一種與植物抗逆性相關蛋白及其編碼基因GsSKP21與應用的制作方法

文檔序號：491978閱讀：483來源：國知局

一種與植物抗逆性相關蛋白及其編碼基因GsSKP21與應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種與植物耐堿性相關蛋白及其編碼基因GsSKP21與應用。該蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質：a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關的蛋白質。本發明通過實驗證明，本發明的蛋白具有提高植物抗逆性的功能，該蛋白在植物育種方面具有重要應用價值。
【專利說明】一種與植物抗逆性相關蛋白及其編碼基因GsSKP21與應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物【技術領域】，具體為一種與植物抗逆性相關蛋白及其編碼基因 GsSKP21與應用。

【背景技術】
[0002] 鹽堿脅迫是影響農作物生產的主要因素之一，嚴重影響作物的產量與質量，是制約我國農業生產和亟待解決的重要問題。與鹽脅迫相比，堿脅迫除了土壤水勢降低產生的滲透脅迫和細胞內高濃度鹽分累積產生的離子毒害外，還使土壤保持較高pH值（>8. 0)。由于堿性鹽離子C0廣和HCCV的存在，可以直接破壞根細胞的結構和功能，使Ca2+，Mg2+， H2P(V離子發生沉淀，從而破壞植物細胞的動態離子平衡。植物應對不利的環境變化有復雜的調控機制和傳導系統，近年來，對植物脅迫應答機制的研究已經取得了巨大的成績，如調控滲透脅迫的MAPK信號傳導途徑和介導離子脅迫的S0S信號轉導通路。然而大部分機制研究主要是集中在鹽脅迫中，對堿脅迫的信號傳導通路研究仍非常有限。

【發明內容】

[0003] 本發明的一個目的是提供一種蛋白質。
[0004] 本發明提供的蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質：
[0005] a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；
[0006] b)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關的蛋白質。
[0007] 本發明還提供了與上述蛋白質相關的生物材料，為下述B1)至B3)中的任一種：
[0008] B1)編碼上述蛋白質的核酸分子；
[0009] B2)含有B1)所述核酸分子的重組載體；
[0010]B3)含有B1)所述核酸分子的重組菌、或含有B2)所述重組載體的重組菌。
[0011] 上述生物材料中，B1)所述核酸分子的核苷酸序列如序列表中序列1所示。
[0012] 本發明另一個目的是提供上述所述蛋白質或所述相關生物材料在提高植物抗逆性中的應用。
[0013] 上述應用中，所述抗逆性為抗堿脅迫。
[0014] 本發明最后一個目的是提供一種構建轉基因植物的方法。
[0015] 本發明所提供的構建轉基因植物的方法，包括如下步驟：使上述蛋白質在出發植物中過表達，進而使植物的抗逆性提高和/或使植物對ABA的敏感性降低。
[0016] 上述方法中，所述蛋白質在受體植物中過表達的方法為：向出發植物中導入上述蛋白質的編碼基因，得到轉基因植物；轉基因植物與出發植物相比，抗逆性提高和/或對 ABA的敏感性降低。
[0017] 上述方法中，所述蛋白質的編碼基因是序列表序列1中第1-1041位核苷酸的DNA 分子。
[0018] 上述方法中，所述抗逆性為抗堿脅迫。
[0019] 上述方法中，所述出發植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為擬南芥。
[0020] 本發明提供了一種與植物耐堿性相關蛋白及其編碼基因GsSKP21與應用。本發明通過實驗證明，本發明的蛋白具有提高植物抗逆性的功能，該蛋白在植物育種方面具有重要應用價值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1為基因槍轟擊洋蔥表皮后觀察GSSKP21蛋白亞細胞定位結果。
[0022] 圖2為野生大豆中在鹽和堿處理下GsSKP21基因轉錄水平表達量的變化。
[0023] 圖3為轉基因擬南芥在種子萌發期及幼苗期對堿脅迫的響應。圖3A為轉基因擬南芥與野生型擬南芥種子在堿脅迫下種子的萌發情況；圖3B為轉基因擬南芥與野生型擬南芥種子在堿脅迫下的萌發率；圖3C為轉基因擬南芥與野生型擬南芥種子在堿脅迫下的展葉率；圖3D為轉基因擬南芥與野生型擬南芥幼苗在堿脅迫下的生長情況；圖3E為轉基因擬南芥與野生型擬南芥幼苗在堿脅迫下的根長。
[0024] 圖4為轉基因擬南芥成苗與野生型擬南芥成苗在堿脅迫下的生長情況。
[0025] 圖5為轉基因擬南芥在種子萌發期及幼苗期對ABA的響應。圖5A為轉基因與野生型擬南芥種子在ABA處理下的種子萌發情況；圖5B為轉基因與野生型擬南芥種子在ABA 處理下的萌發率；圖5C為轉基因與野生型擬南芥種子在ABA處理下的展葉率；圖?為轉基因與野生型擬南芥幼苗在ABA處理下的生長情況；圖5E為轉基因與野生型擬南芥幼苗在 ABA處理下的根長。
[0026] 圖6為非生物脅迫相關Marker基因在野生型擬南芥和GsSKP21超表達擬南芥中的堿脅迫表達模式。
[0027] 圖7為ABA信號通路相關基因在野生型擬南芥和GsSKP21超表達擬南芥中的ABA 脅迫表達模式。

【具體實施方式】
[0028] 以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。
[0029] 實驗材料為野生大豆G07256種子，在文獻"MingzheSun,XiaoliSun,Yang Zhao,HuaCai,ChaoyueZhao,WeiJi,HuiziDuanMu,YangYu,YanmingZhu.Ectopic expressionofGsPPCK3andSCMRPinMedicagoSativaenhancesplantalkaline stresstoleranceandmethioninecontent.PL0SONE2014,9(2) :e89578" 中公開過，公眾可以從吉林省農業科學院獲得。
[0030] 實施例1、野生大豆中耐堿相關蛋白編碼基因GSSKP21的獲得
[0031] 1、植物材料處理
[0032] 挑選飽滿的野生大豆G07256種子于濃H2S04中處理10min，去除泥膜。倒凈濃 H2S04，用無菌水沖洗3?4遍后放置于濕潤的濾紙上，25°C暗培養3d催芽。待芽長到約1? 2cm時，將其轉移到盛有30 %草炭土、70 %普通土的育苗盆中，并將其放置于人工氣候箱中培養。待幼苗長至3周齡，迅速取新鮮葉片及根部3cm，置于-80°C保存。
[0033] 2、植物總RNA的提取
[0034] RNA提取具體步驟參見TIANGEN公司RNApreppure試劑盒說明書。
[0035] 3、cDNA第一鏈的合成
[0036] 以OligodT為引物進行cDNA第一條鏈的合成，方法參見Invitrogen公司 SuperScriptTMIIIReverseTranscriptase說明書。
[0037] 4、目的基因GsSKP21全長序列的擴增
[0038] 以野生大豆總cDNA為模板，采用GsSKP21sense和GsSKP21antisence引物PCR擴增目的基因GsSKP21。引物序列如下：
[0039] GsSKP21sense:5, -ATGTCAGAAATTGACATGGCAGTTAT-3,；
[0040] GsSKP21antisence:5, -TCAAGCGTTTCGCCTCAGAAAACTAT-3，。
[0041] PCR反應的體系：20iiL5XPrimeSTAR?HSPCR緩沖液、8iiLdNTP混合物（A、G、 1\(：各2.51111)、21^上下游引物（1〇11]\〇、11^稀釋5倍的通用模板、1111^1^11^了41嚴批 DNAPolymerase、ddH20 補足體積（總體積 100uL)。
[0042] PCR反應的條件（采用降落的方法）：94°C5min- [94°C30s-65°C30s(-0. 5°C/ circle) - 72°C80s]X20 - [94°C30s- 55°C30s- 72°C80s]X10 - 72°ClOmin- 4°C。
[0043] 將大小符合要求的目的基因電泳條帶回收、克隆至pGEM-T載體（購于Promega公司），轉化大腸桿菌DH5a(全式金，⑶201-01)后送交測序，對測序結果進行DNAMAN分析，確定目的基因的全長序列為l〇41bp。
[0044] 實施例2、GsSKP21在植物細胞內的亞細胞定位分析
[0045] 1、洋蔥表皮細胞的準備
[0046] 在超凈工作臺上將洋蔥剝掉1-2外層蔥片，將靠近心部的蔥片切成1. 5cmx1. 5cm 左右的小塊，小心撕取內表皮，平鋪于1/2MS固體培養基上25°C暗培養6小時。
[0047] 2、亞細胞定位載體的基因槍轟擊
[0048] 金粉的洗滌和質粒DNA包埋參見美國Bio-Rad伯樂Helios基因槍系統說明書。采用Sail、BamHI限制性酶切位點，將GsSKP21全長⑶S區克隆到亞細胞定位載體pBSK II-eGFP，得到GsSKP21亞細胞定位載體pBSKII-GsSKP21-eGFP。引物序列如下：
[0049] S-GsSKP21sense:5,-GCGTCGACATGTCAGAAATTGACATGGCAG-3'
[0050] S-GsSKP21antisense:5'-CGGGATCCAGCGTTTCGCCTCAGAAAACTA-3'
[0051] 采用基因槍轟擊介導的瞬時表達方法將構建的pBSKII-GsSKP21-eGFP和pBSK II-eGFP(陰性對照）亞細胞定位載體分別轟擊于洋蔥表皮上。
[0052] 3、轉染后的洋蔥表皮細胞的培養
[0053] 將轟擊了含目的基因的亞細胞定位載體的洋蔥表皮置于新MS培養基上，暗培養 12小時以便后續觀察。
[0054] 4.激光掃描共聚焦顯微鏡觀察
[0055] 剪取洋蔥表皮細胞裝片，利用激光共聚焦顯微鏡下觀察，GFP的激發波長為 488nm。結果表明：GsSKP21-eGFP融合蛋白定位于細胞核，而陰性對照eGFP則無定位傾向，如圖1所示。
[0056] 實施例3、GsSKP21在鹽堿脅迫條件下的表達特性分析
[0057] 一、植物材料的處理
[0058] 取3周齡的野生大豆幼苗，分別置于200mMNaCl(高鹽脅迫）、50mMNaHC03 (模擬堿脅迫）條件下處理0^1、111、311、611、1211、2411、4811后迅速剪取幼嫩的葉片和根置于-801：保存；同時取未處理〇h、lh、3h、6h、12h、24h、48h幼嫩的葉片和根作為對照。
[0059] 二、野生大豆材料的RNA提取及基因組DNA的去除
[0060] 1、取經上述不同方法處理后的野生大豆材料各約100mg，液氮研磨，用plant RNApr印PlantKit(TIANGEN，catno:DP402)試劑盒并參照試劑盒說明書提取RNA。
[0061] 2、采用TaKaRa公司的DNase I于37°C反應20-30min，去除RNA中的基因組DNA。反應體系如下：RNA 40iiL、10XDNase I Buffer 5iiL、DNase I 2iiL、RNAase InhibitorO. 5uL、RNAase-freeddH202.5uL〇
[0062] 3、加入50 ii L的酚氯仿抽提一次，取上清，用等體積的異丙醇沉淀RNA，用70%乙醇洗沉淀2次，將RNA溶于40ii L無菌RNAase-freeddH20。
[0063] 4、通過電泳和紫外分光光度計檢測RNA的濃度和完整度。
[0064]三、通過Real-time PCR對GsSKP21基因進行表達量檢測
[0065] 以上述總RNA反轉錄獲得的cDNA為模板，采用R-GsSKP21sense和 R-GsSKP21antisense引物序列，通過Real-time PCR對GsSKP21基因進行表達量檢測。引物序列如下所示：
[0066] R-GsSKP21 sense: 5，-GGCTTTGTGAGTTGACATCTGC-3，；
[0067] R-GsSKP21antisense:5' -GTATCTCCTCTGGTGTTTTCCCT-3'。
[0068] PCR反應的體系為：2XSYBRPremixExTaq12.L、MgCl2(25mM) 10iiL、5,PCR and3'PCRPrimer(10iiM) 0? 5iiL、cDNA模板 1iiL、PCR-GradeH20 補足總體積至 25iiL。 PCR反應條件為：5(TC2min-95°C2min- [95°C15s-6(TC30s]X40 -95°Clmin-55°C30s -9530s。
[0069] Real-timePCR采用比較CT法（AACT)計算基因表達量，以野生大豆GAPDH基因為內參基因，以未經處理的樣品作為對照。目標基因表達差異通過經過處理的樣本相對于每個時間點未經處理的樣本的倍數來表示。每個樣品包括3次生物學重復和技術重復，數據取3次重復的平均值，如果有一個數值的偏差比較大則取兩個數據的平均值。原始數據經標準化處理。標準化處理后的數據經T-test進行差異顯著性分析。相對表達量計算方 g.2_AACT= 2_(ACT處理-ACT對照）=2_[(CT處理目的基因-CT處理內參基因）-(CT對照目的基因-CT對照內參基因）]
[0070] 結果表明：GsSKP21基因在野生大豆根和葉組織中，均可以被鹽脅迫和堿脅迫誘導表達，如圖2所示。
[0071] 實施例4、轉基因擬南芥的獲得及鑒定
[0072] -、GsSKP21基因植物表達載體的構建及農桿菌的轉化
[0073] 1、以野生大豆RNA反轉錄的cDNA為模板，采用T-GsSKP21_sense和 T-GsSKP21-antisensePCR擴增GsSKP21基因的全長CDS區。引物分別引入Sail和BamHI 酶切位點。引物序列（下劃線代表酶切位點）如下：
[0074] T-GsSKP21-sense :5, -GCGTCGACATGTCAGAAATTGACATGGCAGTTAT-3'；
[0075] T-GsSKP21-antisense :5' -CGGGATCCTCAAGCGTTTCGCCTCAGAAAACTAT-3'。
[0076] 2、用限制性內切酶Sail和BamHI分別對獲得的目的片段和pCAMBIA-2300載體 (購于廣州吉賽生物科技有限公司，geneSeed798)進行雙酶切，將酶切產物進行連接，轉化大腸桿菌DH5a，經PCR檢測與酶切鑒定，得到植物表達載體，命名為pCAM2300-SKP21，并送交測序。
[0077] 測序結果表明：插入pCAMBIA-2300載體上Sail和BamHI酶切位點間的外源基因序列如SEQIDNo. 1所不，該基因編碼的蛋白的氣基酸序列如序列2所不。將測序正確的陽性克隆轉化至農桿菌LBA4404 (購于Invitrogen?，18313-015)，即獲得了重組農桿菌，并經PCR鑒定得到陽性轉化子，用于侵染擬南芥植株。
[0078] 二、GsSKP21轉基因的擬南芥的獲得及鑒定
[0079] 1、將擬南芥種子（哥倫比亞生態型）4°C春化3-7d后，播種于營養缽中（營養土、君子蘭土和蛭石按1:1:1混合），置于溫室中培養（22°C，光照16h/天），待擬南芥抽出初生苔后，剪去初生苔，待其抽出更多的次生苔且花開較盛時，可用于下述轉化。
[0080] 2、挑取轉化有pCAM2300-SKP21的重組農桿菌單菌落接種于5mLYEB(利福平 100mg/L、卡那霉素50mg/L)液體培養基中，28°C230rpm培養30h，按1 :100轉接入500mL 新鮮的YEB(利福平100mg/L、卡那霉素50mg/L)液體培養基中，28°C230rpm培養16-24h，測得00600約為1.5;41：5000印111離心101^11收集菌體，然后重懸于5001^的5%蔗糖溶液 (含 0? 02%silwet-77)中。
[0081] 3、將已經結夾的花蕾剪掉，把花序倒置浸入所得的含有重組農桿菌的蔗糖溶液 30s，轉化完畢后，將植株套上塑料袋保濕，水平放置于低光強度下生長24h，即可正常培養。一周后，重復侵染一次，可提高轉化效率。
[0082] 4、將侵染后所收集的I；代種子進行消毒春化后，播種于含有50mg/L卡那霉素的 1/2MS固體培養基上。待種子萌發后，將綠色的陽性植株（^代）移栽至營養缽（營養土，君子蘭土，蛭石按1 :1 :1混合）中培養，并收集種子進行代篩選。
[0083] 5、將1\代抗性苗移栽至營養缽中培養，提取基因組DNA，進行PCR鑒定。采用Trizol法提取轉基因擬南芥植株的RNA并反轉錄成。DNA，以。DNA為模板采用 GsSKP21_sense和GsSKP21_antisense引物序列，通過Real-timePCR對轉基因擬南芥的 GsSKP21基因進行表達量檢測。引物序列如下：
[0084] GsSKP21-sense :5, -GCGGCTATGTGAGTTGACATCT-3,；
[0085] GsSKP21-antisense :5' -CTCGCGTATCTCCTCTGGAG-3'。
[0086] 以擬南芥Actin2基因為內參基因，以野生型擬南芥樣品作為對照。目的基因表達通過轉基因植株與非轉基因植物樣本的差異倍數來表示。每個樣品包括3次生物學重復和技術重復，數據取3次重復的平均值，如果有一個數值的偏差比較大則取兩個數據的平均值。原始數據經標準化處理。標準化處理后的數據經T檢驗進行差異顯著性分析。
[0087] 6、將RT-PCR陽性的代轉基因擬南芥單株收種子，并分別播種于含50mg/L卡那霉素的1/2MS培養基上進行篩選，觀察T2代分離情況。如此重復，直至得到T3代轉基因擬南芥純合體株系。
[0088] 實施例5、轉基因擬南芥的抗逆功能分析
[0089] -、轉基因擬南介的抗喊實驗
[0090]1、種子萌發期分析
[0091] 選取飽滿的野生型擬南芥（哥倫比亞生態型）和GsSKP21超量表達的擬南芥純合體種子，用5%次氯酸鈉消毒液消毒lOmin后，于4°C春化3-7d。一部分播種于正常1/2MS 固體培養基上，觀察表型并統計萌發率；一部分播種于含有7mM、8mM和9mMNaHC03的1/2MS 固體培養基上，每天觀察表型并統計萌發率。所有實驗技術重復和生物學重復各3次。
[0092] 結果表明：GsSKP21超量表達擬南芥種子的萌發率比野生型的萌發率高，同時幼苗展葉率也高于野生型，說明GsSKP21超量表達擬南芥植株具有更強的抗堿能力，如圖3A、圖3B、圖3C所示。
[0093] 2、幼苗期分析
[0094] 選取飽滿的野生型擬南芥（哥倫比亞生態型）和GsSKP21超量表達擬南芥純合體種子，用5%次氯酸鈉消毒液消毒lOmin后，于4°C春化3d，播種于1/2MS固體培養基上。1 周后，挑選長勢一致的轉基因擬南芥和野生型擬南芥幼苗水平擺放于含有8mMNaHC03脅迫培養基的平皿中，堅直生長，12d后觀察各處理組和非處理組的擬南芥長勢，3次生物學重復。統計根長數據。所有實驗技術重復和生物學重復各3次。T檢驗進行差異顯著性分析。
[0095] 結果表明：GsSKP21超量表達擬南芥幼苗的根長比野生型植株長，葉子也比野生型植株大，說明GsSKP21超量表達擬南芥植株具有更強的抗堿能力，如圖3D和圖3E所示。
[0096] 3、成苗期分析
[0097] 選取飽滿的野生型擬南芥（哥倫比亞生態型）和GsSKP21超量表達擬南芥純合體種子，4°C春化3d后，播種于營養缽中（營養土，君子蘭土，蛭石按1 :1 :1混合），置于溫室中培養（22°C，光照16h/d)。對于堿處理的苗每3d澆灌一次150mMNaHC03溶液。14d后觀察各處理組和非處理組的擬南芥長勢統計存活率。所有實驗技術重復和生物學重復各3次。
[0098] 結果表明：GsSKP21超量表達擬南芥幼苗的生長狀態要比野生型植株好，并具有綠色的葉子，說明GsSKP21超量表達能夠提高植株的抗堿脅迫能力，如圖4所示。
[0099] 二、轉基因擬南芥對ABA敏感性的檢測
[0100] 1、種子萌發期分析
[0101] 選取飽滿的野生型擬南芥（哥倫比亞生態型）和GsSKP21超量表達擬南芥純合體種子，用5%次氯酸鈉消毒液消毒lOmin后，于4°C春化3-7d，一部分播種于正常1/2MS固體培養基上，觀察表型并統計萌發率；一部分播種于含有0. 8yM或0. 9yMABA的1/2MS固體培養基上，每天觀察表型并統計萌發率。所有實驗技術重復和生物學重復各3次。
[0102] 結果表明：GsSKP21超量表達擬南芥種子的萌發率比野生型的萌發率高，同時幼苗展葉率也高于野生型，說明GsSKP21超量表達降低了擬南芥植株對ABA的敏感性，如圖 5A、圖5B、圖5C所示。
[0103] 2、幼苗期分析
[0104] 選取飽滿的野生型擬南芥（哥倫比亞生態型）和GsSKP21超量表達擬南芥純合體種子，用5%次氯酸鈉消毒液消毒lOmin后，于4°C春化3d，播種于1/2MS固體培養基上。1 周后，挑選長勢一致的轉基因和野生型擬南芥幼苗水平擺放于含有20iiM或30iiMABA脅迫培養基的平皿中，堅直生長，12d后觀察各處理組和非處理組的擬南芥長勢，3次生物學重復。統計根長數據。所有實驗技術重復和生物學重復各3次。T檢驗進行差異顯著性分析。
[0105] 結果表明：GsSKP21超量表達擬南芥幼苗的根長比野生型植株長，葉子也比野生型植株大，說明GsSKP21超量表達降低了轉基因擬南芥植株對ABA的敏感性，如圖ro和圖 5E所示。
[0106] 3、非生物脅迫及ABA相關Marker基因的表達量分析
[0107] 將14日齡野生型和超量表達植株擬南芥分別置于100yMABA條件下處理0h、6h 后迅速剪取植株幼嫩的部分，置于_80°C保存。采用Trizol法提取野生型和轉基因擬南芥植株的RNA并反轉錄成cDNA，以擬南芥Actin2基因為內參基因，以野生型擬南芥未處理 (Oh)樣品作為對照。進行Real-timeRT-PCR分析及數據處理。T檢驗進行差異顯著性分析。引物序列如表1所示。
[0108] 表1弓丨物序列
[0109]
[0110]

【權利要求】
1. 蛋白質，是如下a)或b)的蛋白質： a) 由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質； b) 將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關的蛋白質。
2. 與權利要求1所述蛋白質相關的生物材料，為下述B1)至B3)中的任一種： B1)編碼權利要求1所述蛋白的核酸分子； B2)含有B1)所述核酸分子的重組載體； B3)含有B1)所述核酸分子的重組菌、或含有B2)所述重組載體的重組菌。
3. 根據權利要求2所述的相關生物材料，其特征在于：B1)所述核酸分子的核苷酸序列是序列表中序列1。
4. 權利要求1所述蛋白質、或權利要求2或3所述相關生物材料在提高植物抗逆性中的應用。
5. 根據權利要求4所述的應用，其特征在于：所述抗逆性為抗堿脅迫。
6. -種構建轉基因植物的方法，包括如下步驟：使權利要求1所述蛋白質在出發植物中過表達，進而使植物的抗逆性提高和/或使植物對ABA的敏感性降低。
7. 根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述使權利要求1所述蛋白質在受體植物中過表達的方法為：向出發植物中導入權利要求1所述蛋白質的編碼基因，得到轉基因植物；轉基因植物與出發植物相比，抗逆性提高和/或對ABA的敏感性降低。
8. 根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述蛋白質的編碼基因是序列表序列1中第1-1041位核苷酸的DNA分子。
9. 根據權利要求6-8所述的方法，其特征在于：所述抗逆性為抗堿脅迫。
10. 根據權利要求6-9中任一所述的方法，其特征在于：所述出發植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述雙子葉植物具體為擬南芥。
【文檔編號】C12N15/29GK104387461SQ201410577857
【公開日】2015年3月4日申請日期:2014年10月24日優先權日:2014年10月24日
【發明者】朱延明, 孫曉麗, 劉艾林, 端木慧子, 肖佳雷, 于洋, 孫明哲, 段香波申請人:東北農業大學, 黑龍江八一農墾大學

完整全部詳細技術資料下載