畢赤酵母配置過程中抽提質粒ｄｎａ溶液的調配方法
【專利摘要】本發明公開了畢赤酵母配置過程中抽提質粒ＤＮＡ溶液的調配方法。步驟如下：首先將檸檬酸鈉室溫下進行過濾；加入瓊脂糖凝膠電緩沖液后濃縮；將７０ml的甘油和3倍的純凈水混合均勻后，在高壓下進行滅菌處理；其后再過濾除菌；最后加入3%的瓊脂粉，隨后室溫保存即可；可以加入質量比例為而十分之一的硫酸銨；所述檸檬酸鈉中，可以加入適量山梨醇。本發明的有益效果是，成本低，對環境污染小，可以作為大量制備GK8的途徑。
【專利說明】畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方法【技術領域】
[0001]本發明涉及一種實驗方法，具體來說，畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方法。
【背景技術】
[0002]畢赤酵母，是甲醇營養型酵母中的一類能夠利用甲醇作為唯一碳源和能源的酵母菌。與其它酵母一樣，在無性生長期主要以單倍體形式存在，當環境營養限制時，常誘導2個生理類型不同的接合型單倍體細胞交配，融合成雙倍體。畢赤酵母的另一個生物學特點是，甲醇代謝所需的醇氧化酶被分選到過氧化物酶體中，形成區域化。以葡萄糖作碳源時，菌體中只有I個或很少幾個小的過氧化物酶體，而以甲醇作碳源時，過氧化物酶體幾乎占到整個細胞體積的80%，AOX增至細胞總蛋白的35%-40%。因此，當在AOX基因前利用同源重組方式插入外源蛋白基因時，可獲得大量表達。同時，根據甲醇酵母這種可以形成過氧化物酶體的特性，既可利用該系統表達一些毒性蛋白和易被降解的酶類，也可用以研究細胞特異區域化的生物發生及其機制和功能，為聞等動物類似的研究提供啟不。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方法，步驟如下:首先將檸檬酸鈉室溫下進行過濾；加入瓊脂糖凝膠電緩沖液后濃縮；將7 O ml的甘油和3倍的純凈水混合均勻后，在高壓下進行滅菌處理；其后再過濾除菌；最后加入3%的瓊脂粉，隨后室溫保存即可。
[0004]本發明中，可以加入質量比例為而十分之一的硫酸銨。
[0005]本發明中，所述檸檬酸鈉中，可以加入適量山梨醇。
[0006]本發明的有益效果是，成本低，對環境污染小，可以作為大量制備GK8的途徑。【具體實施方式】
[0007]畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方法，步驟如下:首先將檸檬酸鈉室溫下進行過濾；加入瓊脂糖凝膠電緩沖液后濃縮；將7 O ml的甘油和3倍的純凈水混合均勻后，在高壓下進行滅菌處理；其后再過濾除菌；最后加入3%的瓊脂粉，隨后室溫保存即可。加入質量比例為而十分之一的硫酸銨，所述檸檬酸鈉中，加入適量山梨醇。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.畢赤酵母配置過程中抽提質粒DNA溶液的調配方法，其特征在于，步驟如下:首先將檸檬酸鈉室溫下進行過濾；加入瓊脂糖凝膠電緩沖液后濃縮；將7 O ml的甘油和3倍的純凈水混合均勻后，在高壓下進行滅菌處理；其后再過濾除菌；最后加入3%的瓊脂粉，隨后室溫保存即可。
2.如權利要求1所述的畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方，其特征在于，可以加入質量比例為而十分之一的硫酸銨。
3.如權利要求1所述的畢赤酵母配置過程中抽提質粒D N A溶液的調配方，其特征在于，所述檸檬酸鈉中，可以加入適量山梨醇。
【文檔編號】C12R1/84GK103602664SQ201310525799
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】徐麗 申請人:徐麗