一種生產低聚果糖的方法
【專利摘要】本發明公開了一種生產低聚果糖的方法，包括（1）固定化果糖基轉移酶培養，（2）固定化酵母細胞培養，包括以下步驟：選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種，（3）通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖。本發明的優點是技術先進，果糖基轉移酶經過固定化后，可以提高其利用率，采用分批反應法時，可以反復使用70次以上。柱式反應法，每公斤酶可以生產白砂糖濃度（Brix）≥50的FOS糖漿1T以上，含量≥55%的FOS糖漿。過濾液經再次稀釋，經過固定化酵母細胞的轉化，可以得到含量60—90%的FOS糖漿。而且FOS產品不必經過活性炭脫色，不需離子交換脫鹽，直接經過濃縮獲得Brix≥75，整個工藝簡便，操作便利，生產成本明顯下降。
【專利說明】一種生產低聚果糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種功能性食品配料的制備方法，具體說是一種基于離子交換樹脂固定果糖基轉移酶法和固定化酵母細胞，以蔗糖為原料，工業化生產高純度蔗果低聚糖(低聚果糖)的方法。
【背景技術】
[0002]低聚果糖(Fructo — oligosaccharides,簡稱F0S),又稱寡果糖或鹿果低聚糖,分子式為G-F-Fn，η = I?3 (其中G為葡萄糖基，F為果糖基)，是由蔗糖和I?3個果糖基通過β 2，I鍵與蔗糖中的果糖基結合而成的蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖(分別簡稱為GF2、GF3、GF4)及其混合物。
[0003]作為甜味劑和食品添加劑，低聚果糖是第一個通過FDA審核作為公認安全級(GRAS)的功能性低聚糖，其低齲齒性、難消化性及雙歧桿菌增殖性已得到證實，在非消化性功能食品中，低聚果糖是符合益生元標準(即雙歧桿菌促生素)的典型雙歧因子，具有雙向調節體內菌群、降低血脂、促進維生素的合成、保護肝臟、促進Ca、Mg、Fe等礦物質吸收、防止肥胖、防止齲齒和美容的作用，是近10年來國際市場上廣泛應用的功能性食品配料。
[0004]目前國內工業化生產FOS的現有技術只有液體深層發酵法。即用液體深層發酵法培養黑曲霉，這種微生物能分泌果糖基轉移酶，從培養液分離收集黑曲霉菌體后，不經任何處理，直接投入蔗糖溶液中，使其轉化為F0S。該法的缺點是產酶菌絲體只能利用一次，在FOS生產過程中，由于菌絲體及其培養基成分的存在并參與反應，使產品色度及鹽分過高，需要活性炭脫色和離子交換樹脂脫鹽等后處理工序，使整個工藝復雜，成本提高。而菌體細胞的代謝物就只能作為雜質留在FOS產品中，無法除去，影響產品質量。
[0005]目前，雖有固定化酶法生產低聚果糖的專利報導(CN1335402A)，但此法只注重了低含量的低聚果糖生產，且指標含量只能維持在57%以下，載體使用成本偏高，處理過程需要先做出載體，然后再進行酶液交聯，過程工藝復雜。
【發明內容】
[0006]本發明要解決的技術問題是提供一種工藝簡單，成本低，生產的FOS產品雜質少，低聚果糖含量高的生產方法。
[0007]為解決上述技術問題，本發明的一種生產低聚果糖的方法，包括以下步驟:
(I)固定化果糖基轉移酶培養，包括以下步驟:選取具有能分泌果糖基轉移酶的優良菌株，在合適的培養基中培養，然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化鈣溶液，調ph6.5-7.2，30°C下交聯反應8_12h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶。
[0008](2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種，在合適的培養基中培養，將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6 — 8%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴,均勻落入10%的氯化I丐溶液中，形成直徑為2_3_范圍內的凝膠珠，硬化20-30分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞。
[0009](3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph5-6，溫度48 °C -55 °C，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph5-6，溫度28 V -35 °C，反應1h左右，即可獲得含量70% — 90%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以20% — 60%(w/w)的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，溫度30— 55°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量0.1_3m3/h下通過此柱，反應8—48h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以10% — 40%(w/w)的過濾溶液在ph4.5-7.5，溫度20— 35°C下通過此柱，調節溶液的流量0.1_3m3/h下通過此柱，反應8 — 48h，，可控制FOS成分達到60— 90%的要求。
[0010]作為對本技術方案的進一步改進，固定化果糖基轉移酶培養，所述的合適的培養基培養包括以下步驟:
A.斜面培養基
土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天。
[0011]B.種子培養基
鹿糖5%—20%、?柏粉1%—10%、玉米衆0.1%—5%、玉米粉0.1%—5%、硫酸續0.01% 一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 16h。
[0012]C.發酵培養基
蔗糖5% — 25%、豆柏粉1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、玉米粉0.1% — 5%、硫酸鎂0.01%一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 24h。
[0013]作為對本技術方案的進一步改進，固定化酵母細胞培養，所述的合適的培養基培養包括以下步驟:
A.斜面培養基
麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天。
[0014]B.種子培養基
葡萄糖1% —20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂0.01% —1%，磷酸氫二鈉 0.01% 一 1%、消泡劑 0.02%，30°C發酵 16-20h。
[0015]C.發酵培養基
葡萄糖1% — 20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂0.01% 一 1%，磷酸氫二鈉 0.01%—1%、消泡劑 0.02%, 30°C發酵 30-35h。
[0016]本發明的優點是技術先進，果糖基轉移酶經過固定化后，可以提高其利用率，采用分批反應法時，可以反復使用70次以上。柱式反應法，每公斤酶可以生產白砂糖濃度(Brix)S 50的FOS糖漿IT以上，含量> 55%的FOS糖漿。過濾液經再次稀釋，經過固定化酵母細胞的轉化，可以得到含量60— 90%的FOS糖漿。而且FOS產品不必經過活性炭脫色，不需離子交換脫鹽，直接經過濃縮獲得Brix ^ 75，整個工藝簡便，操作便利，生產成本明顯下降。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖1是本發明的的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0018]一種生產低聚果糖的方法，其特征在于包括以下步驟:
(I)固定化果糖基轉移酶培養，包括以下步驟:選取具有能分泌果糖基轉移酶的優良菌株，固定化果糖基轉移酶培養，培養包括以下步驟。
[0019]A.斜面培養基培養，土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天。
[0020]B.種子培養基培養，鹿糖5%—20%、?柏粉1%—10%、玉米衆0.1%一5%、玉米粉0.1% — 5%、硫酸鎂 0.01% 一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 16h。
[0021]C.發酵培養基培養，鹿糖5%—25%、?柏粉1%—10%、玉米衆0.1%—5%、玉米粉0.1% — 5%、硫酸鎂 0.01% 一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 24h。
[0022]然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化鈣溶液，調ph6.5-7.2，30°C下交聯反應8_12h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶。
[0023](2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種，所述的合適的培養基培養包括以下步驟:
A.斜面培養基培養，麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天。
[0024]B.種子培養基培養，葡萄糖1% — 20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂 0.01% 一 1%，磷酸氫二鈉 0.01% 一 1%、消泡劑 0.02%，30°C發酵 16_20h。
[0025]C.發酵培養基培養，葡萄糖1% — 20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂 0.01% 一 1%，磷酸氫二鈉 0.01%—1%、消泡劑 0.02%，30°C發酵 30_35h。
[0026]將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6 — 8%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2_3mm范圍內的凝膠珠，硬化20-30分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞。
[0027](3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph5-6，溫度48 °C -55 °C，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph5-6，溫度28 V -35 °C，反應1h左右，即可獲得含量70% — 90%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以20% — 60%(w/w)的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，溫度30— 55°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量0.1-3m3/h下通過此柱，反應8—48h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以10% — 40%(w/w)的過濾溶液在ph4.5-7.5，溫度20— 35°C下通過此柱，調節溶液的流量0.l_3m3/h下通過此柱，反應8 — 48h，，可控制FOS成分達到60— 90%的要求。
[0028]實施例1
(I)選取黑曲霉(A.niger)菌種，進行固定化果糖基轉移酶培養。
[0029]A.斜面培養基培養，土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天。
[0030]B.種子培養基培養，蔗糖5%、豆柏粉1%，玉米漿0.1%，玉米粉0.1%，硫酸鎂
0.01%，磷酸氫二鉀0.01%，消泡劑0.03%，30°C發酵16h。
[0031]C.發酵培養基培養，蔗糖5%、豆柏粉1%、玉米漿0.1%、玉米粉0.1%、硫酸鎂
0.01%，磷酸氫二鉀0.01%、消泡劑0.03%，30°C發酵24h。
[0032]然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每100U酶液加入0.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.08%的戊二醛溶液，后再加入0.02%的氯化鈣溶液，調ph6.5，30°C下交聯反應8h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶。
[0033](2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種， A.斜面培養基培養，麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天。
[0034]B.種子培養基培養，葡萄糖1%，蛋白胨0.1%，玉米漿0.1%，硫酸鎂0.01%，磷酸氫二鈉 0.01%,消泡劑 0.02%, 30°C發酵 16h。
[0035]C.發酵培養基培養，葡萄糖1%，蛋白胨0.1%，玉米漿0.1%，硫酸鎂0.01%,磷酸氫二鈉 0.01%,消泡劑 0.02%, 30°C發酵 30h。
[0036]將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2_3_范圍內的凝膠珠，硬化20分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞。
[0037](3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph5，溫度48V，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph5，溫度28 °C，反應1h左右，即可獲得含量70%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以20% (w/w)的蔗糖溶液在ph4.5，溫度30°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量0.1mVh下通過此柱，反應8h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以10%% (w/w)的過濾溶液在ph4.5，溫度20°C下通過此柱，調節溶液的流量0.1m3A下通過此柱，反應8h,,可控制FOS成分達到60%的要求。
[0038]實施例2
(I)選取黑曲霉(A.niger)菌種，進行固定化果糖基轉移酶培養；
A.斜面培養基培養，土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天。
[0039]B.種子培養基培養，蔗糖20%、豆柏粉10%、玉米漿5%、玉米粉5%、硫酸鎂1%，磷酸氫二鉀1%、消泡劑0.03%，30°C發酵16h。
[0040]C.發酵培養基培養，蔗糖25%、豆柏粉10%、玉米漿5%、玉米粉5%、硫酸鎂1%，磷酸氫二鉀1%、消泡劑0.03%，30°C發酵24h。
[0041]然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每150U酶液加入1.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.04%的氯化鈣溶液，調ph7.2，30°C下交聯反應12h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶。
[0042](2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種， A.斜面培養基培養，麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天。
[0043]B.種子培養基培養，葡萄糖20%、蛋白胨10%、玉米漿5%、硫酸鎂1%，磷酸氫二鈉1%、消泡劑 0.02%, 30°C發酵 20h。
[0044]C.發酵培養基培養，葡萄糖20%、蛋白胨10%、玉米漿5%、硫酸鎂01%，磷酸氫二鈉1%、消泡劑 0.02%, 30°C發酵 35h。
[0045]將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6 — 8%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2_3mm范圍內的凝膠珠，硬化30分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞。
[0046](3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph6，溫度55°C，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph6，溫度35°C，反應1h左右，即可獲得含量90%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以60% (w/w)的鹿糖溶液在ph7.5,溫度55°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量3mVh下通過此柱，反應48h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以40% (w/w)的過濾溶液在7.5，溫度35°C下通過此柱，調節溶液的流量3m3/h下通過此柱,反應48h,,可控制FOS成分達到90%的要求。
[0047]實施例3
(I)選取點青霉(A.Penicillium notatum )菌種,進行固定化果糖基轉移酶培養；
A.斜面培養基培養，土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天。
[0048]B.種子培養基培養，蔗糖15%、豆柏粉6%、玉米漿3%、玉米粉4%、硫酸鎂0.6%，磷酸氫二鉀0.5%、消泡劑0.03%，30°C發酵16h。
[0049]C.發酵培養基培養，蔗糖15%、豆柏粉6%、玉米漿3%、玉米粉3%、硫酸鎂0.6%，磷酸氫二鉀0.6%、消泡劑0.03%, 30°C發酵24h。
[0050]然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每130U酶液加入Ig的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.11%的戊二醛溶液，后再加入0.03%的氯化鈣溶液，調ph7.0，30°C下交聯反應10h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶。
[0051](2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種， A.斜面培養基培養，麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天。
[0052]B.種子培養基培養，葡萄糖15%、蛋白胨6%、玉米漿3%、硫酸鎂0.6%，磷酸氫二鈉 0.6%、消泡劑 0.02%，30°C發酵 16-20h。
[0053]C.發酵培養基培養，葡萄糖15%、蛋白胨6%、玉米漿3%、硫酸鎂0.5%，磷酸氫二鈉0.5%、消泡劑 0.02%, 30°C發酵 32h。
[0054]將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成7%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2_3_范圍內的凝膠珠，硬化25分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞。
[0055](3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph5.5，溫度52°C，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph5.5，溫度32°C，反應1h左右，即可獲得含量78.5%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶,用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以40% (w/w)的蔗糖溶液在ph5.5，溫度42°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量1.5m3/h下通過此柱，反應25h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以25% (w/w)的過濾溶液在ph5.5，溫度28°C下通過此柱，調節溶液的流量1.5m3/h下通過此柱，反應20h，，可控制FOS成分達到86.1%的要求。
[0056]上文所列出的一系列的詳細說明僅僅是針對本發明的可行性實施例的具體說明，它們并非用以限制本發明的保護范圍，凡未脫離本發明技藝精神所作的等效實施例或變更均應包含在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種生產低聚果糖的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)固定化果糖基轉移酶培養，包括以下步驟:選取具有能分泌果糖基轉移酶的優良菌株，在合適的培養基中培養，然后將培養得到的大量菌絲體進行破壁，用離心法和超濾法等將酶分離純化，果糖基轉移酶的酶液經HPLC測定酶活力之后，按照每100-150U酶液加入0.5-1.5g的大孔陰離子交換樹脂載體，攪拌混勻，加入0.08-0.15%的戊二醛溶液，后再加入0.02-0.04%的氯化鈣溶液，調ph6.5-7.2，30°C下交聯反應8_12h，后過濾，洗滌，既得固定化果糖基轉移酶； (2)固定化酵母細胞培養，包括以下步驟:選取能分泌葡萄糖轉移酶的酵母菌種，在合適的培養基中培養，將發酵培養的酵母細胞經過離心制得酵母細胞濕菌體，將海藻酸鈉配成6 — 8%的溶液，經消毒處理后，與濕菌體按比例在真空條件下混勻，然后利用壓力噴霧法使混合液通過孔徑為0.6mm的噴嘴，均勻落入10%的氯化鈣溶液中，形成直徑為2_3_范圍內的凝膠珠，硬化20-30分鐘后，過濾分離得到固定化酵母細胞； (3)通過分批反應法或柱式反應法利用固定化果糖基轉移酶、固定化酵母細胞生產低聚果糖，包括以下步驟:按照分批反應法，在反應罐中，按55%蔗糖溶液加入3%的固定化果糖基轉移酶，控制反應液ph5-6，溫度48°C -55°C，反應1h左右，進行過濾，將過濾液稀釋25%，加入8%的固定化酵母細胞，控制反應液ph5-6，溫度28 °C -35 °C,反應1h左右，即可獲得含量70% — 90%的FOS產品，反應結束，用篩網過濾反應液，可以分離回收固定化酶，用于下一批原料的生產；按照柱式反應法，將固定化果糖基轉移酶裝入柱中，以20% — 60%(w/w)的蔗糖溶液在ph4.5-7.5，溫度30— 55°C下通過此柱，調節蔗糖溶液的流量0.l_3m3/h下通過此柱，反應8 — 48h，過濾，得到過濾溶液；將固定化酵母細胞裝入柱中，以10% — 40% (w/w)的過濾溶液在ph4.5-7.5，溫度20— 35°C下通過此柱，調節溶液的流量0.l_3m3/h下通過此柱，反應8 — 48h，，可控制FOS成分達到60— 90%的要求。
2.根據權利要求1所述的生產低聚果糖的方法，其特征在于:固定化果糖基轉移酶培養，所述的合適的培養基培養包括以下步驟: A.斜面培養基 土豆200 g/L、瓊脂15 g/L、蔗糖20 g/L，30°C下培養5天； B.種子培養基 蔗糖5% — 20%、豆柏粉1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、玉米粉0.1% — 5%、硫酸鎂0.01%一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 16h ； C.發酵培養基 蔗糖5% — 25%、豆柏粉1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、玉米粉0.1% — 5%、硫酸鎂0.01%一 1%，磷酸氫二鉀 0.01% 一 1%、消泡劑 0.03%，30°C發酵 24h。
3.根據權利要求1所述的生產低聚果糖的方法，其特征在于:固定化酵母細胞培養，所述的合適的培養基培養包括以下步驟: A.斜面培養基 麥芽汁12 g/L、瓊脂15 g/L，30°C下培養2天； B.種子培養基 葡萄糖1% —20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂0.01% —1%，磷酸氫二鈉 0.01% 一 1%、消泡劑 0.02%，30°C發酵 16-20h ； C.發酵培養基 葡萄糖1% — 20%、蛋白胨0.1% —10%、玉米漿0.1% — 5%、硫酸鎂0.01% 一 1%，磷酸氫二鈉 0.01%—1%、消泡劑 0.02%, 30°C發酵 30-35h。
【文檔編號】C12P19/00GK104232706SQ201310512152
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年10月28日 優先權日:2013年10月28日
【發明者】李國文, 趙洪濤, 袁偉崗 申請人:山東文遠生物技術有限公司