一種稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片及試劑盒，所述稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片包括一基底和固定于所述基底上的寡核酸探針，所述寡核苷酸探針包括：非缺失型α-地中海貧血基因所對應的正常對照寡核苷酸探針如SEQ?ID?NO：1-2；點突變β-地中海貧血基因所對應的正常對照寡核苷酸探針如SEQ?ID?NO：3-4；用于檢測非缺失型α-地中海貧血基因的寡核苷酸探針如SEQ?ID?NO：5-13；用于檢測點突變β-地中海貧血基因的寡核苷酸探針如SEQ?ID?NO：14-40。本發明有益效果：能一次檢測9種稀有的非缺失型α-地貧和27種稀有的點突變β-地貧，為更全面篩選點突變地貧創造了條件。
【專利說明】—種稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片及試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明涉及地中海貧血的診斷設備，尤其涉及一種稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片及試劑盒。
【背景技術】
[0002]地中海貧血(Thalassemia，以下簡稱地貧)是由于病人某種或某些珠蛋白鏈合成速率降低，造成一些肽鏈缺乏，另一些肽鏈相對過多，出現肽鏈數量的不平衡而導致的溶血性貧血。地貧主要有兩種類型，分別為α-珠蛋白鏈合成減缺導致的α-地貧和β-珠蛋白合成減缺導致的β -地貧。
[0003]α-地貧(包括缺失型α-地貧和非缺失型α -地貧)是世界上最常見的單基因遺傳病之一，在中國除了常見的缺失型^-地貧(-^13_7、-^14_2和-」，之外，也有少部分是由于α-珠蛋白基因點突變引起，這類α-地貧也稱為非缺失型α-地貧。
[0004]α -珠蛋白基因點突變類型是導致臨床α地貧漏診的主要原因之一。由于非缺失型α-地貧的基因突變大多數發生在I個基因上(α 2或α?)，不會使另I個α-基因功能受損，故一般定義為α+-地貧，雜合子一般表現為輕型或靜止型，但復合α°時會導致Hb H病，嚴重還可導致Hb H胎兒水腫綜合癥。在中國，目前已報道過12種非缺失型α-地貧，現市場上主要只檢3種常見的非缺失型α -地貧，(α ' a QS、a ws)，其余9種稀有型非缺失型α -地貧見表1。
[0005]表1中國報道過的9種稀有的非缺失型α -地貧
[0006]
【權利要求】
1.一種稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片，包括一基底和固定于所述基底上的寡核酸探針，其特征在于，所述寡核苷酸探針包括: 非缺失型α-地中海貧血基因所對應的正常對照寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ IDNO:1-2 ； 點突變地中海貧血基因所對應的正常對照寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ IDNO:3-4 ； 用于檢測非缺失型α-地中海貧血基因的寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO:5-13 ； 用于檢測點突變β-地中海貧血基因的寡核苷酸探針，其堿基序列如SEQ ID NO:14-40。
2.根據權利要求1所述的稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片，其特征在于，所述基底為尼龍膜。
3.一種稀有地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，包括:權利要求1-2任一項所述的稀有地中海貧血基因檢測的基因芯片，所述試劑盒還包括PCR反應液， 所述PCR反應液包括擴增非缺失型α -地中海貧血基因的兩對引物:
引物 AlF: SEQ ID NO:41 ；
引物 AIR:SEQ ID NO:42 ；
引物 A2F:SEQ ID NO:43 ；
引物 A2R:SEQ ID NO:44 ； 所述PCR反應液還包括擴增點突變β -地中海貧血基因的兩對引物:
引物 BFl: SEQ ID NO:45 ；
引物 BRl:SEQ ID NO:46 ；
引物 BF2: SEQ ID NO:47 ；
引物 BR2:SEQ ID NO:48。
4.根據權利要求3所述的稀有地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述寡核苷酸探針固定在尼龍膜上。
5.根據權利要求3所述的稀有地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述引物5’端標記生物素。
6.根據權利要求3所述的稀有地中海貧血基因檢測的試劑盒，其特征在于，所述的PCR反應液各組分含量為: 去離子水:14.22μ L ;
.10XPCR buffer:2.5μ L ；
. 25mM MgCl2:0.5μ L ；
.2.5mM dNTP:2μ L ；
. 1OmM dUTP:0.5 μ L ；
.100 μ M 引物 AlF:0.05μ L ；
.100 μ M 引物 AlR:0.05μ L ；
.100μM 引物 A2F:0.07μ L ；
.100μM 引物 A2R:0.07μ L ；lOOiiM 弓丨物 BF1 ：0. 07u L ； lOOiiM 弓丨物 BR1 ：0. 07u L ； lOOiiM 引物 BF2 ：0. 05u L ； lOOiiM 引物 BR2 ：0. 05u L ； 5U/u L Taq 酶：0. L ; lU/u L UNG 酶：0. 3u L0
【文檔編號】C12Q1/68GK103602751SQ201310655733
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年12月6日 優先權日:2013年12月6日
【發明者】曾冰云, 劉福平, 劉晶晶, 任維 申請人:亞能生物技術（深圳）有限公司