以作物秸稈漚浸液培養盔形舟形藻的培養基及培養方法

以作物秸稈漚浸液培養盔形舟形藻的培養基及培養方法
【專利摘要】本發明公開了一種作物秸稈漚浸液制備方法及其在水產養殖業上的應用技術，屬水產養殖領域。盔形舟形藻是底棲海洋動物刺參、鮑魚重要餌料，傳統上采用湛江水產學院硅藻培養液配方且采用敞口開放水泥池粗放培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，現采用封閉式水泥池充氣培養，以作物秸稈漚浸液為主要氮源并在培養基中添加了適量硝酸銨，磷酸二氫鈉，丙酮酸鹽，檸檬酸鉀，甘氨酸甜菜堿等營養成分，不僅可廢物利用，還可獲得有重要餌料價值的微藻。有機肥和無機肥混合使用，營養更全面、均衡，操作方便，靈活掌握，可實現工廠化、規模化生產，成本低，藻產量提高340％。
【專利說明】以作物秸稈漚浸液培養盔形舟形藻的培養基及培養方法

【技術領域】
[0001]本發明屬于水產養殖領域，尤其涉及一種以沼氣池廢液為原料培養直舟形藻的培養基及培養方法。

【背景技術】
[0002]我國是糧食生產大國，也是秸桿生產大國。據統計，我國每年可生成7億多噸秸桿。作物光合產物一半在果實中，一半在秸桿里，秸桿中蘊藏著豐富的能量。然而，人們常重視果實而忽視秸桿，每年夏秋冬之際，總有大量小麥、玉米秸桿在田間焚燒，產生濃重煙霧，嚴重污染農村環境，甚至殃及城市。
[0003]秸桿是成熟作物莖葉部分總稱，包括小麥、水稻、玉米、薯類、油料、棉花、甘蔗和其它作物收獲籽實后的剩余部分，富含氮、磷、鉀、鈣、鎂和有機質，是一種多用途可再生生物資源，也是一種粗飼料。特點是粗纖維含量高(30-40%)并含有木質素，木質素雖不能為豬、雞所利用，但可被反芻動物牛、羊消化吸收。
[0004]我國開發利用作物秸桿歷史悠久，但以前農業生產水平低，秸桿數量少，除少量用于墊圈、喂養牲畜、部分用于堆慪肥外，大部分用作燃料。隨著現代農業發展，我國糧食產量大幅提高，秸桿數量增多，加之省柴節煤技術推廣，燒煤和液化氣普及，農村富余秸桿大量堆積。隨農業機械化水平提高，秸桿利用由原來的堆慪肥轉變為直接還田，秸桿還田有堆慪還田、過腹還田、直接還田等多種方式。過腹還田是秸桿經飼喂后變為糞肥還田，堆慪還田是秸桿與糞肥的堆慪。
[0005]現在全國年秸桿還田量超過一億噸，約占秸桿總量20%。秸桿直接還田方式有秸桿粉碎還田、覆蓋還田和高留茬還田。目前推廣面積最大的高留茬還田，約占秸桿直接還田總面積60%，機械粉碎翻壓和覆蓋還田分別占22%和18%。秸桿還田已經成為我國沃土工程和豐收計劃的重要內容。除了還田施肥，秸桿還可作粗飼料喂牛、羊，也可以用作蘑菇等食用菌培養基，還可以發酵用以生產燃氣，沼渣能做有機肥。在眾多利用方式中，利用秸桿培育食用菌和作為生物質能源近來最受業內關注。但農業部調查顯示，我國農作物秸桿廢棄及焚燒量約為2.15億噸，占秸桿資源總量31% ;而作為食用菌基料僅占1500萬噸，為總量 2.14%。
[0006]盡管各地秸桿綜合利用取得了一定成效，但秸桿能源化總體利用水平較低，秸桿開發企業規模小，產業化水平不高，市場競爭力不強。究其原因，秸桿遍布廣大農村，來源分散，自身密度小，易腐爛，收集、運輸和儲存困難，產品附加值低，技術不成熟，效益低，操作麻煩，費時費力，不能充分發揮秸桿開發潛力。為了克服這些缺點，我發明了一種利用作物秸桿慪浸液培養盔形舟形藻的方法，實驗證明，用該法培養盔形舟形藻，藻生長快，產量高，品質優良，不易污染，操作方便，效益高，原料充沛，廢物利用，為秸桿應用開辟了新途徑，秸桿能發揮出更大經濟價值。
[0007]盔形舟形藻是底棲硅藻的一種，是底棲性海洋經濟動物重要餌料。目前，刺參、鮑魚的育苗、保育對盔形舟形藻等底棲硅藻有很大的依賴性，藻的產量常常直接影響刺參、鮑魚等海珍品的生產。與某刺參專用配合飼料相比，以新鮮盔形舟形藻為餌的刺參平均日生長率為4.3%，成活率高達99.57%，且免疫細胞吞噬活動活躍性明顯高于配合飼料組，刺參體態健康，攝食活動明顯，排便量多，運動活躍。以配合飼料為館的刺參成活率僅有83.83%，此組刺參攝食率低，排便量小，活動較少。總之，盔形舟形藻作為刺參餌料效果優于配合飼料。盔形舟形藻細胞兩側對稱，殼面橢圓形，末端頭狀、鈍圓，中央軸區狹窄，殼逢發達，具中央結節和端結節，殼面具線紋或布紋，色素體片狀，2個。淡水、海水、半咸水中均有。
[0008]盔形舟形藻傳統上采用湛江水產學院硅藻培養液配方且采用敞口的開放水泥池粗放培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，工作量大，現在我采用封閉式水泥池充氣培養，以作物秸桿慪浸液為主要氮源并在培養基中添加了適量硝酸銨，磷酸二氫鈉，脯氨酸，丙酮酸鹽，檸檬酸鉀，甘氨酸甜菜堿，谷氨酸鈉，乙酸鈉，甘露醇，葡萄糖酸鹽，SLA溶液，VA溶液，920植物生長刺激素，人尿等營養成分，不僅廢物利用，變廢為寶，而且可獲得有重要餌料價值的微藻。有機肥和無機肥混合使用，營養更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，可實現微藻養殖自動化、工廠化、程序化、規模化生產，成本低，效益高，盔形舟形藻生長速度和產量大幅提高，培養周期縮短，產量提高340%。


【發明內容】

[0009]為了克服盔形舟形藻傳統培養方法的缺點，本發明提供了一種作物秸桿慪浸液制備方法，具體方法如下:建一水泥池，長10米，寬5米，深1.3米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光。底部與地面齊平，在底部一角安裝一個水龍頭。加注池塘水至水深100厘米，先將玉米秸、稻草、麥秸、麥穰、地瓜秧、花生秧、豆秸、棉花秸等用鍘刀鍘成4-6厘米長，按每一噸水加入100斤秸桿的量加入3種不同作物秸桿(三種作物秸桿重量比是1:1: 1)，再按每一噸水加入5公斤牛糞、3公斤豬糞、0.5公斤生石灰、0.4公斤新鮮酒糟的量依次加入牛糞、豬糞、生石灰和酒糟，攪拌均勻，自然慪浸和發酵，每隔3天用耙子攪拌一次。到第30天，加注部分池塘水至原來的水深，以彌補水分的揮發，繼續浸泡。到第45天，從底部的水龍頭將浸泡液放出，靜置、沉淀24小時后,棄沉洛,取上清液100目篩絹過濾,取清液加熱煮沸30分鐘，以殺死其中的細菌、病毒等微生物，冷卻、沉淀、靜置24小時，取上清液，即為秸桿慪浸液，裝入磨口塞試劑瓶或黑色塑料桶，密封，置于4°C冰箱或冷庫保存，備用。
[0010]一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的培養基，配方如下:
[0011 ] 秸桿慪浸液95毫升，硝酸銨4毫克，磷酸二氫鈉7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸鹽5毫克，檸檬酸鉀2毫克，甘氨酸甜菜堿12毫克，谷氨酸鈉4毫克，乙酸鈉4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸鹽9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生長刺激素10國際單位，人尿1.5毫升，次氯酸鈉消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H201800毫克，CoC12.6H20250 毫克，NiC12.6H2010 毫克，CuCl2.2H2010 毫克，MnCl2.4H2070 毫克，ZnC12100毫克，H3B03500毫克，Na2Mo04.2H2030毫克，蒸餾水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，鹽酸硫胺素30毫克，鹽酸吡哆醇10毫克，維生素B12 5毫克，煙酸35毫克，對氨基苯甲酸20毫克，泛酸鈣10毫克，蒸餾水100毫升。
[0012]一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，具體步驟如下:
[0013]建一水泥池，長200厘米，寬100厘米，深65厘米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光，有利于藻光合作用，底部與地面齊平，在底部一角安一個地漏，下面連接一個水龍頭，池上面安置一塊玻璃，將水泥池蓋住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4個孔，其中2個孔穿入2根電源導線，導線末端各連接一個40瓦三基色燈，還有2個孔，分別穿入充氣管和排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑8毫米，將水泥池先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基至水深30厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的盔形舟形藻接種，接種密度6 X 14Cell/mL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，40厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:氨氣=92%: 7%: 1%,白天連續充氣，夜間行間隔充氣，即充氣30分鐘，停止30分鐘，如此反復，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強度4000-12000LUX，夜間打開三基色燈進行照明，培養的前6天，水泥池上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-7000LUX，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第9天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基25升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將水泥池用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；
[0014]所述消毒液由以下重量比的物質組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時,200篩絹過濾,將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0015]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0016]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
[0017]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
[0018]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0019]有益結果
[0020]盔形舟形藻傳統上采用湛江水產學院硅藻培養液配方且采用敞口的開放水泥池粗放培養，培養液成分單調，生長慢，易污染，成本高，效益低，操作費力，工作量大，現在我采用封閉式水泥池充氣培養，以作物秸桿慪浸液為主要氮源并在培養基中添加了適量硝酸銨，磷酸二氫鈉，脯氨酸，丙酮酸鹽，檸檬酸鉀，甘氨酸甜菜堿，谷氨酸鈉，乙酸鈉，甘露醇，葡萄糖酸鹽，SLA溶液，VA溶液，920植物生長刺激素，人尿等營養成分，不僅可以廢物利用，變廢為寶，而且可獲得有重要餌料價值的微藻，一舉多得。有機肥和無機肥混合使用，營養更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，可實現自動化、工廠化、程序化、規模化生產，成本低，效益高，盔形舟形藻生長速度和產量大幅提高，培養周期縮短，產量提高340 %。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為盔形舟形藻形態結構圖；
[0022]其中附圖標記為:1中央結節，2端結節，3殼縫，4細胞壁；
[0023]圖2為利用封閉式水泥池充氣培養盔形舟形藻方法圖；
[0024]其中附圖標記為:5排氣管，6散氣石，7水龍頭，8藻液，9三基色燈，10充氣管。

【具體實施方式】
[0025]一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的培養基，配方如下:
[0026]秸桿慪浸液95毫升，硝酸銨4毫克，磷酸二氫鈉7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸鹽5毫克，檸檬酸鉀2毫克，甘氨酸甜菜堿12毫克，谷氨酸鈉4毫克，乙酸鈉4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸鹽9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生長刺激素10國際單位，人尿1.5毫升，次氯酸鈉消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H201800毫克，CoC12.6H20250 毫克，NiC12.6H2010 毫克，CuCl2.2H2010 毫克，MnCl2.4H2070 毫克，ZnC12 100毫克，H3B03 500毫克，Na2Mo04.2H2030毫克，蒸餾水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，鹽酸硫胺素30毫克，鹽酸吡哆醇10毫克，維生素B12 5毫克，煙酸35毫克，對氨基苯甲酸20毫克，泛酸鈣10毫克，蒸餾水100毫升。
[0027]—種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，具體步驟如下:
[0028]建一水泥池，長200厘米，寬100厘米，深65厘米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光，有利于藻光合作用，底部與地面齊平，在底部一角安一個地漏，下面連接一個水龍頭，池上面安置一塊玻璃，將水泥池蓋住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4個孔，其中2個孔穿入2根電源導線，導線末端各連接一個40瓦三基色燈，還有2個孔，分別穿入充氣管和排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑8毫米，將水泥池先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基至水深30厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的盔形舟形藻接種，接種密度6 X 14Cell/mL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，40厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:氨氣=92%: 7%: 1%,白天連續充氣，夜間行間隔充氣，即充氣30分鐘，停止30分鐘，如此反復，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強度4000-12000LUX，夜間打開三基色燈進行照明，培養的前6天，水泥池上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-7000LUX，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第9天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基25升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將水泥池用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；
[0029]所述消毒液由以下重量比的物質組成--每100份85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時,200篩絹過濾,將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
[0030]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0031]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
[0032]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
[0033]優選地，對所述水泥池，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
[0034]作物秸桿慪浸液制備方法:建一水泥池，長10米，寬5米，深1.3米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光。底部與地面齊平，在底部一角安裝一個水龍頭。加注池塘水至水深100厘米，先將玉米秸、稻草、麥秸、麥穰、地瓜秧、花生秧、豆秸、棉花秸等用鍘刀鍘成4-6厘米長，按每一噸水加入100斤秸桿的量加入3種不同作物秸桿(三種作物秸桿重量比是1:1:1)，再按每一噸水加入5公斤牛糞、3公斤豬糞、0.5公斤生石灰、0.4公斤新鮮酒糟的量依次加入牛糞、豬糞、生石灰和酒糟，攪拌均勻，自然慪浸和發酵，每隔3天用耙子攪拌一次。到第30天，加注部分池塘水至原來的水深，以彌補水分的揮發，繼續浸泡。到第45天，從底部的水龍頭將浸泡液放出，靜置、沉淀24小時后，棄沉渣，取上清液100目篩絹過濾，取清液加熱煮沸30分鐘，以殺死其中的細菌、病毒等微生物，冷卻、沉淀、靜置24小時，取上清液，即為秸桿慪浸液，裝入磨口塞試劑瓶或黑色塑料桶，密封，置于4°C冰箱或冷庫保存，備用。
[0035]920植物生長刺激素為白色結晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小時)，再加5倍體積的蒸餾水稀釋。
[0036]次氯酸鈉消毒海水方法:取海水，脫脂棉過濾，按I立方米海水中加入漂白粉75克的量加入漂白粉，使海水中有效氯含量達到20mg/L，用空氣壓縮機強力充氣12小時后，用硫代硫酸鈉中和余氯。硫代硫酸鈉量由余氯的多少來確定，直到滴入淀粉碘化鉀液不變色為止。
[0037]接種用的盔形舟形藻預先進行提純(本領域常規方法，只要可實現提純即可，例如凱氏提取法)，以確保接種時藻種處于生長旺盛的指數生長期。
[0038]各種無機營養鹽和維生素需預先配成母液且置于4°C冰箱或冷庫冷藏保存備用，放置時間不要超過30天。
[0039]人尿制備方法:取人尿1000毫升，燒瓶煮沸15分鐘后，冷卻、沉淀24小時，棄沉渣，取上清液，裝入棕色磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱保存，備用。
[0040]各種營養鹽要按配方中提供的順序依次加入，同時不斷攪拌，以免發生化學反應。
[0041]所用化學藥品純度均需化學純級別。
[0042]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。
【權利要求】
1.一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的培養基，其特征在于配方如下: 稻桿慪浸液95暈升,硝酸銨4暈克,磷酸二氫鈉7暈克,脯氨酸2暈克,丙酮酸鹽5暈克，檸檬酸鉀2毫克，甘氨酸甜菜堿12毫克，谷氨酸鈉4毫克，乙酸鈉4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖酸鹽9毫克，SLA溶液I毫升，VA溶液1.2毫升，920植物生長刺激素10國際單位，人尿1.5毫升，次氯酸鈉消毒海水1000毫升，其中SLA溶液配方:FeC12.4H20 1800毫克，CoC12.6H20 250 毫克，NiC12.6H20 10 毫克，CuC12.2H20 10 毫克，MnC12.4H2070毫克，ZnC12 100毫克，H3B03 500毫克，Na2Mo04.2H20 30毫克，蒸餾水1000毫升，VA溶液配方:生物素10毫克，鹽酸硫胺素30毫克，鹽酸吡哆醇10毫克，維生素B12 5毫克，煙酸35毫克，對氨基苯甲酸20毫克，泛酸鈣10毫克，蒸餾水100毫升。
2.一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于具體步驟如下: 建一水泥池，長200厘米，寬100厘米，深65厘米，混磚結構，東西走向，以接受更多陽光，有利于藻光合作用，底部與地面齊平，在底部一角安一個地漏，下面連接一個水龍頭，池上面安置一塊玻璃，將水泥池蓋住，玻璃厚度4毫米，玻璃上打上4個孔，其中2個孔穿入2根電源導線，導線末端各連接一個40瓦三基色燈，還有2個孔，分別穿入充氣管和排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑8毫米，將水泥池先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基至水深30厘米，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的盔形舟形藻接種，接種密度6X 14Cell/mL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，40厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:氨氣=92%: 7%: 1%,白天連續充氣，夜間行間隔充氣，即充氣30分鐘，停止30分鐘，如此反復，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強度4000-12000LUX，夜間打開三基色燈進行照明，培養的前6天，水泥池上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-7000LUX，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第9天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基25升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第12天舟形藻密度增加至350 X 14ceIΙ/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將水泥池用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養； 所述消毒液由以下重量比的物質組成:每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料:土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法:將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時,200篩絹過濾,將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2: I: I ;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4°C冰箱備用。
3.根據權利要求2所述的一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4.根據權利要求2所述的一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
5.根據權利要求2所述的一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
6.根據權利要求2所述的一種以作物秸桿慪浸液為主要氮源培養盔形舟形藻的方法，其特征在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進行藻類培養。
【文檔編號】C12N1/12GK104388313SQ201410563143
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月22日 優先權日:2014年10月22日
【發明者】王培磊 申請人:臨沂大學