專利名稱:一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料的制作方法
技術領域：
本發明屬于一種飼料，涉及一種新型的功能性實驗動物配合飼料，具體涉及一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料。
背景技術：
原代培養的魚類腸道粘膜細胞、肝臟細胞作為一個實驗材料(平臺)在基礎理論研究、新型藥物篩選、新型飼料添加劑研究等眾多研究領域得到廣泛性的使用，與活體動物(魚類)相比較，具有研究周期短、實驗條件容易控制、可以實現批量性的規模性實驗、實驗結果重復性好等優點，且使用原代培養細胞較使用細胞系進行實驗的技術難度降低、實驗成本降低，也更接近于魚體自身生理條件。
原代腸道粘膜細胞、肝臟細胞的來源是直接從實驗魚的腸道粘膜、肝胰臟進行分離后、進行增殖培養，用于提供細胞分離實驗的材料魚一般來自于養殖池塘、或可控環境條·件下養殖的魚類。因此，實驗魚的健康狀態、尤其是腸道和干胰臟的生理健康狀態就尤為重要，在實際養殖條件下，飼料物質、環境條件等多種因素可能影響到實驗材料魚的腸道、肝胰臟的生理健康狀態，例如飼料脂肪氧化產物、飼料霉菌毒素、重金屬等可能引腸道粘膜、肝胰臟的細胞損傷，起進而影響到分離的腸道粘膜細胞、肝細胞的質量和細胞的生理狀態；同時，實驗研究的可重復性也要求不同實驗批次的實驗材料魚的條件要基本一致。這就要求對提供腸道粘膜細胞、肝細胞分離的實驗材料魚需要經過一段時間的強化飼養①對可能有的腸道粘膜、肝胰臟損傷進行適度的修復；②對腸道粘膜、肝胰臟生理功能進行適度的強化作用，調整分離細胞的生理狀態；③對不同生理健康狀態的實驗魚進行同一條件下的強化培育，達到相近的生理狀態。
實驗魚從養殖場的池塘購買運到實驗室，會有較大程度的應激反應，同時，由于生產性配合飼料的安全性一般不高、養殖池塘的環境條件較差，魚體生理健康狀態一般不是很理想，部分魚體的腸道粘膜、肝胰臟有一定程度的損傷。這些狀況的存在需要對實驗魚進行一定時期的強化培育，對腸道粘膜、肝胰臟的損傷進行快速修復，對魚體整理生理健康進行快速修復和強化。
實驗材料魚的強化培育除了水域環境條件如水溫、溶解氧、酸堿度等環境因素外，重要的是飼料。飼料是養殖魚類的主要營養物質、能量物質的來源。強化培育實驗材料魚的飼料需要專用的功能性的新型飼料，主要條件是在保障實驗魚正常營養需要、營養平衡的基礎上，能夠對腸道粘膜、肝胰臟損傷進行有效修復，對腸道粘膜細胞、肝胰臟的細胞生理和功能作用進行強化培育，同時，由于動物具有生理性的腸道-肝臟生理軸，也需要對腸-肝軸進行適當的生理功能性強化調理。
但是現有技術中的配合飼料無法同時滿足上述需求，例如公開號為CN101731474 A200910264707. 2的中國發明專利申請公布說明書公開了一種驅蟲保健型草魚飼料，包括魚粉、豆柏、菜柏、棉柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣，還包括南瓜籽、沸石粉、膨潤土、DL-肉堿；并且，以重量百分比計，上述成分的配比為魚粉2 6%，南瓜籽3 8%，豆柏6 8%,菜柏15 30%，棉柏10 30%，小麥10 20%，米糠5 12%，磷酸二氫鈣I. 5 2%，沸石粉I. 5 2%，膨潤土 I 2%，DL-肉堿O. 02%。采用本發明的飼料，可提高草魚對飼料的利用率，從而提高了養殖效益，有效防止了草魚脂肪肝的形成，有效防止了絳蟲在草魚腸道的寄生。
因此，需要配制一種配合飼料能夠強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能。
發明內容
本發明目的是提供一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料。
為達到上述目的，本發明采用的技術方案是一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料，包括魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、米糠柏、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、DL肉毒堿、豆油，還包括維生素和礦物質預混料、熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養物；其中，所述魚粉為秘魯魚粉；所述維生素和礦物質預混料中；其中，按照質量百分比，上述成分的配比為
秘魯魚粉10 15% ;豆柏10 15% ;菜籽柏10 18% ;棉籽柏10 16% ;小麥15 20. 73% ;米糠8 10% ;米糠柏4 6% ;磷酸二氫鈣I. 8 2% ;沸石粉I. 5 2% ;膨潤土 I. 5 2%，豆油2 3% ;維生素和礦物質預混料1% ;熊脫氧膽酸O. 005 O. 010% ;牛磺酸O. 005 O. 010% ;谷氨酰胺O. I O. 2% ；DL肉毒堿O. 100 O. 150% ;酵母培養物O. 500 O. 650%。
上述配合飼料的制備方法包括以下步驟
I)將所有的飼料原料粉碎到60目以上；
2)秘魯魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、維生素和礦物質預混料先使用混合機混合均勻，得到混合物A ；
3)熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、肉毒堿、酵母培養物先與米糠柏混合均勻，再與步驟2)所得混合物A進行混合；最后加入豆油進行混合；
4)混合均勻后使用飼料制粒機加工成直徑I. 5mm或2. 0mm、或2. 5mm不同規格的
顆粒，顆粒的直徑與長度比保持在I : 2左右；冷卻、風干，雙層塑料袋封口包裝，4°C保存備用。
上述配合飼料的使用方法包括以下步驟
I)實驗材料魚一般養殖在可以控制溫度、可增氧的室內循環養殖系統中，水溫可以保持在24 28°C、溶解氧4 7mg/L，所述養殖系統在使用之前7天進行常規消毒；實驗魚進入養殖系統之前要進行常規的消毒處理；
2)飼料投喂采用人工投喂的方法，每天按照魚體體重的2 4%的重量稱取強化飼料，分早、中、晚三次進行投喂，投喂量根據實驗魚的攝食情況進行適當調整，以在30min內全部攝食完投喂的飼料為準進行飽食投喂；
一般使用本發明所述飼料2 3周就可以達到實驗魚分離腸道粘膜細胞、肝細胞的要求。
上述配合飼料的使用效果評價方法包括以下步驟
使用本發明飼料養殖2 3周后，對實驗魚的生理健康狀態進行鑒定常規觀察魚體活動能力、體表顏色、體表粘液等項目；解剖觀察腸道粘膜、肝胰臟的形態、色澤、組織形態的完整性；測定血清中轉氨酶活力、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、低密度脂蛋白、球蛋白、D乳酸、二胺氧化酶活力、細菌總數等指標，確定肝胰臟、腸道通透性和魚體血液內環境穩定性等健康指標。
由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點
I、本發明的配合飼料在考慮營養的基礎上，還組合了適宜作用劑量的以下成分促進腸道粘膜細胞生長、損傷修復的因子-谷氨酰胺、酵母培養物；有利于腸道有益微生物生長和微生態平衡的因子酵母培養物；有利于干胰臟脂肪代謝、保護干胰臟生理功能的因子DL肉毒堿、牛磺酸；有利于生理性腸道-干胰臟軸膽汁循環的因子熊脫氧膽酸、牛磺酸。利用這種飼料養殖的實驗材料魚，作為腸道粘膜細胞、肝臟細胞的分離和原代培養的實驗材料魚，可以獲得健康的腸道粘膜細胞和健康的肝臟細胞，且實驗材料魚的生理條件保持一致，腸道粘膜細胞、肝臟細胞分離與原代培養實驗的重復性很好。 2、本發明的配合飼料營養平衡性好、含有功能性生理調節物質實驗魚從養殖場的池塘購買運到實驗室，會有較大程度的應激反應，同時，由于生產性配合飼料的安全性一般不高、養殖池塘的環境條件較差，魚體生理健康狀態一般不是很理想，部分魚體的腸道粘膜、肝胰臟有一定程度的損傷。采用本發明的配合飼料克服上述困難，對實驗魚進行一定時期的強化培育，對腸道粘膜、肝胰臟的損傷進行快速修復，對魚體整理生理健康進行快速修復和強化，從而得到理想的實驗材料魚。
3、采用本發明的配合飼料可以使實驗魚的腸道粘膜細胞生長狀態良好，由于本發明飼料中的牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養物有利于腸道粘膜細胞的生長、損傷修復，同時促進腸道有益微生物的生長。使用本發明飼料可以對損傷的腸道組織結構、生理性功能進行有效的、快速的修復，并腸道粘膜細胞具有特殊的增強作用。
4、養殖魚類容易出現脂肪性肝胰臟疾病，同時，由于現有的飼料配方中營養素的評合格問題、油脂氧化產物、霉菌毒素等容易導致肝胰臟器質性損傷，所以，對來源于實際養殖池塘的魚類都會存在一定的肝胰臟生理健康問題。由于本發明組合了合適劑量的對肝胰臟損傷修復、對脂肪肝治療有效的因子牛磺酸、熊脫氧膽酸、DL肉毒堿，因此，能夠對肝胰臟損傷進行有效修復，對肝胰臟的細胞生理和功能作用進行強化培育。
圖I為原代培養20h的草魚腸道粘膜細胞(X 100)；
圖2為原代培養192h的草魚肝細胞(X 200)。
具體實施方式
下面結合附圖和實施例對本發明作進一步描述
實施例一
I)按照質量比，取進口魚粉14. 74% ;豆柏10% ;菜籽柏18% ;棉籽柏16% ;小麥20% ；米糠8% ;米糠柏4% ;磷酸二氫鈣2% ;沸石粉2% ;膨潤土 I. 5%，豆油2% ;維生素和礦物質預混料1% ;熊脫氧膽酸O. 005% ;牛磺酸O. 005% ;谷氨酰胺O. 1% ；DL肉毒堿O. 150% ;酵母培養物O. 500%。將所有的飼料原料粉碎到60目以上；
2)魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、維生素和礦物質預混料先使用混合機混合均勻，得到混合物A ；
上述技術方案中，所述秘魯魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、維生素和礦物質預混料均為常規飼料原料，可以在國內飼料原料貿易商或加工工廠購得，其中，所述維生素包括VA，VD3，VK3 VE, VB1,VB2，VB6，VB12，VC，泛酸鈣，煙酸，葉酸和肌醇，所述礦物質包括銅Cu，錳Mn，鋅Zn，碘I，硒Se，鈷Co，美Mg，鉀K共8種元素。
3)熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、肉毒堿、酵母培養物先與米糠柏混合均勻，再與步驟2)所得混合物A進行混合；最后加入豆油進行混合；
上述技術方案中，所述熊脫氧膽酸、牛磺酸為醫藥原料；所述谷氨酰胺為生化產品；肉毒堿購自北京桑普生化技術有限公司，酵母培養物購自美 國達農威深圳公司，先與米糠柏為飼料原料。
4)混合均勻后使用飼料制粒機加工成直徑I. 5mm或2. 0mm、或2. 5mm不同規格的
顆粒，顆粒的直徑與長度比保持在I : 2左右；冷卻、風干，雙層塑料袋封口包裝，4°C保存備用。
5)將實驗材料魚(草魚、鯽魚、團頭魴)養殖在可以控制溫度、可增氧的室內循環養殖系統中，水溫可以保持在24 28°C、溶解氧4 7mg/L,所述養殖系統在使用之前7天進行常規消毒；實驗魚進入養殖系統之前要進行常規的消毒處理；
6)飼料投喂采用人工投喂的方法，每天按照魚體體重的2 4%的重量稱取強化飼料，分早、中、晚三次進行投喂，投喂量根據實驗魚的攝食情況進行適當調整，以在30min內全部攝食完投喂的飼料為準進行飽食投喂；
7)使用上述飼料2周后實驗魚血清檢測指標的變化，比較試驗前后血清指標的變化，結果顯示均達到實驗材料魚的要求，顯示出本發明飼料良好的對魚體健康、對腸道粘膜和肝胰臟具有良好的強化、修復功能作用，具體數據參加下表
表I實驗魚(草魚)各項指數試驗前后的變化
_期I試驗前I試驗后
缽璗 g..'g120 115 120 118 | 119
總膽紅-素 UinolfL_ 9.2 TJ 0.9 0.9 ] 1.2
天門冬氨_氨暴_移_ DL412 141 134 IJg | 145
兩基轉移150 Ti 65 55 μ 5
_性__ r/L_ 146 59_ TE_ It j 75
谷氨S胺轉移SI I L3_ I_ I_ I 卜―
凰 mtrol/L _ SJ_ 18.2 9_ TM_JjJ_
oiittol/Ll_ S-I 2.7 1.7 1.5 13.P
顧圖疇 pibioI/L_ 4.09 481 4.02 3.33 j 3.62
甘油三_ wwol/L__3.9 7.5__SJ_ 2.4 ] 4.4 —
蠤備度—蛋白 P 腿ol/L__1.72 I.l 1.63 I.i l j 0-89
.....nimol/L.............................................................................................I0.fi.......................[￠:31 1...0:0 [0:4.......................—...
表2實驗魚(團頭魴)各項指數試驗前后的變化
權利要求
1. 一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料，其特征在于，由魚粉、豆柏、菜籽柏、棉籽柏、小麥、米糠、米糠柏、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、DL肉毒堿、豆油，維生素和礦物質預混料、熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養物構成；所述魚粉為秘魯魚粉；其中，按照質量百分比，上述成分的配比為 秘魯魚粉10 15% ;豆柏10 15% ;菜籽柏10 18% ;棉籽柏10 16% ;小麥15 ·20. 73% ;米糠8 10% ;米糠柏4 6% ;磷酸二氫鈣I. 8 2% ;沸石粉I. 5 2% ;膨潤土·I.5 2%，豆油2 3% ;維生素和礦物質預混料1% ;熊脫氧膽酸0. 005 0. 010% ;牛磺酸·0.005 0. 010% ;谷氨酰胺0. I 0. 2% ；DL肉毒堿0. 100 0. 150% ;酵母培養物0. 500 ·0.650%。
專利摘要
本發明屬于一種飼料，具體涉及一種強化魚類腸道粘膜和肝胰臟細胞生理功能的配合飼料，包括魚粉、豆粕、菜籽粕、棉籽粕、小麥、米糠、米糠粕、磷酸二氫鈣、沸石粉、膨潤土、DL肉毒堿、豆油，還包括維生素和礦物質預混料、熊脫氧膽酸、牛磺酸、谷氨酰胺、酵母培養物。利用這種飼料養殖的實驗材料魚，作為腸道粘膜細胞、肝臟細胞的分離和原代培養的實驗材料魚，可以獲得健康的腸道粘膜細胞和健康的肝臟細胞，且實驗材料魚的生理條件保持一致，腸道粘膜細胞、肝臟細胞分離與原代培養實驗的重復性很好。
文檔編號A23K1/18GKCN102067955 B發布類型授權 專利申請號CN 201010585756
公開日2012年12月5日 申請日期2010年12月13日
發明者葉元土, 蔡春芳, 張寶彤, 姚仕彬, 秦杰 申請人:蘇州大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan