一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust-UDP及其構(gòu)建方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust-UDP及其構(gòu)建方法，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCCNO.9324，本發(fā)明提供的靈芝工程菌，是通過選用靈芝強(qiáng)啟動子P- gpd 過表達(dá)編碼UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP）基因，得到高產(chǎn)靈芝多糖靈芝工程菌Rmust-UDP；通過搖瓶發(fā)酵實驗表明，該菌在其細(xì)胞生長不受影響的情況下，UDP轉(zhuǎn)化子菌株產(chǎn)靈芝胞內(nèi)多糖的含量為23.47mg/100mg比野生型菌株（WT菌株）的含量（15.28mg/100mg）提高了53.6%，UDP轉(zhuǎn)化子菌株產(chǎn)靈芝胞外多糖的含量為1.66g/L比野生型菌株（WT菌株）的含量（1.22g/L）提高了36.1%。因此，本高產(chǎn)菌株可以作為生產(chǎn)靈芝多糖的工程菌株，具有廣泛的應(yīng)用前景。CGMCC NO932420140623
【專利說明】一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust-UDP及其構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程和代謝工程領(lǐng)域的，具體涉及一種通過基因工程對靈芝代謝 途徑中有關(guān)靈芝多糖合成的UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP)基因過表達(dá)的方法，構(gòu)建了一個 靈芝多糖的高產(chǎn)工程菌株。
【背景技術(shù)】
[0002] 靈芝（fefloofe/ma )是擔(dān)子菌綱，多孔菌科，靈芝屬真菌。靈芝真菌在我 國有20多種，包括赤芝，黃芝，紫芝，黑芝，薄蓋靈芝，樹舌等。我國應(yīng)用靈芝作為藥物已有 兩千多年的歷史。靈芝對于增強(qiáng)人體免疫力，調(diào)節(jié)血糖，控制血壓，輔助腫瘤放化療，保肝護(hù) 肝，促進(jìn)睡眠等方面均具有顯著療效。由于其特殊的藥用價值，靈芝的有效成分分析和藥理 學(xué)研究已經(jīng)引起了國際上的廣泛關(guān)注，尤其在日本，美國，韓國等國家。目前，靈芝的研究已 經(jīng)深入到了分子水平，一些專著相繼出版，從不同的角度介紹了靈芝的生物學(xué)特性、栽培技 術(shù)、藥理學(xué)作用及臨床應(yīng)用等情況。
[0003] 靈芝多糖是從靈芝中提取的一種新內(nèi)源活性物質(zhì)，其所含的化學(xué)成分能夠顯著提 高吞噬細(xì)胞的吞噬能力，增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫功能，還能提高紅細(xì)胞中超氧化物歧化 酶活性，對人體具有多種功能。
[0004] UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP)基因是靈芝多糖合成途徑中的一個較為重要的基 因。在細(xì)胞中，糖原分解會產(chǎn)生大量游離的葡萄糖-1-磷酸，UDP-葡萄糖焦磷酸化酶主要催 化葡萄糖-1-磷酸變?yōu)閁DP-葡萄糖，而UDP-葡萄糖是糖原生物合成中糖基的供體。這是糖 原合成的第一步反應(yīng)。糖原合成后再經(jīng)過一系列的反應(yīng)就產(chǎn)生了各種多糖。因此UDP-葡 萄糖焦磷酸化酶基因?qū)μ窃暮铣删哂兄匾淖饔谩ｌ`芝多糖的合成途徑如下所示：
【權(quán)利要求】
1. 一種靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust-UDP，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心的保藏編號為CGMCC NO. 9324。
2. 權(quán)利要求1所述靈芝多糖高產(chǎn)工程菌株Rmust-UDP的構(gòu)建方法，其特征在于：將目 的片段與表達(dá)載體相連得到重組表達(dá)質(zhì)粒PJW-EXP-UDP，然后將重組表達(dá)質(zhì)粒通過PEG介 導(dǎo)的原生質(zhì)體融合的方法將重組表達(dá)質(zhì)粒傳化進(jìn)靈芝中，從而得到高產(chǎn)靈芝多糖的工程菌 株； 其中所述的目的片段為UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO :1所 不，其編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所不。
【文檔編號】C12N15/80GK104403955SQ201410595875
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】徐軍偉, 李煥軍, 任夢飛, 紀(jì)森林, 張德懷 申請人:昆明理工大學(xué)