魚鱗膠原蛋白多肽的新用途
【專利摘要】本發明公開了魚鱗膠原蛋白多肽在制備抗腫瘤的特殊膳食食品、藥品或者保健品中的新用途。本發明魚鱗膠原蛋白多肽的抑瘤效果非常優良，副作用小，有非常良好的應用前景。
【專利說明】魚鱗膠原蛋白多肽的新用途
【技術領域】
[0001] 本發明涉及魚鱗膠原蛋白多肽的新用途。
【背景技術】
[0002] 動物膠原類物質是動物的基本組成成分，是動物及人體組織結構的基礎，包括空 腔器官、血管、骨骼、臟器等，其分子結構是進化中最保守的，因而在人類應用中是最不易引 起過敏反應的一類物質，在我國中醫藥中被廣泛應用，均廣泛用于我國中醫藥散結化瘀、創 傷修復、補血養顏等方面。
[0003] 魚膠原蛋白含19種氨基酸，包括人體必需的7種氨基酸和2種兒童必需氨基酸， 比人乳蛋白所含的氨基酸還多兩種，其蛋白含量比牛乳粉、羊乳粉高4倍。魚皮、魚鱗膠原 蛋白多肽是魚膠原的酶解產物，現代生物學實驗證明，魚皮、魚鱗膠原蛋白多肽具有優良的 吸收性、低抗原性，具有促進脂質代謝、降低膽固醇、促進礦物質吸收、降血壓、抗氧化等生 理功能。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供魚鱗膠原蛋白多肽在制備治療抗腫瘤藥物中的新用途。
[0005] 本發明提供了魚鱗膠原蛋白多肽在制備抗腫瘤的特殊膳食食品、藥品或者保健品 中的用途。
[0006] 本發明還提供了魚鱗膠原蛋白多肽在制備用于腫瘤輔助治療的特殊膳食食品、藥 品或者保健品中的用途。
[0007] 特殊膳食營養品，是指在腫瘤治療過程中的具有營養支持作用的營養食品。
[0008] 其中，所述腫瘤是肉瘤、肺癌、乳腺癌或胸腺癌。
[0009] 其中，所述魚鱗膠原白多肽以羅非魚魚鱗為原料制備而成，其中，羥賴氨酸重量百 分含量大于1. 3%;重均分子量為800?2400。優選地，所述多肽中羥脯氨酸的重量百分含 量大于7. 3%，輕脯氨酸的重量百分含量優選大于9. 2%，再進一步優選為9. 2?9. 4%。
[0010] 所述魚鱗膠原白多肽由如下方法制備：
[0011] a、將100重量份的羅非魚魚鱗為原料，加入800?1200重量份水，升溫至80? 90°C，恒溫20?60分鐘；
[0012] b、然后降溫至30?65°C，調節pH值至8?9,加入1?8份堿性蛋白酶，恒溫降 解0. 5?12小時；
[0013] c、再在45-50°C恒溫條件下，加入1?8份中性蛋白酶，攪拌反應0.5?12小時；
[0014] d、然后再升溫到75?90°C，保溫15?30分鐘，使酶失活；
[0015] e、加入絮凝劑，經絮凝沉淀雜質、過濾，將濾液噴霧干燥，即得。
[0016] 步驟b所述的堿性蛋白酶是alcalase或胰酶中的至少一種。
[0017] 步驟c所述的中性蛋白酶是A1398、或Neutrase酶，或Flavourzyme中的至少一 種。
[0018] 步驟e所述的絮凝劑是硅藻土或活性炭的至少一種。
[0019] 本發明還提供了一種抗腫瘤或者用于腫瘤輔助治療的藥品、特殊膳食食品或者保 健品，它是以魚鱗膠原蛋白多肽為活性成分，加上藥品、食品保或健食品上可接受的輔料或 輔助性成分制備而成的制劑。
[0020] 其中，所述制劑為液體制劑、固體制劑或半固體制劑。
[0021] 本發明魚鱗膠原蛋白多肽可以有效抑制腫瘤的生長，對肉瘤、肺癌、乳腺癌和胸腺 癌的療效確切，副作用小，為臨床抗腫瘤或腫瘤輔助治療的藥物、特殊膳食食品或保健食品 提供了 一種新的選擇，應用前景良好。
[0022] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0023] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0024] 圖1魚鱗膠原蛋白多肽組與對照組的腫瘤（肉瘤）大小比對圖；
[0025] 圖2魚鱗膠原蛋白多肽組與對照組的實驗解剖圖；
[0026] 圖3魚鱗膠原蛋白組與對照組小鼠外觀比對圖；
[0027] 圖4魚鱗膠原蛋白組和對照組腫瘤(肺癌）組織外觀圖；
[0028] 圖5魚鱗膠原蛋白組與對照組腫瘤(肺癌）鏡下觀察比對圖（400倍鏡下)。
【具體實施方式】
[0029] 實施例1本發明魚鱗膠原蛋白多肽的制備方法
[0030] 本發明魚鱗膠原蛋白可通過購買市售產品獲得，也可按照如下方法制備：
[0031] 方法一：將100克脫鈣羅非魚鱗，水洗，加無離子水1000升溫至85°C 30分鐘，后 降溫至45°C，調pH值到8. 0,加入3克堿性蛋白酶，降解2小時，同樣條件下再加入中性蛋 白酶4克，反應2小時，鱗片全部溶解，然后升溫到90°C，保溫15?30分鐘，使酶失活，力口 入適量絮凝劑硅藻土和活性炭（以I : 1混合）沉降8小時，直接取上清；上清液于真空度 0. 06?0. lOMpa，溫度40?65°C減壓蒸餾，最后噴霧干燥，即得固態蛋白多肽粉。
[0032] 經測定,其中：羥脯氨酸含量：9. 4% ;羥賴氨酸，1. 4%。
[0033] 方法二：過程同方法一，其中，堿性蛋白酶為胰酶，用量8克，中性蛋白酶8克絮凝 劑為娃藻土，上清液于真空度〇. 06?0. IOMpa,溫度40?65?減壓蒸饋，最后噴霧干燥，即 得固態蛋白多肽粉。
[0034] 經測定,其中：羥脯氨酸含量：9. 2% ;羥賴氨酸，1. 42%。
[0035] 方法一以羅非魚鱗為原料制備膠原蛋白及多肽
[0036] 將100克脫鈣羅非魚鱗，水洗，加無離子水1000升溫至85°C 30分鐘，后降溫至 45°C，調pH值到8. 0,加入3克堿性蛋白酶，降解2小時，同樣條件下再加入中性蛋白酶4 克，反應2小時，鱗片全部溶解，然后升溫到90°C，保溫15?30分鐘，使酶失活，加入適量絮 凝劑硅藻土和活性炭（以I : 1混合）沉降8小時，直接取上清；上清液于真空度0.06? 0. lOMpa，溫度40?65°C減壓蒸饋，最后噴霧干燥，即得固態蛋白多肽粉。
[0037] 經測定，其中：羥脯氨酸含量：9.4% ;羥賴氨酸，1.4%。
[0038] 方法二以羅非魚鱗為原料制備膠原蛋白及多肽
[0039] 過程同實施例1，其中，堿性蛋白酶為胰酶，用量8克，中性蛋白酶8克絮凝劑為硅 藻土，上清液于真空度0. 06?0. lOMpa，溫度40?65°C減壓蒸餾，最后噴霧干燥，即得固態 蛋白多肽粉。
[0040] 方法三以羅非魚皮為原料制備膠原蛋白及多肽
[0041] 稱取IOOg干魚皮于IOOOml燒杯中，常溫洗滌至pH值為7左右，加熱至80度下恒 溫30分鐘，冷卻至50°C，調pH值至8,加入堿性蛋白酶2. 5克，反應3小時；調溫至45°C，力口 入中性蛋白酶4克，恒溫攪拌反應3小時；加熱至85°C恒溫15分鐘，滅活酶。加入適量絮 凝劑硅藻土和活性炭（以1 : 2混合）沉降8小時，直接取上清。上清液于真空度0.06? 0. lOMpa，溫度40?65°C減壓蒸饋，最后噴霧干燥，即得固態蛋白多肽粉。
[0042] 產品檢測結果：羥脯氨酸含量：9. 38% ;羥賴氨酸，1. 31%。
[0043] 方法四以鱈魚皮為原料制備膠原蛋白及多肽
[0044] 稱取IOOg干燥鱈魚皮于IOOOml燒杯中，常溫洗滌至pH值為7左右，加熱至80度 下恒溫30分鐘，冷卻至50°C，調pH值至8,分別加入中胰酶4克，反應6小時；調溫至45°C， 加入1398蛋白酶3克，恒溫攪拌反應5小時；加熱至85°C恒溫15分鐘，滅活酶。
[0045] 經絮凝沉淀過濾，濾液于50°C左右進行減壓蒸餾，最后經噴霧干燥，即得魚皮膠原 蛋白多肽粉。
[0046] 產品檢測結果：羥脯氨酸含量：7. 3% ;羥賴氨酸，1. 3%
[0047] 經測定,其中：羥脯氨酸含量：9. 2% ;羥賴氨酸，1. 42%
[0048] 方法五以草魚鱗為原料制備膠原蛋白及多肽
[0049] 將100克脫鈣草魚鱗，水洗，加無離子水1000升溫至85度30分鐘，后降溫至45°C， 調pH值到8. 0,加入5克alcalase酶，降解2小時，同樣條件下再加入1398酶3克，反應 2小時，鱗片全部溶解，然后升溫到90°C，保溫15?30分鐘，使酶失活，加入適量絮凝劑硅 藻土和活性炭的混合物（按照1 : 2混合好）沉降8小時，直接取上清。上清液于真空度 0. 06?0. lOMpa，溫度40?65°C減壓蒸餾，最后噴霧干燥，即得固態蛋白多肽粉。
[0050] 經測定,其中：羥脯氨酸含量：9. 8% ;羥賴氨酸，1. 43%。
[0051] 以下通過藥效試驗證明本發明的有益效果：
[0052] 實施例1本發明魚鱗膠原蛋白多肽的抗肉瘤實驗
[0053] 1、實驗材料動物：昆明種小鼠，體重20克左右，無特定病原體（SPF)條件下飼養；
[0054] 瘤種：S180肉瘤；
[0055] 羅非魚鱗酶解膠原蛋白多肽粉，按照實施例1方法一制備。
[0056] 2、實驗方法
[0057] (1)實體腫瘤單劑量抑瘤實驗
[0058] 取上述昆明種小鼠20只，稱重，隨機分成兩組，一組為對照組，生理鹽水灌胃；一 組為魚鱗膠原蛋白多肽組。將魚鱗膠原蛋白多肽溶解在生理鹽水溶液中，形成10%濃度的 魚鱗膠原蛋白多肽溶液。
[0059] 對照組接種生理鹽水，魚鱗膠原蛋白多肽組口服10%濃度的魚鱗膠原蛋白多肽溶 液，每天按照0. 2ml (魚鱗膠原蛋白多肽組相當于口服20mg魚鱗膠原蛋白多肽/天.只鼠） 劑量分別灌胃，前肢腋下接種S180腫瘤；同時灌胃十天后處死動物，解剖，觀察實體腫瘤生 長狀況，稱重瘤體。
[0060] (2)實體腫瘤量效關系實驗
[0061] 取昆明種小鼠40只，稱重，完全隨機分成4組，分為對照組和3個魚鱗膠原蛋白多 肽組。將魚鱗膠原蛋白多肽物質分別溶解成1〇%、5%、2. 5%濃度的魚鱗膠原蛋白多肽溶液。
[0062] 對照組口服生理鹽水，3個魚鱗膠原蛋白多肽組分別口服10%、5%、2. 5%濃度的魚 鱗膠原蛋白多肽溶液，每天按照0. 2ml (3個魚鱗膠原蛋白多肽組相當于分別口服20mg、 IOmg和5mg魚鱗膠原蛋白多肽/天.只鼠)三個劑量要求分別灌胃，前肢腋下接種S180腫 瘤；同時灌胃十天后處死動物，解剖，觀察腫瘤生長狀況，稱重瘤體。
[0063] 抑瘤率計算：
【權利要求】
1. 魚鱗膠原蛋白多肽在制備抗腫瘤的特殊膳食食品、藥品或者保健品中的用途。
2. 魚鱗膠原蛋白多肽在制備用于腫瘤輔助治療的特殊膳食食品、藥品或者保健品中的 用途。
3. 根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述腫瘤是肉瘤、肺癌、乳腺癌或胸 腺癌。
4. 根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述魚鱗膠原白多肽以羅非魚魚鱗 為原料制備而成，其中，輕賴氨酸重量百分含量大于1. 3% ;重均分子量為800?2400 ; 優選地，所述多肽中羥脯氨酸的重量百分含量大于7. 3%。
5. 根據權利要求4所述的用途，其特征在于：所述魚鱗膠原白多肽由如下方法制備： a、 以100重量份的羅非魚魚鱗為原料，加入800?1200重量份水，升溫至80?90°C， 恒溫20?60分鐘； b、 然后降溫至30?65 °C，調節pH值至8?9,加入1?8份堿性蛋白酶，恒溫降解 0. 5?12小時； c、 再在45-50°C恒溫條件下，加入1?8份中性蛋白酶，攪拌反應0. 5?12小時； d、 然后再升溫到75?90°C，保溫15?30分鐘，使酶失活； e、 加入絮凝劑，經絮凝沉淀雜質、過濾，將濾液噴霧干燥，即得。
6. 根據權利要求5所述的用途，其特征在于：步驟b所述的堿性蛋白酶是alcalase或 胰酶中的至少一種。
7. 根據權利要求5所述的用途，其特征在于：步驟c所述的中性蛋白酶是A1398、或 Neutrase 酶，或 Flavourzyme 中的至少一種。
8. 根據權利要求5所述的用途，其特征在于：步驟e所述的絮凝劑是硅藻土或活性炭 的至少一種。
9. 一種抗腫瘤或者用于腫瘤輔助治療的藥品、特殊膳食食品或者保健品，其特征在于： 它是以魚鱗膠原蛋白多肽為活性成分，加上藥品、食品或保健食品上可接受的輔料或輔助 性成分制備而成的制劑。
10. 根據權利要求9所述的藥品、特殊膳食食品或者保健品，其特征在于：所述制劑為 液體制劑、固體制劑或半固體制劑。
【文檔編號】A23L1/305GK104223115SQ201410027581
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年1月21日 優先權日:2013年6月17日
【發明者】史宗潔, 韋山, 張榕村 申請人:史宗潔, 韋山, 張榕村