一種蜜環菌濃縮液的制備方法
【專利摘要】一種蜜環菌濃縮液的制備方法，包括：將菌株接種到無菌培養基上，27℃±1℃培養3～4天得到菌絲體；按重量份數比例取葡萄糖3～5份、蛋白胨1～3份、酵母浸膏1～3份、KH2PO40.1～0.5份、MgSO40.1～0.5份、NaCl0.001～0.003份、維生素B10.05～0.1份，加入純化水100-150份后混合均勻得培養液；：將菌絲體接種于培養液中，在27℃±1℃、轉速100rpm～500rpm、通氣量100～150L/h、PH值為5.0左右的條件下發酵3～5天；收集發酵液，將發酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.030～1.035（20℃）即得。本發明的積極效果是：明確了培養基組成，利于生產操作。縮短了生產周期。發酵液產量較高。發酵液中腺苷含量較原生產工藝高。
【專利說明】一種蜜環菌濃縮液的制備方法
【技術領域】:
[0001]本發明屬于制藥領域，具體涉及中藥原料藥蜜環菌濃縮液的制備方法。
【背景技術】:
[0002]蜜環菌[Armillariamellea(Vahl ex Fr.)Quel]是屬于白磨科(Tricholomataceae)蜜環菌屬[Armillaria(Fr.) Staude.]的藥食兼用菌是一種與傳統中藥天麻(GastrodiaelataBlume)共生的著名的藥用真菌。經國內外多年的研究，分離得到了蜜環菌多糖、倍半萜類化合物和嘌呤類化合物等多種活性成分。蜜環菌子實體具有催眠、鎮靜、抗眩暈、改善心腦血液循環及較強的腦保護作用，可以治療多種疾病，并可提高機體免疫功能。蜜環菌是我國滋補保健類中藥材之一，倍受國內外學者青睞。目前，蜜環菌已在藥品和保健食品領域應用廣泛，特別是以其為重要成分的中成藥腦心舒，在市場上頗有影響。蜜環菌是天麻的共生菌，有研究證明，蜜環菌的菌絲及發酵液有與天麻相類似的藥理作用。因此，加大蜜環菌液體發酵培養，優化發酵培養條件可滿足該品種的需求。但由于法定標準中對蜜環菌濃縮液的培養基組成不明確，現有的蜜環菌濃縮液制備方法存在培養周期長，腺苷含量不確定等不足，影響大規模的生產。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是提供一種蜜環菌濃縮液的制備方法，克服現有的濃縮液制備方法存在的上述不足。
[0004]本發明的蜜環菌濃縮液制備方法包括以下步驟:
[0005]1、將蜜環菌菌株接種到無菌培養基上，27°C 土 TC培養3~4天，得到菌絲體備用；
[0006]2、制備無菌培養液:按重量份數比例取葡萄糖3~5份、蛋白胨I~3份、酵母浸膏I ~3 份、KH2PO40.1 ~0.5 份、MgSO40.1 ~0.5 份、NaCl0.001 ~0.003 份、維生素 B10.05 ~
0.1份，加入純化水100-150份后混合均勻。
[0007]3、發酵:將步驟I所得到的菌絲體接種于步驟2制得的液體培養液中，在270C ±1°C、轉速IOOrpm~500rpm、通氣量100~150L/h、PH值為5.0左右的條件下發酵3~5天；
[0008]4、濃縮:收集發酵液，將發酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.030~1.035 (20°C)即得。
[0009]本發明的積極效果是:明確了培養基組成，利于生產操作。縮短了生產周期，本發明周期6-9天，現有的方法10-13天。發酵液產量較高，是現有方法的1.15倍。發酵液中腺苷含量較原生產工藝高。本發明制備的蜜環菌濃縮液腺苷含量高于0.45mg/ml，現有方法制備的蜜環菌濃縮液腺苷含量低于0.40mg/ml.【具體實施方式】[0010]實施例1
[0011]1、將蜜環菌菌株接種到無菌培養基上，27°C ±1°C培養3天得到菌絲體備用；
[0012]2、制備無菌培養液:按重量份數比例取葡萄糖3份、蛋白胨3份、酵母浸膏1份、KH2PO40.1份、MgSO40.5份、NaCl0.003份、維生素B10.05份，加入純化水100份后混合均勻；
[0013]3、發酵:將菌絲體接種于液體培養液中，于27°C ±1°C，轉速lOOrpm，通氣量100L/h，PH值為5.0左右發酵3天；濃縮:收集發酵液，將發酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.032(20°C)即得。
[0014]實施例2
[0015]1、將蜜環菌菌株接種到無菌培養基上，27°C ±1°C培養4天得到菌絲體備用；
[0016]2、制備無菌培養液:按重量份數比例取葡萄糖5份、蛋白胨1份、酵母浸膏3份、KH2PO40.5份、MgSO40.1份、NaCl0.001份、維生素B10.1份，加入純化水150份后混合均勻。
[0017]3、發酵:將步驟I所得到的菌絲體接種于步驟2制得的液體培養液中，在270C ±11:、轉速500印111、通氣量150L/h、PH值5.0左右的條件下發酵5天；
[0018]4、濃縮:收集發酵液，將發酵液過濾后減壓濃縮至密度為1.030~1.035 (20°C)即得。`
【權利要求】
1.一種蜜環菌濃縮液的制備方法，其特征是包括以下步驟: (1)將蜜環菌菌株接種到無菌培養基上，27°c±1°C培養3~4天得到菌絲體備用； (2)制備無菌培養液:按重量份數比例取葡萄糖3~5份、蛋白胨I~3份、酵母浸膏I ~3 份、KH2PO40.1 ~0.5 份、MgSO40.1 ~0.5 份、NaCl0.001 ~0.003 份、維生素 B10.05 ~`0.1份，加入純化水100-150份后混合均勻； (3)發酵:將步驟(1)所得到的菌絲體接種于步驟(2)制得的液體培養液中，在270C ±1°C、轉速IOOrpm~500rpm、通氣量100~150L/h、PH值為5.0左右的條件下發酵3~5天； (4)濃縮:收集發酵液，將發酵液過濾后減壓濃縮至密度為20°C時1.030~1.035，即得。`
【文檔編號】C12N1/14GK103667082SQ201310680901
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月12日 優先權日:2013年12月12日
【發明者】常紅, 白冰, 高紅梅, 趙源慧, 李君海, 吳小玲, 楊喆茗 申請人:吉林修正藥業新藥開發有限公司