一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟：(1)取紅色鏈霉菌菌種接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得一級(jí)種子液；(2)將一級(jí)種子液接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得二級(jí)種子液；(3)將二級(jí)種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)過程中補(bǔ)加豆油、脂肪酶、玉米漿、蛋白酶等物質(zhì)，培養(yǎng)一定時(shí)間后得到高紅霉素含量的發(fā)酵液。上述紅霉素的制備方法，通過發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)過程的控制的優(yōu)化，特別是通過引入生物酶，提高了原料利用率及紅霉素的發(fā)酵水平，簡(jiǎn)化工藝，降低了生產(chǎn)成本。
【專利說明】 一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及抗生素發(fā)酵制備領(lǐng)域，特別是涉及一種紅霉素的發(fā)酵制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅霉素屬大環(huán)內(nèi)脂類抗生素，它的抗菌譜和青霉素相似，特別對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌、抗酸桿菌、立克次氏體及大病毒有抗菌活性，是治療耐藥性金黃色葡萄球菌感染和溶血性鏈球菌感染所引起疾病的首選藥物，臨床上可用于對(duì)青霉素過敏的患者。近年來，隨著紅霉素臨床應(yīng)用領(lǐng)域的擴(kuò)大和以阿奇霉素、羅紅霉素、克拉霉素等為代表的新型半合成紅霉素的出現(xiàn)，紅霉素生產(chǎn)和銷售日趨活躍。
[0003]紅霉素發(fā)酵是采用一種放線菌(紅色鏈霉菌)作為產(chǎn)生菌，經(jīng)過復(fù)壯、分離、孢子培養(yǎng)制備成斜面孢子備用，然后將斜面孢子接入種子罐進(jìn)行種子擴(kuò)大培養(yǎng)，最后接入發(fā)酵復(fù)合培養(yǎng)基，通過對(duì)培養(yǎng)溫度、PH、基質(zhì)濃度等參數(shù)的控制，使其最大限度的產(chǎn)生紅霉素的過程。目前國(guó)外紅霉素發(fā)酵水平明顯高于國(guó)內(nèi)，因此，本領(lǐng)域迫切需要提供一種新的紅霉素發(fā)酵制備方法，提高紅霉素發(fā)酵水平，從而提高紅霉素產(chǎn)量、降低發(fā)酵成本。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]提高紅霉素發(fā)酵生產(chǎn)水平的主要途徑一是改變菌種原有性能，進(jìn)行誘變篩選或基因工程技術(shù)獲得高產(chǎn)菌種，二是優(yōu)化培養(yǎng)基組成成分和培養(yǎng)條件。本發(fā)明的目的在于通過優(yōu)化發(fā)酵工藝提供一種簡(jiǎn)單可行、發(fā)酵水平高的紅霉素制備方法。
[0005]一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0006](I)取紅色鏈霉菌按8?12%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液；
[0007](2)將所述一級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液；
[0008](3)將所述二級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12?15h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.2?1.5g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)24?30h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u蛋白酶的比例添加蛋白酶,并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米衆(zhòng)0.6?0.9g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)140?160h后，紅霉素效價(jià)不再上升，終止培養(yǎng)，整個(gè)培養(yǎng)過程中，控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖15?25g/L、淀粉30?50g/L、黃豆餅粉25?35g/L、玉米漿10?20g/L、硫酸銨I?2g/L、豆油8?15g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸I丐5?10g/L、泡敵0.1 ?0.2g/L ；
[0009]其中，步驟(I)中的所述一級(jí)種子培養(yǎng)基和步驟(2)中的所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:葡萄糖20?40g/L、淀粉20?40g/L、黃豆餅粉20?30g/L、玉米漿10?20g/L、硫酸銨3?5g/L、豆油6?10g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸?丐5?10g/L、泡敵0.1?0.2g/L0
[0010]在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述一級(jí)種子培養(yǎng)基、所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米楽；15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸鈣10g/L、泡敵0.lg/L。
[0011]在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟(2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿15g/L、硫酸銨1.5g/L、豆油12g/L、氯化鈉4g/L、碳酸鈣10g/L、泡敵 0.lg/L。
[0012]在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟(3)中，通過添加氨水的方式控制pH為6.9?7.1。
[0013]上述應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，通過發(fā)酵培養(yǎng)基及培養(yǎng)過程的控制的優(yōu)化，特別是通過引入生物酶，提高了原料利用率及紅霉素的發(fā)酵水平，簡(jiǎn)化工藝，降低了生產(chǎn)成本。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014]圖1為一實(shí)施方式的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】做詳細(xì)的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細(xì)節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實(shí)施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進(jìn)，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實(shí)施的限制。
[0016]請(qǐng)參閱圖1，一實(shí)施方式的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0017]步驟S100、取紅色鏈霉菌按8?12%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0018]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20?40g/L、淀粉20?40g/L、黃豆餅粉20?30g/L、玉米衆(zhòng)10?20g/L、硫酸銨3?5g/L、豆油6?10g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸鈣 5 ?10g/L、泡敵 0.1 ?0.2g/L。
[0019]步驟S200、將所述一級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0020]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20?40g/L、淀粉20?40g/L、黃豆餅粉20?30g/L、玉米衆(zhòng)10?20g/L、硫酸銨3?5g/L、豆油6?10g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸鈣 5 ?10g/L、泡敵 0.1 ?0.2g/L。
[0021]步驟S300、將所述二級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12?15h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.2?1.5g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)24?30h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u蛋白酶的比例添加蛋白酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米漿0.6?0.9g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)140?160h后，紅霉素效價(jià)不再上升，終止培養(yǎng)，整個(gè)培養(yǎng)過程中，控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖15?25g/L、淀粉30?50g/L、黃豆餅粉25?35g/L、玉米衆(zhòng)10?20g/L、硫酸銨I?2g/L、豆油8?15g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸I丐5?10g/L、泡敵 0.1 ?0.2g/L。
[0022]優(yōu)選的，所述一級(jí)種子培養(yǎng)基、所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米楽；15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸隹丐10g/L、泡敵 0.lg/L。
[0023]優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿15g/L、硫酸銨1.5g/L、豆油12g/L、氯化鈉4g/L、碳酸鈣10g/L、泡敵0.lg/L。
[0024]優(yōu)選的，控制pH值步驟為:通過添加氨水的方式控制pH為6.9?7.1。
[0025]本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于:
[0026]1、優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基中的碳源，選擇作為速效碳源的葡萄糖和作為遲效碳源的淀粉，可以防止單獨(dú)使用葡萄糖時(shí)因?yàn)槠咸烟谴x過快導(dǎo)致中間代謝產(chǎn)物積累或PH降低，進(jìn)而降低紅霉素發(fā)酵水平。
[0027]2、由于葡萄糖對(duì)紅霉素的生物合成有一定抑制作用，本發(fā)明在發(fā)酵過程中不補(bǔ)加葡萄糖，同時(shí)增加了發(fā)酵培養(yǎng)基中豆油的含量，并在發(fā)酵過程中流加大量豆油。以豆油作為發(fā)酵過程中主要碳源，此外豆油還能在被菌體分解后生成各種脂肪酸、甘油為紅霉素合成提供代謝中間體。同時(shí)豆油加量的增大可以減少丙醇的使用，甚至不用流加丙醇，從而簡(jiǎn)化工藝，降低發(fā)酵成本。由于豆油被菌體分解過程中存在著油脂分解不徹底、利用速度慢、分解利用滯后這些問題，會(huì)造成發(fā)酵液中殘留油脂較多，并加大原材料的消耗量，本發(fā)明在培養(yǎng)過程中添加脂肪酶，調(diào)節(jié)菌體利用油脂速度，使之滿足菌體的生長(zhǎng)代謝所需，并提高油脂利用率，降低殘留油脂。本發(fā)明在培養(yǎng)過程中添加脂肪酶處理豆油相比專利CN 102732383B中先用脂肪酶處理豆油再用于發(fā)酵而言，更便于控制豆油的降解速度，可以防止一次性或者直接加入大量豆油代謝物導(dǎo)致菌體生長(zhǎng)過快、影響紅霉素的生成，此外可以省略單獨(dú)用酶處理豆油這一步驟，簡(jiǎn)化工藝，降低生產(chǎn)成本。
[0028]3、在發(fā)酵過程中流加玉米漿。玉米漿相比硫酸銨等速效無機(jī)氮源，菌體利用速度慢，但其除含有大量的氮外還含有豐富的微量元素等，能為菌體生長(zhǎng)代謝提供全面的營(yíng)養(yǎng)成分。為了提高玉米漿的利用速度，本發(fā)明在培養(yǎng)過程中添加蛋白酶，調(diào)節(jié)玉米漿中蛋白的降解速度，為菌體生長(zhǎng)代謝提高足夠的氮源，實(shí)現(xiàn)了流加玉米漿對(duì)流加硫酸銨的替代。
[0029]本發(fā)明的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法通過優(yōu)化發(fā)酵工藝能提高紅霉素的發(fā)酵水平，并簡(jiǎn)化工藝，降低生產(chǎn)成本。
[0030]下面結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。
[0031]實(shí)施例1
[0032]一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0033](I)取紅色鏈霉菌按8%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0034]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0035](2)將所述一級(jí)種子液按8%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0036]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0037](3)將所述二級(jí)種子液按10%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12h后，按每升培養(yǎng)基添加1u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.2g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)24h后，按每升培養(yǎng)基添加20u蛋白酶的比例添加蛋白酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米漿0.6g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)145h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為9850u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，通過補(bǔ)加氫氧化鈉溶液控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖15g/L、淀粉50g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米漿10g/L、硫酸銨lg/L、豆油8g/L、氯化鈉3g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0038]實(shí)施例2
[0039]一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0040](I)取紅色鏈霉菌按12%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)24h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0041]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉20g/L、玉米漿10g/L、硫酸銨5g/L、豆油10g/L、氯化鈉3g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0042](2)將所述一級(jí)種子液按12%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)24h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0043]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉20g/L、玉米漿10g/L、硫酸銨5g/L、豆油10g/L、氯化鈉3g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0044](3)將所述二級(jí)種子液按12%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)15h后，按每升培養(yǎng)基添加15u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.5g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)30h后，按每升培養(yǎng)基添加1u蛋白酶的比例添加蛋白酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米漿0.9g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)140h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為10150u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，通過補(bǔ)加氨水控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖15g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米楽；20g/L、硫酸銨2g/L、豆油8g/L、氯化鈉3g/L、碳酸鈣10g/L、泡敵0.lg/L。
[0045]實(shí)施例3
[0046]一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0047](I)取紅色鏈霉菌按12%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0048]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖40g/L、淀粉20g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿20g/L、硫酸銨3g/L、豆油6g/L、氯化鈉6g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0049](2)將所述一級(jí)種子液按12%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0050]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖40g/L、淀粉20g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿20g/L、硫酸銨3g/L、豆油6g/L、氯化鈉6g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0051](3)將所述二級(jí)種子液按8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)15h后，按每升培養(yǎng)基添加20u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.5g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)24h后，按每升培養(yǎng)基添加1u蛋白酶的比例添加蛋白酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米漿0.6g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)160h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為9956u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，通過補(bǔ)加氨水控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米楽；15g/L、硫酸銨1.5g/L、豆油12g/L、氯化鈉4g/L、碳酸鈣10g/L、泡敵0.lg/L。
[0052]實(shí)施例4
[0053]一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0054](I)取紅色鏈霉菌按10%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0055]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0056](2)將所述一級(jí)種子液按10%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0057]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0058](3)將所述二級(jí)種子液按8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12h后，按每升培養(yǎng)基添加15u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油
1.2g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)30h后，按每升培養(yǎng)基添加20u蛋白酶的比例添加蛋白酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米漿0.9g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)150h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為10251u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，通過補(bǔ)加氨水控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖25g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉35g/L、玉米楽；20g/L、硫酸銨2g/L、豆油15g/L、氯化鈉6g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0059]對(duì)比例I
[0060]一種常規(guī)的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0061](I)取紅色鏈霉菌按10%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0062]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0063](2)將所述一級(jí)種子液按10%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0064]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
[0065](3)將所述二級(jí)種子液按8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12h后，開始按每升培養(yǎng)基流加葡萄糖2g/h的比例添加葡萄糖，按每升培養(yǎng)基流加丙醇0.4g/h的比例添加丙醇，培養(yǎng)20h后，開始按每升培養(yǎng)基流加硫酸銨lg/h的比例添加硫酸銨，培養(yǎng)150h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為8532u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，控制pH為6.9?7.0，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖45g/L、黃豆餅粉35g/L、玉米漿20g/L、硫酸銨2g/L、豆油15g/L、氯化鈉6g/L、碳酸|丐5g/L、泡敵0.2g/L。
[0066]對(duì)比例2
[0067]一種常規(guī)的紅霉素制備方法，包括以下步驟:
[0068](I)取紅色鏈霉菌按8%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液。
[0069]其中，一級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖40g/L、淀粉20g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿20g/L、硫酸銨3g/L、豆油6g/L、氯化鈉6g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0070](2)將所述一級(jí)種子液按8%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)30h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液。
[0071]其中，二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖40g/L、淀粉20g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿20g/L、硫酸銨3g/L、豆油6g/L、氯化鈉6g/L、碳酸鈣5g/L、泡敵0.2g/L。
[0072](3)將所述二級(jí)種子液按8%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)15h后，開始按每升培養(yǎng)基流加葡萄糖1.5g/h的比例添加葡萄糖，按每升培養(yǎng)基流加丙醇0.4g/h的比例添加丙醇，培養(yǎng)20h后，開始按每升培養(yǎng)基流加硫酸銨1.2g/h的比例添加硫酸銨，培養(yǎng)150h后，終止發(fā)酵，發(fā)酵液中紅霉素含量為8340u/mL。整個(gè)培養(yǎng)過程中，控制pH為6.9?7.0，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖50g/L、黃豆餅粉35g/L、玉米衆(zhòng)20g/L、硫酸銨2g/L、豆油15g/L、氯化鈉6g/L、碳酸|丐5g/L、泡敵0.2g/L。
[0073]根據(jù)上述實(shí)施例1?4及對(duì)比例I?2可知，實(shí)施例1?4中發(fā)酵液紅霉素平均含量為10052u/mL，對(duì)比例I?2中發(fā)酵液紅霉素平均含量為8436u/mL。本發(fā)明的紅霉素的制備方法相比常規(guī)制備方法，發(fā)酵水平提高了 19%，同時(shí)簡(jiǎn)化了補(bǔ)料種類。這說明本方法通過優(yōu)化發(fā)酵工藝達(dá)到了提高紅霉素的發(fā)酵水平、簡(jiǎn)化工藝的目的。
[0074]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【權(quán)利要求】
1.一種應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取紅色鏈霉菌按8?12%的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液； (2)將所述一級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)24?36h，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液； (3)將所述二級(jí)種子液按8?12%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30?32°C培養(yǎng)，開始培養(yǎng)12?15h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u脂肪酶的比例添加脂肪酶，并開始按每升培養(yǎng)基流加豆油1.2?1.5g/h的比例添加豆油，培養(yǎng)24?30h后，按每升培養(yǎng)基添加10?20u蛋白酶的比例添加蛋白酶,并開始按每升培養(yǎng)基流加玉米楽；0.6?0.9g/h的比例添加玉米漿，培養(yǎng)140?160h后，紅霉素效價(jià)不再上升，終止培養(yǎng)，整個(gè)培養(yǎng)過程中，控制pH為6.9?7.1，通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速或通入無菌空氣控制溶氧在30%以上，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖15?25g/L、淀粉30?50g/L、黃豆餅粉25?35g/L、玉米漿10?20g/L、硫酸銨I?2g/L、豆油8?15g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸隹丐5?10g/L、泡敵0.1?0.2g/L ； 其中，步驟(I)中的所述一級(jí)種子培養(yǎng)基和步驟(2)中的所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:葡萄糖20?40g/L、淀粉20?40g/L、黃豆餅粉20?30g/L、玉米漿10?20g/L、硫酸銨3?5g/L、豆油6?10g/L、氯化鈉3?6g/L、碳酸?丐5?10g/L、泡敵0.1?0.2g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，其特征在于，所述一級(jí)種子培養(yǎng)基、所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為:葡萄糖30g/L、淀粉30g/L、黃豆餅粉25g/L、玉米衆(zhòng)15g/L、硫酸銨4g/L、豆油8g/L、氯化鈉4g/L、碳酸I丐10g/L、泡敵0.lg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為:葡萄糖20g/L、淀粉40g/L、黃豆餅粉30g/L、玉米漿15g/L、硫酸銨1.5g/L、豆油 12g/L、氯化鈉 4g/L、碳酸鈣 10g/L、泡敵 0.lg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用生物酶的紅霉素制備方法，其特征在于，步驟(3)中，通過添加氨水的方式控制pH為6.9?7.1。
【文檔編號(hào)】C12P19/62GK104388501SQ201410596453
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】吳鵬, 王雙平, 陳龍 申請(qǐng)人:寧夏乙征生物工程有限公司