一種促進蘭花生長和防病的方法
【專利摘要】本發明為一種促進蘭花生長和防病的方法，涉及一種在防治病害的同時，還能促進蘭花發枝、延長花期的方法。本發明在蘭花分株移植時，按哈茨木霉T216制備的孢子濃度為1×107-1×108個孢子/g的固態培養物與培養基質1:50的質量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株，在蘭花生長期間，該固態培養物可誘導蘭花植株對白絹病、立枯病、炭疽病等真菌性病害及歐氏桿菌引起的細菌性軟腐病的抗性，減少植株發病率，降低病情指數；并促進蘭花提早發枝，增加蘭花的葉片數。此外，本發明研究發現在蘭花初現花苞時，將哈茨木霉T216的液態培養物調節成1×105-1×107個孢子/mL的濃度，對蘭花植株進行噴霧處理，可增加蘭花的花枝數及延長蘭花的花期。
【專利說明】一種促進蘭花生長和防病的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于促進蘭花生長和防病的栽培【技術領域】，涉及一種哈茨木霉T216在防治蘭花病害的同時，還能促進蘭花發枝、延長花期的方法。
【背景技術】
[0002]蘭花紫莖綠葉，四季常青，葉姿清雅瀟灑，開花清香幽遠，更因高潔、典雅的氣質名列百花之冠，為世人廣為栽培。在人工條件下栽培，選擇合適的栽培基質非常重要。國內外用于蘭花栽培植料一般由天然礦物、田園土壤、工農業有機無機廢棄物的單質或混合(復合體)，它基本具備了水、肥、汽、熱等類似于自然土壤可供植物生長的肥力特性。目前，人工配制的栽培基質也越來越多地應用到蘭花栽植中，其中常用的基質材料主要有以下幾種:蘭石，浮石，蛭石，蛇木，陶粒，爐渣，木炭，水苔，樹皮，珍珠巖，木屑，花泥，松針，腐葉，稻殼，椰糠，泡沫塑料或泥炭，這些培養基質能提供蘭花生長養分供應需要。但蘭花在生長過程中常會受到病原真菌、細菌及病毒等微生物的為害，從而引起蘭花產生腐爛、發銹、猝倒、枯萎、潰瘍、炭疽、痂斑、斑點等癥狀，嚴重影響蘭花的生長和品質。據統計，僅為害蘭花的病原真菌就約有30余屬100多種。常見的為:引起炭疽病的刺孢盤屬(Collectotrichum),引起白絹病的小核菌屬(Sclerotium),引起花果枯萎病的葡萄孢屬(Botrytis),引起黑腐病或心腐病的疫霉屬(Phytophthora),引起葉斑病或枯萎病的鐮刀菌屬(Fusarium),以及引起銹病的夏孢銹菌屬(Uerdo)、鞘銹菌屬(Coleosporium)等。而現有的普通培養基質自身還不具有防病殺菌的功效。
[0003]目前蘭花病害多采用化學藥劑防治，常引發①農藥使用過量，引起蘭花藥害；②對侵染病原菌判斷不準確，不能對癥下藥錯過防治適期，防治效果低；④長期單一使用殺菌劑，使病原菌產生抗藥性；⑤污染環境等問題。目前也有一些采用物理、生物等方法防治蘭花的研究報道，如用一定濃度的食醋防治蘭花的黑斑病和白粉病等，這也存在防治適期不易掌握及防治效果偏低的缺點。此外，蘭花多采用鱗莖分株的方法進行擴繁種植，若未做好栽植基質和種莖消毒，病害也會很快傳播蔓延。因此，探索出一種適合于蘭花病害防治，而且同時又能促進蘭花生長的方法是目前蘭花栽培【技術領域】急需解決的問題。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是針對蘭花人工栽培中，常受真菌性及細菌性病原菌侵染為害，但現有防治方法存在諸多缺陷的情況，提供一種在防治病害的同時，還能促進蘭花發枝、延長花期的方法。
[0005]本發明的目的是通過以下方式實現的:
[0006]一種促進蘭花生長和防病 的方法，應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧，促進蘭花的發枝，延長花期，減少病害的發生。
[0007]上述方法中優選在蘭花以球莖分株移栽時，應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻作為移栽栽培基質；在蘭花現苞時，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧。
[0008]上述方法中所述的木霉菌是保藏編號為CCTCC NO:M207141的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) T216。
[0009]上述方法中所述的木霉菌的固態培養物的培養過程為:
[0010]配制稻麩粉固體培養基，用水拌濕，分裝，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入木霉菌的種子菌，24-26°C培養，經常搖動瓶體，待木霉菌絲長滿培養基并產生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，此時孢子濃度為I X IO8-1 X IO9個孢子/g，加珍珠巖將孢子濃度調節為I X IO7-1 X IO8個孢子/g，得到固態培養物。
[0011]上述方法中蘭花移植時，按固態培養物與栽培基質1:50的質量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株即可。
[0012]上述方法中所述的稻麩粉固體培養基是每1000g培養基中含麥麩500g，米糠450g,玉米粉 30g, (NH4)2SO4IOg,葡萄糖 IOg0
[0013]上述方法中木霉菌液態發酵培養物按如下方法獲得:發酵罐發酵:按體積比10%的接種量將種子菌接入發酵罐培養基中，進行發酵，發酵控制參數為:溫度控制，分為兩個階段，發酵第一階段(菌體培養階段):0-72小時，26-28°C，發酵第二階段(代謝產物產生階段):72-200 小時，23-25°C;通氣量(V/V):0-20 小時:1:0.6 ;20_40 小時:1:0.8 ;40_80 小時:1:1.2 ；80小時以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;整個發酵過程pH值控制為6.5-6.8 ；發酵完成后將發酵醪用氫氧化鈉溶液調至PH為7.5，悶罐過夜，過濾，即可。
[0014]上述方法中發酵罐培養基:1.5-2.0%麥麩汁液，0.5-1.0%葡萄糖，2.0-3.0%玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏，0.1-0.5%CaC03, 0.01-0.03%MgS04.7H20,0.5-0.8%KH2P04 和 K2HPO4, pH值為6.5-6.8，余量為水，所述 百分比均為重量百分比；通入蒸汽達121°C滅菌30分鐘；其中麥麩汁液為每200g麥麩加水1000mL的浸潰液。
[0015]上述方法中種子菌的培養:培養基配方:可溶性淀粉30g,葡萄糖20g,蛋白胨5g,KH2PO4Ig, MgSO4.7Η200.5g, CaCO30.25g, (NH4) 2S042g, 7jC 1000mL, pH6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為200mL，經115°C滅菌20分鐘；在無菌條件下，將培養于PDA試管斜面培養基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± I°C的培養溫度，150轉/分的轉速條件下，培養60小時，獲到制備的種子菌。
[0016]上述方法中在蘭花初現花苞時，將液態發酵培養物用水調節成I X IO5-1 X IO7個孢子/mL的濃度，對蘭花植株進行噴霧處理，優選I X IO6個孢子/mL。
[0017]本發明的有益效果:
[0018]1、本發明首次提出了一種促進蘭花生長和防病的方法，現有技術中多采用化學殺菌劑對蘭花進行防病，往往造成環境污染、引起蘭花藥害、使病原菌產生抗藥性等一系列問題；即便偶爾應用物理、生物等防治方法，也會出現防治適期不易掌握及防治效果偏低的缺點，更沒有在防病的同時還能促進蘭花生長的制劑或者方法出現；可以說目前幾乎沒有關于達到蘭花病害生物防治以及促進蘭花生長，延長花期共同效果的研究報道。
[0019]2、本發明應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧，能有效減少病害的發生，促進蘭花的發枝，延長花期。
[0020]3、本發明優選在蘭花移栽時，應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻，優選在蘭花現苞時，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧，通過大量的研究表明，選擇在合適的時間，以及合適的處理方式能夠進一步體現本發明的效果和優勢。
[0021]4、本發明優選木霉菌是保藏編號為CCTCC NO:M207141的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T216。該木霉菌有抗化學殺菌劑的優勢，在蘭花栽培過程中如果使用了其他的化學殺菌劑，則能有效防止其對該木霉的殺滅作用，保證木霉菌的存活和防病、促進生長功倉泛。
[0022]5、本發明研究發現在蘭花分株移植時，在常用的栽培基質中按孢子濃度為
IX IO7-1 X IO8個孢子/g的固態制劑與培養基質1:50的質量比，將二者混勻裝盆，再栽入蘭花植株，在蘭花生長期間，該固態培養物可誘導蘭花植株對白絹病、立枯病、炭疽病等真菌性病害及歐氏桿菌(Erwinia)引起的細菌性軟腐病的抗性，減少發病率，降低病情指數；并促進蘭花的新葉提早發枝，增加蘭花的葉片數。
[0023]6、本發明研究發現在蘭花初現花苞時，將液態培養物調節成I X IO5-1 X IO7個孢子/mL的濃度，優選I X IO6個孢子/mL的濃度，對蘭花植株進行噴霧處理，可增加蘭花的花枝數及延長的花期。
[0024]本發明涉及的哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T216
[0025]保藏日期:2007年9月7日
[0026]保藏單位名稱:中國典型培養物保藏中心
[0027]保藏單位簡稱:CCTCC
[0028]保藏號為:CCTCCN0.M207141
[0029]保藏地址:中國.武漢.武漢大學。
【具體實施方式】
[0030]以下結合實施例旨在進一步說明本發明，而非限制本發明。
[0031]實施例1制備實施例
[0032](I)母種的保存:哈茨木霉(Trichoderma harzianum)突變型菌株T216采用試管PDA斜面培養基培養；
[0033](2)種子菌的培養:培養基配方:可溶性淀粉30g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，KH2P04lg，MgSO4.7Η200.5g, CaCO30.25g, (NH4) 2S042g，水 1000mL, ρΗ6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為200mL，經115°C滅菌20分鐘。在無菌條件下，將培養于PDA試管斜面培養基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± 1°C的培養溫度，150轉/分的轉速條件下，培養60小時，獲到制備的種子菌。
[0034](3)T216菌株固態培養物的制備:配制稻麩粉固體培養基:每1000g培養基中含麥麩500g，米糠450g，玉米粉30g，(NH4) 2S0410g,葡萄糖10g，加水至培養基含水量為70_80%，分裝于罐頭瓶中，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入種子菌，24-26°C培養，經常搖動瓶體，待木霉菌絲長滿培養基并產生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，孢子濃度一般為I X IO8-1 X IO9個孢子/g，再加入珍珠巖將孢子濃度調節為I X IO7-1 X IO8個孢子/g，即為T216菌株固態培養物。
[0035](4)T216菌株液態培養物的制備:配制發酵罐培養基:1.5_2.0%麥麩汁液，
0.5-1.0% 葡萄糖，2.0-3.0% 玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏。0.1-0.5%CaC03, 0.01-0.03%MgS04.7H2O, 0.5-0.8%KH2P04和K2HPO4, pH值為6.5-6.8，余量為水(所述百分比均為重量百分比);通入蒸汽達121°C在位滅菌30分鐘。按10% (V/V)的接種量將三角瓶中培養的種子菌接入發酵罐，進行控制發酵，發酵控制參數為:溫度控制，分為兩個階段，發酵第一階段菌體培養階段0-72小時，26-28°C，發酵第二階段代謝產物產生階段72-200小時，23_25°C ;通氣量(V/V):0-20 小時:1:0.6 ；20-40 小時:1:0.8 ;40_80 小時:1:1.2 ；80 小時以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;發酵全過程pH值控制在6.5-6.8 ;發酵醪用氫氧化鈉溶液調pH為7.5，悶罐過夜，滅菌紗布真空過濾，密封包裝，即成T216菌株液態培養物。
[0036]實施例2應用實施例①
[0037]應用按照實施例1方法制備的T216固態培養物(以下稱T216固態菌劑，孢子濃度為I X IO7個孢子/g)進行蘭花栽培試驗，該實驗是在長沙市馬坡嶺湖南省園藝研究所蘭花栽培園進行。在蘭花(建蘭)分株移植時，在常用的栽培基質中按T216固態菌劑與培養基質1:50的質量比，將二者混勻裝盆，再移入蘭花植株，按常規方法管理，30d、120d后調查每盆蘭花所生新苗。120d后調查植株發病情況，每株如有一片及一片以上葉片有明顯病害癥狀，就算為發病株。試驗結果如表1所示。
[0038]表1木霉T216固態制劑對蘭花防病促生長的效果
【權利要求】
1.一種促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧，促進蘭花的發枝，延長花期，減少病害的發生。
2.根據權利要求1所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，在蘭花以球莖分株移栽時，應用木霉菌的固態培養物與蘭花培養基質混勻，在蘭花現苞時，應用木霉菌的液態發酵培養物對蘭花植株進行噴霧。
3.根據權利要求2所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的木霉菌是保藏編號為 CCTCC NO:M207141 的哈茨木霉(Trichoderma harzianum) T216。
4.根據權利要求1或2或3所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的木霉菌的固態培養物的培養過程為: 配制稻麩粉固體培養基，用水拌濕，分裝，滅菌冷卻；在無菌條件下，接入木霉菌的種子菌，24-26°C培養，經常搖動瓶體，待木霉菌絲長滿培養基并產生大量綠色分生孢子后，倒出，攤開粉碎陰干，過40目篩，此時孢子濃度為1 X 108-1 X 109個孢子/g，加珍珠巖將孢子濃度調節為1 X10-1 X 108個孢子/g，得到固態培養物。
5.根據權利要求4所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，蘭花移植時，按固態培養物與栽培基質1:50的質量比，將二者混勻，再栽入蘭花植株即可。
6.根據權利要求4所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，所述的稻麩粉固體培養基是每1000g培養基中含麥麩500g，米糠450g，玉米粉30g，(NH4)2S0410g，葡萄糖10g。
7.根據權利要求1或2或3所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，木霉菌液態發酵培養物按如下方法獲得:發酵罐發酵:按體積比10%的接種量將種子菌接入發酵罐培養基中，進行發酵，發酵控制參數為:溫度控制，分為兩個階段，發酵第一階段:0-72小時，26-28°C，發酵第二階段=72-200 小時，23_25°C ;通氣量(V/V):0-20 小時:1:0.6 ；20-40小時:1:0.8 ；40-80小時:1:1.2 ；80小時以后:1:0.6 ;攪拌速度:250-300rpm ;整個發酵過程PH值控制為6.5-6.8 ;發酵完成后將發酵醪用氫氧化鈉溶液調至pH為7.5，悶罐過夜，過濾，即可。
8.根據權利要求7所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，發酵罐培養基:1.5-2.0% 麥麩汁液，0.5-1.0% 葡萄糖，2.0-3.0% 玉米粉，1.0-2.0% 酵母膏，0.1-0.5%CaC03,0.01-0.03%MgS04.7H20,0.5-0.8%KH2P04 和 K2HPO4, pH 值為 6.5-6.8，余量為水，所述百分比均為重量百分比；通入蒸汽達121°C滅菌30分鐘；其中麥麩汁液為每200g麥麩加水1000mL的浸潰液。
9.根據權利要求4或7所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，種子菌的培養:培養基配方:可溶性淀粉30g,葡萄糖20g，蛋白胨5g，KH2PO4Ig, MgSO4.7Η200.5g，CaCO30.25g，(NH4)2S042g,水 1000mL, pΗ6.9，分裝于 500mL 三角瓶中，裝液量為 200mL,經115°C滅菌20分鐘；在無菌條件下，將培養于PDA試管斜面培養基上的哈茨木霉T216菌株接入三角瓶中，于27± 1°C的培養溫度，150轉/分的轉速條件下，培養60小時，獲到制備的種子菌。
10.根據權利要求7所述的促進蘭花生長和防病的方法，其特征在于，在蘭花初現花苞時，將液態發酵培養物用水調節成1X 105-1X 107個孢子/mL的濃度，對蘭花植株進行噴霧處理。
【文檔編號】C12N1/14GK103875717SQ201410130978
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年4月2日 優先權日:2014年4月2日
【發明者】魏林, 梁志懷, 張屹, 李麗輝, 李萌, 陳玉榮, 李衛東 申請人:湖南省植物保護研究所