一種利用連鎖不平衡在家系中篩查Wilson disease基因突變的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用連鎖不平衡在家系中篩查Wilson?disease基因突變的方法，它基于連鎖不平衡原理，以單核苷酸多態(tài)性基因分型的方法，依靠6個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)確定肝豆?fàn)詈俗冃曰颊咭约捌湫值芙忝?或者三級(jí)以內(nèi)親屬)的基因型狀態(tài)，將家系其他成員的單倍型與先證者的單倍型相比較判斷是否為患病或雜合攜帶者。
【專利說(shuō)明】—種利用連鎖不平衡在家系中篩查Wi Ison disease基因突變的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種利用連鎖不平衡在家系中篩查Wilson disease基因突變的方法，尤其是用于家系篩查的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝豆?fàn)詈俗冃?，又稱Wilson Disease(WD)，是一種較為常見的常染色體隱性遺傳病，其致病基因?yàn)锳TP7B，在中國(guó)漢族人群的攜帶率為1/50.Wilson Disease的發(fā)病呈漸進(jìn)性，如果能早期發(fā)現(xiàn)純合性突變者，可以進(jìn)行排銅治療，但如果發(fā)現(xiàn)較晚，則會(huì)造成不可逆的神經(jīng)損害.ATP7B基因較大，用DNA測(cè)序方法檢測(cè)成本很高.臨床多采用血漿銅藍(lán)蛋白檢測(cè)篩檢，但其敏感性不及DNA測(cè)序，且攜帶者的檢出是銅藍(lán)蛋白檢測(cè)的最大局限.曾有利用微衛(wèi)星序列多態(tài)性檢測(cè)ATP7B基因區(qū)域的單倍型來(lái)推測(cè)其突變情況，但微衛(wèi)星序列的基因分型對(duì)設(shè)備的要求和成本均較高，難以用來(lái)進(jìn)行人群水平的大規(guī)模篩檢。
[0003]目前，Wilson disease的診斷主要依賴于:臨床表現(xiàn)包括神經(jīng)和精神癥狀、旰異常、角膜色素環(huán)；輔助檢查包括血漿銅藍(lán)蛋白水平的降低、24小時(shí)尿銅排泄量增加、肝銅含量的增加以及核磁共振等影像學(xué)檢查。但是這些臨床表現(xiàn)常存在缺失，比如在幼兒患者中神經(jīng)和精神癥狀在患病早期并不出現(xiàn)，并且生化指標(biāo)的準(zhǔn)確性也會(huì)受到其他因素的影響，比如外源性的雌激素或者懷孕期都可以使血清銅藍(lán)蛋白的水平升高，這些因素也可以使Wilson disease患者個(gè)體的血清銅藍(lán)蛋白含量高于正常低值?，F(xiàn)有的檢查，沒有一項(xiàng)能夠作為確診的指標(biāo)，易出現(xiàn)誤診和漏診。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]為了克服臨床表現(xiàn)的缺失和檢查指標(biāo)的不準(zhǔn)確，本發(fā)明提供一種單倍型檢測(cè)Wilson disease的方法，利用連鎖不平衡在家系中快速篩查Wilson disease基因突變，該檢測(cè)方法用于進(jìn)行家系篩查，能夠及早發(fā)現(xiàn)雜合攜帶者，也能夠區(qū)分出無(wú)癥狀的患者和雜合攜帶者。
[0005]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:選取與ATP7B(ATPase，Cu++transporting, beta polypeptide)基因突變呈連鎖不平衡的6個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)包括 rsl061472、rs2147363、rsl924611、rs7993492、rsl801243、rs28942074,以SNP基因分型的方法，不經(jīng)過(guò)測(cè)序，僅依靠6個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)確定Wilson disease患者個(gè)體兄弟姐妹(或三級(jí)以內(nèi)的親屬)的基因突變狀態(tài)。達(dá)到對(duì)先證者的家系的快速篩查，找出雜合攜帶者同時(shí)也區(qū)分出無(wú)癥狀者的目的。
[0006]本發(fā)明的有益效果是，不經(jīng)過(guò)測(cè)序，依靠6個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)確定先證者家系中雜合攜帶者的同時(shí)，也能夠區(qū)分出無(wú)癥狀者?？梢淮螜z測(cè)多個(gè)樣本,成本低、快速。
【具體實(shí)施方式】[0007]在有患者的家系中，同時(shí)檢測(cè)先證者以及兄弟姐妹(或三級(jí)以內(nèi)親屬)的基因突變狀態(tài)。針對(duì)6個(gè)SNP位點(diǎn)設(shè)計(jì)Taqman探針,應(yīng)用實(shí)時(shí)突光定量聚合酶鏈反應(yīng)(ploymerasechain reaction)鑒定每個(gè)位點(diǎn)的基因型狀態(tài)。用以上6個(gè)SNP位點(diǎn)構(gòu)建單倍型。比較先證者親屬與先證者的單倍型，Wilson Disease是常染色體隱性遺傳病，若與先證者單倍型完全相同的為病人(純合子)，完全不同的為正常個(gè)體，一半相同的為攜帶者(雜合子)。
[0008]
【權(quán)利要求】
1.一種利用連鎖不平衡在家系中篩查Wilson disease基因突變的方法，其特征是:利用6個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因分型在家系中快速篩查Wilson disease基因突變。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:6個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與ATP7B基因的突變呈連鎖不平衡。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:6個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)包括rsl061472、rs2147363、rsl924611、rs7993492、rsl801243、rs28942074。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的方法，其特征在于Taqman探針，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(ploymerase chain reaction)鑒定每個(gè)位點(diǎn)的基因型狀態(tài)；用以上6個(gè)SNP位點(diǎn)構(gòu)建單倍型。比較先證者親屬與先證者的單倍型。
5.根據(jù)權(quán)利要求 4所述的方法，其特征在于所述的方法是非診斷目的的。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103820555SQ201410070111
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】李衛(wèi)東, 楊付花 申請(qǐng)人:李衛(wèi)東