肉與肉制品中馬源成分的檢測方法及驢源成分的檢測方法
【專利摘要】本發明提供了一種用于檢測肉與肉制品中馬源成分的檢測方法與試劑盒，包括：如SEQ ID No.1所示的上游引物和如SEQ ID No.2所示的下游引物。本發明提供了一種用于檢測肉與肉制品中驢源成分的檢測方法與試劑盒，包括：如SEQ ID No.3所示的上游引物和如SEQ ID No.4所示的下游引物。選擇上述引物組對肉與肉制品中提取的DNA模板進行PCR擴增，具有較高的特異性，能夠保證檢測方法的靈敏度和準確性。
【專利說明】肉與肉制品中馬源成分的檢測方法及驢源成分的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于食品檢測【技術領域】，尤其涉及一種肉與肉制品中馬源成分的檢測方法 及驢源成分的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 隨著市場經濟的不斷深入發展，部分不法商販為了謀求不正當利益，在肉或肉制 品中摻雜其他價格便宜的肉種，在肉及肉制品市場出現了一種以次充好、以假亂真的現象。 肉或肉制品中摻有標稱以外的其他價格便宜的動物源性成分，有的甚至全部為標稱以外的 其他價格便宜的動物源性成分，這極大地損害了消費者的利益，擾亂了流通市場秩序和健 康發展，同時也對民族宗教信仰造成一定的潛在沖突。
[0003] 傳統一般采用感官方法對肉或肉制品的色澤、氣味、組織形狀等參數進行判斷，但 是其可靠性較差，尤其是添加了色素和芳香劑等添加劑或者經過其它加工處理的肉及肉制 品而言，感官方法判斷準確性更低。
【發明內容】
[0004] 有鑒于此，本發明的目的在于提供一種肉與肉制品中馬源成分的檢測方法及驢源 成分的檢測方法，本發明提供的檢測方法結果準確、可靠。
[0005] 本發明提供了一種用于檢測肉與肉制品中馬源成分的試劑盒，包括：如SEQ ID No. 1所示的上游引物和如SEQ ID No. 2所示的下游引物。
[0006] 本發明以Genbank上已經登錄公布的所有馬的Cytb基因序列為基礎，運用生物軟 件DnaStar進行序列比對分析，找出來自不同國家、地區、品種馬、的Cytb基因種內保守序 列區域，用于設計上下游擴增引物，將所設計出的各物種PCR擴增引物進行再次比對，排除 種間交叉性，保證擴增的特異性。同時，找出馬的Cytb基因序列中共有的同源序列，設計哺 乳動物檢測引物，用以對各檢測體系進行監控。最后，將獲得的各物種上下游擴增引物序列 提交Gembank，進行Blast確認，以確保所設計的引物序列對目前已經公布的DNA序列沒有 非特異性檢測擴增，并選定上游引物和下游引物。本發明選用特定的上游引物和下游引物 用于檢測肉與肉制品中的馬源成分，其具有良好的特異性，從而能夠實現對馬源成分的檢 測。
[0007] 以如SEQ ID No. 1所示的上游引物和如SEQ ID No. 2所示的下游引物進行PCR擴 增，其擴增位點及擴增片段大小如表1所示：
[0008] 表1馬源成分的擴增位點及擴增片段大小
[0009]
【權利要求】
1. 一種用于檢測肉與肉制品中馬源成分的試劑盒，其特征在于，包括：如SEQ ID No. 1 所示的上游引物和如SEQ ID No. 2所示的下游引物。
2. 根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述上游引物的濃度為0. ΙμΜ? 0. 5 μ Μ，所述下游引物的濃度為0. 1 μ Μ?0. 5 μ Μ。
3. -種肉與肉制品中馬源成分的檢測方法，包括以下步驟： 提取肉樣品或肉制品樣品的DNA ; 以所述DNA為模板進行PCR擴增，所述PCR擴增反應體系中的上游引物如SEQ ID No. 1 所示，下游引物如SEQ ID No. 2所示； 對所述PCR擴增產物進行電泳，鑒定所述擴增產物。
4. 根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，還包括： 對所述擴增產物進行酶切。
5. 根據權利要求3或4所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應體系中，所述 上游引物的濃度為〇. 1 μ Μ?0. 5 μ M，所述下游引物的濃度為0. 1 μ Μ?0. 5 μ M。
6. 根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應體系中，所述上游 引物的濃度為〇. 5 μ M，所述下游引物的濃度為0. 5 μ M。
7. -種用于檢測肉與肉制品中驢源成分的試劑盒，其特征在于，包括：如SEQ ID No. 3 所示的上游引物和如SEQ ID No. 4所示的下游引物。
8. 根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述上游引物的濃度為0. ΙμΜ? 0. 5 μ Μ，所述下游引物的濃度為0. 1 μ Μ?0. 5 μ Μ。
9. 一種肉與肉制品中驢源成分的檢測方法，包括以下步驟： 提取肉樣品或肉制品樣品的DNA ; 以所述DNA為模板進行PCR擴增，所述PCR擴增反應體系中的上游引物如SEQ ID No. 3 所示，下游引物SEQ ID No. 4所示； 對所述PCR擴增產物進行電泳，鑒定所述擴增產物。
10. 根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應體系中，所述上游 引物的濃度為〇. 1 μ Μ?0. 5 μ M，所述下游引物的濃度為0. 1 μ Μ?0. 5 μ M。
【文檔編號】C12Q1/68GK104250667SQ201410528241
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年10月9日 優先權日:2014年10月9日
【發明者】侯曉林, 王蕾, 陸彥, 孫英健, 張永紅 申請人:北京農學院