一種增菌液中細菌dna的提取裝置制造方法
【專利摘要】本實用新型提供一種增菌液中細菌DNA的提取裝置，包括過濾內管、第一套管和第二套管，過濾內管的管體可置入第一套管和第二套管內，過濾內管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過濾內管的頂端具有內管蓋，過濾內管的底端縮窄為內管開口，在內管開口上方設有過濾膜，過濾膜上方設有用于壓緊過濾膜的壓膜圈，所述過濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復合濾膜，所述過濾膜的孔徑為0.2-20um。本實用新型所述的裝置，采用膜過濾直接裂解法，規避了純化法和直接裂解法的缺點，能對多份增菌液中的細菌富集合并后，一次抽提DNA，而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于革蘭氏陽性菌；并且還能有效去除樣品基質的干擾。
【專利說明】一種增菌液中細菌DNA的提取裝置
【技術領域】
[0001]本實用新型涉及從一種或多種增菌液中提取PCR檢測所用的細菌DNA的裝置，所述增菌液經過膜過濾后，直接裂解細菌提取DNA。
【背景技術】
[0002]增菌液中細菌DNA的提取方法，按原理可簡單分為兩類，純化法和直接裂解法。純化法的方法有多種，但都遵循以下流程:細菌裂解一富集DNA—清洗DNA—重新溶解DNA。該方法的優點是得到的DNA純度高，PCR抑制因子含量很低；其缺點是在提取過程中DNA丟失較多，導致最終DNA的得率低。另外操作步驟較多，也容易產生交叉污染。直接裂解法操作步驟少，不采用富集、清洗等純化處理，直接將細菌裂解后提取DNA，故DNA的損失較小，但殘留的PCR抑制因子可影響后續的PCR反應，樣品基質也會對PCR檢測產生不利影響。
[0003]理想的增菌液中細菌DNA的提取方法，應具備以下特點:DNA純度高、DNA的得率高、PCR抑制因子含量低、操作簡便、不使用有毒的有機溶劑等。對于PCR檢測而言，提取方法最好能對多份增菌液中的細菌富集合并后，一次抽提DNA;而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于細胞壁堅固難以裂解的革蘭氏陽性菌；并且還能有效去除樣品基質的干擾。
實用新型內容
[0004]本實用新型即是針對上述的問題，提供從一份或多份增菌液中提取PCR檢測所用的細菌DNA的裝置。
[0005]具體來說，本實用新型所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，包括過濾內管、第一套管和第二套管，過濾內管的管體可置入第一套管和第二套管內，過濾內管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過濾內管的頂端具有內管蓋，過濾內管的底端縮窄為內管開口，在內管開口上方設有過濾膜，過濾膜上方設有用于壓緊過濾膜的壓膜圈。
[0006]進一步的，所述過濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復合濾膜。
[0007]進一步的，所述過濾膜的孔徑為0.2_20um。
[0008]進一步的,所述第二套管具有或無管蓋。
[0009]進一步的，所述過濾內管的材質為聚丙烯。
[0010]進一步的，所述第一套管和第二套管的材質為聚丙烯。
[0011]本實用新型所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置的使用方法如下所述:
[0012]1、濃縮細菌:在過濾內管中加入增菌液，以IOOOxg離心力離心I分鐘(或在IOmmHg-15mmHg壓力下過濾I分鐘)，再以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)；
[0013]2、去除脂質:在過濾內管中加入75%乙醇浸泡I分鐘，以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)；[0014]3、裂解細菌:更換新的外套管，將過濾內管置入第二套管內。在過濾內管中加入EB裂解液(含蛋白酶K)，55°C孵育30分鐘(革蘭氏陽性細菌延長至60分鐘)；
[0015]4、加熱滅活:95°C孵育10分鐘滅活蛋白酶K ;以12000xg離心力離心3分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)，第二套管中的溶液即為用于PCR檢測的細菌DNA溶液。
[0016]本實用新型所述的裝置，采用膜過濾直接裂解法，規避了純化法和直接裂解法的缺點，能對多份增菌液中的細菌進行合并，僅需一次DNA抽提流程，而且抽提方法不僅適用于革蘭氏陰性菌，也適用于革蘭氏陽性菌；并且還能有效去除樣品基質的干擾。具有如下特
占-
^ \\\.[0017]1、以膜過濾替代了高速離心濃縮細菌，省略了高速離心后從離心管中吸棄上清液的步驟，操作更簡便，并可有效避免交叉污染及生物安全風險，并且能對多個增菌液中的細菌富集后一并進行DNA抽提；
[0018]2、增加了增菌液去脂的步驟，能有效去除樣品及培養基的脂溶性成分殘留中的PCR抑制劑，消除基質干擾；
[0019]3、特殊裂解液配方和低溫裂解方式，不僅適用于革蘭氏陰性菌DNA的提取，而且適用于更難裂解的革蘭氏陽性菌DNA的提取，在提高裂解效率的同時，減少了 DNA的斷裂和降解。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0020]圖1是本實用新型實施例中過濾內管置入第一套管的示意圖；
[0021]圖2是本實用新型實施例`中過濾內管置入第二套管的示意圖；
[0022]其中，I為第一套管、2為過濾內管、20為內管蓋、21為內管開口、3為壓膜圈、4為
過濾膜、5為第二套管、50為第二套管管蓋。
【具體實施方式】
[0023]以下結合附圖和【具體實施方式】，對本實用新型所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置進行非限制性地描述，目的是公眾更好地理解所述技術方案。
[0024]如圖1-2所示，本實用新型所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，包括過濾內管2、第一套管I和第二套管5,過濾內管2的管體可置入第一套管I和第二套管5內，過濾內管2的頂端膨大部則留在第一套管I和第二套管5的管口外，過濾內管2的頂端具有內管蓋20，過濾內管2的底端縮窄為內管開口 21，在內管開口 21上方設有過濾膜4，過濾膜4上方設有用于壓緊過濾膜4的壓膜圈3，所述過濾膜4為兩層以上玻璃纖維制成的復合濾膜，孔徑為0.2-20um,第二套管5具有或無第二套管蓋50,所述過濾內管、第一套管和第二套管的材質為聚丙烯。
[0025]本實用新型所述裝置的使用方法如下:
[0026]1、濃縮細菌:在過濾內管中加入200ul-400ul增菌液，以1000xg離心力離心I分鐘(或在10mmHg-15mmHg壓力下過濾I分鐘)，再以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)。
[0027]2、去除脂質:在過濾內管中加入200ul75%乙醇浸泡I分鐘，以6000xg離心力離心I分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)。[0028]3、裂解細菌:更換新的外套管，將過濾內管置入第二套管內。在過濾內管中加入200ul EB裂解液(含蛋白酶K)，55°C孵育30分鐘(革蘭氏陽性細菌延長至60分鐘)。
[0029]4、加熱滅活:95°C孵育10分鐘滅活蛋白酶K ;以12000xg離心力離心3分鐘(或在20mmHg-30mmHg壓力下過濾I分鐘)，外套管中的溶液即為用于PCR檢測的細菌DNA溶液。
[0030]其中，EB裂解液配方為:去離子水、苯乙烯-二乙烯苯聚合物5-20%、蛋白酶K0.05-lmg/ml (使用前加入)；裂解孵育溫度:55°C。
[0031]應用本實用新型所述裝置的方法，規避了純化法和直接裂解法的缺點，能對多份增菌液中的細菌富集合并后，一次抽提DNA，并且還能有效去除樣品基質的干擾。
【權利要求】
1.一種增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:包括過濾內管、第一套管和第二套管，過濾內管的管體可置入第一套管和第二套管內，過濾內管的頂端膨大部則留在第一套管和第二套管的管口外，過濾內管的頂端具有內管蓋，過濾內管的底端縮窄為內管開口，在內管開口上方設有過濾膜，過濾膜上方設有用于壓緊過濾膜的壓膜圈。
2.根據權利要求1所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過濾膜為兩層以上玻璃纖維制成的復合濾膜。
3.根據權利要求1或2所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過濾膜的孔徑為0.2-20um。
4.根據權利要求1或2所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述第二套管具有或無管蓋。
5.根據權利要求1或2所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述過濾內管的材質為聚丙烯。
6.根據權利要求1或2所述的增菌液中細菌DNA的提取裝置，其特征在于:所述第一套管和第二套管的材質為聚丙烯。
【文檔編號】C12N15/10GK203513676SQ201320604940
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年9月27日 優先權日:2013年9月27日
【發明者】呂敬章, 徐樣明 申請人:呂敬章, 徐樣明