一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基和補料方法
【專利摘要】本發明涉及一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基和補料方法，本發明通過已經確認的適合于殺真菌鏈霉菌為菌種發酵生產恩拉霉素的種子培養基和發酵培養基的配伍，并且以補料方法為控制方法，結合目前國內外已公布的恩拉霉素發酵控制工藝最終使得恩拉霉素的發酵單位達到10000u/ml以上，生產周期不超過240h，同國內技術相比，發酵單位提高了20%，生產周期減少了20h以上。
【專利說明】一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基和補料方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于發酵【技術領域】，特別是涉及一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培 養基和補料方法。
【背景技術】
[0002] 恩拉霉素（enramycin)是由殺真菌鏈霉菌發酵而得，是不飽和脂肪酸與十幾種氨 基酸結合的多肽類抗生素，主要組分有恩拉霉素 A和恩拉霉素 B，主要是以鹽酸鹽形式應 用。目前，國內恩拉霉素的發酵生產采用二級發酵模式，該方式存在的主要問題有以下幾 占 · 1恩拉霉素發酵水平較低，其發酵單位低于8000u/ml。
[0003] 2國內發酵生產恩拉霉素的培養基中加入葡萄糖，經高溫滅菌，易導致部分葡萄 糖碳化，降低總糖含量，影響發酵液質量。
[0004] 3恩拉霉素發酵生產所需的原材料采購成本較高，特別是恩拉霉素培養基中常用 的有機氮源市場價格較高，提高發酵成本，降低市場競爭力。
[0005] 4國內恩拉霉素的發酵培養周期較長，一般在260h以上，導致能耗較高。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高發酵單位，降 低生產成本，實現恩拉霉素穩定、高效的生產的殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養 基； 本發明的另一目的是提供上述殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的補料方法。
[0007] 為實現上述目的所采取的技術方案為： 一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基，其特 征在于所述種子培養基組成為：玉米油15?20ml/L、α -乳糖5?10g/L、乳糖酶0. 01? 〇· 03g/L、配方魚粉20?25g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米漿干粉10?15g/L、蚯蚓粉 5?10g/L、硫酸銨0· 2?0· 5g/L、輕質碳酸|丐1?5g/L ; 所述發酵培養基組成為：玉米油20?30ml/L、α -乳糖20?25g/L、乳糖酶0. 02? 〇· 05g/L、配方魚粉30?40g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米漿干粉15?20g/L、蚯蚓粉 10?15g/L、硫酸銨0· 3?0· 7g/L、輕質碳酸鈣1?5g/L、硫酸鎂0· 03?0· 06g/L、硫酸鋅 0· 02 ?0· 04g/L、磷酸二氫鉀 0· 5 ?0· 9g/L、氯化鈉 0· 3 ?0· 7g/L、氯化鉀 0· 2 ?0· 5g/L、 表面活性劑1. 5?2. 5g/L、氧載體4?7g/L。
[0008] 所述配方魚粉是由魚粉、骨粉和羽毛粉按照重量比7:3:1混合而得。
[0009] 所述氧載體為吐溫80或全氟化碳。
[0010] 所述表面活性劑為聚氧乙烯烷基醇酰胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸 酯或十八烷基二羥乙基氧化胺。
[0011] 利用上述培養基發酵生產恩拉霉素的補料方法，其特征是：在發酵過程中采用流 加法進行補料，補料包括補培養基、補水、補硫酸銨、pH控制和補氨基酸，其中 a補培養基： 發酵前70h不用進行補料， 發酵時間在71?90h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養基總 體積的3?5%， 發酵時間在ll〇h?130h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養 基總體積的2?4%， 發酵時間在150h?180h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養 基總體積的1?2% ; b補水： 發酵前80h不用進行補水， 發酵時間在81?160h，當菌體濃度高于55%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 50?55%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在161h?發酵結束，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在40?50%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度； c發酵過程pH控制工藝： 發酵前80h，pH不進行控制， 發酵時間在81?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 6?6. 9， 發酵時間在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH控至6. 3? 6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 3?6. 6 ; d補入氨基酸： 發酵前80h，不用補入氨基酸， 發酵在81h、130h和170h分別補入濃度為0. 2?0. 5mg/L的絲氨酸、半胱氨酸和精氨 酸，其補入量為發酵液體積的〇. 1?〇. 3%(這一過程是分別加入這三種，還是每次加入混合 液？） e補硫酸按： 在發酵的80h、150h和220h，分別補入30%的硫酸銨溶液，其用量控制在發酵液體積的 0· 05 ?0· 1%。
[0012] 本發明培養基中使用乳糖，避免出現葡萄糖碳化現象。
[0013] 本發明通過已經確認的適合于殺真菌鏈霉菌為菌種發酵生產恩拉霉素的種子培 養基和發酵培養基的配伍，并且以補料方法為控制方法，結合目前國內外已公布的恩拉 霉素發酵控制工藝最終使得恩拉霉素的發酵單位達到l〇〇〇〇u/ml以上，生產周期不超過 240h，同國內技術相比，發酵單位提高了 20%，生產周期減少了 20h以上。
[0014] 本發明適用于規模化發酵生產恩拉霉素，能夠滿足年產100噸恩拉霉素的生產需 求。
[0015] 具體實施方法 下面用實例予以說明本發明，應該理解的是，實例是用于說明本發明而不是對本發明 的限制。本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。
[0016] 下述實施例的菌種選用殺真菌鏈霉菌：生產使用的菌種來源為母瓶發酵液。母瓶 發酵液質量要求為：PH6?8 ;菌體濃度10?30% ;鏡檢無雜菌；發酵單位2000?3000u/ml。
[0017] 以下實施例中的發酵方法采用目前國內外已知的、公開的以殺真菌鏈霉菌發酵生 產工藝，如 種子培養工藝： 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的5? 10%。種子培養條件為：罐壓0. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，30? 50m3/h ;12h?移種：50?70m3/h ;攪拌轉速80?100r/min ;pH6?8 ;培養時間30?35h。 種子培養結束，其菌體濃度20?30% ;pH值6?8 ;無其它雜菌污染。
[0018] 發酵培養工藝： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2?3% ;培養溫度29?31°C ;攪拌轉速 100?120r/min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;培養時間230?240h ;發酵過程中pH控制在6. 0? 7. 5 ;發酵過程中進行菌檢，要求無其它雜菌；0?120h :600?800m3/h ;121h?發酵結束： 1000?1500m3/h。發酵培養停止條件為：發酵效價每6?8h取樣檢測，前、后檢測的發酵 單位相差在500u/ml以內；菌體濃度30?40% ;發酵單位在10000u/mL以上。
[0019] 實施例1 10m3種子罐：玉米油150L、α -乳糖50kg、乳糖酶0. lkg、配方魚粉200kg、啤酒酵母干 漁150kg、玉米楽干粉lOOkgJ丘蝴粉50kg、硫酸銨2kg、輕質碳酸興10kg。
[0020] 種子培養工藝控制： 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的5 %。種 子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，30m3/h ;12h? 移種：50m3/h ;攪拌轉速80r/min ;pH6?8 ;培養時間30h。種子培養結束，其菌體濃度21% ; pH值7.8 ;無其它雜菌污染。
[0021] 60m3發酵罐：玉米油1200L、α -乳糖1200kg、乳糖酶L 2kg、配方魚粉1800kg、啤 酒酵母漁干900kg、玉米楽干粉900g/L、il丘蝴粉600kg、硫酸銨18kg、輕質碳酸興60kg、硫酸 鎂1. 8kg、硫酸鋅1. 2kg、磷酸二氫鉀30kg、氯化鈉18kg、氯化鉀12kg、聚氧乙烯烷基醇酰胺 90kg、吐溫 80 240kg。
[0022] 發酵培養工藝： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2. 1% ;培養溫度29?31°C;攪拌轉速100r/ min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5。發酵過程中進行菌檢，要求 無其它雜菌；〇?120h :600m3/h ;121h?發酵結束：1000m3/h。發酵培養停止：菌體濃度為 31%，恩拉霉素發酵單位為10276u/ml，生產周期232h。
[0023] 在發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補培養基、補水、補硫酸銨、pH控制 和補氨基酸，其中 a補培養基工藝控制： 發酵前70h不用進行補料。
[0024] 發酵時間在71?90h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養 基總體積的3?5%。
[0025] 發酵時間在110h?130h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵 培養基總體積的2?4%。
[0026] 發酵時間在150h?180h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵 培養基總體積的1?2%。
[0027] b補水工藝控制： 發酵前80h不用進行補水， 發酵時間在81?160h，當菌體濃度高于55%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 50?55%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在161h?發酵結束，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在40?50%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度； c發酵過程pH控制工藝： 發酵前80h，pH不進行控制， 發酵時間在80?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 6?6. 9。
[0028] 發酵時間在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH控至 6. 3?6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 3?6. 6 ; d補入氨基酸： 發酵前80h，不用補入氨基酸， 恩拉霉素發酵培養過程中，分別在81h、130h和170h補入濃度為0. 2?0. 5mg/L的絲 氨酸、半胱氨酸和精氨酸，其補入量為發酵液體積的〇. 1?〇. 3%。
[0029] e補硫酸銨 恩拉霉素發酵培養過程中，分別在80h、150h和220h補入30%的硫酸銨溶液，其用量控 制在發酵液體積的〇. 05?0. 1%。
[0030] 實施例2 10m3種子罐：玉米油160L、α -乳糖60kg、乳糖酶0. 12kg、配方魚粉210kg、啤酒酵母干 漁160kg、玉米楽干粉llOkgJ丘蝴粉60kg、硫酸銨2. 5kg、輕質碳酸興20kg。
[0031] 種子培養工藝： 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的6 %。種 子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，35m3/h ;12h? 移種：55m3/h ;攪拌轉速85r/min ;pH6?8 ;培養時間31h。種子培養結束，其菌體濃度22% ; pH值7.4 ;無其它雜菌污染。
[0032] 60m3發酵罐：玉米油1320L、α -乳糖1260kg、乳糖酶1. 8kg、配方魚粉1980kg、啤 酒酵母漁干960kg、玉米楽干粉960g/L、il丘蝴粉660kg、硫酸銨24kg、輕質碳酸興120kg、硫酸 鎂2. 4kg、硫酸鋅1. 5kg、磷酸二氫鉀36kg、氯化鈉24kg、氯化鉀18kg、甘油酯102kg、全氟化 碳 300kg。
[0033] 發酵培養工藝： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2. 3% ;培養溫度29?31°C;攪拌轉速105r/ min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5 ;發酵過程中進行菌檢，要求無 其它雜菌；〇?120h :650m3/h ;121h?發酵結束：1100m3/h。發酵培養結束，菌體濃度30? 40% ;恩拉霉素發酵單位為10723u/ml，生產周期234h。
[0034] 在發酵過程中采用流加法進行補料，具體補料方式參見實施例1。
[0035] 實施例3 10m3種子罐：玉米油175L、α -乳糖75kg、乳糖酶0. 2kg、配方魚粉225kg、啤酒酵母干 漁175kg、玉米楽干粉125kg、il丘蝴粉75kg、硫酸銨3. 5kg、輕質碳酸興30kg。
[0036] 種子培養工藝： 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的7 %。種 子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，40m3/h ;12h? 移種：60m3/h ;攪拌轉速90r/min ;pH6?8 ;培養時間33h。種子培養結束，其菌體濃度25% ; pH值7. 1 ;無其它雜菌污染。
[0037] 60m3發酵罐：玉米油1500L、α -乳糖1350kg、乳糖酶2. 1kg、配方魚粉2100kg、啤 酒酵母漁干1050kg、玉米楽干粉1050g/L、il丘蝴粉750kg、硫酸銨30kg、輕質碳酸興180kg、硫 酸鎂2. 7kg、硫酸鋅1. 8kg、磷酸二氫鉀42kg、氯化鈉30kg、氯化鉀21g、聚甘油酯120kg、全 氟化碳330kg。
[0038] 發酵工藝控制： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行 培養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2. 5% ;培養溫度29?31°C ;攪拌轉速 110r/min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5 ;發酵過程中進行菌檢， 要求無其它雜菌；〇?120h :700m3/h ;121h?發酵結束：1200m3/h。發酵培養結束，菌體濃 度35% ;恩拉霉素發酵單位為11386u/ml，生產周期236h。
[0039] 在發酵過程中采用流加法進行補料，具體補料方式參見實施例1。
[0040] 實施例4 10m3種子罐：玉米油180L、α -乳糖90kg、乳糖酶0. 25kg、配方魚粉240kg、啤酒酵母干 漁190kg、玉米楽干粉140kg、il丘蝴粉90kg、硫酸銨4kg、輕質碳酸|丐40kg。
[0041] 種子培養工藝 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的8 %。種 子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，45m3/h ;12h? 移種：65m3/h ;攪拌轉速95r/min ;pH6?8 ;培養時間34h。種子培養結束，其菌體濃度27% ; pH值6.7 ;無其它雜菌污染。
[0042] 60m3發酵罐：玉米油1620L、α -乳糖1350kg、乳糖酶2. 4kg、配方魚粉2220kg、啤 酒酵母漁干1080kg、玉米楽干粉1140g/L、il丘蝴粉840kg、硫酸銨36kg、輕質碳酸興240kg、硫 酸鎂3kg、硫酸鋅2. lkg、磷酸二氫鉀48kg、氯化鈉36kg、氯化鉀24g、聚乙二醇（100)硬脂酸 酯 132kg、吐溫 80 360kg。
[0043] 發酵培養工藝： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2. 7% ;培養溫度29?31°C;攪拌轉速115r/ min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5 ;發酵過程中進行菌檢，要求無 其它雜菌；〇?120h :750m3/h ; 121h?發酵結束：1350m3/h。發酵培養結束，菌體濃度37% ; 恩拉霉素發酵單位為11167u/ml，生產周期238h。
[0044] 在發酵過程中采用流加法進行補料，具體補料方式參見實施例1。
[0045] 實施例5 10m3種子罐：玉米油200L、α -乳糖l〇〇kg、乳糖酶0. 3kg、配方魚粉250kg、啤酒酵母干 漁200kg、玉米楽干粉150kg、il丘蝴粉90kg、硫酸銨5kg、輕質碳酸興50kg。
[0046] 種子培養工藝 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的10%。 種子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C;空氣流量：0?12h，50m3/h ; 12h? 移種：70m3/h ;攪拌轉速100r/min ;pH6?8 ;培養時間35h。種子培養結束，其菌體濃度30% ; pH值6.2 ;無其它雜菌污染。
[0047] 60m3發酵罐：玉米油1800L、α -乳糖1500kg、乳糖酶3kg、配方魚粉2400kg、啤酒 酵母漁干1200kg、玉米楽干粉1200g/L、il丘蝴粉900kg、硫酸銨42kg、輕質碳酸興300kg、硫酸 鎂3. 6kg、硫酸鋅2. 4kg、磷酸二氫鉀54kg、氯化鈉42kg、氯化鉀30g、十八烷基二羥乙基氧化 胺 150kg、吐溫 80 420kg。
[0048] 發酵培養工藝： 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在2. 9% ;培養溫度29?31°C;攪拌轉速120r/ min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5 ;發酵過程中進行菌檢，要求無 其它雜菌；〇?120h :800m3/h ; 121h?發酵結束：1500m3/h。發酵培養結束，菌體濃度39% ; 恩拉霉素發酵單位為l〇823u/ml，生產周期240h。
[0049] 在發酵過程中采用流加法進行補料，具體補料方式參見實施例1。
[0050] 對比實施例 10m3種子罐：豆油175L、葡萄糖75kg、玉米蛋白粉225kg、花生餅粉175kg、玉米漿 125kg、酵母膏75kg、硫酸銨3. 5kg、輕質碳酸興30kg。
[0051] 種子培養工藝 首先將種子培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好 的殺真菌鏈霉菌母瓶發酵液接入種子罐進行培養，接種量控制在種子培養基體積的7 %。種 子培養條件為：罐壓〇. 04?0. 06MPa ;罐溫28?30°C ;空氣流量：0?12h，40m3/h ;12h? 移種：60m3/h ;攪拌轉速90r/min ;pH6?8 ;培養時間32h。種子培養結束，其菌體濃度18% ; pH值6.8 ;無其它雜菌污染。
[0052] 60m3發酵罐：豆油1500L、葡萄糖1350kg、玉米蛋白粉2100kg、花生餅粉1050kg、 玉米漿1050g/L、酵母膏750kg、硫酸銨30kg、輕質碳酸鈣180kg、硫酸鎂2. 7kg、硫酸鋅 1. 8kg、磷酸二氫鉀42kg、氯化鈉30kg、氯化鉀21g、消泡劑有機硅油120L。
[0053] 發酵培養工藝 先將發酵培養基滅菌，冷卻，并用無菌空氣保壓，然后將種子液全部移入發酵罐進行培 養。發酵培養條件為：培養基滅菌后脂肪控制在1. 7% ;培養溫度29?31°C;攪拌轉速110r/ min ;罐壓0. 05?0. 06MPa ;發酵過程中pH控制在6. 0?7. 5 ;發酵過程中進行菌檢，要求無 其它雜菌；〇?120h :700m3/h ;121h?發酵結束：1100m3/h。發酵培養結束，菌體濃度32% ; 恩拉霉素發酵單位為8143u/ml，生產周期271h。
【權利要求】
1. 一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基，其 特征在于所述種子培養基組成為：玉米油15?20ml/L、α -乳糖5?10g/L、乳糖酶0. 01? 〇· 03g/L、配方魚粉20?25g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米漿干粉10?15g/L、蚯蚓粉 5?10g/L、硫酸銨0· 2?0· 5g/L、輕質碳酸|丐1?5g/L ; 所述發酵培養基組成為：玉米油20?30ml/L、α -乳糖20?25g/L、乳糖酶0. 02? 〇· 05g/L、配方魚粉30?40g/L、啤酒酵母干渣15?20g/L、玉米漿干粉15?20g/L、蚯蚓粉 10?15g/L、硫酸銨0· 3?0· 7g/L、輕質碳酸鈣1?5g/L、硫酸鎂0· 03?0· 06g/L、硫酸鋅 0· 02 ?0· 04g/L、磷酸二氫鉀 0· 5 ?0· 9g/L、氯化鈉 0· 3 ?0· 7g/L、氯化鉀 0· 2 ?0· 5g/L、 表面活性劑1. 5?2. 5g/L、氧載體4?7g/L。
2. 按照權利要求1所述的培養基，其特征在于所述配方魚粉是由魚粉、骨粉和羽毛粉 按照重量比7:3:1混合而得。
3. 按照權利要求1所述的培養基，其特征在于所述氧載體為吐溫80或全氟化碳。
4. 按照權利要求1所述的培養基，其特征在于所述表面活性劑為聚氧乙烯烷基醇酰 胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸酯或十八烷基二羥乙基氧化胺。
5. -種利用權利要求1-6所述的培養基發酵生產恩拉霉素的補料方法，其特征是：在 發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補培養基、補水、補硫酸銨、pH控制和補氨基酸， 其中 a補培養基： 發酵前70h不用進行補料， 發酵時間在71?90h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養基總 體積的3?5%， 發酵時間在ll〇h?130h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養 基總體積的2?4%， 發酵時間在150h?180h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養 基總體積的1?2% ; b補水： 發酵前80h不用進行補水， 發酵時間在81?160h，當菌體濃度高于55%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在 50?55%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度， 發酵時間在161h?發酵結束，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體 濃度在40?50%，每隔6?8h檢測發酵液菌體濃度； c發酵過程pH控制工藝： 發酵前80h，pH不進行控制， 發酵時間在81?100h，若pH < 6. 5,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH至6. 6?6. 9 ; 若pH > 7,加入20%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 6?6. 9， 發酵時間在101?180h，若pH < 6. 2,加入10?20%的氫氧化鈉，調節pH控至6. 3? 6. 6 ;若pH > 6. 6,加入30%的硫酸銨溶液，調節pH至6. 3?6. 6 ; d補入氨基酸： 發酵前80h，不用補入氨基酸， 發酵在81h、130h和170h分別補入濃度為0. 2?0. 5mg/L的絲氨酸、半胱氨酸和精氨 酸，其補入量為發酵液體積的〇. 1?〇. 3%(這一過程是分別加入這三種，還是每次加入混合 液？） e補硫酸按： 在發酵的80h、150h和220h，分別補入30%的硫酸銨溶液，其用量控制在發酵液體積的 0· 05 ?0· 1%〇
【文檔編號】C12R1/465GK104195203SQ201410432903
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月29日 優先權日:2014年8月29日
【發明者】任勇, 奇乃, 李小萍, 董媛 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司