一種細菌復合厭氧礦化2,4,6-三溴苯酚的方法

一種細菌復合厭氧礦化2,4,6-三溴苯酚的方法
【專利摘要】一種細菌復合厭氧礦化2,4,6-三溴苯酚的方法，本發明涉及厭氧礦化2,4,6-三溴苯酚的方法。本發明是要解決現有的生物降解2,4,6-三溴苯酚的方法礦化率低的技術問題。本發明的方法：一、制造厭氧條件；二、由厭氧發酵Ma13菌株和還原脫鹵Dehaloabacter菌種在厭氧條件下對2,4,6-三溴苯酚進行還原脫溴；三、由硫酸還原DS菌株進行氧化分解，完成細菌復合厭氧礦化2,4,6-三溴苯酚。根據14C-苯酚示蹤試驗計算，2,4,6-三溴苯酚礦化到CO2的百分比為100％所需要的時間約28～35天。本方法適于處理深層地下水、厭氧反應器中的2,4,6-三溴苯污染物。
【專利說明】一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)的方法。 技術背景
[0002] 2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)被廣泛應用于殺蟲劑、防腐劑以及新型阻燃劑溴化 環氧樹脂的中間體等農業及電子行業。據統計在2001年，2, 4, 6-TBP在日本的產量高達每 年2, 500噸，全球的產量則高達每年9, 500噸。2, 4, 6-TBP是一種具有急性毒性的溴代酚類 化合物，具有脂溶性、難降解性等特點，可造成大氣、水和土壤環境的大范圍污染，并對人類 健康和生態環境造成了嚴重威脅。基于它的廣泛應用、持久性和高毒性，2, 4, 6-TBP在1998 年被美國環保協會列為危險廢物。
[0003] 目前，利用生物分解2, 4, 6-TBP的研究主要集中在還原脫溴，而還原脫溴的終產 物，苯酚，依然具有很高的毒性，需要進一步分解礦化。目前報道具有直接礦化2, 4, 6-TBP 能力的微生物很少。Takashi 等（Biosci Biotechnol Biochem, 72 (5)，2008)篩選出一株 蒼白桿菌（Ochrobactrum sp.)TB01好氧菌株，這株菌在36小時內對TBP的脫溴率達到 100%，研究推斷可繼續對苯酚進行好氧分解，而其礦化率沒有報道。Ronen等（Soil Biol Biochem, 37 (9)，2005)利用一株營養缺陷型皮氏無色桿菌（Achromobacterpiechaudii) TBPZ降解土壤中的TBP，發現營養源酵母浸出物對不同生長階段的細胞生長和活性有顯著 影響，礦化率未報道。申請號為201110025511. 5的中國專利公開了一種降解2, 4, 6-三 溴苯酚的芽孢桿菌GZT，該芽孢桿菌GZT對2, 4, 6-三溴苯酚的降解率為96. 2 %，脫溴率為 88. 4%，礦化率為29. 0%。然而以上幾種方法對2, 4, 6-三溴苯酚的礦化率低。


【發明內容】

[0004] 本發明提供一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-TBP的方法，以解決現有的生物處理 方法難以直接礦化2, 4, 6-TBP及礦化率低的技術問題，而提供一種細菌復合厭氧礦化 2, 4, 6-三溴苯酚的方法。
[0005] 本發明的細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-TBP的方法按以下步驟進行：
[0006] -、制造厭氧條件：將厭氧培養基加入到玻璃容器中，吹入氮氣驅除容器 內的氧氣，然后將容器密封，進行滅菌處理，再向滅菌后容器內注入Na 2S溶液和 Titanium(III) -NTA溶液，把容器內的厭氧培養基還原至無氧狀態，得到厭氧容器；
[0007] 二、由厭氧發酵菌（Clostridium sp. strain Mal3,簡稱 Mal3 菌株） (Yoshida et al, 130, Bioresour Technol, 478-485, 2013)和還原脫氯菌群（其中 Dehaloabacter菌種起還原脫齒作用，占菌群數量的51% ) (Yoshida et al,ApplEnviron Microbiol, 75 (8)，2400-2405)在厭氧條件下對2, 4, 6-三溴苯酚（2, 4, 6-TBP)進行還原脫 溴：將待處理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步驟一得到的厭氧容器中， 再接入活性Mal3菌株和Dehaloabacter菌種，將厭氧容器放在溫度為30?35°C的培養箱 中培養，從厭氧容器中取樣，檢測其中苯酚的濃度大于等于待處理2, 4, 6-TBP濃度的80% 時，還原脫溴過程完成；
[0008] 三、向厭氧容器內注入Na2S04溶液，并接入硫酸還原菌株（Desulfobacterium parachlorophenolicastrain DS,簡稱 DS 菌株）（Suzuki et al, Int J Syst Evol Micr.，in press, doi : 10. 1099/i js. 0. 064360-0)對苯酚進一步氧化分解，繼續在30?35°C的培養箱 中培養8?15天，完成2, 4, 6-TBP的厭氧礦化。
[0009] 本發明采用細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-TBP，即采用單菌和高度富集的菌種來實 現鹵代芳烴的厭氧礦化，礦化步驟分兩步實現：一、厭氧發酵和還原脫溴：還原脫溴過程 由Mal3菌株和Dehaloabacter菌種同時復合實現，復合菌還原脫溴2, 4, 6-TBP的步驟為 2, 4, 6-TBP還原脫溴為2, 4-二溴苯酚，然后是4-溴酚，然后是苯酚；二、還原脫溴產物（苯 酚）的進一步分解由繼而添加的DS菌株氧化分解實現，其中額外添加 Na2S04作為苯酚分解 的電子受體，DS菌株所需的無機碳源C02由Mal3菌株厭氧發酵過程提供。本發明在同一體 系中同時滿足不同菌體的還原、氧化條件要求，各種菌的功能作用相互支持、協同，無其他 雜菌，沒有電子供體/受體間不必要的氧化還原反應，也沒有各種菌之間的營養競爭和無 益的生物化學反應，提高了分解處理效率，又降低了礦化成本。
[0010] 本發明的方法處理濃度約為20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用28?35天的時間。根據 苯酚生成率計算，大約20天后2, 4, 6-ΤΒΡ的脫溴率達到100%。根據14C-苯酚示蹤試驗計 算，約28?35天后，2, 4, 6-TBP礦化到C02的百分比為99. 6 %。
[0011] 本發明的方法，適于處理深層地下水、厭氧反應器中的2, 4, 6-三溴苯污染物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1為試驗1中Mal3菌株、Dehaloabacter菌種和DS菌株對2, 4, 6-TBP的還原 脫溴和礦化過程中2, 4, 6-三溴苯酚及降解后產物的濃度變化曲線圖。

【具體實施方式】

【具體實施方式】 [0013] 一：本實施方式的細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法按以 下步驟進行：
[0014] -、制造厭氧條件：將厭氧培養基加入到容器中，吹入氮氣驅除容器內的氧氣，然 后將容器密封，進行滅菌處理，再向滅菌后容器內注入Na 2S溶液和Titanium (III)-NTA溶 液，把容器內的厭氧培養基還原至無氧狀態，得到厭氧容器；
[0015] 二、由Mal3菌株和Dehaloabacter菌種在厭氧條件下對2, 4, 6_三溴苯酚進行還 原脫溴：將待處理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步驟一得到的厭氧容器 中，再接入活性Mal3菌株和Dehaloabacter菌種，將厭氧容器放在溫度為30?35°C的培養 箱中培養，從厭氧容器中取樣，檢測當其中的苯酚濃度大于等于2, 4, 6-TBP的初始濃度的 80%時，還原脫溴過程完成；
[0016] 三、由DS菌株進行氧化分解：向厭氧容器內注入Na2S04溶液，接入硫酸鹽還原菌株 (Desulfobacterium sp.，簡稱DS)，繼續在30?35°C的培養箱中培養8?15天，完成細菌 復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0017]

【具體實施方式】二：本實施方式與【具體實施方式】一不同的是步驟一中的厭氧培養基 每 lOOOmL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、0. 4g KH2P04、200mmol3-(N-嗎啉） 丙磺酸、lg刃天青鹽、lmL維他命儲備液、lmL SLelO微量元素溶液和余量的水組成，pH值為 7. 0?7. 2 ;其它與【具體實施方式】一相同。

【具體實施方式】 [0018] 三：本實施方式與二不同的是維他命儲備液每 1000mL由20mg蛋白生物素、20mg葉酸、100mg維生素 B6、50mg硫胺素、50mg維生素 B2、50mg 泛酸鹽、50mg維生素 B12、50mg對氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg煙酰胺、50mg類脂酸、50mg 氯高鐵血紅素、50mgl，2-萘醌、50mg維他命K2和余量的水組成；其它與二相 同。

【具體實施方式】 [0019] 四：本實施方式與一至三之一不同的是所述的SLelO 微量元素溶液每l〇〇〇mL由10mL質量百分濃度為25%的HC1、1. 5gFeCl3 ·4Η20、0· 07gZnCl2、 0· lg MnCl4 ·4Η20、0· 19g CoCl2 ·6Η20、2ι? CUC12 ·2Η20 g、0. 02g NiCl2 ·2Η20、0· 04g Na2Mo04 ·Η20 和余量的水組成；其它與一至三之一相同。

【具體實施方式】 [0020] 五：本實施方式與一至四之一不同的是步驟一中，吹 氮氣的時間為15?20min。其它與一至四之一相同。
[0021 ] 吹氮氣的目的是驅除容器內的氧氣。

【具體實施方式】 [0022] 六：本實施方式與一至四之一不同的是步驟一中，容 器密封用聚四氟乙烯塞和鋁箔蓋密封。其它與一至四之一相同。
[0023] 采用這種方式密封后，可用注射的方式將其他材料加入到容器中，而不影響容器 的厭氧狀態。

【具體實施方式】 [0024] 七：本實施方式與一至六之一不同的是步驟一中，滅 菌處理是在溫度為121°C、壓力為0. 2MPa的滅菌鍋滅菌處理15?30min。其它與具體實施 方式一至六之一相同。

【具體實施方式】 [0025] 八：本實施方式與一至七之一不同的是步驟二中，蛋 白胨的添加量為〇. 01?lmg/L。其它與一至七之一相同。

【具體實施方式】 [0026] 九：本實施方式與一至八之一不同的是步驟二中，葡 萄糖的濃度控制在〇. 5?2. 5mmol/L之間。其它與一至八之一相同。
[0027] 本實施方式中，葡萄糖既作為Mal3菌株的發酵產氫底物又作為Dehaloabacter菌 種的有機碳源來源，葡萄糖的濃度可確保Mal3菌株和Dehaloabacter菌種的生長狀況良 好，當添加的葡萄糖濃度大于5mM時，還原脫溴反應不會發生。

【具體實施方式】 [0028] 十：本實施方式與一至九之一不同的是步驟二中，接 入活性Mal3菌后，Mal3菌的16s rRNA基因拷貝濃度為102?105copies/mL ;其它與具體實 施方式一至九之一相同。

【具體實施方式】 [0029] i^一 ：本實施方式與一至十之一不同的是步驟二 中，接入Dehaloabacter菌種后，Dehaloabacter菌種的16s rRNA基因拷貝濃度大于 8X 103copies/mL。其它與一至十之一相同。
[0030] 本實施方式中，Dehaloabacter菌種的16s rRNA基因拷貝初始濃度大于 8 X 103copies/mL，可確保Mal3菌株和Dehaloabacter菌種的生長狀況良好,且2, 4, 6-TBP 在20天之內被分解為苯酚；當轉接的Dehaloabacter菌種初始16s rRNA基因拷貝濃度小 于102copies/mL時，Dehaloabacter菌種的生長受到嚴重抑制，且還原脫溴反應不會發生。
[0031]

【具體實施方式】十二：本實施方式與【具體實施方式】一至i^一之一不同的是步驟二中 Dehaloabacter菌種中包含兩種種系類型，FTH1和FTH2, FTH1種系類型占菌體量的41%， FTH2菌占菌體量的7%。其它與【具體實施方式】一至i^一之一相同。

【具體實施方式】 [0032] 十三：本實施方式與一至十二之一不同的是步驟三中 Na2S04的濃度為1. 0?2. 5mmol/L。其它與一至十二之一相同。

【具體實施方式】 [0033] 十四：本實施方式與一至十三之一不同的是步驟三中 接種的活性DS菌株的初始16s rRNA基因拷貝濃度要大于104c〇pieS ml/1。其它與具體實 施方式一至十三之一相同。
[0034] 用以下試驗驗證本發明的有益效果：
[0035] 試驗1 :本試驗的細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴酚的方法按以下步驟進行：
[0036] -、制造厭氧條件：將25mL厭氧培養基加入到60mL血清瓶內，吹入氮氣15分鐘， 驅除容器內的氧氣，然后將血清瓶用聚四氟乙烯塞和鋁箔蓋密封，放在溫度為121°C、壓力 為0. 2MPa的滅菌鍋滅菌處理30min，再向滅菌后血清瓶內注入15mM的Na2S溶液和2. 5mM的 Titanium(III) -NTA溶液，當培養基顏色由粉色變為無色后，說明培養基的含氧條件由微氧 變為無氧狀態，得到厭氧狀態的血清瓶；
[0037] 其中厭氧培養基每 1000mL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、 0. 4gKH2P04、200mmol/L3-(N-嗎啉）丙磺酸、lg刃天青鹽、lmL維他命儲備液、lmL SLelO微量 元素溶液和余量的水組成，用NaOH或HC1調整pH為7. 0-7. 2 ;維他命儲備液每1000mL由 20mg蛋白生物素、20mg葉酸、100mg維生素 B6、50mg硫胺素、50mg維生素 B2、50mg泛酸鹽、 50mg維生素 B12、50mg對氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg煙酰胺、50mg類脂酸、50mg氯高鐵 血紅素、50mgl，2-萘醌、50mg維他命K2和余量的水組成；SLelO微量元素溶液每1000mL由 10mL 質量百分濃度為 25% 的 HC1、1. 5g FeCl3 · 4Η20、0· 07gZnCl2、0. lg MnCl4 · 4Η20、0· 19g CoCl2 · 6H20、2m CUC12 · 2H20 g、0. 02g NiCl2 · 2Η20、0· 04g Na2Mo04 · H20 和余量的水組成；
[0038] 二、厭氧發酵菌（Clostridium sp. strain Mal3,簡稱 Mal3 菌株） (Yoshida et al, 130, Bioresour Technol, 478-485, 2013)和還原脫齒氯群（其中 Dehaloabacter菌種起還原脫齒作用，占菌群數量的51% ) (Yoshida et al,ApplEnviron 皿1(^〇1^〇1，75(8)，2400-2405)在厭氧條件下對2,4,6-三溴苯酚（2,4,6-了8?)進行還原 脫溴：將待處理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步驟一得到的血清瓶中， 其中2,4,6-TBP的初始濃度為20μπι〇1/1，蛋白胨的濃度為0.01mg/L，葡萄糖的濃度為 2. 0mmol/L,再接入活性Mal3菌和Dehaloabacter菌，其中Mal3菌的16s rRNA基因拷貝 濃度為 104copies/mL，Dehaloabacter 菌的 16s rRNA 基因拷貝濃度為 2X104copies/mL， Dehaloabacter菌中包含2種種系類型，FTH1和FTH2,其中FTH1占41%，FTH2占7%。將血 清瓶放在溫度為30°C的培養箱中培養20天，第一天開始每隔5天從血清瓶中取樣，檢測其 中的物質種類及濃度，當第20天時，苯酚的濃度達到20 μ mol/L，此濃度已經與2, 4, 6-TBP 的初始濃度相等，完成了還原脫溴和氧化分解；
[0039] 三、由DS菌株進行氧化分解：第20天，向血清瓶內注入Na2S04溶液，使Na 2S04的 濃度為 2. 0mmol/L,接入硫酸還原菌株（Desulfobacterium parachlorophenolicastrain DS，簡稱 DS 菌株）（Suzuki et al, Int J Syst Evol Micr.，in press, doi :10. 1099/ ijs. 0. 064360-0)，硫酸還原菌株的16s rRNA基因拷貝濃度為105copies ml/1，繼續在30°C 的培養箱中培養，每隔2天從血清瓶中取樣，檢測其中的物質種類及濃度，在第28天時，檢 測到容器內苯酚的濃度降為0. 04 μ mol/L，完成細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0040] 從將污染物2, 4, 6-TBP、Mal3菌和Dehaloabacter菌加入到血清瓶中起，不斷取 樣，檢測血清瓶的物質，以此監測2, 4, 6-三溴苯酚的還原脫溴和礦化過程，得到的血清瓶 中的物質種類及濃度隨著時間變化的情況如圖1所示，其中a為2, 4, 6-三溴苯酚的濃度變 化情況，b為2,4-二溴苯酚的濃度變化情況，c為4-溴苯的濃度變化情況，d為苯酚的濃度 變化情況。從圖1可以看出，處理濃度為20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用28天的時間。2, 4, 6-TBP 首先被還原為2, 4-二溴酚，然后再到4-溴酚，經過20天之后，2, 4, 6-ΤΒΡ被完全脫溴為苯 酚，脫溴率為100%。接入DS菌株和NaS04之后，苯酚開始分解。大約28天后，苯酚濃度降 低為零。根據 14C-苯酚示蹤試驗計算，28天后2, 4, 6-TBP礦化到C02的百分比為94. 1 %。
[0041] 試驗2 :本試驗與試驗1不同的是步驟二中，接入活性Mal3和Dehaloabacter菌 后，Mal3 菌的 16s rRNA 基因拷貝濃度為 103copies/mL，Dehaloabacter 菌的 16s rRNA 基因 拷貝大于9 X 103copies/mL，Dehaloabacter菌中包含2種種系類型，FTH1和FTH2,其中FTH1 占 41%，FTH2占7% ;其它與試驗1相同。
[0042] 本試驗處理濃度為20 μ Μ的2, 4, 6-TBP需要用34天的時間。2, 4, 6-TBP首先被還 原為2, 4-二溴酚，然后再到4-溴酚，經過23天之后，2, 4, 6-ΤΒΡ被完全脫溴為苯酚，脫溴 率為100%。接入DS菌株和NaS04之后，苯酚開始分解。大約34天后，苯酚濃度降低為零。 根據 14C_苯酚示蹤試驗計算，34天后2, 4, 6-TBP礦化到C02的百分比為96. 5%。
[0043] 試驗3、本試驗與試驗1不同的是步驟三中，第20天，向血清瓶內注入Na2S0 4溶液， 使Na2S04的濃度為2. 4mmol/L，接入硫酸還原菌株（Desulfobacterium sp.，簡稱DS)，硫酸 還原菌株的16s rRNA基因拷貝濃度為6X105copies ml/1。其它與試驗1相同。
[0044] 三、由DS菌株進行氧化分解：，向血清瓶內注入Na2S04溶液，使Na 2S04的濃度 為2. 0mmol/L，接入硫酸還原菌株（Desulfobacterium sp.，簡稱DS)，硫酸還原菌株的16s rRNA基因拷貝濃度為105copies mL_1，繼續在30°C的培養箱中培養，每隔2天從血清瓶中取 樣，檢測其中的物質種類及濃度，在第28天時，檢測到容器內苯酚的濃度降為0. 04 μ mol/ L，完成細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚。
[0045] 本試驗中，接入DS菌株和NaS04之后，苯酚開始分解。大約32天后，苯酚濃度降 低為零。根據 14C-苯酚示蹤試驗計算，32天后2, 4, 6-TBP礦化到C02的百分比為93. 7%。
【權利要求】
1. 一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征在于該方法按以下步驟進 行： 一、 制造厭氧條件：將厭氧培養基加入到容器中，吹入氮氣驅除容器內的氧氣，然后將 容器密封，進行滅菌處理，再向滅菌后容器內注入Na 2S溶液和Titanium(III)-NTA溶液，把 容器內的厭氧培養基還原至無氧狀態，得到厭氧容器； 二、 由厭氧發酵菌株和還原脫氯菌群中Dehaloabacter菌在厭氧條件下對2, 4, 6-三 溴苯酚進行還原脫溴：將待處理的污染物2, 4, 6-TBP、蛋白胨、葡萄糖依次注入到步驟一 得到的厭氧容器中，再接入活性厭氧發酵菌株和Dehaloabacter菌，將厭氧容器放在溫 度為30?35°C的培養箱中培養，取樣檢測，當其中的苯酚的物質的量大于等于污染物 2, 4, 6-TBP的物質的量的80%時，還原脫溴過程完成； 三、 由硫酸還原菌進行氧化分解：向厭氧容器內注入Na2S04溶液，接入硫酸還原菌株， 繼續在30?35°C的培養箱中培養8?15天，完成細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚。
2. 根據權利要求1所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征在于 步驟一中的厭氧培養基每 l〇〇〇mL 由 lg NH4C1、0. 05g CaCl22H20、0. lg MgCl26H20、0. 4gKH2P04、 200mmol3-(N-嗎啉）丙磺酸、lg刃天青鹽、lmL維他命儲備液、lmL SLelO微量元素溶液和余 量的水組成，pH值為7. 0?7. 2。
3. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特 征在于維他命儲備液每l〇〇〇mL由20mg蛋白生物素、20mg葉酸、100mg維生素 B6、50mg硫胺 素、50mg維生素 B2、50mg泛酸鹽、50mg維生素 B12、50mg對氨基苯甲酸、50mg硫辛酸、50mg 煙酰胺、50mg類脂酸、50mg氯高鐵血紅素、50mgl，2-萘醌、50mg維他命K2和余量的水組成。
4. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其 特征在于所述的SLelO微量元素溶液每1000mL由10mL質量百分濃度為25%的HC1、 1. 5gFeCl3 · 4Η20、0· 07g ZnCl2、0. lg MnCl4 · 4Η20、0· 19g CoCl2 · 6H20、2m CUC12 · 2H20 g、0. 02g NiCl2 · 2H20、0. 04g Na2Mo04 · H20 和余量的水組成。
5. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步驟一中，滅菌處理是在溫度為121°C、壓力為0. 2MPa的滅菌鍋滅菌處理15?30min。
6. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步驟二中，蛋白胨的添加量為0. 01?lmg/L。
7. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步驟二中，葡萄糖的濃度控制在0. 5?2. 5mmol/L之間。
8. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步驟二中，接入活性厭氧發酵菌株后，厭氧發酵菌的初始16S rRNA基因拷貝數為102? 105copies/mL〇
9. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特征 在于步驟二中，接入Dehaloabacter菌的初始16S rRNA基因拷貝數大于8 X 103copies/mL。
10. 根據權利要求1或2所述的一種細菌復合厭氧礦化2, 4, 6-三溴苯酚的方法，其特 征在于步驟三中接種的活性硫酸還原菌的初始16S rRNA基因拷貝數大于104copies ml/1。
【文檔編號】C12P39/00GK104059960SQ201410317146
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年7月4日 優先權日:2014年7月4日
【發明者】李智靈, 王愛杰, 孫凱, 南軍, 程浩毅, 梁斌, 林小秋 申請人:哈爾濱工業大學