一種改進的氨芐西林的制備方法
【專利摘要】本發明涉及制藥領域，提供了一種制備氨芐西林的方法以及該方法獲得的產品，其包括：1)在0℃～30℃條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中,在pH值為5.5～7.5，溫度為10℃～30℃下進行反應；2)將步驟1)所得產物，用酸調至溶液澄清，保持pH值為0.5～2.0，溫度為10℃-30℃；3)將步驟2)所得溶液，降溫至12℃～15℃，然后調節pH至3.00～3.50，再降溫至5℃～6℃、pH值維持在3.50；然后調pH為4.9～5.0降溫到1℃～2℃保持，即得氨芐西林結晶。本發明大幅地提升了氨芐西林產品的收率和質量，提高了生產效率、保證了氨芐西林產品的用藥安全。
【專利說明】一種改進的氨芐西林的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種氨芐西林的制備方法，具體涉及一種改進的酶法制備氨芐西林的方法。
【背景技術】
[0002]氨芐西林，化學名為(25，51?，61?)-3，3-二甲基-6-[00-2-氨基-2-苯乙氨基]-7-氧代-4-硫雜-1-氮雜雙環[3.2.0]庚烷-甲酸，其游離酸含3分子結晶水，它是一種常用的青霉素類廣譜β_內酰胺類抗生素。
[0003]氨芐西林殺菌作用、穿透細胞壁的能力很強，是目前應用較為廣泛的口服青霉素之一。氨芐西林的制備有化學合成法和酶法制備法，化學法相對反應條件苛刻，反應步驟復雜，而且對環境污染較大。而酶促合成方法可以顯著減少反應步驟，反應條件溫和，是生產氨芐西林的重要途徑之一。[0004]《氨芐西林酶促合成方法與介質體系的研究》(潘繩彬，浙江大學理學院，碩士學位論文，20070901)報道了不同介質體系下的氨芐西林酶促的合成方法，主要介紹了有機體系和兩項體系下合成氨芐西林的方法，由于對環境保護的要求，有機體系介質中酶促合成氨芐西林，存在著對環境的污染的問題；而水相體系中相對符合環保要求，但該文中記載的在研究水相體系下的酶促合成氨芐西林的產率并不是很高，即使最佳反應條件下其產率也才為65.6%，而且該水相介質中加入了有機溶劑，底物濃度的比例不適當(例如1:2)，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽用量較大、不是最經濟的和不是最適合大生產，而且實踐證明引入的側鏈越多、產品的質量越差，側鏈不能反應就是產品中的雜質；現有技術文獻為了提高反應效率而添加有機溶劑，與完全水相中反應相比，不利于經濟環保，低毒，過敏源減少；而如何提聞純水相體系下的氣節西林廣率，依然有待進一步的研究，同時提聞氣節西林廣品的質量、保證用藥安全、同樣是藥品研發領域進一步追求的目標。
【發明內容】
[0005]針對以上技術缺陷，本發明提供了一種改進的酶法制備氨芐西林的方法。所述方法包括以下步驟:
[0006]I)在O°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽于水中混合加入到氨芐西林合成酶中，在pH值為5.5~7.5，溫度為10°C~30°C下進行反應；
[0007]2)將步驟I)所得產物，用酸調至溶液澄清，保持pH值為0.5-2.0，溫度為IO0C -300C ；
[0008]3)將步驟2)所得溶液，降溫至12~15°C，然后調節pH至3.00~3.50，再降溫至5-6°C、pH值維持在3.50 ;然后調pH為4.9-5.0,降溫到1_2°C保持，即得氨芐西林結晶。
[0009]本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽與中混合加入到氨芐西林合成酶中的方式，包括但不限于:將6-APA固體與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽的固體于水中混合后攪拌直接加入到氨芐西林合成酶中；或將6-APA固體先溶解然后加入到氨芐西林合成酶中，然后緩慢加入D-苯甘氨酸甲酯或其鹽液體；然后在pH值為5.5~7.5、溫度為10°C~30°C條件下進行反應；
[0010]本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，其中所述D-苯甘氨酸甲酯的鹽包括但不限于鹽酸鹽，還可以是本領域常用的D-苯甘氨酸甲酯的其他藥用鹽。
[0011]本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述pH值為5.5~7.5，pH值范圍包括但不限于5.5~7.0,6.0~7.5,6.6~7.5或6.0~7.0 ;同樣pH值可以為5.5,5.8、
6.0,6.3,6.5,6.8,7.0,7.2或7.5 ;本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述pH值為 6.2 ~6.5。
[0012]本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述反應溫度10°C~30°C范圍包括但不限于:1(TC~25°C、1(TC~2(TC、15°C~2(TC、15°C~25°C、15°C~3(TC、2(TC~3(TC、25°C~30°C ；
[0013]作為實施 方式之一，所述溫度可以是10°C、11°C、12°C、13°C、14°C、15°C、16°C、17。。、18。。、19。。、20。。;2rC、22°C、23t:、24t:、25t:、26t:、27t:、28t:、29t:*3(rC ;作為實施方式之一，所述反應溫度優選為10°C~15°C
[0014]作為本發明實施方式之一，所述步驟I)中，混合及反應過程中的溫度優選為10°C~15°C ;反應過程中的pH值為6.2~6.5;當6-八卩八的殘留量低于211^/1111時，結束反應。
[0015]當本發明步驟I)的反應過程中，為了保持上述pH值范圍，可選擇地使用包括但不限于3N的氨水溶液進行適當調節。
[0016]本發明的所述步驟I)中，作為實施方式之一，所述6-APA與對苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽的重量比為1.0:1.0~1.5，優選1.0:1.0 ;所述氨芐西林合成酶的濃度為1.0KU/L-1.5U/L。
[0017]本發明的所述步驟2)中，作為實施方式之一，所述酸選自鹽酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液，草酸或檸檬酸；優選酸的質量濃度范圍為:10% -30%，其可以為12%~28%、15%~25%、18%~22%的濃度范圍，作為示例性的說明，如質量濃度為10%、11%、12%、13%,14%,15%,16%,17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28^^29^^30%的鹽酸、稀硫酸、稀硝酸、磷酸溶液、草酸、檸檬酸；作為實施方式之一；優選為鹽酸。
[0018]本發明方法中所述步驟2)中，作為實施方式之一，可選擇地加入適量的ETDA-2Na，其中所述“適量”可以由本領域技術人員結合反應產物的量進行確定，如可以為原料6-APA質量的0.5%~2% ;示例性地為0.5%、1%、1.5%或2%的量。
[0019]本發明的所述步驟3)中，作為實施方式之一，所述堿包括但不限于氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀，氫氧化鋇或氫氧化鈣；所述堿的濃度為10-40% ;其可以為12%~38%、12% ~35 %、12% ~30 %、12% ~25 %、15% ~35 %、15% ~30 %、15% ~25 %、18% ~25 %、18% ~35 %、18% ~30 %、18% ~25% ; 10 %、11 %、12 %、13 %、14 %、15 %、16 %、17%,18%,19%,20%,21 %,22%,23%,24%,25%,26%,27%,28%,29%,30%,35%,40%質量濃度的氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀，氫氧化鋇或氫氧化鈣溶液；優選為20%質量濃度的氫氧化鈉溶液。
[0020]作為本發明實施方式之一，本發明方法還進一步包括:[0021]4)析出晶體后，先后用水、可選擇地和70%~95%的甲醇、乙醇或異丙醇、80-98%的丙酮的有機溶劑洗滌，干燥，即得。
[0022]本發明方法中，作為實時方式之一、所述步驟4)中，水或有機溶劑與氨芐西林的重量比是2~3:1，優選為1:1。
[0023]發明方法中，作為實時方式之一、所述步驟4)中，干燥條件為:抽真空攪拌干燥，真空度0.095MPa以下，溫度為45_65°C。
[0024]作為實施方式之一，本發明的所述6-APA、D-對苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽、氨芐西林合成酶和/或水均為本領域常規的原料，符合本領域常規的質量標準要求，優選符合如下標準的、任意來源(市上購買或制備)的原料或更高標準的原料。
[0025]作為本發明優選的實施方式之一，本發明氨芐西林的酶法制備方法優選包括以下步驟:
[0026]加料及反應:
[0027]I) 10°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，氨芐西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L.濃度，控制PH值為5.5-7.5，溫度為10-30°C，當6-APA的 殘留低于2mg/ml，結束反應；可選擇地用3mol/L氨水調節反應過程中的pH值
[0028]結晶:
[0029]2)將步驟I)所得產物，用鹽酸調至溶液澄清，保持pH值為0.5~2.0，溫度為10°C~30°C ;并可選擇地加入適量EDTA-Na ；
[0030]3)然后經過濾進入結晶罐，先降溫至12~15°C，然后用氫氧化鈉溶液調節pH為
3.00~3.50，5~6°C條件下將pH維持在3.50 ;然后用氫氧化鈉溶液調pH為4.9~5.0，降溫到l°c~2°C養晶；其中氫氧化鈉溶液為15-30%質量濃度；
[0031]精制、干燥:
[0032]4)養晶后進行固液分離，分離全部母液后，先純化水洗滌，然后用70%~95%濃度的甲醇、80%~98%的丙酮、或70%~95%乙醇洗滌離心、邊攪拌邊抽真空、使真空度在0.095MPa以下，溫度保持45~65°C、干燥。
[0033]本發明還進一步提供了一種采用本發明方法制備而得的氨芐西林產品，所述產品的氨芐西林含量大于或等于99.5% ;總雜的含量小于或等于為0.20% ;單雜的含量小于或等于0.10 % ο
[0034]相對于現有技術，本發明方法顯著地提高了氨芐西林產品的收率，而且本發明所獲得的氨芐西林產品的質量更高，總雜、單雜的含量顯著地降低。
[0035]與文獻中記載現有技術相比本發明方法在以下幾方面進行了顯著的提高或改進:從反應PH值方面，PH值更接近中性，方便控制，避免強堿強酸的破壞，進一步減少了雜質的生成；從使用的原材料上:不適用有毒有害的原材料，例如:特戊酰氯，吡啶，三乙胺，二氯甲烷等等高致癌的化學原料，只是最后的洗滌環節適用二類溶解丙酮，對人體以及環節是高效低毒；從反應溫度上，溫度相比較化學法來講更方便大生產的控制，因為化學法要在-40°C條件下反應，本發明在10°C _15°C條件下反應，更節能，更環保，更易操作；從結晶方法上，結晶過程全部在水相中進行，無毒無味，健康環保，不加任何有機溶劑，結晶中不加入任何溶解后產品中將不會殘留在晶體內部，使產品質量更好，致敏原更少，工業生產更加高效易控；從精制方面，對于溶劑的選擇上，本發明70% -95%濃度的甲醇，80% -98%的丙酮，70%-95%乙醇洗滌，可以達到更好的效果、如水份好干燥，溶媒殘留更低。
[0036]本發明通過采用藥典(2010年第二版)所記載的穩定性加速試驗方法進行檢測，本發明中各實施例中所得產品的氨芐西林質量穩定，進一步提高了氨芐西林產品的用藥安全。
【具體實施方式】
[0037]本發明通過以下實施例和實驗例進一步闡述本發明，但本發明并不受限于此。
[0038]實施例1
[0039]物料準備:
[0040]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯29g ;氨芐西林合成酶1.0KU/L ;98 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ; 10 %鹽酸56ml ；3mol/L氨水2ml ;20 %氫氧化鈉水溶液38ml ；純化水585ml ο
[0041]制備過程:
[0042]在反應器中 加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯29g攪拌均勻。
[0043]降溫至10°C，加入氨芐西林合成酶1.0KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.4~6.5，溫度10±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量2ml。
[0044]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0045]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至20°C，滴加10%鹽酸56ml后氨芐西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0046]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，滴加36ml20%氫氧化鈉水溶液調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C將pH保持在3.5，2ml20 %氫氧化鈉溶液調節pH至4.9~
5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次,35ml丙酮洗滌I次后于45°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.84g，收率:86.9%。
[0047]實施例2
[0048]物料準備:
[0049]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽35g;氨芐西林合成酶1.0KU/L ;80 %丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 55ml ;10%氫氧化鈉水溶液 78ml ;純化水 585ml。
[0050]制備過程:
[0051]在反應器中加入純化水350ml，攪拌下加入6-APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽35g，攪拌均勻。
[0052]降溫至11 °C，加入氨芐西林合成酶1.3KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度11±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量55ml。
[0053]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0054]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至21°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.04加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0055]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，用10%氫氧化鈉水溶液74ml調節pH至
3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值3.5，然后10%氫氧化鈉水溶液4ml調節pH至4.9~
5.0，繼續降溫至I~2°C養晶30min、分離結晶液，濾餅用35ml純化水洗滌I次，35ml80%丙酮洗滌I次后于50°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.77g，收率:86.8%。
[0056]實施例3
[0057]物料準備:
[0058]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液88ml (濃度400mg/ml);氨節西林合成酶 1.2KU/L ;70% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;20%鹽酸 28ml ;3mol/L 氨水 46ml ;15%氫氧化鈉水溶液51ml ;純化水497ml。
[0059]制備過程:
[0060]在反應器中加入純化水262ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液88ml，攪拌均勻。
[0061]降溫至12°C，加入氨芐西林合成酶1.2KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度12±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量46ml。
[0062]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0063]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至22°C，滴加20%鹽酸28ml后氨芐西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0064]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，然后用15%氫氧化鈉溶液48ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值在3.50，然后用15 %氫氧化鈉溶液3ml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml70%甲醇洗滌I次后，于55°C，真空度0.09MP下烘干，得氨芐西林:56.26g，收率:86.1%。
[0065]實施例4
[0066]物料準備:
[0067]6-APA35g;D-苯甘氨酸甲酯37g;氨芐西林合成酶1.5KU/L ;95 %甲醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;30 %鹽酸19ml ;3mol/L氨水IOml ;25 %氫氧化鈉水溶液28ml ;純化水585ml ο
[0068]制備過程:
[0069]在反應器中加入純化水350ml,攪拌下加入6_APA35g, D-苯甘氨酸甲酯37g,攪拌均勻。
[0070]降溫至13°C，加入氨芐西林合成酶1.5KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.3~6.4，溫度13±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量10ml。
[0071]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0072]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至23°C，滴加30%鹽酸19ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0073]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，然后25%氫氧化鈉水溶液27ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6 °C保持pH在3.5，然后用25%氫氧化鈉水溶液Iml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml95%甲醇洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.42g，收率:86.3%。
[0074]實施例5
[0075]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽44g ;氨節西林合成酶1.4KU/L ；95 %乙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 65ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0076]制備過程:
[0077]在反應器中加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯37g，攪拌均勻。
[0078]降溫至14 °C，加入氨芐西林合成酶1.4KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度14±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量65ml。[0079]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0080]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至23°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0081]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，用20%氫氧化鈉水溶液37ml調節pH至
3.0~3.5，降溫至5~6°C將pH值保持在3.50，然后用25%氫氧化鈉水溶液Iml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml的95%乙醇洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.59g，收率:86.6%。
[0082]實施例6
[0083]6-APA35g ;D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液116ml (濃度380mg/ml);氨節西林合成酶 1.5KU/L ;80% 乙醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ;15% 鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 60ml ;25%氫氧化鈉水溶液29ml ;純化水469ml。
[0084]制備過程:
[0085]在反應器中加入純化水234ml，攪拌下加入6_APA35g，D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液116ml，攪拌均勻。
[0086]降溫至15 °C,加入氨節西林合成酶1.5KU/L,反應全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度15±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量60ml。
[0087]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0088]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至24°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.05加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0089]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C然后用25%氫氧化鈉水溶液28ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH維持在3.5，然后用25%氫氧化鈉溶液Iml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%乙醇洗滌I次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.llg，收率:85.8%。
[0090]實施例7
[0091]物料準備:
[0092]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽43g ;氨芐西林合成酶1.3KU/L ;80%異丙酮35ml ；EDTA-2Na0.35g ;10%鹽酸 55ml ；3mol/L 氨水 20ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0093]制備過程:
[0094]在反應器中加入純化水350ml,攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯43g,攪拌均勻。
[0095]降溫至15°C，加入氨芐西林合成酶1.3KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度14±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量20ml。
[0096]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0097]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至24°C，滴加10%鹽酸55ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0098]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，然后用20%氫氧化鈉水溶液37ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值在3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液Iml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%異丙酮洗滌I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.34g，收率:
86.2%。
[0099]實施例8
[0100]物料準備:
[0101]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽52.5g ;氨芐西林合成酶1.2KU/L ;90%異丙醇35ml ；EDTA-2Na0.35g ;15%鹽酸 37ml ;3mol/L 氨水 48ml ;20%氫氧化鈉水溶液 38ml ;純化水 585ml。
[0102]制備過程:
[0103]在反應器中加入純化水350ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽52.5g，攪拌均勻。
[0104]降溫至14°C,加入氨節西林合成酶1.2KU/L,反應全程用3mol/L氨水控制pH值
6.4~6.5，溫度14±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量 70ml。
[0105]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0106]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至21°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.06加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0107]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，然后用20%氫氧化鈉水溶液37ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH值3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液Iml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液,濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml的90%異丙酮洗滌 I次后于60°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.77g，收率:86.8%。[0108]實施例9
[0109]物料準備:
[0110]6-APA35g ;D_苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液125ml (濃度420mg/ml);氨節西林合成酶 1.4KU/L ;80% 甲醇 35ml ;EDTA_2Na0.35g ; 15%鹽酸溶液 37ml ;3mol/L 氨水 72ml ；20%氫氧化鈉水溶液38ml ;純化水460ml。
[0111]制備過程:
[0112]在反應器中加入純化水225ml，攪拌下加入6_APA35g、D-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽水溶液125ml，攪拌均勻。
[0113]降溫至15°C，加入氨芐西林合成酶1.4KU/L，反應全程用3mol/L氨水控制pH6.2~6.3，溫度15±0.5°C，反應至6-APA殘留濃度< 2mg/ml時停止反應，3mol/L氨水用量72ml。
[0114]將氨芐西林合成酶分離，得到氨芐西林粗品。
[0115]在燒杯中，投入氨芐西林粗品，加入200ml純化水，升溫至22°C，滴加15%鹽酸37ml后氨芐西林溶解，pH = 1.01加入EDTA_2Na0.35g，攪拌IOmin后過濾得清液。
[0116]將清液轉入結晶罐中，降溫至12~15°C，滴加20%氫氧化鈉水溶液38ml調節pH至3.0~3.5，降溫至5~6°C保持pH3.50，然后用20%氫氧化鈉水溶液2ml調節pH至4.9~5.0,繼續降溫至I~2°C養晶30min,分離結晶液，濾餅用35ml純化水洗漆I次，35ml80%甲醇洗滌I 次后于55°C，真空度0.09MP下烘干。得氨芐西林:56.69g，收率:
86.7%。
[0117]實驗例I加速穩定性試驗
[0118]實驗儀器:高效液相色譜儀、氣相色譜儀、聚合物測定儀、卡氏水分測定儀、旋光儀
坐寸ο
[0119]高效液相的條件:波長:225nm,紫外檢測器,流速:1.0ml/minl,流動相:磷酸鹽緩沖液:乙腈=95:5，
[0120]高效液相色譜儀:島津LC-20A，氣相色譜儀:島津GC-2010，卡氏水分測定儀:瑞士萬通870型，旋光儀:數字自動旋光儀WZZ-2S
[0121]實驗方法:在各時間點取樣，按藥典2010版記載的關于加速穩定性的方法檢測。分取采用實施例6，實施例7，實施例8，實施例9的方法制備的樣品60g，密封袋兩層密封，放置于溫度為40°C、濕度75% ±5%的加速試驗箱。
[0122]實驗結果:
[0123]實施例6所得氨芐西林產品的加速試驗結果
[0124](400C ±2°C、RH75% ±5% )
[0125][0126]
【權利要求】
1.一種酶法制備氨芐西林的方法，所述方法包括: 1)在0°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，在pH值為5.5~7.5，溫度為10°C~30°C下進行反應； 2)將步驟I)所得產物，用酸調至溶液澄清，保持pH值為0.5~2.0，溫度為10°C~30 0C ； 3)將步驟2)所得溶液，降溫至12~15°C，然后堿調節pH值至3.00~3.50，再降溫至5°C~6°C、維持pH值在3.50 ;然后調堿pH值為4.9~5.0，降溫到1°C~2°C保持，即得氨節西林結晶。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，6-APA與對苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽的質量比為1.0:1.0~1.5，優選1.0: 1.0 ;所述氨芐西林合成酶的濃度為1.0KU/L-1.5U/L。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟I)中，反應過程的溫度優選為10°C~15°C ;反應過程中的pH值為6.2~6.5 ;可選擇地當6-APA的殘留量低于2mg/ml時，結束反應。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的溫度為20°C~24°C;可選擇地加入適量EDTA-2Na。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中的酸選自鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸溶液、草酸或檸檬酸；優選酸的質量濃度范圍為10%~30%。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)中的堿選自氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀、氫氧化鋇或氫氧化鈣；優選堿的質量濃度為10~40%。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法還包括: 4)步驟3)析出晶體后，用水、可選擇地和70%~95%的甲醇、乙醇或異丙醇、或80-98%的丙酮的有機溶劑洗滌，干燥，即得；優選所述水或有機溶劑與氨芐西林的重量比為 1:1。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟4)中，干燥條件為:抽真空攪拌干燥，真空度0.095MPa以下，溫度為45_65°C。
9.根據權利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括: 1)10°C~30°C條件下，將6-APA與D-苯甘氨酸甲酯或其鹽酸鹽于水中混合加入氨芐西林合成酶中，氨芐西林合成酶是1.0KU/L-1.5KU/L濃度，在PH值為5.5-7.5，溫度為10-30°C下進行反應，當6-APA的殘留低于2mg/ml，結束反應；可選擇地用3mol/L氨水調節反應過程中的pH值； 2)將步驟I)所得產物用鹽酸調至溶液澄清， 3)保持pH值為0.5-2.0，溫度為10°C-3(TC ;然后經過濾進入結晶罐，先降溫至12~15°C，然后用氫氧化鈉溶液調節pH為3.00~3.50，5_6°C條件下將pH維持在3.50 ;然后用氫氧化鈉溶液調PH為4.9-5.0,降溫到1_2°C養晶；其中氫氧化鈉溶液為15-30%濃度； 4)養晶后進行固液分離，分離全部母液后，先進行純化水洗滌，然后用70%-95%濃度的甲醇，80% -98%的丙酮，或70% -95%乙醇洗滌離心、邊攪拌邊抽真空、使真空度在0.095MPa以下，溫度保持45-65°C、干燥。
10.一種權利要求1-9任一所述的方法獲得的氨節西林產品,其特征在于,所述產品中氨芐西林含 量大于或等于99.5% ;總雜的含量小于或等于為0.20% ;單雜的含量小于或等于 0.10%。
【文檔編號】C12P37/04GK103937866SQ201410197856
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年5月12日 優先權日:2014年5月12日
【發明者】劉紅池 申請人:聯邦制藥(內蒙古)有限公司