一種白僵菌的固體培養基以及白僵菌的培養方法
【專利摘要】本發明提供了一種白僵菌的固體培養基以及白僵菌的培養方法，其中，本發明的固體培養基包括按質量比1：（1～1.2）：（1～1.2）的蛭石、麥麩以及玉米粉，將蛭石、麥麩以及玉米粉混合蒸汽滅菌40min得到；在此基礎上，本發明將白僵菌接種液在加有硫酸慶大霉素的液體擴大培養基培養后，再接種于固體培養基中，在25～27℃培養7.5～8d后收獲。本發明固體培養基具有良好的保濕性和透氣性，能為白僵菌增殖提供豐富的N源和C源營養，原料經濟易得。本發明的培養方法，操作簡單，流程清晰，對生產環境和生產設備要求不高，生產成本較低，生產周期較短，在生產中不需要對培養基進行倒料，杜絕了生產中雜菌的污染問題，非常適合小型企業和生產單位快速生產白僵菌。
【專利說明】一種白僵菌的固體培養基以及白僵菌的培養方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于發酵培養【技術領域】，尤其涉及一種白僵菌的固體培養基以及白僵菌的培養方法。
【背景技術】
[0002]白僵菌是一種常見的具有殺蟲廣譜性的昆蟲病原真菌，具有寄主范圍廣，致病力強，對人、畜和植物無毒害，不殺傷天敵，不污染環境，無化學農藥殘留、易于培養、防治成本具有競爭力等特點，是目前國內外研究應用最廣泛的害蟲生物防治病原真菌，已成功用于國內外數十種重大農、林業害蟲的生物防治實踐，并開發出多種白僵菌生物制劑用于商品化生產，白僵菌已是目前生物防治中應用最廣、使用面積最大的生物病原真菌殺蟲劑。白僵菌生物農藥的生產和使用是解決化學農藥殘留污染問題的主要途徑，已成為農業害蟲防治的最主要措施之一，對保障農、林業綠色食品生產及食品安全和保護環境具有重要意義。[0003]白僵菌經濟、快速大量增殖生產是白僵菌大量用于生物防治實踐的前提條件。目前白僵菌大量培養的主要方式包括液態培養、固態培養和液固兩相培養三種。其中液態培養的過程中白僵菌主要以芽生孢子和菌絲為主要產物，由于芽生孢子對害蟲活性低，不易保存，因此傳統液態培養并不適合作為制劑生產的方式。在固態培養的過程中，白僵菌可形成分生孢子，能夠有效侵染蟲體，而且易于保存，但是存在培養周期長，產量較低，產品質量不穩定的缺點。目前最常用的培養方式是液固兩相培養，首先使用種子液進行液態培養獲得大量菌絲體和芽生孢子，然后接種在固體培養基上進行二次培養，生產分生孢子。這種培養方式可縮短生產周期，保證大量培養的效率和所產孢子的質量，但需要盡量降低生產成本和縮短生產周期。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種白僵菌的固體培養基以及白僵菌的培養方法，旨在解決現有技術中所存在的培養周期長、產量較低、產品質量不穩定以及成本高等問題。
[0005]本發明是這樣實現的，一種白僵菌的固體培養基，其特征在于，包括按質量比1:(I~1.2): (I~1.2)的蛭石、麥麩以及玉米粉，將蛭石、麥麩以及玉米粉混合蒸汽滅菌40min得到。
[0006]本發明進一步提供了上述白僵菌的培養方法，包括以下步驟:
[0007](I)加入5ml濃度為IO7孢子/mL的白僵菌接種液于150ml液態擴大培養基中，在27±1°C、220~250r/min震蕩條件下培養72h ；
[0008](2)接入權利要求1的固體培養基，所述固體培養基放置在用滅菌報紙封口的滅菌罐頭瓶中，每瓶固體培養基15g，接菌量為10~15ml/100g，加滅菌水量為50%~55%，罐頭瓶放入8#夾鏈袋中封口，在25~27°C培養7.5~8d后收獲。
[0009]優選地，在步驟(1)中，所述液態擴大培養基的制備過程包括:將Sg葡萄糖、2g蛋白胨、2g 酵母浸膏、0.2gNaH2P04,0.1gMgSO4^0.1gKCl 以及 200mlH20 在 121°C滅菌 40min，冷卻后加入0.1%的硫酸慶大霉素。
[0010]本發明克服現有技術的不足，基于白僵菌的液固兩相培養方式，摸索出了一種能快速大量培養白僵菌分生孢子的生產方法和簡易培養基配方，以解決生產部門和基層農技部門白僵菌生產和使用的實際需要，提高我國白僵菌生物防治面積。
[0011]其中，本發明的固體培養基中，蛭石作為填充基質能改善和擴大白僵菌與營養物質的接觸面，同時保證培養基的保濕性和透氣性，改善固體培養基的物理性質，有利于白僵菌的快速增殖。麥麩和玉米粉作為固體培養基的營養物質為白僵菌增殖提供豐富的N源和C源營養，其原料經濟易得，能保證白僵菌大量增殖的營養需要。
[0012]此外，本發明的白僵菌的培養方法，操作簡單，流程清晰，對生產環境和生產設備要求不高，生產成本較低，生產周期較短，在生產中不需要對培養基進行倒料，杜絕了生產中雜菌的污染問題，非常適合小型企業和生產單位快速生產白僵菌。
【具體實施方式】
[0013]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0014]實施例1
[0015](I)白僵菌的固體培養基的制備:
[0016]將5g蛭石、5~6g麥麩以及5~6g玉米粉混合蒸汽滅菌40min得到。
[0017](2)液態擴大培養基的制備:
[0018]將Sg 葡萄糖、2g 蛋白胨、2g 酵母浸膏、0.2gNaH2P04、0.lgMgS04、0.1gKCl 以及200mlH20混合后得到的混合物蒸汽滅菌40min，冷卻后加入混合物質量分數0.1%硫酸慶大
霉素O
[0019]實施例2
[0020]一種白僵菌的培養方法，包括以下步驟:
[0021](I)加入5ml濃度為IO7孢子/mL的白僵菌接種液于實施例1中的150ml液態擴大培養基中在27 ± I °C、220~250r/min轉震蕩培養72h ；
[0022](2)接入實施例1中的固體培養基，所述固體培養基放置在用滅菌報紙封口的滅菌罐頭瓶中，每瓶固體培養基15g，接菌量為10~15ml/100g，滅菌水量50%~55%，罐頭瓶放入8#夾鏈袋中封口，在25~27°C培養7.5~8d后收獲。
[0023](3)將收獲產物進行測量，烘干前產分生孢子量達3.7X IO9孢子/g，烘干后單位產孢量每克達100億個以上。
[0024]相比于 現有技術的缺點和不足，本發明具有以下有益效果:
[0025]1.培養基配方和制作方法簡單，材料易得，成本低廉，分生孢子產量高。
[0026]2.白僵菌的培養方法操作簡單，生產工藝流程清晰，生產周期短，分生孢子產量聞。
[0027]3.對生產環境和生產設備要求低，可操作性強，生產成本較低，非常適合小型企業和生產單位快速生產白僵菌用于害蟲生物防治需要。
[0028]4.在生產中不需要對培養基進行倒料，杜絕了生產中雜菌的污染問題，能生產出純凈的白僵菌，產品質量高。
[0029]以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的 任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種白僵菌的固體培養基，其特征在于，包括按質量比1: (1~1.2): (1~1.2)的蛭石、麥麩以及玉米粉，將蛭石、麥麩以及玉米粉混合蒸汽滅菌40min得到。
2.一種白僵菌的培養方法，其特征在于包括以下步驟: (1)加入5ml濃度為IO7孢子/mL的白僵菌接種液于150ml液態擴大培養基中，在27 ± 1 °C、220~250r/min震蕩條件下培養72h ； (2)接入權利要求1的固體培養基，所述固體培養基放置在用滅菌報紙封口的滅菌罐頭瓶中，每瓶固體培養基15g，接菌量為10~15ml/100g，加滅菌水量為50%~55%，罐頭瓶放入8#夾鏈袋中封口，在25~27°C培養7.5~8d后收獲。
3.如權利要求2所述的白僵菌的培養方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述液態擴大培養基的制備過程包括:將8g葡萄糖、2g蛋白胨、2g酵母浸膏、0.2gNaH2P04、0.1gMgSO4、0.1gKCl以及200mlH20在121°C滅菌40min，冷卻后加入0.1%的硫酸慶大霉素。
【文檔編號】C12R1/645GK103881930SQ201410123023
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月28日 優先權日:2014年3月28日
【發明者】趙奎軍, 于洪春, 宋龍騰, 戴長春, 裴海英 申請人:東北農業大學