脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明涉及基因檢測領域，具體涉及一種脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針及試劑盒。所述試劑盒包括脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針，所述引物包括9對引物，所述探針包括15條探針；本發明的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針及試劑盒利用熒光定量PCR技術，增加現有專利技術中所沒有的常見突變位點的檢測，實現一次性特異的檢測16種由于SMN基因缺失、轉換與點突變導致的SMA患者并實現對SMA患者的分型。
【專利說明】脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針及試劑盒
【技術領域】
[0001] 本發明涉及基因檢測領域，具體涉及一種脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引 物和探針及試劑盒。
【背景技術】
[0002] 脊髓性肌萎縮癥（spinal muscular atrophy，SM)是一種較常見的遺傳性疾病， 兒童起病的SM呈常染色體隱性遺傳。攜帶者發生率為1/35-1/80,最近報道中國人群SM 致病基因的攜帶者頻率為1/42,群體發病率為1/5000-1/10000活產嬰兒，居兒童致死性常 染色體遺傳病的第二位，僅次于囊性纖維變性。脊髓性肌萎縮癥國際協會根據SM患者的 發病年齡和臨床表現分為4型：1型（嚴重型）、11型（中間型）JII型（輕型）和IV型（成 人型）。
[0003] 目前，臨床上常用于輔助脊髓性肌萎縮癥檢測的方法主要有肌電圖、肌肉活檢組 織化學染色及血清肌酸磷酸激酶（CPK)檢測。但SM的臨床變異性大，肌電圖在兒童患者 不易配合檢查，肌肉活檢為有創性檢查，令家長難以接受，且需冰凍切片組化染色的條件， 更難以在臨床上廣泛開展，即使可以推行，肌電圖和肌肉活檢亦均缺乏特異性，因此本病 極易誤診。為了能夠更準確地對患者進行確診，以防止重癥患者的出生，就需要對患者的 基因型進行檢測。發展至今，在國內外用于SM基因診斷的主要方法有：①連鎖分析；② 聚合酶鏈反應單鏈構象多態性（PCR-SSCP)技術；③錯配聚合酶鏈反應一限制性片段長度 多態性（PCR-RFLP)分析；④變性高效液相分析技術（DHPLC);⑤多重連接探針依賴性擴 增技術（MLPA)⑥實時熒光定量PCR(Real-time PCR)技術；⑦高分辨率溶解曲線（Hight Resolution Melting Analysis，HRMA);⑧數字 PCR 技術（Digital PCR)。現有產品及專利 見表1。
[0004] 表 1
[0005]
【權利要求】
1. 脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針，其特征在于，所述引物包括9對 引物，所述探針包括15條探針； 所述9對引物為：
2. 根據權利要求1所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的引物和探針，其特征在 于，所述15條探針的5'端和3'端分別設有熒光基團和熒光淬滅基團，具體如下：
3. 脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括PCR反 應液，所述PCR反應液中包含權利要求1-2任一項所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢 測的引物和探針。
4. 根據權利要求3所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測的試劑盒，其特征在于， 所述PCR反應液包括如下含量的各組分：
【文檔編號】C12N15/11GK104480206SQ201410767333
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月12日 優先權日:2014年12月12日
【發明者】劉晶晶, 李長遠, 向筑 申請人:亞能生物技術（深圳）有限公司