一種稠李提取物的制備方法及在降血脂藥品及保健品中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于醫藥【技術領域】，主要公開了稠李提取物的制備方法及在藥品和保健品中的新用途。經實驗研究表明：稠李提取物對高脂飲食誘導的高血脂小鼠具有明顯的降血脂作用。因此，可以使用該提取物制備降血脂藥物、保健品、食品添加劑或復方制劑等。其藥品或保健品可以是現有的任何劑型，如片劑，膠囊劑，粉針劑，注射劑，丸劑，軟膠囊，顆粒劑和貼劑等。
【專利說明】-種稠李提取物的制備方法及在降血脂藥品及保健品中的 應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種稠李提取物的制備及在醫藥和保健品中的新用途；屬于中藥提取 物的新生物活性的醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 稠李屬植物在我國種類繁多，為多年生喬木，在我國廣泛種植，因耐寒耐陰在東北 地區成長密集。主要包括山桃稠李左ii)，星毛稠李Zwergeriafla),稠 李CPaofe racefflosa)，褐毛稠李以及紫葉稠李Firgifliaaa) 等。因該屬植物整體美觀，在我國是一種重要的觀賞物種。其中山桃稠李，稠李和紫葉稠李 為薔薇科李屬植物，在東北分布較廣。
[0003] 研究表明：稠李屬植物的葉子可以用于制作產品(稠李葉茶及其制備方法，專 利，ZL. 200610010198. 7)，花因含有大量的苯甲醛可以做防腐用料(趙秋雁，稠李 Linn.揮發油化學組成分析，《植物研究》，2003)，此外，稠李含有的豐富黃酮類成分 (何映霞，紫葉稠李葉片中黃酮的提取工藝優化《北方園藝》，2013年）和花色苷類成分(辛 越，稠李屬三種果實花色苷抗氧化活性研究，東北林業大學碩士論文，2013年)。上述文獻報 道了稠李的抗氧化和對IfepG2的細胞毒活性(冷梅，紫葉稠李果實花色苷的抗氧化活性，食 品科學，2013年；辛越，稠李屬三種果實花色苷對H印G2細胞的增殖抑制作用比較，食品工 業科技，2013年）。
[0004] 到目前為止關于稠李的提取物制備方法未見文獻報道，且未有關該提取物在降血 脂方面的研究報道。本發明創新性的提出了稠李提取物的制備方法及在降血脂方面的新用 途。
【發明內容】
[0005] 本發明提供了一種稠李提取物的制備方法及在降血脂的藥物或保健品及食品添 加劑的應用。
[0006] -種稠李提取物的制備方法，通過如下步驟獲得：干燥的稠李樣品，粉碎過20目 篩，經適當的溶劑和提取方法，得到提取液，減壓濃縮至干；用水混懸至無沉淀，上大孔樹脂 吸附柱色譜，依次用水和70%以上的乙醇進行洗脫，收集醇洗脫部分，即得稠李提取物。
[0007] 前述的稠李,選自山桃稠李OcWw1S 稠李(/Ww 1S racefflosa )或紫葉稠 李的任何一種；提取部位選自其果實，莖葉或花等任一部位，其優選果 實。提取方法選自浸泡提取、回流提取、超聲提取、逆流提取、超臨界萃取等的任何一種；提 取溶劑選自水，甲醇，乙醇任何一種及不同比例混合物；用于樣品后續純化處理的大孔吸附 柱色譜，包括藥學上能夠接受的，可以用于分離的多種常規樹脂，選自D101，NKA12或ADS等 的任何一種。
[0008] 前述的稠李提取物，主要包含黃酮，花色苷等抗氧化成分。
[0009] 前述的稠李提取物，具有降血脂作用，可以用于藥物、保健品及食品添加劑中的應 用。
[0010] 當本發明用于上述用途時，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其 可以以任何常規的形式給藥，如片劑，膠囊劑，粉針劑，注射劑，丸劑，軟膠囊，顆粒劑和貼劑 等。
[0011] 本發明制備具有降血脂活性的桔梗提取物可以與藥用載體或食品載體混合，這 里使用的固體或液體的賦形劑在本領域是總所周知的，下面舉幾個例子，散劑是內服的粉 末劑，它的賦形劑有乳糖，淀粉，糊精，碳酸鈣，合成或天然硫酸鋁，氧化鎂，硬脂酸鎂，碳酸 氫鈉，干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水，甘油，1，2-丙二醇，單糖漿，乙醇，乙二醇，聚乙二 醇，山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蠟、木蠟、液 體石錯等組合成的疏水劑或親水劑。
[0012] 本發明可以通過下面的實驗例進一步說明。
[0013] 實施例1.稠李提取物的制備 制備方法1 :取500克干燥的稠李果實（山桃稠李，浸泡于70%的乙 醇的水溶液中，用回流提取的方法提取3次，每次30min，提取液趁熱過濾，濾液旋轉蒸發除 去溶劑。濃縮至干的浸膏在經水分散至無沉淀，經DlOl大孔吸附樹脂柱色譜吸附，依次用 水和70%以上乙醇解吸附，收集醇洗脫部分，減壓濃縮至無醇味，經冷凍干燥得粉末狀提取 物。
[0014] 制備方法2 :取500克干燥的稠李葉子（山桃稠李，)，浸泡于70%的 乙醇的水溶液中，用回流提取的方法提取3次，每次30min，提取液趁熱過濾，濾液旋轉蒸發 除去溶劑。濃縮至干的浸膏在經水分散至無沉淀，經DlOl大孔吸附樹脂柱色譜吸附，依次 用水和70%以上乙醇解吸附，收集醇洗脫部分，減壓濃縮至無醇味，經冷凍干燥得粉末狀提 取物。
[0015] 制備方法3 :取500克干燥的稠李果實(紫葉稠李，)，浸泡于70% 的乙醇的水溶液中，用超聲波提取的方法提取3次，每次30min，提取液趁熱過濾，濾液旋轉 蒸發除去溶劑。濃縮至干的浸膏在經水分散至無沉淀，經DlOl大孔吸附樹脂柱色譜吸附， 依次用水和70%以上乙醇解吸附，收集醇洗脫部分，減壓濃縮至無醇味，經冷凍干燥得粉末 狀提取物。
[0016] 制備方法4 :取500克干燥的稠李果實(紫葉稠李，浸泡于70% 的乙醇的水溶液中，用超聲波提取的方法提取3次，每次30min，提取液趁熱過濾，濾液旋轉 蒸發除去溶劑。濃縮至干的浸膏在經水分散至無沉淀，經DlOl大孔吸附樹脂柱色譜吸附， 依次用水和70%以上乙醇解吸附，收集醇洗脫部分，減壓濃縮至無醇味，經冷凍干燥得粉末 狀提取物。
[0017] 實施例2.稠李提取物中總黃酮的測定 1. 1實驗材料 前述的稠李提取物，來源為紫葉稠李(/Ww1S 的果實。
[0018] 1.2儀器與試劑 電子天平；紫外可見分光光度計；真空干燥箱；水浴鍋；RE-52AA型旋轉蒸發儀；高速 離心機；蘆丁對照品（98. 5%)，實驗室自制；無水乙醇，氫氧化鈉；硝酸鋁；亞硝酸鈉等，北京 化工廠。
[0019] 1.3 方法 1.3. 1蘆丁對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的蘆丁對照品10. 〇〇 mg，置于50ml容量瓶中，加70%的乙 醇溶液，置于水浴上加熱溶解，放冷；然后，用70%的乙醇溶液稀釋至刻度線，搖勻即得0. 20 mg/ml的標準溶液。分別取上述標準溶液0· 5、L 0、L 5、2. 0、2. 5、3. 0、4. 0 ml于IOml量筒， 各加30%乙醇，使成為5ml ;先加5%亞硝酸鈉溶液0. 3ml，搖勻，放置6min ;再加10%硝酸鋁 0. 3ml，搖勻，放置6min ;加4%氫氧化鈉4. 0ml，再加30%乙醇溶液至10. 0ml。則分別得到 不同濃度的標準溶液。
[0020] 1.3.2標準曲線的制備 分別從上述制備的標準溶液中，以30%乙醇溶液5ml，5%亞硝酸0. 3ml，10%硝酸鋁溶 液0. 3 ml，4%氫氧化鈉4. 0ml，然后再用30%乙醇溶液定容至10. Oml的溶液作空白液，用 紫外分光光度計；以3 cm比色皿，510 nm波長測定吸光度，作以蘆丁量（mg)與吸光度的標 準曲線，用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁量7(mg)與吸光度Z的方程。
[0021] 1.3.3總黃酮含量測定 移液管移取Iml樣品于量筒，用70%乙醇稀釋到所需溶液。使其顏色接近蘆丁標準液 顏色，盡量使其吸光度在〇. 2?0. 6的范圍內，以保證其吸光度檢測穩定性。從已稀釋好的 樣品中移取Iml于量筒。加30%乙醇至5. 0ml，先加5%氫氧化鈉0. 3ml，搖勻，靜置6min，再 加10%硝酸鋁〇. 3ml，搖勻靜置6min，再加4%氫氧化鈉4. Oml，用30%乙醇定容至IOml，搖 勻，靜置15min后測定。
[0022] 2實驗結果 結果表明稠李提取中總黃酮含量為2. 56% 實施例3.稠李提取物對高脂血癥大鼠的降血脂作用 1. 1實驗材料 前述的稠李提取物，來源為紫葉稠李(/Wm )的果實。
[0023] 1. 2儀器及試劑 解剖器械、酶標儀，膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇（TC)、甘油三酯（TG)、低密度脂蛋白 膽固醇（LDL-C)，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C)測定試劑盒，南京建成生物工程有限公司生 產。
[0024] 1. 3動物及分組 健康成年雄性SD大鼠，體重200±20g，每組8只；模型組飼料：在維持飼料中添加 20. 0%蔗糖、15%豬油、1. 2%膽固醇、0. 2%膽酸鈉，適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了 粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣、磷均要達到維持飼 料的國家標準。
[0025] 實驗分為空白對照組、模型對照組和3個劑量組的稠李提取物給藥組，按體重隨 機分成2組，10只大鼠給予維持飼料作為空白對照組，40只給予模型飼料作為模型對照組。 每周稱量體重1次。模型對照組給予模型飼料1 一 2周后，空白對照組和模型對照組大鼠 不禁食采血(眼內眥或尾部)，采血后盡快分離血清，測定血清TC水平。根據TC水平將模型 對照組隨機分成4組，及模型組10只，3個劑量的給藥組各10只。
[0026] I. 4藥物配置及給藥方式 稠李提取物用生理鹽水配置，按100，200，400mg/kg設為低、中、高三個劑量組，采用 灌胃方式給藥，空白對照組和模型對照組同時給予同體積的相應溶劑，空白對照組繼續給 予維持飼料，模型對照組及3個劑量組繼續給予模型飼料，并定期稱量體重。
[0027] 1. 5血清學指標的測定 經4周給藥后，麻醉動物，采血，采血后盡快分離血清，嚴格按試劑盒說明書方法測定 血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平。
[0028] 2實驗結果 經高脂飲食飼料喂養后，大鼠血脂TC, TG，LDL-C水平均明顯高于空白對照組，且具 有統計學意義〇°〈〇.〇5);給予4周的稠李提取物后，中、高劑量（200,400mg/kg)均可以顯 著降低高血脂癥大鼠的血脂水平〇°〈〇. 05);此外，中、高兩個劑量組均可以顯著升高血脂中 HDL-C 的水平 0°〈0. 05)。
[0029] 表1稠李提取物對大鼠血清中1'(：、了6、0^-(：、邢1^-(：水平的影響（臟〇1/1)(1 ：|：5 ,n =8)
【權利要求】
1. 一種稠李提取物的制備方法，具體包括如下步驟：干燥的稠李樣品，粉碎過20目篩， 經適當的溶劑和提取方法，得到提取液，減壓濃縮至干；用水混懸至無沉淀，上大孔樹脂吸 附柱色譜，依次用水和70%以上的乙醇進行洗脫，收集醇洗脫部分，即得稠李提取物。
2. 根據權利要求1所述的稠李，選自山桃稠李（/?^^ fflaadii)，稠李（/?^^ racefflosa)或紫葉稠李（/?^^ 的任何一種；提取部位選自其果實，莖葉或花等 任一部位，其優選果實。
3. 根據權利要求1所述的提取溶劑和提取方法，提取溶劑選自水，甲醇，乙醇任何一種 及不同比例混合物；提取方法選自浸泡提取、回流提取、超聲提取、逆流提取、超臨界萃取等 的任何一種。
4. 根據權利要求1所述的大孔吸附柱色譜，主要包括藥學上能夠接受的，可以用于分 離的多種常規樹脂，選自D101，NKA12或ADS等的任何一種。
5. 根據權利要求1所述的稠李提取物，具有降血脂作用，可以用于藥物、保健品及食品 添加劑中的應用。
6. 根據權利要求1所述的稠李提取物，其含有豐富的花色苷，黃酮等成分。
7. 根據權利要求5所述的用途，其特征在于所述藥物或保健品片劑，膠囊劑，粉針劑， 注射劑，丸劑，軟膠囊，顆粒劑和貼劑等多種劑型。
【文檔編號】A23L1/29GK104367659SQ201410664124
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月20日 優先權日:2014年11月20日
【發明者】李偉, 李新殿, 林紅梅, 金銀萍, 侯微, 王英平, 李慧萍, 張晶 申請人:吉林農業大學