一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法
【專利摘要】一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，屬于貯藏保鮮【技術領域】。本發明通過咖啡酸對溶菌酶進行修飾，經咖啡酸修飾的的溶菌酶提高了溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力，拓寬了溶菌酶的抗菌譜。
【專利說明】一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法
【技術領域】
[0001]一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，屬于貯藏保鮮【技術領域】。
技術背景 [0002]溶菌酶是一種由129個氨基酸組成的單體蛋白，是一種糖苷水解酶，分子量14400左右，等電點11左右。化學性質十分穩定，PH值在1.2~11.3范圍內劇烈變動時，結構幾乎不變，在酸性環境中對熱的穩定性也很強。溶菌酶具有抗菌，抗病毒，清除壞死組織，加快創口修復再生等功能，在食品和醫藥工業具有廣泛應用。但是天然的溶菌酶為非廣譜抗菌劑，主要作用于革蘭氏陽性細菌，其作用機理為能夠水解細胞壁的主要成分肽聚糖，而革蘭氏陰性菌細胞壁中肽聚糖含量很少，且被一層較厚的脂多糖類物質所覆蓋，所以對革蘭氏陰性細菌幾乎沒有作用，極大的限制了溶菌酶作為天然防腐劑的推廣，為了改變這種局限性，一些學者通過改性研究以實現天然溶菌酶對革蘭氏陰性細菌的抑制作用。本發明使用咖啡酸對溶菌酶進行修飾，提高了溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌的能力，拓寬了溶菌酶的抗菌
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【發明內容】
[0003]本發明的技術方案:本發明的目的在于提供一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，取40mg咖啡酸溶解于3mL5M的NaOH溶液中，用5MHCl調PH至7.5左右，然后加入去離子水至8mL ;再向該溶液中加入160mg的EDAC (碳二亞胺)，完全溶解后，于室溫下靜止Ih ;再加入40mg溶菌酶，混合物在30°C恒溫水浴中攪拌反應24h，反應結束后，將所得的反應液裝入截留分子量為3500-7000Da的透析袋中用去離子水透析，不溶的部分離心除去，可溶部分冷凍干燥得產品。下表為溶菌酶與咖啡酸修飾酶對2種革蘭氏陰性菌的最小抑菌濃度(mg / mL)。
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【權利要求】
1.一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是取40mg咖啡酸溶解于3mL5M的NaOH溶液中，用5M HCl調PH至7.5左右，然后加入去離子水至8mL ;再向該溶液中加入160mg的EDAC(碳二亞胺),完全溶解后，于室溫下靜止Ih ;再加入40mg溶菌酶，混合物在30°C恒溫水浴中攪拌反應24h，反應結束后，將所得的反應液裝入截留分子量為3500-7000Da的透析袋中用去離子水透析，不溶的部分離心除去，可溶部分冷凍干燥得產品。
2.根據權利要求1所述的一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是修飾溶菌酶的物質為咖啡酸。
3.根據權利要求1所述的一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是咖啡酸與溶菌酶的質量 比為1:1。
4.根據權利要求1所述的一種通過咖啡酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征溶菌酶與碳二亞胺的質量比為1: 4。
【文檔編號】C12N9/96GK103555704SQ201310559949
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月8日 優先權日:2013年11月8日
【發明者】曹棟, 楊曼麗, 史蘇佳 申請人:江南大學