一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，包括（1）制備混合凝膠或者磁性納米Fe3O4顆粒，（2）固定化單寧酶，（3）層析綠茶幾個步驟，采用本發(fā)明可以增加茶液的澄清度，降低茶液中兒茶素含量，提高茶液鮮醇度，提高茶液品質(zhì)及穩(wěn)定性，也為固定化單寧酶的應用提供參考。
【專利說明】一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法。
【背景技術】
[0002]單寧酶是一種水解酶，在有關茶飲料工業(yè)和茶產(chǎn)品開發(fā)中有不少的研究與應用。首先，利用其對茶乳酪的轉(zhuǎn)溶作用，在液態(tài)茶和速溶茶加工中用來減少或避免茶飲料中沉淀或冷后渾的產(chǎn)生；其次，利用這種轉(zhuǎn)溶作用，添加外源單寧酶可以減輕茶葉濃縮液過濾時膜的污染和堵塞。另外，在水體系中單寧酶對酯型兒茶素有較好的水解作用，外源酶在茶葉加工中的應用已有些研究，但大多集中在深加工領域，在改善成品茶品質(zhì)方面則很少涉及。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的是提供一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，通過本發(fā)明發(fā)可以增加茶液的澄清度，降低茶液中兒茶素含量，提高茶液鮮醇度，提高茶液品質(zhì)及穩(wěn)定性，也為固定化單寧酶的應用提供參考。
[0004]本發(fā)明通過如下技術方案解決上述技術問題:
[0005]一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下工藝步驟:
[0006]( I)制備混合凝膠:用質(zhì)量濃度為2%乙酸配制質(zhì)量濃度為4.5%的殼聚糖溶液，按容積比1:1將殼聚糖溶液與質(zhì)量濃度為5.5%的海藻酸鈉溶液混合得混合液，按每IOOmL所述混合液加入0.1g濃度為1.2mol/L的NaCl溶液，在70°C水浴30min后于4°C溫度下靜置5h即得混合凝膠；
[0007](2)制備固定化單寧酶:將步驟(1)所得混合凝膠和濃度為300i! g/ml的單寧酶酶液混合，攪拌均勻，所得混合液4°C溫度下滴加在CaCl2和戊二醛的混合液中，所述CaCl2和戊二醛的混合液中CaCl2質(zhì)量濃度為2%、戊二醛質(zhì)量濃度為0.04%,并于4°C溫度下交聯(lián)，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶；
[0008](3)、層析綠茶:將步驟(2)所得固定化單寧酶裝入層析柱，利用恒流泵將綠茶茶汁通過層析柱進行層析，得到高品質(zhì)的茶液。
[0009]所述步驟(2)中所述混合凝膠與所述單寧酶酶液容積比例為1:1。
[0010]所述步驟(2)中所述交聯(lián)時間為5h。
[0011]所述步驟(3)中所述恒流泵流速為2ml/min。
[0012]一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下工藝步驟:
[0013](I)、制備磁性納米Fe3O4顆粒:按容積比5: 4將濃度為0.5mol/L的FeCl2 *4H20溶液和濃度為0.5mol/L的FeCl3 *6H20溶液混合均勻，所得混合液用功率為80W的超聲波處理lh，在80°C水浴條件下一邊攪拌所述混合液的同時逐滴加入沉淀劑NH3 -H2O,直至所述混合液PH值為6.5，15min后繼續(xù)緩慢加入沉淀劑NH3 ? H2O,調(diào)節(jié)所述混合液pH值至9.5，之后用磁鐵進行磁力分離沉降，傾去上清液，所得固體物質(zhì)用蒸餾水沖洗直至PH值為中性，干燥所述固體物質(zhì)即得磁性納米Fe3O4顆粒；[0014](2)、固定化單寧酶:將步驟(I)所得磁性納米Fe3O4顆粒與質(zhì)量濃度為4%的海藻酸鈉溶液在超聲波中混合成均勻膠體，向所述膠體中加入濃度為300ii g/ml的單寧酶酶液得到混合液，按容積比為1:25將所得混合液滴加到質(zhì)量濃度為1%的CaCl2溶液中，包埋Ih后水洗至中性，再加入與CaCl2溶液同等容積的質(zhì)量濃度為1.5%的戊二醛，進行交聯(lián)，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶；
[0015](3)、層析綠茶:將步驟(2)所得固定化單寧酶裝入層析柱，利用恒流泵將綠茶茶汁通過層析柱進行層析，得到高品質(zhì)的茶液。
[0016]所述步驟(2 )所述磁性納米Fe3O4顆粒與所述海藻酸鈉溶液質(zhì)量比為3:7。
[0017]所述步驟(2)所述膠體與所述單寧酶酶液的容積比為1:1。
[0018]所述步驟(2)所述交聯(lián)時間為2h。
[0019]所述步驟(3)中所述恒流泵流速為2ml/min。
[0020]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其進步和創(chuàng)新之處在于:
[0021](I)采用混合凝膠的方法對單寧酶進行固定化，發(fā)揮了殼聚糖和海藻酸鈉載體各自的優(yōu)點，取長補短，更好的對單寧酶進行固定化處理。
[0022](2)利用磁性納米Fe3O4協(xié)同海藻酸鈉對單寧酶進行固定化，提供了單寧酶固定化的新型載體。
[0023](3)利用固定化的單寧酶處理綠茶，提高了茶液的澄清度，為茶葉加工澄清工藝提供參考，降低茶液中兒茶素含量，提高茶液鮮醇度，提高茶液品質(zhì)及穩(wěn)定性，也為固定化單寧酶的應用提供參考。
【具體實施方式】
[0024]本發(fā)明所用單寧酶是用本領域技術人員公知的任何一種方法獲得，例如市售純單寧酶粉、利用曲霉發(fā)酵獲取單寧酶等，優(yōu)選地，本發(fā)明采用無花果曲霉發(fā)酵獲取單寧酶酶液。
[0025]本發(fā)明所用綠茶茶湯是本領域技術人員公知的任何一種浸提綠茶茶葉的方法制備茶湯，優(yōu)選地，本發(fā)明采用每g綠茶茶樣加入8mL去離子水在60°C下浸提Ih后得到茶湯。
[0026]實施例1:
[0027]首先制備混合凝膠，用2%乙酸配制質(zhì)量濃度為4.5%殼聚糖溶液，將50mL所得殼聚糖溶液與50mL質(zhì)量濃度為5.5%的海藻酸鈉溶液混合，再加入0.1g濃度為1.2mol/L的NaCl，在70°C水浴30min后放于4°C冰箱靜置5h即得混合凝膠。
[0028]取50mL混合凝膠，加入50mL濃度為300 U g/ml的單寧酶酶液，用玻璃棒攪拌均勻，4°C條件下滴加在IOOmL CaCl2和戊二醛的混合液，所述CaCl2和戊二醛的混合液中CaCl2質(zhì)量濃度為2%、戊二醛質(zhì)量濃度為0.04%，放于4°C冰箱內(nèi)交聯(lián)5h，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶。
[0029]將所述固定化單寧酶裝入層析柱，將5g茶樣用研缽碾碎，放入裝有40mL去離子水的燒杯中在60°C下浸提Ih后得到茶湯，利用恒流泵將茶湯經(jīng)固定化酶層析柱循環(huán)層析處理，恒流泵速率為2.0ml/min，收集茶液，得到高品質(zhì)茶液。
[0030]用酒石酸鐵比色法測定多酚總量，用茚三酮比色法測定氨基酸總量，用高效液相測定兒茶素組分。高效液相色譜條件為:梯度洗脫，流動相A為2%乙酸，從92%至69%，流動相B為乙晴，流速為1.5ml/min，檢測時間為50min。用透光儀測定茶汁的透光率。經(jīng)檢測后澄清度高，透光率T由76.9%提高至96.4%、茶多酚含量在18.95mg/ml基本不變、氨基酸含量由5.62 u g/ml變?yōu)?.97 u g/ml，兒茶素含量由0.35mg/ml降低為0.19mg/ml，連續(xù)層析2h后，固定化酶活為初始酶活1.25倍，茶液澄清度高、品質(zhì)好，營養(yǎng)損失率低，茶液口感好，具有工業(yè)應用前景。
[0031]實施例2:
[0032]采用氨水法制備磁性納米Fe3O4顆粒，分別取50mL濃度為0.5mol/L的FeCl2 *4H20和40mL濃度為0.5mol/L的FeCl3 ? 6H20溶液于燒杯中混勻，用功率為80W的超聲波處理lh，在80°C水浴條件下一邊攪拌的同時逐滴加入沉淀劑NH3 *H20，直至pH6.5，15min后繼續(xù)緩慢加入NH3 -H2O,調(diào)節(jié)pH值至9.5，用磁鐵吸住燒杯底部，傾去上清液，用蒸餾水沖洗直至中性，干燥即得磁性納米Fe3O4顆粒。
[0033]將磁性納米Fe3O4顆粒與質(zhì)量濃度為4%的海藻酸鈉溶液以質(zhì)量比為3:7在超聲波中混合成均勻膠體，向1mL混合膠體中加入1mL濃度為300 u g/ml的單寧酶酶液得到混合液，然后逐滴加入到50ml質(zhì)量濃度為1%的CaCl2溶液中，包埋Ih后水洗至中性，再加入到50ml質(zhì)量濃度為1.5%的戊二醛溶液中，交聯(lián)2h，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶。
[0034]固定化單寧酶裝入層析柱，將5g茶樣用研缽碾碎，放入裝有40mL去離子水的燒杯中在60°C下浸提Ih后得到茶湯，利用恒流泵將茶湯經(jīng)固定化酶層析柱循環(huán)層析處理，恒流泵速率為2.0ml/min，收集茶液，得到高品質(zhì)茶液。
[0035]用酒石酸鐵比色法測定多酚總量，用茚三酮比色法測定氨基酸總量，用高效液相測定兒茶素組分。高效液相色譜條件為:梯度洗脫，流動相A為2%乙酸，從92%至69%，流動相B為乙晴，流速為1.5ml/min，檢測時間為50min。用透光儀測定茶汁的透光率。經(jīng)檢測后澄清度高，透光率T由75.8%提高至92.6%、茶多酚含量在16.75mg/ml基本不變、氨基酸含量由4.72 u g/ml變?yōu)?.29u g/ml，兒茶素含量由0.19mg/ml降低為0.14mg/ml，連續(xù)層析2h后，固定化酶活為初始酶活1.65倍，茶液澄清度高、品質(zhì)好、營養(yǎng)損失率低，茶湯口感好，具有工業(yè)運用前景。
【權利要求】
1.一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下工藝步驟: (1)制備混合凝膠:用質(zhì)量濃度為2%乙酸配制質(zhì)量濃度為4.5%的殼聚糖溶液，按容積比1:1將殼聚糖溶液與質(zhì)量濃度為5.5%的海藻酸鈉溶液混合得混合液，按每IOOmL所述混合液加入0.1g濃度為1.2mol/L的NaCl溶液，在70°C水浴30min后于4°C溫度下靜置5h即得混合凝膠； (2)制備固定化單寧酶:將步驟(1)所得混合凝膠和濃度為3001；g/ml的單寧酶酶液混合，攪拌均勻，所得混合液4°C溫度下滴加在CaCl2和戊二醛的混合液中，所述CaCl2和戊二醛的混合液中CaCl2質(zhì)量濃度為2%、戊二醛質(zhì)量濃度為0.04%,并于4°C溫度下交聯(lián)，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶； (3)、層析綠茶:將步驟(2)所得固定化單寧酶裝入層析柱，利用恒流泵將綠茶茶汁通過層析柱進行層析，得到高品質(zhì)的茶液。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述混合凝膠與所述單寧酶酶液容積比例為1:1。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述交聯(lián)時間為5h。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述恒流泵流速為2ml/min。
5.一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下工藝步驟: (1)、制備磁性納米Fe3O4顆粒:按容積比5: 4將濃度為0.5mol/L的FeCl2 *4H20溶液和濃度為0.5mol/L的FeCl3 ? 6H20溶液混合均勻，所得混合液用功率為80W的超聲波處理Ih,在80°C水浴條件下一邊攪拌所述混合液的同時逐滴加入沉淀劑NH3 -H2O,直至所述混合液PH值為6.5，15min后繼續(xù)緩慢加入沉淀劑NH3 ? H2O,調(diào)節(jié)所述混合液pH值至9.5，之后用磁鐵進行磁力分離沉降，傾去上清液，所得固體物質(zhì)用蒸餾水沖洗直至PH值為中性，干燥所述固體物質(zhì)即得磁性納米Fe3O4顆粒； (2)、固定化單寧酶:將步驟(1)所得磁性納米Fe3O4顆粒與質(zhì)量濃度為4%的海藻酸鈉溶液在超聲波中混合成均勻膠體，向所述膠體中加入濃度為3001； g/ml的單寧酶酶液得到混合液，按容積比為1:25將所得混合液滴加到質(zhì)量濃度為1%的CaCl2溶液中，包埋Ih后水洗至中性，再加入與CaCl2溶液同等容積的質(zhì)量濃度為1.5%的戊二醛，進行交聯(lián)，用蒸餾水洗掉未固定的酶得到固定化單寧酶； (3)、層析綠茶:將步驟(2)所得固定化單寧酶裝入層析柱，利用恒流泵將綠茶茶汁通過層析柱進行層析，得到高品質(zhì)的茶液。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(2 )所述磁性納米Fe3O4顆粒與所述海藻酸鈉溶液質(zhì)量比為3:7。
7.根據(jù)權利要求5所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(2)所述膠體與所述單寧酶酶液的容積比為1:1。
8.根據(jù)權利要求5所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(2)所述交聯(lián)時間為2h。
9.根據(jù)權利要求5所述的一種應用固定化單寧酶提高綠茶品質(zhì)的方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述恒流泵流速為2ml/min。
【文檔編號】A23F3/20GK103621712SQ201310646655
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月4日 優(yōu)先權日:2013年12月4日
【發(fā)明者】楊洋, 嚴東, 趙芬芬, 馬萬良, 胡振興 申請人:廣西大學