酶法制備(3r,5s)-6-氯-3,5-二羥基己酸叔丁酯的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種酶法制備(3R,5S)-6-氯-3,5-二羥基己酸叔丁酯的方法，所述方法包括如下步驟：將共表達全細胞、(S)-6-氯-5-羥基-3-氧代己酸叔丁酯、輔因子、葡萄糖和緩沖液按一定比例混合，在pH＝5～8、溫度為20～45℃下反應，經后處理得到產物。與現有技術相比，本發明所采用的方法操作過程簡單、生產效率高、環境友好、生產成本較低且反應轉化率及產物光學純度高，具有良好的工業應用價值。
【專利說明】酶法制備（3R, 5S)-6-氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯
【技術領域】
[0001] 本發明屬于制藥工業生物【技術領域】，具體涉及一種酶法制備 (3R，5S)-6-氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯的方法。
【背景技術】
[0002] (3R，5S) -6-氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯是降膽固醇他汀類藥物羅蘇伐他汀 (Rosuvastatin)的關鍵手性中間體，該中間體的合成技術一直以來受到廣泛的研究與關 注。目前文獻報道的制備方法主要有化學法和生物法。
[0003] 化學法生產（3R，5S)-6_氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯是利用易燃的硼烷類 衍生物在_70°C下將（S)-6-氯-5-羥基-3-氧代己酸叔丁酯不對稱還原得到。該工 藝需要極端低溫和無水無氧的反應條件，能耗嚴重，難以實用化（Angew.Chem.Int. Ed.，2000, 39, 4306-4308)。
[0004] 生物催化技術以具有底物專一性強、催化效率高、反應條件溫和、反應步驟簡便及 環境污染小等特點，被廣泛用于制備他汀類手性側鏈前體。
[0005] 已報道的制備（3R，5S)-6-氯-3,5-二羥基己酸叔丁酯的生物法中，大部分均需要 同時使用酮還原酶和葡萄糖脫氫酶，而且都是分開表達、分開加料的，這就使得發酵次數增 力口、成本提高，同時也影響生產的使用和效率（US7879585B)。
【發明內容】
[0006] 為了克服現有技術存在的上述缺陷，本發明公開了 一種酶法制備 (3R，5S)-6-氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯的方法。
[0007] 具體工藝路線如下所示：
【權利要求】
1. 一種酶法制備（3R，5S)-6-氯-3, 5-二羥基己酸叔丁酯的方法，其特征在于：將共表 達全細胞、（S)-6-氯-5-羥基-3-氧代己酸叔丁酯、輔因子、葡萄糖和緩沖液按一定比例混 合后反應得到產物。
2. 如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述共表達全細胞為含羰基還原酶（KRED) 與葡萄糖脫氫酶（GDH)的基因工程菌。
3. 如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述共表達全細胞是由能同時表達羰 基還原酶（KRED)與葡萄糖脫氫酶（GDH)重組基因的大腸桿菌或酵母菌通過發酵培養得到， 其中優選為大腸桿菌。
4. 如權利要求1、2或3所述的方法，其特征在于：利用所述共表達全細胞直接催化反 應。
5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述共表達全細胞的濃度為10?300g/L、 所述（S)-6-氯-5-羥基-3-氧代己酸叔丁酯的濃度為10?300g/L、所述輔因子的濃度為 0. 01?1. Og/L、所述葡萄糖的濃度為10?300g/L和所述緩沖液的濃度為10?100mM/L。
6. 如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述反應在pH = 5?8、溫度為20?45°C 下進行。
7. 如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述輔因子為NAD、NADH、NADP和NADPH的 任意一種或它們的組合，其中優選為NADP。
8. 如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液或三乙醇胺 緩沖液，其中優選為三乙醇胺緩沖液。
【文檔編號】C12P7/62GK104328148SQ201410613335
【公開日】2015年2月4日 申請日期:2014年11月4日 優先權日:2014年11月4日
【發明者】竺偉, 陳加利, 張文明, 吳會 申請人:尚科生物醫藥（上海）有限公司