一種液體復合菌種的制備方法
【專利摘要】一種液體復合菌種的制備方法，該菌種包括固氮菌、解鉀細菌和抗生菌，固氮菌為根瘤菌、圓褐固氮菌、根癌土壤桿菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氮螺菌Yu-62、聯合固氮菌K1ebsie11a?p1antico1a19-1或棕色固氮菌Az230之一；解鉀細菌為硅酸鹽細菌NBT菌株、鉀細菌JF88菌株或硅酸鹽細菌G10菌株之一；抗生菌為鏈霉菌、青霉菌、多粘芽孢桿菌或5406抗生菌之一；制備方法為：固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中各選一種細菌，分別制作對應的菌種培養基，pH值為6～8.5；然后分別按常規裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作，得到液體菌種；再將三種液體菌種混合，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為1：1：（0.025～0.05）。本發明滿足生產營養均衡復混肥的要求，投資少、易掌握及容易、成本低。
【專利說明】一種液體復合菌種的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種用于液體復合菌種的制備方法，該液體復合菌種可用于液體肥料的制備。
【背景技術】
[0002]現有的液體速效復混肥都是采用氮、磷、鉀等化學肥料有針對性地混制而成的無機肥料。由于化學肥料存在有損地力、造成土壤板結等缺陷，人們逐漸將研究方向瞄準了環保、高效、無害、可增強地力的天然肥料，特別是經腐化后的天然肥料。
[0003]液體復合菌種是生產天然液體速效復混肥的必須菌種，現有的液體復合菌種結構單一，難于滿足生產營養均衡復混肥的要求。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題在于，提供一種液體復合菌種的制備方法，克服現有液體復合菌種結構單一、難于滿足生產營養均衡復混肥要求的缺陷。
[0005]本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:提供一種液體復合菌種的制備方法，其特征在于，該液體復合菌種包括固氮菌、解鉀細菌和抗生菌；其中:
[0006]固氮菌為根瘤 菌、圓褐固氮菌、根癌土壤桿菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氣螺菌Yu_62、聯合固氣菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氣菌Az230之一；
[0007]解鉀細菌為硅酸鹽細菌NBT菌株、鉀細菌JF88菌株或硅酸鹽細菌GlO菌株之一；
[0008]抗生菌為鏈霉菌、青霉菌、多粘芽孢桿菌或5406抗生菌之一；
[0009]該制備方法包括如下步驟:
[0010]S1、在所述固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中各選擇一種細菌，分別制作選定細菌的菌種培養基，三種細菌的菌種培養基配方PH值為6~8.5 ;
[0011]S2、將三種菌種培養基分別按常規進行裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作，得到液體菌種；
[0012]S3、將三種細菌的液體菌種進行混合，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為 I:1:(0.025 ~0.05)。
[0013]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，步驟S2中，培養時間為3~7天。
[0014]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，步驟S2中，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為1:1:0.03。
[0015]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，步驟SI中，所述三種細菌的培養基配方PH值為7。
[0016]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，步驟S2中，滅菌操作采用高壓滅菌，滅菌溫度為121°C，滅菌時間為20~30分鐘。
[0017]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，步驟SI中，在所述固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中分別選擇根瘤菌、鉀細菌JF88菌株和5406抗生菌；[0018]所述根瘤菌的液體菌種培養基配方為:葡萄糖10克、磷酸二氫鉀0.5克、碳酸鈣3克、硫酸鎂0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5 ;
[0019]所述鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基配方為:蔗糖5克、磷酸氫二鈉2克、硫酸鎂0.5克、三氯化鐵0.005克、碳酸鈣0.1克、鋁土礦0.5克、水I升，PH值6~7.5 ;
[0020]所述5406抗生菌的液體菌種培養基配方為:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化鈉10克、水I升，PH值6~7.5。[0021]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，所述根瘤菌的液體菌種培養基、鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基分別裝于三角瓶中進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到30°C以下，在無菌接種箱內接入菌種，然后放置在25°C~30°C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存；所述5406抗生菌的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基裝于裝三角瓶進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到60 C左右，在無囷接種箱內接入囷種，然后放直在25 C~30 C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存。
[0022]實施本發明的液體復合菌種的制備方法，與現有技術比較，其有益效果是:
[0023]1.本液體復合菌種包括三種細菌菌種，能夠滿足生產營養均衡復混肥的要求；
[0024]2.菌種生產僅需常規的高壓滅菌鍋、接種箱及培養設備，投資少、易培訓，菌種的采集、保管及培養操作容易，綜合成本低。
【具體實施方式】
[0025]下面將結合實施例對本發明作進一步說明。
[0026]在本發明的液體復合菌種的制備方法中，制備的液體復合菌種包括固氮菌、解鉀細菌和抗生菌。其中:
[0027]固氮菌為根瘤菌、圓褐固氮菌、根癌土壤桿菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氣螺菌Yu_62、聯合固氣菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氣菌Az230的其中一種。
[0028]解鉀細菌為硅酸鹽細菌NBT菌株、鉀細菌JF88菌株或硅酸鹽細菌GlO菌株的其中一種。
[0029]抗生菌為鏈霉菌、青霉菌、多粘芽孢桿菌或5406抗生菌的其中一種。
[0030]本發明的液體復合菌種的制備方法如下:
[0031]首先，在上述固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中各選擇一種細菌(例如，選擇根瘤菌、鉀細菌JF88菌株和5406抗生菌)，分別制作所選定細菌的菌種培養基，三種細菌的菌種培養基配方PH值為6~8.5(例如，可以根據情況，選擇菌種培養基配方PH值為6、7、7.5、8、8.5等)。上述三類細菌均為現有技術，其中各種細菌的菌種培養基也為現有技術。例如，選擇根瘤菌、鉀細菌JF88菌株和5406抗生菌時，根瘤菌的液體菌種培養基配方為:葡萄糖10克、磷酸二氫鉀0.5克、碳酸鈣3克、硫酸鎂0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5。鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基配方為:蔗糖5克、磷酸氫二鈉2克、硫酸鎂0.5克、三氯化鐵0.005克、碳酸鈣0.1克、鋁土礦0.5克、水I升，PH值6~7.5。5406抗生菌的液體菌種培養基配方為:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化鈉10克、水I升，PH值6~7.5。[0032]然后，將三種菌種培養基分別按常規進行裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作，得到液體菌種。例如，選擇根瘤菌、鉀細菌JF88菌株和5406抗生菌，按照如下常規方式進行裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作:對根瘤菌的液體菌種培養基、鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基分別裝于三角瓶中進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到30°C以下，在無菌接種箱內接入菌種，然后放置在25°C~30°C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存。對5406抗生菌的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基裝于裝三角瓶進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到60°C左右，在無菌接種箱內接入菌種，然后放置在25°C~30°C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存。
[0033]最后， 將三種細菌的液體菌種進行混合，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為1:1:(0.025~0.05)(例如，根據情況，可以選擇三種細菌液體菌種的重量配比為1:1:0.025、I:1:0.03、1:1:0.04、1:1:0.05 等)，得到液體復合菌種。
【權利要求】
1.一種液體復合菌種的制備方法，其特征在于，該液體復合菌種包括固氮菌、解鉀細菌和抗生菌；其中: 固氮菌為根瘤菌、圓褐固氮菌、根癌土壤桿菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氮螺菌Yu_62、聯合固氮菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氮菌Az230之一； 解鉀細菌為硅酸鹽細菌NBT菌株、鉀細菌JF88菌株或硅酸鹽細菌GlO菌株之一； 抗生菌為鏈霉菌、青霉菌、多粘芽孢桿菌或5406抗生菌之一； 該制備方法包括如下步驟: 51、在所述固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中各選擇一種細菌，分別制作選定細菌的菌種培養基，三種細菌的菌種培養基配方PH值為6~8.5 ; 52、將三種菌種培養基分別按常規進行裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作，得到液體菌種； 53、將三種細菌的液體菌種進行混合，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為1:1:(0.025 ~0.05)。
2.如權利要求1所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，步驟S2中，培養時間為3~7天。
3.如權利要求1所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，步驟S2中，固氮菌、解鉀細菌、抗生菌的混合重量配比為1:1:0.03。
4.如權利要求1所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，步驟SI中，所述三種細菌的培養基配方PH值為7。
5.如權利要求1所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，步驟S2中，滅菌操作采用高壓滅菌，滅菌溫度為121°C，滅菌時間為20~30分鐘。
6.如權利要求1至5之一所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，步驟SI中，在所述固氮菌、解鉀細菌、抗生菌中分別選擇根瘤菌、鉀細菌JF88菌株和5406抗生菌； 所述根瘤菌的液體菌種培養基配方為:葡萄糖10克、磷酸二氫鉀0.5克、碳酸鈣3克、硫酸鎂0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5 ; 所述鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基配方為:蔗糖5克、磷酸氫二鈉2克、硫酸鎂0.5克、三氯化鐵0.005克、碳酸鈣0.1克、鋁土礦0.5克、水I升，PH值6~7.5 ; 所述5406抗生菌的液體菌種培養基配方為:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化鈉10克、水I升，PH值6~7.5。
7.如權利要求6所述的液體復合菌種的制備方法，其特征在于，所述根瘤菌的液體菌種培養基、鉀細菌JF88菌株的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基分別裝于三角瓶中進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到30°C以下，在無菌接種箱內接入菌種，然后放置在25°C~30°C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存；所述5406抗生菌的液體菌種培養基的裝罐、滅菌、冷卻、接種、培養操作為:將液體菌種培養基裝于裝三角瓶進行高壓滅菌，在121°C保持20~30分鐘，然后冷卻到60°C左右，在無菌接種箱內接入菌種，然后放置在25°C~30°C恒溫振動搖床上，振動培養3~7天，得到液體菌種，進行冷凍保存。
【文檔編號】C12R1/80GK103614316SQ201310530981
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】方小紅, 吳峰 申請人:深圳市新華南方生物科技股份有限公司