一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法。所述的檢測方法包括以下步驟：以無菌操作取樣品加水稀釋震蕩混勻，做成均勻稀釋液，再進一步加水稀釋；取滅菌吸管吸取不同濃度的均勻稀釋液，接種于TTC營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于TTC營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻；同時取未加入任何樣品的TTC營養瓊脂平板做空白對照；對加有樣品菌液及空白對照的TTC營養瓊脂平板，待瓊脂凝固后，翻轉平板，置于水浴鍋內進行培養，進行菌落計數。.本發明在將樣品稀釋液接種于培養基中后進行培養時，培養溫度控制在45-47℃，可使菌液更好的生長繁殖，整個操作遵循無菌操作，檢測結果更真實可靠。
【專利說明】一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于食品檢測領域，具體涉及一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法。
【背景技術】
[0002]發酵乳制品口感獨特，營養豐富，受到人們的熱切追捧。發酵乳制品主要發酵菌乳酸菌對人體健康有益，而凡能發酵碳水化合物產物乳酸的細菌統稱為乳酸菌。乳酸菌是一種革蘭氏陽性菌，根據其種系進化過程中形成的不同生化指標可將其分為:低％含量組，如乳酸桿菌屬、腸球菌屬及乳酸球菌屬等，高％含量的雙歧桿菌，這些菌種形態結構、代謝特征及生理學特點等均不這完全相同。人類及其他動物體內如腸道、陰道黏膜等部位均天然存在著乳酸菌。乳酸菌可幫助調節腸道微生物平衡，促進營養吸收，可改善肝功能，防止乳糖不耐癥，還有抗癌及抗衰老等作用。將乳酸菌用于食品中，可提高食品附加值及保藏性。正因為乳酸菌的上述優點，目前，乳酸菌已作為益生菌在乳制品中廣泛添加，同時，也廣泛用于藥品領域中。此外，乳酸菌在工業領域中也有廣泛應用，如用其發酵產生蘋果酸及乳酸來釀造蘋果酒及葡萄酒。乳酸菌數量是評價該類產品營養價值及保健作用的重要指標，目前，市場流通的產品中乳酸菌的含量多數達到109
0^11/1111 左右。
[0003]雖然乳酸菌在生活各大領域中均有廣泛應用，但隨著食物種類的增多，乳酸菌應用也帶來了一系列的安全問題，其質量問題也日益嚴重化與多樣化。目前，市場上發酵乳制品種類繁多，且均宣稱含有多種乳酸菌，給消費者的選擇及相關部門的質量監督均帶來較大困難。因此，對食品尤其是發酵乳制品中的乳酸菌種類進行定性檢測以更好的對發酵乳制品進行質量管理，保障消費者的權利具有重要意義。菌落總數的測定可以了解產品在生產、加工及包裝及貯存、運輸等過程中受外界污染的情況，研究顯示，乳酸菌乳制品中的污染菌在產品貨架期內可以存活，對消費者的健康造成了極大的威脅。因此，對乳酸菌乳制品的污染菌總數進行檢測對保證乳酸菌乳制品的質量及消費者的健康均具有重大意義。而乳酸菌乳制品本身含有大量的活性乳酸菌，給其污染菌的菌落計數帶來較大困難。目前，日本《乳菌菌粉末清涼飲料菌落總數測定》用添加劑青霉素6鉀的葡萄糖瓊脂培養基與添加4%氯化鈉的80？平板計數瓊脂培養基上生長菌澆的差值作為菌落總數，但這種方法培養基添加的選擇性抑制成分對檢測具有很大的影響，檢測結果靈敏度及準確度均較低，且操作繁瑣。為此，本發明提供一種檢測周期短，檢測結果準確的乳酸菌乳制品中除乳酸菌外的菌落總數的檢測方法。
【發明內容】
[0004]本發明的目的就是針對上述現有技術中存在的缺陷提供一種一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法。
[0005]本發明的技術方案如下:
一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，包括以下步驟: (1)樣品預處理:以無菌操作取5-1001樣品加水50-10001稀釋震蕩混勻，做成均勻稀釋液，再進一步加水稀釋；
(2)樣品接種:取的滅菌吸管吸取步驟(1)中制得的不同濃度的均勻稀釋液，接種于丁扣營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用1-3“的無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于丁扣營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻；
(3)空白對照:取未加入任何樣品的丁扣營養瓊脂平板做空白對照；
(4)待步驟(2)與步驟(3)中的營養瓊脂平板的瓊脂凝固后，翻轉平板，置于水浴鍋內進行培養，進行菌落計數。
[0006]優選的，步驟(1)中所加入的水為滅菌水。
[0007]優選的，步驟(1)中所述的均勻稀釋液中樣品與水的體積比為1:10，再進一步加水稀釋的均勻稀釋液的濃度分別為1:100，1:1000。
[0008]優選的，步驟(2)與步驟(3)中所述的111:營養瓊脂的組分為:蛋白胨10.08/^1,牛肉浸粉3.0，氯化鈉5.0，瓊脂15.0,17(:,邱值為7.4-7.6^
[0009]優選的，步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸餾水中，并在1211條件下滅菌15-30111111。
[0010]優選的，步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂平板中的含量為3-511^/1111。
[0011]優選的，步驟(4)中的培養時間均為46-4811，水浴鍋的溫度均為46-481。
[0012]步驟(4)中的菌落計數的具體方法為:選擇菌落數在30-300之間的平板作為菌落總數的測定標準，對于100以內的菌落數，按實際菌落數，對于大于100的菌落數，采用2位有效數字，2位有效數字數的讀數四舍五入，平板內有鏈狀菌落生長時，若僅有一條鏈，可視為一個菌落，若有不同來源的幾條鏈，將每條鏈作為一個菌落計數。
本發明與現有技術相比，具有以下有益效果:
1.本發明在將樣品稀釋液接種于培養基中后進行培養時，培養溫度控制在45-471，避免了過高的溫度影響細菌生長，也避免了過低的溫度使瓊脂易于凝固，導致瓊脂不易于菌液混合充分，可使菌液更好的生長繁殖。
[0013]2.本發明中所有操作及所有相關試劑均嚴格執行無菌原則，避免了操作過程中帶入的污染菌對檢測結果的影響，檢測結果更真實可靠。
[0014]2.本發明將樣品菌液采用無菌水稀釋成一系列不同濃度的稀釋液，同時進行空白對照，保證了菌落計數的準確性與靈敏度。
【具體實施方式】
[0015]本發明通過以下具體實施例更詳細的說明本發明，可以使本專業技術人員更全面的了解本發明，但不以任何方式限制本發明。
[0016]實施例1
一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:以無菌操作取5“樣品加滅菌水50“稀釋震蕩混勻，做成1:10的均勻稀釋液，再進一步加滅菌水稀釋為1:100，1:1000的均勻稀釋液；
(2)樣品接種:取的滅菌吸管吸取步驟(1)中制得的不同濃度的均勻稀釋液，接種于！'IX:營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用的無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于！'扣營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻；
(3)空白對照:取未加入任何樣品的丁扣營養瓊脂平板做空白對照；
(4)待步驟(2)與步驟(3)中的營養瓊脂平板的瓊脂凝固后，翻轉平板，置于461水浴鍋內培養46卜，進行菌落計數。
[0017]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂的組分為:蛋白胨10.08加1，牛肉浸粉3.0，氯化鈉5.0，瓊脂15.0,11(:,邱值為7.4。
[0018]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸餾水中，并在121/(11條件下滅菌15111111。
[0019]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂平板中11(:的含量為31^加1。
[0020]步驟(4)中的菌落計數的具體方法為:選擇菌落數在30-300之間的平板作為菌落總數的測定標準，對于100以內的菌落數，按實際菌落數，對于大于100的菌落數，采用2位有效數字，2位有效數字數的讀數四舍五入，平板內有鏈狀菌落生長時，若僅有一條鏈，可視為一個菌落，若有不同來源的幾條鏈，將每條鏈作為一個菌落計數。
[0021]實施例2
一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:以無菌操作取10“樣品加滅菌水10001稀釋震蕩混勻，做成1:10的均勻稀釋液，再進一步加滅菌水稀釋為1:100, 1:1000的均勻稀釋液；
(2)樣品接種:取的滅菌吸管吸取步驟(1)中制得的不同濃度的均勻稀釋液，接種于丁扣營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用3“的無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于11(:營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻；
(3)空白對照:取未加入任何樣品的丁扣營養瓊脂平板做空白對照；
(4)待步驟(2)與步驟(3)中的營養瓊脂平板的瓊脂凝固后，翻轉平板，置于481水浴鍋內培養48卜，進行菌落計數。
[0022]步驟(2)與步驟(3)中所述的111:營養瓊脂的組分為:蛋白胨10.(^/1111，牛肉浸粉3.0，氯化鈉5.0，瓊脂15.0,11(:,邱值為7.6。
[0023]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸餾水中，并在12條件下滅菌30111111。
[0024]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂平板中的含量為3-5呢加1。
[0025]步驟(4)中的菌落計數的具體方法為:選擇菌落數在30-300之間的平板作為菌落總數的測定標準，對于100以內的菌落數，按實際菌落數，對于大于100的菌落數，采用2位有效數字，2位有效數字數的讀數四舍五入，平板內有鏈狀菌落生長時，若僅有一條鏈，可視為一個菌落，若有不同來源的幾條鏈，將每條鏈作為一個菌落計數。
[0026]實施例3
一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:以無菌操作取8“樣品加滅菌水8001稀釋震蕩混勻，做成1:10的均勻稀釋液，再進一步加滅菌水稀釋為1:100，1:1000的均勻稀釋液；
(2)樣品接種:取的滅菌吸管吸取步驟(1)中制得的不同濃度的均勻稀釋液，接種于丁扣營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用2“的無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于11(:營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻；
(3)空白對照:取未加入任何樣品的丁扣營養瓊脂平板做空白對照；
(4)待步驟(2)與步驟(3)中的營養瓊脂平板的瓊脂凝固后，翻轉平板，置于471水浴鍋內培養47卜，進行菌落計數。
[0027]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂的組分為:蛋白胨10.08加1，牛肉浸粉3.0，氯化鈉5.0，瓊脂15.0,11(:,邱值為7.5。
[0028]步驟(2)與步驟(3)中所述的營養瓊脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸餾水中，并在12條件下滅菌20111111。
[0029]步驟(2)與步驟(3)中所述的III:營養瓊脂平板中11(:的含量為3-5呢加1。
[0030]步驟(4)中的菌落計數的具體方法為:選擇菌落數在30-300之間的平板作為菌落總數的測定標準，對于100以內的菌落數，按實際菌落數，對于大于100的菌落數，采用2位有效數字，2位有效數字數的讀數四舍五入，平板內有鏈狀菌落生長時，若僅有一條鏈，可視為一個菌落，若有不同來源的幾條鏈，將每條鏈作為一個菌落計數。
[0031]以上所述實施例只是本發明的較佳實例，并非來限制本發明實施范圍，故凡依本發明申請專利范圍所述的構造、特征及原理所做的等效變化或修飾，均應包括本發明專利申請范圍內。
【權利要求】
1.一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣品預處理:以無菌操作取5-10ml樣品加水50-100ml稀釋震蕩混勻，做成均勻稀釋液，再進一步加水稀釋； (2)樣品接種:取Iml的滅菌吸管吸取步驟(I)中制得的不同濃度的均勻稀釋液，接種于TTC營養瓊脂平板上，對滅菌吸管采用l-3ml的無菌生理鹽水沖洗，將沖洗液接種于TTC營養瓊脂平板上，將營養瓊脂平板轉動，使混勻均勻； (3)空白對照:取未加入任何樣品的TTC營養瓊脂平板做空白對照； (4)待步驟(2)與步驟(3)中的TTC營養瓊脂平板的瓊脂凝固后，翻轉平板，置于水浴鍋內進行培養，進行菌落計數。
2.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(O中所加入的水為滅菌水。
3.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(O中所述的均勻稀釋液中樣品與水的體積比為1:10，再進一步加水稀釋的均勻稀釋液的濃度分別為1:100，1:1000。
4.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(2)與步驟(3)中所述的TTC營養瓊脂的組分為:蛋白胨10.0g/ml，牛肉浸粉3.0，氯化鈉5.0,瓊脂 15.0, TTC, pH 值為 7.4-7.6。
5.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(2)與步驟(3)中所述的TTC營養瓊脂在使用前先按1:3的比例溶于蒸餾水中，并在121°C條件下滅菌15_30min。
6.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(2)與步驟(3)中所述的TTC營養瓊脂平板中TTC的含量為3-5mg/ml。
7.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(4)中的培養時間均為46-48h，水浴鍋的溫度均為46-48°C。
8.根據權利要求1所述的一種發酵乳制品中菌落總數的檢測方法，其特征在于，步驟(4)中的菌落計數的具體方法為:選擇菌落數在30-300之間的平板作為菌落總數的測定標準，對于100以內的菌落數，按實際菌落數，對于大于100的菌落數，采用2位有效數字，2位有效數字數的讀數四舍五入，平板內有鏈狀菌落生長時，若僅有一條鏈，可視為一個菌落，若有不同來源的幾條鏈，將每條鏈作為一個菌落計數。
【文檔編號】C12Q1/06GK104293879SQ201410558802
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月18日 優先權日:2014年10月18日
【發明者】郭狄 申請人:中山鼎晟生物科技有限公司