以沼氣池廢液為原料培養(yǎng)直舟形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用沼氣池廢液培養(yǎng)直舟形藻的方法，屬水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域。直舟形藻是鮑、海參、海膽、扇貝、貽貝、舔食螺類等海洋名貴動(dòng)物重要餌料，傳統(tǒng)采用f/2培養(yǎng)基配方且采用塑料薄膜袋培養(yǎng)，生長慢，易污染，易劃破，成本高，效益低，操作費(fèi)力，現(xiàn)采用白塑料桶充氣培養(yǎng)并在培養(yǎng)基中添加了沼氣池廢液，硅酸鈉，磷酸二氫鉀，蘋果酸鈉，檸檬酸鐵，量元素，吲哚乙酸，D-異抗壞血酸鈉，P-胡蘿卜素，萘乙酸，海泥浸出液等，廢物利用，變廢為寶，且可獲得有重要餌料價(jià)值的直舟形藻，有機(jī)和無機(jī)肥混合使用，營養(yǎng)更全面、均衡，操作方便，靈活掌握，塑料桶可重復(fù)利用，成本低，效益高，產(chǎn)量提高340%。
【專利說明】以沼氣池廢液為原料培養(yǎng)直舟形藻的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及一種利用沼氣池廢液培養(yǎng)直舟形藻的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 畜禽養(yǎng)殖中，大量糞、尿直接排放會(huì)導(dǎo)致周圍環(huán)境嚴(yán)重污染，為此，以沼氣生產(chǎn)為 主的能源生態(tài)型沼氣工程在養(yǎng)殖業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。盡管沼氣工程大大減少了養(yǎng)殖廢棄物 直接排放，但在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，沼氣生產(chǎn)中會(huì)產(chǎn)生大量沼氣廢液（簡稱沼液），如果不能 充分有效利用，會(huì)給周圍環(huán)境尤其是對水環(huán)境造成嚴(yán)重污染。沼液富含氮、磷等營養(yǎng)元素， 它的過度排放是造成水體富營養(yǎng)化和水環(huán)境污染的一個(gè)重要因素。
[0003] 沼液是有機(jī)物經(jīng)沼氣池制取沼氣后的液體殘留物，不僅含作物生長所必需的氮、 磷、鉀、微量元素、氨基酸等，而且含丁酸、吲哚乙酸、維生素B12等活性物質(zhì)，有促進(jìn)作物生 長和控制病害發(fā)生雙重作用。沼液含有豐富有機(jī)質(zhì)和較多的腐殖酸，既是一種優(yōu)質(zhì)基肥，也 是良好的土壤改良劑。沼液的施用可增加土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，增加土壤中的空隙度，協(xié)調(diào)土壤中 水、肥、氣、熱條件；同時(shí)沼液養(yǎng)分全面，緩急相濟(jì)，可協(xié)調(diào)植株內(nèi)激素平衡。沼液用作有機(jī)肥 的優(yōu)點(diǎn)有：有機(jī)營養(yǎng)與無機(jī)營養(yǎng)結(jié)合；大量元素與微量元素結(jié)合；肥效與藥效結(jié)合；速效與 緩效結(jié)合；植物體內(nèi)酶激活與土壤肥力有效性結(jié)合。大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與施用等價(jià)化肥 比較，施用沼液，蔬菜增產(chǎn)15-30%，糧食作物增產(chǎn)5-15%，經(jīng)濟(jì)作物增產(chǎn)15-20%，且作物 抗逆性增強(qiáng)，病蟲害降低，品質(zhì)提高，耐貯存。如種植蔬菜，可得環(huán)保型無公害蔬菜，深受廣 大菜農(nóng)和市民歡迎。隨著全球有機(jī)農(nóng)業(yè)發(fā)展，綠色食品市場需求量猛增，價(jià)格居高不下，沼 肥將有更廣闊的市場。
[0004] 另外，沼液用作淡水養(yǎng)殖肥料，不僅營養(yǎng)豐富，加快魚池浮游生物繁殖，耗氧量減 少，改善水質(zhì)，而且水面能保持茶褐色，易吸收光熱，提高水溫，加之沼液pH值為中性偏堿， 能使魚池保持中性，促進(jìn)魚類更好生長。總之，沼液是一種很好的養(yǎng)魚肥料。
[0005] 雖然沼液在作物種植和漁業(yè)上得到了廣泛應(yīng)用，但在海洋微藻特別是餌料微藻的 培養(yǎng)上的應(yīng)用極少，這限制了沼液的進(jìn)一步開發(fā)利用，而我的實(shí)驗(yàn)研究表明，沼液對海洋餌 料微藻直舟形藻的生長發(fā)育、產(chǎn)量提高有極好的效果，這為沼液的開發(fā)應(yīng)用開辟了新的道 路。
[0006] 餌料微藻是指需要借助顯微鏡才能觀察到的一類可以被海水動(dòng)物攝食并能滿足 它們營養(yǎng)需要的微型藻類。目前世界上常用的餌料微藻有20多種。我國海水育苗中常用 館料微藻主要有：娃藻門的牟氏角刺藻Cheatoceros muelleri、三角褐指藻Phaeodactylum trecornutum、中肋骨條藻Skeletonema costatum、底棲舟形藻Navicula sp·、底棲卵形藻 Cocconeis sp.;金藻類的綠光等鞭藻Isochrysis galbana及其3011品系和8701品系；綠 藻類的亞心形四片藻Tetraselmis subcordiformis、小球藻Chlorella sp.和藍(lán)藻類的純 頂螺旋藻Spirulina platensis，以及裸藻類的纖細(xì)裸藻Euglena gracilis等。其中直舟 形藻是鮑、海參、海膽、扇貝、泥蚶、魁蚶、貽貝、雜色蛤、舔食螺類等底棲性海洋名貴經(jīng)濟(jì)動(dòng) 物的重要餌料，特別是在、海參、海膽、扇貝育苗過程中，直舟形藻是海參、海膽、扇貝幼體最 重要、最喜食的開口餌料，對育苗成功與否有決定性作用。
[0007] 直舟形藻Navicula sp.隸屬硅藻門、羽紋綱、舟形藻目、舟形藻科、舟形藻屬。細(xì)胞 舟形至橢圓形，中部寬，兩端尖。殼面中線上有殼縫，能自由行動(dòng)?？v軸左右對稱，橫軸和殼 環(huán)軸也是左右對稱?？v軸最長，橫軸短，殼環(huán)軸一般短于橫軸，殼面花紋左右對稱，呈點(diǎn)紋。 殼中央有中央結(jié)節(jié)，兩端各有一端結(jié)節(jié)，向壁內(nèi)凸出，起加強(qiáng)硅質(zhì)細(xì)胞壁作用。沒有船骨突， 有復(fù)大孢子。色素體2-4個(gè)，板狀或塊狀。舟形藻屬是硅藻門種類最多的一個(gè)屬，有1850 種，中國有100多種。細(xì)胞單獨(dú)生活，也有少數(shù)群居于自己分泌的膠質(zhì)管內(nèi)，淡水、海水、半 咸水均有。本屬最早發(fā)現(xiàn)于新生代第三紀(jì)古新世，古老種類中尚有兩個(gè)種一直生活到現(xiàn)在。
[0008] 直舟形藻傳統(tǒng)上采用f/2培養(yǎng)基配方且采用塑料薄膜袋培養(yǎng)，生長慢，易污染，易 劃破，成本高，效益低，操作費(fèi)力，工作量大。為了克服直舟形藻傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的缺點(diǎn)，本 發(fā)明采用白塑料桶充氣培養(yǎng)并在培養(yǎng)基中添加了沼氣池廢液，硅酸鈉，磷酸二氫鉀，硝酸 銨，甘露醇，生長素貯液，碳酸氫鈉，蘋果酸鈉，檸檬酸鐵，P 1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸 鈉，谷氨酸鈉，苯甲酸鈉，硬脂酸鎂，羧甲基纖維素鈉，D-異抗壞血酸鈉，海藻酸丙二醇酯， β_胡蘿卜素，α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液等營養(yǎng)成分，不僅可以廢物利用，變廢 為寶，而且可獲得有重要餌料價(jià)值的直舟形藻，一舉多得，實(shí)在巧妙。有機(jī)肥和無機(jī)肥混合 使用，營養(yǎng)更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，塑料桶可重復(fù)利用，成本低，效益高，直舟 形藻生長速度和產(chǎn)量大幅提高，培養(yǎng)周期縮短，產(chǎn)量提高340%。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 為了克服直舟形藻傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種以沼氣池廢液為主要 原料培養(yǎng)直舟形藻的方法，配方如下：
[0010] 沼氣池廢液85毫升，硅酸鈉5毫克，磷酸二氫鉀8毫克，硝酸銨6毫克，甘露醇3毫 克，生長素液2暈升，碳酸氫鈉200暈克，蘋果酸鈉2暈克，朽 1檬酸鐵5暈克，P1微量兀素 溶液3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸鈉5毫克，谷氨酸鈉10毫克，苯甲酸鈉5毫克，硬脂酸鎂 8毫克，羧甲基纖維素鈉12毫克，D-異抗壞血酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β-胡 蘿卜素12暈克，α -萘乙酸〇. 2暈克，土壤浸出液1暈升，海泥浸出液1. 2暈升，二氧化氯 消毒海水1000毫升；
[0011] 其中，生長素貯液配方：生物素1毫克，維生素B1IOO毫克，煙酸0. 1毫克，對氨基 苯甲酸10毫克，蒸餾水1000毫升；
[0012] P1微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷1毫克，氯化鋅5毫克，氯 化銅40微克，氯化錳40毫克，氯化鐵10毫克，蒸餾水1000毫升；
[0013] 一種利用沼液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻方法，具體步驟如下：
[0014] 培養(yǎng)容器為容積25升白塑料桶，市場有售，食品級(jí)聚乙烯材料制成，無縫一體式 結(jié)構(gòu)，堅(jiān)固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻進(jìn)行光合作用。水桶頂部有一圓形蓋子，上有 旋絲，可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上3個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和 排氣管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米。還有一個(gè)孔穿入一根金屬導(dǎo)線，導(dǎo)線末端接一個(gè)25w節(jié)能 燈。將白塑料桶先用砂濾海水洗凈，再用工業(yè)用鹽酸浸泡、消毒10-15分鐘，然后用冷開海 水沖洗3遍，裝入所述的培養(yǎng)基15升，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的直舟形 藻接種，接種密度6 X 104cell/mL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，35厘米，頂端露 出蓋子10厘米，下端通過料管與散氣石連接，用以充氣（散氣石的作用是形成很小的氣泡， 避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞）；另一根較短，14厘米，兩端露出蓋子即可，用以排 氣；兩根玻璃管同樣粗細(xì)；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管 與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣：純二氧化碳：臭氧：甲 烷=92% : 6% : 1% : 1% ;連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室外 培養(yǎng)，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度4000-9000LUX ;夜間打開節(jié)能燈進(jìn)行 照明。培養(yǎng)的前6天，塑料桶上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強(qiáng)度維持在 2000-4000LUX，避免強(qiáng)烈陽光對細(xì)胞造成光傷害；第7天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì)胞 的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成；培養(yǎng)至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng) 基3升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，直舟形藻密度增加至 500 X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，將藻液倒出，將白塑料桶用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30 分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)；
[0015] 所述消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成：每100份85%乙醇中加入以下重量份的中 藥材和輔料：土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉 5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于 60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計(jì)烘干并粉 碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15 份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時(shí),200篩絹過濾,將清液 靜置沉淀36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混 合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比 例為重量比2 : 1 : 1;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0016] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒 10-20分鐘。
[0017] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎荆?消毒5-10分鐘。
[0018] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒， 消毒5-6分鐘。
[0019] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?毒，消毒2-3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類培 養(yǎng)。
[0020] 有益結(jié)果
[0021] 直舟形藻傳統(tǒng)上采用f/2培養(yǎng)基配方且采用塑料薄膜袋培養(yǎng)，生長慢，易污染，易 劃破，成本高，效益低，操作費(fèi)力，工作量大，現(xiàn)在采用白塑料桶充氣培養(yǎng)并在培養(yǎng)基中添加 了沼氣池廢液，硅酸鈉，磷酸二氫鉀，硝酸銨，甘露醇，生長素貯液，碳酸氫鈉，蘋果酸鈉，檸 檬酸鐵，P 1微量元素溶液，吲哚乙酸，乙酸鈉，谷氨酸鈉，苯甲酸鈉，硬脂酸鎂，羧甲基纖維素 鈉，D-異抗壞血酸鈉，海藻酸丙二醇酯，β-胡蘿卜素， α-萘乙酸，土壤浸出液，海泥浸出液 等營養(yǎng)成分，不僅可以廢物利用，變廢為寶，而且可獲得有重要餌料價(jià)值的直舟形藻，一舉 多得，實(shí)在巧妙。有機(jī)肥和無機(jī)肥混合使用，營養(yǎng)更加全面、均衡，操作方便，靈活掌握，塑料 桶可重復(fù)利用，成本低，效益高，直舟形藻生長速度和產(chǎn)量大幅提高，培養(yǎng)周期縮短，產(chǎn)量提 聞 340!%。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022] 圖1為直舟形藻形態(tài)結(jié)構(gòu)圖；
[0023] 其中附圖標(biāo)記為：1端結(jié)節(jié)，2中央結(jié)節(jié)，3細(xì)胞壁，4線紋，5殼縫；
[0024] 圖2為利用沼氣池廢液培養(yǎng)直舟形藻方法圖；
[0025] 其中附圖標(biāo)記為：6排氣管，7白塑料桶，8藻液，9散氣石，10節(jié)能燈，11充氣管。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 沼氣池廢液預(yù)處理方法：沼液使用前應(yīng)進(jìn)行預(yù)處理，方法是：取沼液原液5000毫 升，100目篩絹過濾，取清液，用離心機(jī)離心4分鐘，轉(zhuǎn)速4500轉(zhuǎn)/分鐘，棄殘?jiān)?，取上清液?加熱，煮沸30分鐘，殺死其中細(xì)菌、病毒等微生物，冷卻、靜置、沉淀24小時(shí)，再取上清液即 為沼液，裝入磨口塞試劑瓶，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱或冷庫保存?zhèn)溆谩?br>
[0027] 白塑料桶消毒方法：白塑料桶先用砂濾海水洗凈，再用工業(yè)用鹽酸浸泡、消毒 10-15分鐘,然后用冷開海水沖洗3遍。
[0028] 二氧化氯消毒海水的方法：海水用脫脂棉過濾，按每立方米海水加三氧化氯水劑 5毫升的量加入三氧化氯水劑，充分?jǐn)嚢?，溶解、消?小時(shí)，后用空氣壓縮機(jī)強(qiáng)力充氣，使 海水充分翻滾60分鐘，即可用于養(yǎng)藻。
[0029] 土壤浸出液制備方法：取樹林中松散、富含有機(jī)質(zhì)的上層土壤1公斤，加純水2000 毫升，煮沸30分鐘，在暗處放置2天，過濾，濾液600毫升加純水400毫升使用。
[0030] 因檸檬酸鐵（FeC6H5O7 ·5Η20)較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C， 并不斷攪拌至全部融化。
[0031] 接種用的直舟形藻預(yù)先進(jìn)行提純（本領(lǐng)域常規(guī)方法，只要可實(shí)現(xiàn)提純即可，例如 凱氏提取法），以確保接種時(shí)藻種處于生長旺盛的指數(shù)生長期。
[0032] 各種營養(yǎng)鹽要按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
[0033] 各種無機(jī)營養(yǎng)鹽和維生素需預(yù)先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存?zhèn)溆?，放置時(shí) 間不要超過45天。
[0034] 海泥抽取液制備方法：取比較肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加2份淡水，充分 攪拌均勻，靜置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加1克NaOH的量加入 NaOH，煮沸25分鐘。煮時(shí)需不斷攪拌均勻，煮后靜置24小時(shí)取上清液，密封，置于4°C冰箱 或冷庫備用。
[0035] 所用化學(xué)藥品純度均需化學(xué)純級(jí)別。
[0036] 實(shí)施例1 :為了克服直舟形藻傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的缺點(diǎn)，一種以沼氣池廢液為主要原 料培養(yǎng)直舟形藻的方法，配方如下：
[0037] 沼氣池廢液85毫升，硅酸鈉5毫克，磷酸二氫鉀8毫克，硝酸銨6毫克，甘露醇3毫 克，生長素液2暈升，碳酸氫鈉200暈克，蘋果酸鈉2暈克，朽 1檬酸鐵5暈克，P1微量兀素 溶液3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸鈉5毫克，谷氨酸鈉10毫克，苯甲酸鈉5毫克，硬脂酸鎂 8毫克，羧甲基纖維素鈉12毫克，D-異抗壞血酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β-胡 蘿卜素12暈克，α -萘乙酸〇. 2暈克，土壤浸出液1暈升，海泥浸出液1. 2暈升，二氧化氯 消毒海水1000毫升；
[0038] 其中，生長素貯液配方：生物素1毫克，維生素B1IOO毫克，煙酸0. 1毫克，對氨基 苯甲酸10毫克，蒸餾水1000毫升；
[0039] P1微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷1毫克，氯化鋅5毫克，氯 化銅40微克，氯化錳40毫克，氯化鐵10毫克，蒸餾水1000毫升；
[0040] 一種利用沼液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻方法，具體步驟如下：
[0041] 培養(yǎng)容器為容積25升白塑料桶，市場有售，食品級(jí)聚乙烯材料制成，無縫一體式 結(jié)構(gòu)，堅(jiān)固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻進(jìn)行光合作用。水桶頂部有一圓形蓋子，上有 旋絲，可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上3個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和 排氣管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米。還有一個(gè)孔穿入一根金屬導(dǎo)線，導(dǎo)線末端接一個(gè)25w節(jié)能 燈。將白塑料桶先用砂濾海水洗凈，再用工業(yè)用鹽酸浸泡、消毒10-15分鐘，然后用冷開海 水沖洗3遍，裝入所述的培養(yǎng)基15升，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的直舟形 藻接種，接種密度6X 104cell/mL ;蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，35厘米，頂端露 出蓋子10厘米，下端通過料管與散氣石連接，用以充氣（散氣石的作用是形成很小的氣泡， 避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞）；另一根較短，14厘米，兩端露出蓋子即可，用以排 氣；兩根玻璃管同樣粗細(xì)；用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管 與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣：純二氧化碳：臭氧：甲 烷=92% : 6% : 1% : 1% ;連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室外 培養(yǎng)，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度4000-9000LUX ;夜間打開節(jié)能燈進(jìn)行 照明。培養(yǎng)的前6天，塑料桶上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強(qiáng)度維持在 2000-4000LUX，避免強(qiáng)烈陽光對細(xì)胞造成光傷害；第7天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì)胞 的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成；培養(yǎng)至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補(bǔ)充新鮮培養(yǎng) 基3升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，直舟形藻密度增加至 500 X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，將藻液倒出，將白塑料桶用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30 分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)；
[0042] 所述消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成：每100份85%乙醇中加入以下重量份的中 藥材和輔料：土荊皮30份、杠板歸15份、黃柏15份、苦參5份、艾葉5份、輔料3份；消毒液 制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60°C下烘干，再用中藥材粉碎 機(jī)分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計(jì)烘干并粉碎的土荊皮30份、杠板歸15份、黃 柏15份、苦參5份、艾葉5份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48 小時(shí)，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上 述清液中加入輔料3份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維 生素C的混合物，混合比例為重量比2 : 1 : 1;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上 標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0043] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10 分鐘。
[0044] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎荆?消毒5分鐘。
[0045] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒， 消毒5分鐘。
[0046] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?毒，消毒2分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類培養(yǎng)。
[0047] 實(shí)施例2
[0048] 其他步驟同于實(shí)施例1，區(qū)別在于所述消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成：每100份 85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料：土荊皮40份、杠板歸20份、黃柏20份、苦參 10份、艾葉10份、輔料4份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切 碎，于65°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計(jì)烘干并 粉碎的土荊皮40份、杠板歸20份、黃柏20份、苦參10份、艾葉10份，置于三角燒瓶中充分 混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48小時(shí)，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時(shí)，撇去 液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料4份混合攪拌均勻得到消毒液， 所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2 : 1 : 1;將 所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0049] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒15 分鐘。
[0050] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎荆?消毒7. 5分鐘。
[0051] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒， 消毒5. 5分鐘。
[0052] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?毒，消毒2. 5分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2. 5分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類培 養(yǎng)。
[0053] 實(shí)施例3
[0054] 其他步驟同于實(shí)施例1，區(qū)別在于所述消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成：每100份 85%乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料：土荊皮50份、杠板歸25份、黃柏25份、苦參 15份、艾葉15份、輔料5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切 碎，于70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計(jì)烘干并 粉碎的土荊皮50份、杠板歸25份、黃柏25份、苦參15份、艾葉15份，置于三角燒瓶中充分 混合后，加入100份85 %乙醇，浸泡48小時(shí)，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時(shí)，撇去 液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料5份混合攪拌均勻得到消毒液， 所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2 : 1 : 1;將 所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
[0055] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒20 分鐘。
[0056] 優(yōu)選地，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎荆?消毒10分鉀。
[0057] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒， 消毒6分鐘。
[0058] 優(yōu)選地，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?毒，消毒3分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類培養(yǎng)。
[0059] 最后應(yīng)說明的是：以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡 管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然 可以對前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換； 而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范 圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種以沼氣池廢液為主要原料培養(yǎng)直舟形藻的培養(yǎng)基，其特征在于配方如下： 沼氣池廢液85毫升，硅酸鈉5毫克，磷酸二氫鉀8毫克，硝酸銨6毫克，甘露醇3毫克， 生長素液2暈升，碳酸氫鈉200暈克，蘋果酸鈉2暈克，朽1檬酸鐵5暈克，P1微量兀素溶液 3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸鈉5毫克，谷氨酸鈉10毫克，苯甲酸鈉5毫克，硬脂酸鎂8毫 克，羧甲基纖維素鈉12毫克，D-異抗壞血酸鈉3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β -胡蘿卜 素12毫克，α -萘乙酸〇. 2毫克，土壤浸出液1毫升，海泥浸出液1. 2毫升，二氧化氯消毒 海水1000毫升； 其中，生長素貯液配方：生物素1毫克，維生素B1IOO毫克，煙酸0. 1毫克，對氨基苯甲 酸10毫克，蒸餾水1000毫升A微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化鈷1毫 克，氯化鋅5毫克，氯化銅40微克，氯化錳40毫克，氯化鐵10毫克，蒸餾水1000毫升。
2. -種以沼氣池廢液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻的方法，其特征在于具體步驟如下： 培養(yǎng)容器為容積25升白塑料桶，市場有售，食品級(jí)聚乙烯材料制成，無縫一體式結(jié)構(gòu)， 堅(jiān)固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻進(jìn)行光合作用，水桶頂部有一圓形蓋子，上有旋絲， 可旋轉(zhuǎn)而密封，蓋子打上3個(gè)孔，一個(gè)孔插入充氣管，另一個(gè)孔插入排氣管，充氣管和排氣 管都是玻璃管，內(nèi)徑6毫米。還有一個(gè)孔穿入一根金屬導(dǎo)線，導(dǎo)線末端接一個(gè)25w節(jié)能燈，將 白塑料桶先用砂濾海水洗凈，再用工業(yè)用鹽酸浸泡、消毒10-15分鐘，然后用冷開海水沖洗 3遍，裝入權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基15升，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的直 舟形藻接種，接種密度6 X 104cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，35厘米，頂 端露出蓋子10厘米，下端通過料管與散氣石連接，用以充氣，（散氣石的作用是形成很小的 氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細(xì)胞）；另一根較短，14厘米，兩端露出蓋子即可，用 以排氣，兩根玻璃管同樣粗細(xì)，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料 管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣：純二氧化碳：臭氧： 甲烷=92% : 6% : 1% : 1%，連續(xù)充氣，充氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；室 外培養(yǎng)，太陽光照射，最佳溫度25±2°C，最佳光照強(qiáng)度4000-9000LUX，夜間打開節(jié)能燈進(jìn) 行照明，培養(yǎng)的前6天，塑料桶上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強(qiáng)度維持 在2000-4000LUX，避免強(qiáng)烈陽光對細(xì)胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強(qiáng)的光照有利于細(xì) 胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養(yǎng)至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補(bǔ)充新鮮培 養(yǎng)基3升，以彌補(bǔ)蒸發(fā)掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續(xù)培養(yǎng)，至第10天，直舟形藻密度增加 至500X 104cell/mL，停止培養(yǎng)，將藻液倒出，將白塑料桶用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒 30分鐘，后進(jìn)入下一輪培養(yǎng)； 所述消毒液由以下重量比的物質(zhì)組成：每100份85 %乙醇中加入以下重量份的中藥 材和輔料：土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉 5?15份、輔料3-5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于 60-70°C下烘干，再用中藥材粉碎機(jī)分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計(jì)烘干并粉 碎的土荊皮30?50份、杠板歸15?25份、黃柏15?25份、苦參5?15份、艾葉5?15 份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85%乙醇,浸泡48小時(shí),200篩絹過濾,將清液 靜置沉淀36小時(shí)，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混 合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比 例為重量比2 : 1 : 1;將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱備用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種以沼氣池廢液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻的方法，其特征 在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種以沼氣池廢液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻的方法，其特征 在于，對選用的所述白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-10分 鐘。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種以沼氣池廢液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻的方法，其特征 在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后進(jìn)行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分 鐘。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種以沼氣池廢液為主要原料養(yǎng)殖直舟形藻的方法，其特征 在于，對選用的白塑料桶，洗刷干凈后分兩個(gè)階段消毒，先使用高壓氮?dú)鈬娚湎?，消?-3 分鐘，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘，消毒完畢后再進(jìn)行藻類培養(yǎng)。
【文檔編號(hào)】C12N1/12GK104212719SQ201410436473
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年9月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月1日
【發(fā)明者】王培磊 申請人:臨沂大學(xué)