一種通過體外酶消化法評定豆粕家禽有效氨基酸含量的方法
【專利摘要】本發明涉及一種通過體外酶消化法評定豆粕家禽有效氨基酸含量的方法；首先分析測定豆粕樣品中氨基酸含量(AAi)，利用兩步酶法(胃蛋白酶—胰酶)體外消化豆粕，通過豆粕樣品中氨基酸含量×體外干物質消失率(AAi×DMD)與其對應的家禽有效氨基酸含量(EAAi)的實測值進行回歸分析，建立待測豆粕樣品中各種氨基酸含量、體外干物質消失率與有效氨基酸含量的數學模型，用于快速評定豆粕家禽有效氨基酸含量。本發明可以快速評定豆粕家禽有效氨基酸含量且適于生產應用，為更精確地配制家禽飼料提供保障。
【專利說明】一種通過體外酶消化法評定豆粕家禽有效氨基酸含量的方 法 (一）
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種利用體外兩步酶消化法評定豆柏家禽有效氨基酸含量的方法，屬 于飼料【技術領域】。 (二）
【背景技術】
[0002] 蛋白質原料約占畜禽飼料總成本的40?50%，因此，進行蛋白質飼料原料營養價 值的精確評價，提高蛋白質原料的利用效率是降低配合飼料成本的重要手段和方法。豆柏 是目前我國飼料工業使用量最多、應用范圍最廣的蛋白質飼料原料，在家禽飼料中所占的 比例超過20%。有效氨基酸是評價豆柏營養價值和可利用性的重要指標，比傳統的表觀可 消化氨基酸和總氨基酸具有更好的重復性和應用性，能夠更加準確地反應動物機體利用豆 柏蛋白質的程度。但傳統測定豆柏有效氨基酸的方法需要通過代謝試驗進行，存在測定所 需時間長、對儀器和試驗條件要求高等問題，除進行專門研究外基本無法進行測定，飼料生 產中進行配方設計時僅能通過現有數據庫的標定值或經驗值進行。而豆柏中有效氨基酸含 量與其加工工藝、粗蛋白含量及原料來源等均顯著相關，變異范圍大，生產中僅根據某一固 定值進行配方設計，極易引起所配制飼料中有效氨基酸的過剩或不足，造成生產損失。因 此，準確評定豆柏有效氨基酸含量是家禽飼料精確配制的關鍵，是蛋白質原料合理利用的 基礎，對減少詞料資源浪費、提商家禽的生廣效率具有重要意義。 (三）
【發明內容】
[0003] 為了解決上述問題，本發明提供了一種通過體外酶消化法評定豆柏家禽有效氨基 酸含量的方法；目的是提供一種通過體外酶消化法快速評定豆柏家禽有效氨基酸含量且 適于生產應用的方法，可以為更精確地配制家禽飼料提供保障。
[0004] 本發明是這樣實現的：首先分析測定豆柏樣品中氨基酸含量（AAi),利用兩步酶 法（胃蛋白酶一胰酶）體外消化豆柏，通過豆柏樣品中氨基酸含量X體外干物質消失率 (AA iXDMD)與其對應的家禽有效氨基酸含量（EAAi)的實測值進行回歸分析，建立待測豆柏 樣品中各種氨基酸含量、體外干物質消失率與有效氨基酸含量的數學模型，用于快速評定 豆柏家禽有效氨基酸含量。
[0005] -種通過體外酶消化法評定豆柏家禽有效氨基酸含量的方法，包括以下步驟：
[0006] 1、將待測豆柏樣品粉碎，過60目篩，105±2°C烘至恒重，按GB/T 18246方法測定 其各種氨基酸含量（AAi);準確稱取待測豆柏樣品LOg(即待測豆柏樣品體外消化后的質 量M 0,精確到0· OOOlg)，加入濃度為I. Omg/mL胃蛋白酶水溶液10?15mL (pH = L 5?3. 5)， 密封，36?42°C水浴恒溫振蕩（120?180r/min)消化4小時；再向上述消化4小時后的樣 品中加入濃度為I. Omol/L NaOH溶液0. 1?0. 3mL中和，然后再向上述中和后的樣品中加 入濃度為10mg/mL胰酶水溶液10?15mL，混合均勻后轉移到12000?14000D的透析袋中， 封口；將透析袋放入300?500mL磷酸緩沖液（pH = 6. 5?8. 5)中，36?42°C水浴恒溫 振蕩（120?180r/min)消化20小時；取出透析袋，用蒸餾水反復沖洗透析袋內消化殘渣， 105°C烘干，測定殘渣的質量即待測豆柏樣品體外消化后的質量（M1)，通過以下公式計算待 測豆柏樣品的體外干物質消失率（DMD):
【權利要求】
1. 一種通過體外酶消化法評定豆柏家禽有效氨基酸含量的方法，其特征在于包括以下 步驟： 1) 將待測豆柏樣品粉碎，過60目篩，105±2°C烘至恒重，按GB/T 18246方法測定其各 種氨基酸含量AAi ;準確稱取待測豆柏樣品^1. 0g，，加入濃度為1. Omg/mL的胃蛋白酶水溶 液10?15mL(pH = L 5?3. 5)，密封，36?42°C水浴恒溫振蕩120?180r/min消化4小 時；再向上述消化4小時后的樣品中加入濃度為1. Omol/L NaOH溶液0. 1?0. 3mL中和；然 后再向上述中和后的樣品中加入濃度為10mg/mL的胰酶水溶液10?15mL，混合均勻后轉移 至IJ 12000?14000D的透析袋中，封口；將透析袋放入300?500mL pH = 6. 5?8. 5的磷酸 緩沖液中，36?42°C水浴恒溫振蕩120?180r/min消化20小時；取出透析袋，用蒸餾水反 復沖洗透析袋內消化殘渣，l〇5°C烘干，測定殘渣的質量A，通過以下公式計算待測豆柏樣 品的體外干物質消失率DMD : M0(g) 其中，DMD為待測豆柏樣品的體外干物質消失率； M。為待測豆柏樣品體外消化前的質量，單位g ; Mi為殘渣的質量即待測豆柏樣品體外消化后的質量，單位g ; 2) 將待測豆柏樣品的氨基酸含量X體外干物質消失率AAiXDMD代入下述構建的數學 模型，得出待測豆柏的各種有效氨基酸含量； 建立的待測豆柏樣品中各種家禽有效氨基酸含量EAA評定的數學模型如下： 賴氨酸（Lys) :EAA_ = 1. 2015X (AALysXDMD)+0. 0586 蛋氨酸（Met) :EAAMet = 1· 2900X (AAMetXDMD)-〇. 0173 蘇氨酸（Thr) :EAAThr = 1· 1614X (AAThrXDMD)+0. 0303 色氨酸（Tyr) :EAATyr = 1. 4006X (AATyrXDMD)-〇. 4772 精氨酸（Arg) :EAAArg = 1. 2015X (AAArgXDMD)+0· 1839 絲氨酸（Ser) :EAASer = 1. 1400X (AASerXDMD)+0. 1236 谷氨酸（Glu) :EAAGlu = 1. 1820X (AAGluXDMD)+0. 5250 甘氨酸（Gly) :EAAGly = 1. 1044X (AAayXDMD)+0. 2311 丙氨酸（Ala) :EAAMa = 1. 1862X (AAAlaXDMD)+0. 0058 胱氨酸（Cys) :EAAGys = 1. 5282X (AAGysXDMD)-〇. 1705 纈氨酸（Val) :EAAVal = 0· 9617X (AAValXDMD)+0. 2812 亮氨酸（Leu) :EAALeu = 1. 2580X (AALeuXDMD)-〇. 0552 組氨酸（His) :EAAHis = 0· 9943X (AAmsXDMD)+0. 2318 脯氨酸（Pro) :EAAPr。= 1. 2707X (AAPr〇XDMD)+0. 0072 天冬氨酸（Asp) :EAAAsp = 1. 1783X (AAAspXDMD)+0. 2705 異亮氨酸（lie) :EAAIle = 1. 2502X (AAIleXDMD)-〇. 0618 苯丙氨酸（Phe) :EAAPhe = 1. 2708X (AAPheXDMD)+0. 0095 所述的i是指賴氨酸Lys、蛋氨酸Met、蘇氨酸Thr、色氨酸Tyr、精氨Arg、絲氨酸Ser、 谷氨酸Glu、甘氨酸Gly、丙氨酸Ala、胱氨酸Cys、纈氨酸Val、亮氨酸Leu、組氨酸His、脯氨 酸Pro、天冬氨酸Asp、異亮氨酸lie或苯丙氨酸Phe。
【文檔編號】C12Q1/34GK104263809SQ201410429451
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年8月27日 優先權日:2014年8月27日
【發明者】林海, 焦洪超, 趙梅, 趙景鵬, 宋志剛 申請人:山東農業大學