-15±1小時 32±1℃15±1小時34±1℃
4.根據權利要求1所述Bt液體深層發酵工藝，其特征是采用變風量發酵。發酵前要根據各項參數確定最大通氣量Vgz，最大通氣量Vgz的計算公式是0.00531Vgz＝πR2H＋πR2L－Vm＋VF＋0.667β(1＋P)[VT－R2π(H＋L)]式中，R發酵罐半徑(米)Vgz最大通氣量(立方米/小時)Vm.培養基體積(立方米)VF下封頭體積(立方米)P發酵罐內壓(公斤/平方厘米)VT消沫器以下發酵罐體積，如無消沫器，則為罐全體積(立方米)H上檔攪拌器園盤距罐筒體下邊緣垂直距離(米)β泡沫密度系數(噸/立方米)，與消沫劑性質及用量和培養基性質相關。風量與發酵時間的對應關系是0-2±1小時 1/3Vgz2±1-4±1小時1/2Vgz4±1-7±1小時3/5Vgz7±1-9±1小時8/9Vgz9±1小時后 1Vgz
全文摘要
本發明屬于生物技術領域。一種蘇云金桿菌(Bt)液體深層發酵工藝。該工藝采用飼料酵母、豆餅粉、玉米粉、魚粉、CaCO、KCl制備發酵培養基，變溫變風量通氣攪拌發酵，發酵液毒力可達到4500-5000IU(PX)/mg，采用本工藝發酵，降壓生產成本，穩定產品質量，縮小發酵液毒力效價波動范圍，縮短發酵時間，有效排除噬菌體干擾。
文檔編號C12N1/20GK1133884SQ9610078
公開日1996年10月23日 申請日期1996年2月8日 優先權日1996年2月8日
發明者王成球, 朱珠, 蘭家谷, 呂玉平 申請人:王成球